专利名称：多肽GluR2-3Y的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种多肽G1UR2-3Y的新用途。
背景技术：
药物成瘾是一种慢性的复发性的疾病，不只危害成瘾患者本身的健康，由此还会引起犯罪和街头暴力等社会问题。近20年来我国吸毒的人群在不断增长，并且戒毒后的复吸率很高，防止复吸成为临床上治疗成瘾中亟待解决的问题。大量研究证明谷氨酸系统尤其是AMPA受体参与精神活性物质的依赖与复吸,提示AMPA受体可能作为治疗精神活性物质依赖与复吸的一个靶点。
干扰妝GluR2_3Y (氨基酸序列为 N-Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Tyr-Lys-Glu-Gly-Tyr-Asn-Val-Tyr-Gly-C)是由组成 AMPA 受体的 GluR2 亚基胞内C端的9个氨基酸组成的片段(Tyr-Lys-Glu-Gly-Tyr-Asn-Val-Tyr-Gly)并在前端连接上TAT 透膜片段(Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg)而组成。
发明内容
本发明的一个目的是提供多肽GluR2_3Y或以多肽GluR2_3Y为有效成分的制剂的
新用途。本发明提供了多肽GluR2-3Y或以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂在制备抑制精神活性物质依赖与复吸的产品中的应用；所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列为序列表中的序列I ;所述多肽GluR2_3Y的氨基酸序列中自氨基末端的第I位Tyr为氨基直接连接在^ -碳原子上的Tyr ;所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自a -碳原子上的氨基酸残基。上述应用中，所述以多肽GluR2_3Y为有效成分的制剂为含有GluR2_3Y的注射剂(包括动静脉内注射、肌肉注射、皮下注射等)、缓释剂、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或口服液；所述以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂具体为多肽GluR2-3Y溶液，所述多肽GluR2-3Y溶液具体为将所述多肽GluR2-3Y溶解在生理盐水中得到的多肽溶液；所述多肽GluR2-3Y在所述多肽GluR2-3Y溶液中的终浓度进一步具体为I. 5 y mol/mL。上述应用中，所述精神活性物质依赖与复吸为阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和/或大麻类物质依赖与复吸；所述阿片类物质为吗啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因类物质为可卡因，所述苯丙胺类物质为苯丙胺、甲基苯丙胺和/或摇头丸，所述大麻类物质为活性成分为四氢大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制剂；所述产品为药物。上述多肽G1UR2-3Y或上述以多肽G1UR2-3Y为有效成分的制剂在制备预防和/或治疗精神活性物质依赖与复吸的产品中的应用也是本发明保护的范围。
上述应用中，所述精神活性物质依赖与复吸为阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和/或大麻类物质依赖与复吸。上述应用中，所述阿片类物质为吗啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因类物质为可卡因，所述苯丙胺类物质为苯丙胺、甲基苯丙胺和/或摇头丸，所述大麻类物质为活性成分为四氢大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制剂；所述产品为药物。上述以多肽G1UR2-3Y为有效成分的制剂也是本发明保护的范围，上述以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂为在多肽GluR2-3Y中加入一种或多种药学上可接受的载体；上述载体包括药学领域常规的稀释剂、缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。以多肽G1UR2-3Y为活性成分的制剂可以制成注射液(包括动静脉内注射、肌肉注射、皮下注射等)、缓释剂，皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液等多种形式。上述 各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。