专利名称：一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法
技术领域：
本发明涉及藤梨根黄酮的分离提纯方法，特别是一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法。
背景技术：
藤梨根为称猴桃科软率称猴桃Actinidia arguta (Sieb. et Zucc. ) Planch的根，曾收载于1987年版《中国药典》。藤梨根味酸、涩，性凉，具有清热解毒、清热利湿、祛风除湿、利尿止血、解毒消肿、止血等功效。现代药理研究表明藤梨根提取物具有增强免疫功能、抗氧化、降血脂、抗突变、抗畸变和抗肿瘤等多种药理作用，广泛应用于消化系统癌症、黄疸、消化不良、呕吐、腹泻等疾病的治疗(中草药学[M]，南京江苏人民出版社， 1976:662-623，陈贯诚，猕猴桃[J]，中药材科技，1981，4 (I) :30-31).研究表明藤梨根中提取的黄酮具有明显的抗肿瘤活性(王岚，康琢，杨伟鹏等，藤梨根正丁醇提取物和总黄酮苷抗肿瘤作用研究[J]，中国中药杂志，2010，35 (16) :2184-2186)。关于藤梨根提取物中黄酮类化合物含量测定和提取工艺的研究已有文献报道(白瑶，陈佳庆，申野等.软枣猕猴桃根黄酮类化合物提取工艺条件优化研究[J]，中国民族民间医药，2009，18 (21) :2-3 ;张兰杰，谷昊，隋晓慧，野生软枣猕猴桃总黄酮含量的测定[J]，中国野生植物资源，2005，24 (4)49-51 ;王小平，白吉庆，成奉珍，不同来源藤梨根中总黄酮含量比较研究[J]，商洛学院学报，2007，21 (2) 51-53 ;王小平，白吉庆，藤梨根总黄酮提取方法及含量测定研究[J]，陕西中医学院学报，2008，31 (5) :65-66)，但黄酮的提取工艺繁琐复杂且纯度不高，从一定程度限制了其深入研究与制剂开发。在CN200410022919、 CN02114318、 CN03156252、 CN02129513、 CN01128730、CN1478495A、CN1093594A等中国专利中都涉及了制备具有抗癌作用的复方中成药中使用了藤梨根或猕猴桃根，这些专利大多涉及复方中成药的配方组成、制备和应用，在CN1965872、CN1977869、CN101623309、CN101757056A、CN1679797等中国专利都涉及了单味中药藤梨根的提取与制备，但没有涉及到黄酮类成分的分离和制备。模拟移动床色谱，是规模化色谱分离技术的一种新发展，是模拟移动床技术与色谱技术的结合。该技术既保留了色谱精细分离的优点，又将化工中的连续逆流、精馏、回流等因素集约进去，使系统具有规模化精细分离的能力。该项技术已应用于糖类制备、结构异构体分离制备、光学对映体的分离制备及同位素的分离等。与传统的制备色谱技术相比，模拟移动床技术采用连续操作手段，这一点有利于实现自动化操作，制备效率高，每克填料每天制备量可达I克以上，制备量大，大型模拟移动床制备仪器每年制备量可达百万吨级水平，同时试剂的消耗量很少，可以节约试剂高达90%以上。该技术在石油、精细化工、食品、药物(特别是手性药物)等诸多领域已经发挥很大作用，应用前景广阔。目前，在天然产物分离方面应用较多，但是应用模拟移动床吸附分离提纯藤梨根黄酮的方法仍未见公开报道。
发明内容
本发明的目的是提供了一种使用模拟移动床色谱技术分离提纯藤梨根黄酮的方法，解决目前藤梨根黄酮分离纯度低，制备成本高，不易于规模化生产的问题。本发明通过以下技术方案来实现一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，其特征在于该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于80-90°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量6-10倍的75%乙醇回流提取 3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在40-50°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为大孔吸附树脂，吸附区原料流量为4-16BV/h (BV为吸附剂的柱床体积，下同)；解析剂为40%-90%的乙醇溶液，解析剂流量为5-25BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为5-25BV/h ;树脂吸附再生剂是2%-4%的NaOH溶液，再生剂流量为5_10BV/h ;切换时间为600-800S ;温度控制在25-70°C ;全程压力控制范围为0. 2-1. OMPa ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量50-150ML/h、进风口温度160-240°C、出风口温度50-90°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。进一步地，所述的大孔吸附树脂选自AB-8弱极性大孔吸附树脂、ADS-8弱极性大孔吸附树脂、NKA-9极性大孔吸附树脂、X-5非极性大孔吸附树脂、DM301中极性大孔吸附树脂或ADS-7强极性大孔吸附树脂中的任何一种。步骤c中制备的藤梨根黄酮液体的质量百分比浓度为5-20%，纯度为60-90%。采用上述技术方案的积极效果本发明的模拟移动床连续式的生产方式可用于提取藤梨根黄酮，其生产自动化程度高、工作效率高，生产环境安全环保，适合工业化生产，制备所得的藤梨根黄酮粉纯度较现有技术有了较大幅度的提高，可达90%以上，可以大规模的用于药品制备与生产。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明做进一步的说明，但不应理解为对本发明的限制 实施例I
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于85°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量6倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在45°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为AB-8弱极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为6BV/h ;解析剂为40%的乙醇溶液，解析剂流量为12BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为8BV/h ;树脂吸附再生剂是2%的NaOH溶液，再生剂流量为5BV/h ;切换时间为660S ;温度控制在29°C左右；全程压力控制在0. 7MPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为5%、纯度为60% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量50ML/h、进风口温度190°C、出风口温度66°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达92%。实施例2