本发明的另一个目的是提供一种预防和/或治疗精神活性物质依赖与复吸的产品。本发明提供了一种预防和/或治疗精神活性物质依赖与复吸的产品，其活性成分为多肽GluR2-3Y或以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂；所述多肽GluR2_3Y的氨基酸序列为序列表中的序列I ;所述多肽GluR2_3Y的氨基酸序列中自氨基末端的第I位Tyr为氨基直接连接在^ -碳原子上的Tyr ;所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自a -碳原子上的氨基酸残基。本发明的第三个目的是提供一种抑制精神活性物质依赖与复吸的产品。本发明提供了一种抑制精神活性物质依赖与复吸的产品，其活性成分为多肽GluR2-3Y或以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂；所述多肽GluR2_3Y的氨基酸序列为序列表中的序列I ;所述多肽GluR2_3Y的氨基酸序列中自氨基末端的第I位Tyr为氨基直接连接在^ -碳原子上的Tyr ;所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自a -碳原子上的氨基酸残基。上述产品中，所述以多肽GluR2_3Y为有效成分的制剂为含有GluR2_3Y的注射剂(包括动静脉内注射、肌肉注射、皮下注射等)、缓释剂、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒齐U、胶囊或口服液。在本发明的实施例中，上述以多肽G1UR2-3Y为有效成分的制剂为多肽GluR2-3Y溶液，所述多肽GluR2-3Y溶液具体为将所述多肽GluR2_3Y溶解在生理盐水中得到的多肽溶液；所述多肽GluR2-3Y在所述多肽GluR2-3Y溶液中的终浓度进一步具体为I.5 umol/mL。上述生理盐水的浓度为0. 9% (质量百分含量)。上述产品中，上述精神活性物质依赖与复吸为阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和/或大麻类物质依赖与复吸；所述阿片类物质具体为吗啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因类物质具体为可卡因，所述苯丙胺类物质具体为苯丙胺、甲基苯丙胺和/或摇头丸，所述大麻类物质具体为活性成分为四氢大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制剂；
上述广品为药品。本发明的实验证明，多肽G1UR2-3Y可以预防和治疗各种精神活性物质依赖与复吸(包括阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和大麻类物质依赖与复吸，在精神活性物质依赖与复吸的预防和治疗中具有重要意义。
图I为静脉注射GluR2_3Y抑制吗啡诱导的自身给药的多次重建图2为静脉注射GluR2_3Y不影响自身给药的消退时程图3为静脉注射GluR2_3Y使伏核shell区LTD恢复正常水平
具体实施例方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例I、多肽GluR2_3Y抑制药物成瘾与复吸I、材料雄性SD大鼠(体重约300g，约70日龄)购自中国军事医学科学院实验动物中心。药品盐酸吗啡注射液(盐酸吗啡注射液为沈阳第一制药厂生产，吗啡浓度为10mg/ml,使用时用0. 9%的无菌生理盐水稀释)；G1UR2-3Y由吉尔生化(上海)有限公司合成，GluR2_3Y的氨基酸残基序列如下所示N， -Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Tyr-Lys-Glu-Gly-Tyr-Asn-Val-Tyr-Gly-C’(序列I);上述GluR2_3Y的氨基酸残基序列中自氨基末端的第I位Tyr为氨基直接连接在3 -碳原子上的Tyr ;所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自a-碳原子上的氨基酸残基。对照肽GluR2_3S的氨基酸残基序列如下所示N’ -Tyr-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Val-Tyr-Lys-Tyr-Gly-Gly-TYr-Asn-Glu-Cj (序列 2)；GluR2-3Y溶液将多肽GluR2_3Y溶解在0. 9%的生理盐水中得到的多肽溶液；多肽GluR2-3Y在多肽GluR2-3Y溶液中的终浓度为I. 5 y mol/mL。GluR2-3S溶液将多肽GluR2_3S溶解在0. 9%的生理盐水中得到的多肽溶液；多肽GluR2-3S在多肽GluR2-3S溶液中的终浓度为I. 5 y mol/mL。大鼠自身给药装置(安来软件科技有限公司)由自身给药箱和配套控制软件组成，箱外壁有一蜂鸣器，箱内壁上方有一照明灯，箱内壁上有两个鼻触孔，每个鼻触孔内均有一个鼻触灯，大鼠颈静脉有插管接出体外，并通过自身给药箱内的管系统与箱外的给药泵连接起来，给药泵可以在程序的控制下将吗啡泵入大鼠颈静脉内，所有的输入输出信号均由软件进行实时记录。2、实验将体重约300g、约70日龄的雄性SD大鼠分为两组GluR2_3S组(9只)、GluR2_3Y组(8只)。I)大鼠吗啡自身给药行为的获得(建立)
有效鼻触数通过程序设定自身给药箱内两个鼻触孔中的任意一个为有效鼻触孔，有效鼻触数为大鼠在每天训练的3小时内触碰有效鼻触孔的总次数；无效鼻触数设定另一个鼻触孔为无效鼻触孔，无效鼻触数为大鼠在每天训练的3小时内触碰无效鼻触孔的总次数；自身给药数大鼠在每天3个小时的训练中触碰有效鼻触而获得的吗啡注射的总次数。因为在不应期内，有效鼻触不会获得吗啡，所以自身给药数小于或等于有效鼻触数；大鼠自身给药训练方法将大鼠放入自身给药箱内进行训练，每天一次，每次3个小时。大鼠触碰有效鼻触孔一次，会静脉给药一次(从颈静脉泵入吗啡溶液，吗啡浓度为lmg/ml，剂量为0. 3mg/kg大鼠体重)。每次训练开始时，照明灯亮，预示着可以获得吗啡。当 大鼠有效鼻触一次后，照明灯灭，除静脉给药一次外，有效鼻触灯亮5s，同时伴随有不连续的声音刺激5s，之后有15s的不应期。在不应期里，大鼠触碰有效鼻触孔不会有吗啡注射和声光刺激。不应期后，照明灯再次亮起。无效鼻触则始终不会引起吗啡注射和声光刺激。如此循环到训练结束。最少训练10天，直到大鼠获得自身给药行为。判定的标准为大鼠的自身给药数连续三天都超过10次，并且这3天中的变化范围在15%以内。如果在21天内还无法达到上述要求，则大鼠被认为无法获得自身给药行为，不再进行后续的消退实验。统计最后一天大鼠的有效鼻触数和无效鼻触数如下，结果采用平均值土标准误的方式表示GluR2-3S组的有效鼻触次数26. 89 ± I. 45 (次/3小时)；GluR2-3Y组的有效鼻触次数24. 13 ±3. 20 (次/3小时)；GluR2-3S组的无效鼻触次数I. 89±0. 59 (次/3小时)；GluR2-3Y组的无效鼻触次数2. 38 ±0. 82 (次/3小时)；可以看出，两组大鼠都获得了稳定的自身给药行为，有效鼻触数显著高于无效鼻触数。2)大鼠吗啡自身给药行为的消退消退的程序与建立的程序相同，唯一的不同是大鼠触碰有效鼻触孔后没有吗啡注射。消退完成的判定标准为消退10天，并且有效鼻触数和无效鼻触数连续三天都在10次以内。统计消退最后一天的有效鼻触数和无效鼻触数如下，结果采用平均值土标准误的方式表示GluR2-3S组的有效鼻触次数4. 44 ±0. 84 (次/3小时)；GluR2-3Y组的有效鼻触次数2. 75± I. 10 (次/3小时)；GluR2-3S组的无效鼻触次数2. 44 ±0. 50 (次/3小时)；GluR2-3Y组的无效鼻触次数2. 13 ±0. 74 (次/3小时)； 可以看出，两组大鼠的有效鼻触数明显降低，与无效鼻触数比较没有显著差异。3)吗啡诱导的大鼠自身给药行为的重新建立(重建)在上述2)完成消退的24小时之后，两组大鼠均腹腔注射吗啡溶液(5mg/kg大鼠体重)，注射完后放入自身给药箱中，进行大鼠自身给药行为的重建测试，程序和消退完全相同。在腹腔注射吗啡溶液之前60分钟，分别在不同组的小鼠颈静脉注射两种小肽。在第一次重建后，还可以再次进行消退，待消退最少三天，且满足大鼠的有效鼻触数和无效鼻触数连续三天都在10次以内的条件后，可以进行第二次重建，之后再次进行上述消退，并进行第三次重建。第二和第三次重建与第一次重建的方法及程序完全相同，只是没有注射小肽。不同组的小鼠颈静脉注射两种小肽的方法如下GluR2-3Y组颈静脉注射GluR2_3Y溶液剂量为lml/kg大鼠(此时大鼠体重约为400g)；GluR2-3S组颈静脉注射GluR2_3S溶液剂量为lml/kg大鼠(此时大鼠体重约为400g)。实验结果采用平均值土标准误的方法表示A、多肽GluR2_3Y抑制药物成瘾与复吸统计第一次重建、第二次重建和第三次重建的有效鼻触次数如下第一次重建GluR2-3S组的有效鼻触次数20. 44±5. 94 (次/3小时)；第一次重建GluR2_3Y组的有效鼻触次数22±5. 98 (次/3小时)；第二次重建GluR2_3S组的有效鼻触次数29±5. 30 (次/3小时)；第二次重建GluR2_3Y组的有效鼻触次数12. 63±4. 91 (次/3小时)；第三次重建GluR2_3S组的有效鼻触次数32. 11 ±6. 71 (次/3小时)；第三次重建GluR2_3Y组的有效鼻触次数10. 75±2. 