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于85°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量8倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在45°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为ADS-8弱极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为5BV/h ;解析剂为80%的乙醇溶 液，解析剂流量为15BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为10BV/h ;树脂吸附再生剂是3%的NaOH溶液，再生剂流量为8BV/h ;切换时间为625S ;温度控制在32°C左右；全程压力控制在IMPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为20%、纯度为65% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量90ML/h、进风口温度195°C、出风口温度72°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达90%。实施例3
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于90°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量10倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在50°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为NKA-9极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为15BV/h ;解析剂为70%的乙醇溶液，解析剂流量为23BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为20BV/h ;树脂吸附再生剂是4%的NaOH溶液，再生剂流量为6BV/h ;切换时间为800S ;温度控制在62°C左右；全程压力控制在0. 8MPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为10%、纯度为80% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量120ML/h、进风口温度240°C、出风口温度85°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达 92%。实施例4
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于87°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量7倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在47°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为X-5非极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为9BV/h ;解析剂为90%的乙醇溶液，解析剂流量为21BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为15BV/h ;树脂吸附再生剂是2%的NaOH溶液，再生剂流量为5BV/h ;切换时间为720S ;温度控制在50°C左右；全程压力控制在0. 9MPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为18%、纯度为70% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量125ML/h、进风口温度230°C、出风口温度78V、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达 94%。实施例5
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于90°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量9倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在48°C，-0. IMPa条件下减压浓缩， 得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为DM301中极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为16BV/h ;解析剂为50%的乙醇溶液，解析剂流量为14BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为18BV/h ;树脂吸附再生剂是4%的NaOH溶液，再生剂流量为7BV/h ;切换时间为650S ;温度控制在65°C左右；全程压力控制在0. 5MPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为12%、纯度为90% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量110ML/h、进风口温度200°C、出风口温度90 V、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达 90%。实施例6
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于89°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量8倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在48°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为ADS-7强极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为14BV/h ;解析剂为40%的乙醇溶液，解析剂流量为25BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为16BV/h ;树脂吸附再生剂是3%的NaOH溶液，再生剂流量为7BV/h ;切换时间为800S ;温度控制在30°C左右；全程压力控制在0. 5MPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为20%、纯度为85% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量150ML/h、进风口温度240°C、出风口温度90°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达 92%。实施例7