91 (次/3小时)；将结果作图，如图I所示，其中(a)实验流程图；(b)大鼠吗啡自身给药的训练和消退阶段，包括训练的前10天及连续稳定的3天，还有消退的前9天及连续稳定的3天；(c)吗啡诱导的药物寻求行为的第一次重建，GluR2-3Y处理组(n=8)及GluR2_3S处理组(n=9)均可以重建，且两组间没有显著性差异；(d)吗啡诱导的药物寻求行为的第二次重建，GluR2-3Y处理组的有效鼻触数显著低于GluR2-3S处理组；(e)吗啡诱导的药物寻求行为的第三次重建，GluR2-3Y处理组的有效鼻触数显著低于GluR2-3S处理组；(f)吗啡诱导的药物寻求行为的三次重建的整体分析，GluR2-3Y处理组的有效鼻触数显著低于GluR2-3S处理组。#P〈0. 05, #P〈0. 01。B、静脉注射G1UR2-3Y不影响自身给药的消退时程大鼠进行14天的吗啡自身给药训练，之后分作两组进行消退，一组为给药组，在每天的消退实验开始前一个小时静脉注射GluR2-3Y溶液(lml/kg大鼠，n = 7),另一组为对照组，注射同等剂量的GluR2-3S溶液(lml/kg大鼠，n = 7),消退21天，前19天每天均
注射多肽溶液一次。结果如图2所示，Ca)实验流程图。(b)吗啡自身给药行为建立的最后一天，GluR2-3Y组与GluR2-3S组大鼠的鼻触数之间没有显著的差异。(c)两组大鼠在消退过程中的有效鼻触数之间没有显著差异。(d)两组大鼠在消退过程中的无效鼻触数之间没有显
著差异。
、
C、静脉注射GluR2_3Y使伏核shell区LTD恢复正常水平大鼠进行自身给药的训练、消退及三次重建，并在第一次重建前一个小时分别静脉注射GluR2-3Y溶液(lml/kg大鼠)和GluR2-3S溶液(lml/kg大鼠)。在第三次重建前断头取脑，矢状位切取脑片，另外取一组没有经过任何处理的相同天龄的大鼠作为Naive对照组，用EPClO-Double Amplifier (HEKA Instruments,德国)膜片钳放大器记录三组大鼠伏核壳区神经元的LTD。所有数据均被LTD诱导前的EPSCs的幅度的平均值标准化。结果如图3所示，Ca)实验流程图；(b) Naive对照组大鼠(n=8)能正常诱导LTD ；(C)静脉注射G1UR2-3S的大鼠(n=6) LTD诱导水平减弱；(d)静脉注射GluR2_3Y的大鼠(n=6)LTD也能正常诱导；(e) (b_d)图中LTD诱导后的最后5min的结果总结(抑制程度=最后记录5min的EPSCs幅度的平均值/低频诱导前EPSCs幅度的平均值)，GluR2_3S组(83. 88±8. 29%)与另外两组(Naive 组:57. 44±7. 09%, GluR2_3Y 组:47. 53±2. 17%)相比均有显著性差异。(*)与Naive对照组相比，*P〈0. 05 ;⑷与GluR2_3S组相比，##P〈0. 01。因此，从上述实验可以看出，表明在自身给药行为的三次重新建立过程中，GluR2-3Y组和GluR2-3S组的大鼠的有效鼻触数有显著差异，即静脉注射GluR2_3Y后显著抑制了大鼠的重建觅药行为的持续性。本研究的结果证实了 GluR2_3Y能够有效抑制吗啡诱导的大鼠自身给药行为的多
次重建。权利要求
1.多肽G1UR2-3Y或以多肽G1UR2-3Y为有效成分的制剂在制备抑制精神活性物质依赖与复吸的产品中的应用；所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列为序列表中的序列I ; 所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列中自氨基末端的第I位Tyr为氨基直接连接在β -碳原子上的Tyr ;所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自α _碳原子上的氨基酸残基。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于所述以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂为含有GluR2-3Y的注射剂、缓释剂、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或口服液；所述以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂具体为多肽GluR2-3Y溶液，所述多肽GluR2_3Y溶液具体为将所述多肽GluR2-3Y溶解在生理盐水中得到的多肽溶液；所述多肽GluR2-3Y在所述多肽GluR2-3Y溶液中的终浓度进一步具体为I. 5 μ mol/mL。
3.根据权利要求I或2所述的应用，其特征在于所述精神活性物质依赖与复吸为阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和/或大 麻类物质依赖与复吸； 所述阿片类物质为吗啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因类物质为可卡因，所述苯丙胺类物质为苯丙胺、甲基苯丙胺和/或摇头丸，所述大麻类物质为活性成分为四氢大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制剂； 所述产品为药物。
4.权利要求1-3中任一所述的应用中的所述多肽GluR2-3Y或所述以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂在制备预防和/或治疗精神活性物质依赖与复吸的产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述精神活性物质依赖与复吸为阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和/或大麻类物质依赖与复吸。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于所述阿片类物质为吗啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因类物质为可卡因，所述苯丙胺类物质为苯丙胺、甲基苯丙胺和/或摇头丸，所述大麻类物质为活性成分为四氢大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制剂；所述产品为药物。
7.一种预防和/或治疗精神活性物质依赖与复吸的产品，其活性成分为多肽GluR2-3Y或以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂；所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列为序列表中的序列I ; 所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列中自氨基末端的第I位Tyr为氨基直接连接在β -碳原子上的Tyr ;所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自α -碳原子上的氨基酸残基。
8.一种抑制精神活性物质依赖与复吸的产品，其活性成分为多肽GluR2-3Y或以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂；所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列为序列表中的序列I ; 所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列中自氨基末端的第I位Tyr为氨基直接连接在β -碳原子上的Tyr ;所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自α _碳原子上的氨基酸残基。
9.根据权利要求7或8所述的产品，其特征在于所述以多肽GluR2-3Y为有效成分的制剂为含有GluR2-3Y的注射剂、缓释剂、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊或口服液。
10.根据权利要求7-9中任一所述的产品，其特征在于所述精神活性物质依赖与复吸为阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和/或大麻类物质依赖与复吸； 所述阿片类物质具体为吗啡、可待因、海洛因、哌替啶和/或美沙酮，所述可卡因类物质具体为可卡因，所述苯丙胺类物质具体为苯丙胺、甲基苯丙胺和/或摇头丸，所述大麻类物质具体为活性成分为四氢大麻酚、大麻二酚和/或大麻酚的制剂； 所述产品为药物。
全文摘要
本发明公开了一种多肽GluR2-3Y的新用途。本发明提供了多肽GluR2-3Y和以多肽GluR2-3Y为有效成分制备的各种预防和/或治疗精神活性物质依赖与复吸的药品中的应用；所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列为序列表中的序列1；所述多肽GluR2-3Y的氨基酸序列中自氨基末端的第1位Tyr为氨基直接连接在β-碳原子上的Tyr；所述氨基酸残基序列的其他氨基酸残基为氨基直接连接在各自α-碳原子上的氨基酸残基。本发明的实验证明，GluR2-3Y可以预防和治疗各种精神活性物质的依赖与复吸(包括阿片类物质药物依赖与复吸、可卡因类物质依赖与复吸、苯丙胺类物质依赖与复吸和大麻类物质依赖与复吸)。
文档编号A61P25/36GK102727864SQ20121023218
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月5日 优先权日2012年7月5日
发明者于龙川, 张建军 申请人:北京大学