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于80°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量8倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在40°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为AB-8弱极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为4BV/h ;解析剂为80%的乙醇溶液，解析剂流量为5BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为5BV/h ;树脂吸附再生剂是4%的NaOH溶液，再生剂流量为10BV/h ;切换时间为600S ;温度控制在25°C左右；全程压力控制在0. 2MPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为9%、纯度为78% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量130ML/h、进风口温度160°C、出风口温度50°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达 95%。实施例8
一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于85°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量10倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在50°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为ADS-8弱极性大孔吸附树脂，吸附区原料流量为16BV/h ;解析剂为75%的乙醇溶液，解析剂流量为25BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为25BV/h ;树脂吸附再生剂是2%的NaOH溶液，再生剂流量为5BV/h ;切换时间为800S ;温度控制在70 V左右;全程压力控制在IMPa左右。制得的藤梨根黄酮液体质量百分比浓度为12%、纯度为60% ；
d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量80ML/h、进风口温度200°C、出风口温度90°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度可达93%。对比例I
一种分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括以下步骤
a、将藤梨根净选，粉碎，备用；
b、将藤梨根粉于85°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量6倍的75%乙醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；乙醇提取液在45°C，-0. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物；
C、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量50ML/h、进风口温度190°C、出风口温度66°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。经过鉴定，藤梨根黄酮粉的纯度只有45%。对比例I是在实施例I的基础上去掉了模拟移动床色谱的步骤。经过对比可得，引入模拟移动床色谱法，可以大大提高制得的藤梨根黄酮粉的纯度，较普通方法有了大幅度的提高，本发明的技术方案可以广泛适用于制药应用。
权利要求
1.一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，其特征在于该方法包括以下步骤 a、将藤梨根净选，粉碎，备用； b、将藤梨根粉于80-90°C恒温下，加入藤梨根细粉总质量6-10倍的75%こ醇回流提取3次，时间依次为2、2、lh，滤过，3次提取滤液合并；こ醇提取液在40-50°C，-O. IMPa条件下减压浓缩，得到藤梨根黄酮粗提物； C、将藤梨根黄酮粗提物制备成进样液进入模拟移动床分离纯化得藤梨根黄酮液体，其中吸附剂为大孔吸附树脂，吸附区原料流量为4-16BV/h ;解析剂为40%-90%的こ醇溶液，解析剂流量为5-25BV/h ;冲洗剂为去离子水，冲洗剂流量为5-25BV/h ;树脂吸附再生剂是 2%-4%的NaOH溶液，再生剂流量为5_10BV/h ;切换时间为600-800S ;温度控制在25_70°C ；全程压カ控制范围为O. 2-1. OMPa ； d、将藤梨根黄酮液体在蠕动泵进料量50-150ML/h、进风ロ温度160-240°C、出风ロ温度50-90°C、气流式雾化条件下进行喷雾干燥，即制成藤梨根黄酮粉。
2.根据权利要求I所述的模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，其特征在于进ー步地，所述的大孔吸附树脂选自AB-8弱极性大孔吸附树脂、ADS-8弱极性大孔吸附树脂、NKA-9极性大孔吸附树脂、X-5非极性大孔吸附树脂、DM301中极性大孔吸附树脂或ADS-7强极性大孔吸附树脂中的任何ー种。
3.根据权利要求I所述的模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，其特征在于步骤c中制备的藤梨根黄酮液体的质量百分比浓度为5-20%，纯度为60-90%。
全文摘要
本发明提供了一种模拟移动床色谱分离提纯藤梨根黄酮的方法，该方法包括将藤梨根净选，粉碎，乙醇回流提取，减压浓缩，模拟移动床分离纯化，喷雾干燥等步骤制备而成藤梨根黄酮粉。本发明的模拟移动床连续式的生产方式可用于提取藤梨根黄酮，其生产自动化程度高、工作效率高，生产环境安全环保，适合工业化生产，制备所得的藤梨根黄酮粉纯度较现有技术有了较大幅度的提高，可达90%以上，可以大规模的用于药品制备与生产。
文档编号A61P35/00GK102688266SQ201210197170
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月15日 优先权日2012年6月15日
发明者姜瑞平, 张立秋, 武子敬, 滕坤, 赵竹青, 赵蕊, 阮洪生 申请人:通化师范学院