专利名称：替普瑞酮防治吗啡所致的肾脏损伤的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种替普瑞酮的新用途，具体是替普瑞酮在制备预防和/或治疗吗啡所致的肾脏损伤中的应用，属于医药技术领域。
背景技术：
阿片类药物的滥用已经成为国内外关注的严重的社会问题。吗啡作为一种强有效的镇痛剂常用于治疗急性和慢性疼痛，是阿片类药物的一种。但长期应用吗啡会导致多个系统和器官的细胞死亡和凋亡，其临床应用受到很大的限制(Nestler EJ, AghajanianGK. Molecular and cellular basis of addiction. Science. 1997 ；278 :58-63. Yin D，Mufson RA, Wang R， Shi Y. Fas—mediated cell death promoted by opioids. Nature.1999; 397-218. Hu S，Sheng WSj Lokensgard JRj Peterson PK. Morphine inducesapoptosis of human microglia and neurons. Neuropharmacology. 2002 ；42 :829— 836.)。其中，吗啡对肾脏的损害是显著而又严重的。寻找保护吗啡所致的肾脏损伤的药物对于降低吗啡的副作用及更广泛地应用吗啡具有重要的意义。替普瑞丽(geranylgeranylacetone，GGA)，即6，10，14，18-四甲基-5，9，13，17-十九烷四烯-2-酮的单顺式和全反式异构体的混合物，现已被广泛应用于消化道溃疡的治疗中。近年研究发现，GGA对光损伤、缺血性肾衰竭、癫痫和脑梗塞等疾病具有保护作用(Tanito M, Kwon Y. W, Kondo N，Bai J, Masutani H，Nakamura H，Fujii J, OhiraA, Yodoi J. Cytoprotective effects of geranylgeranylacetone against retinalphotooxidative damage, J Neurosci 2005; 25， 2396—404; Suzuki S， MaruyamaS, Sato W, Morita Y，Sato F，Miki Y，Kato S，Katsuno M，Sobue G，Yuzawa Y，Matsuo S. geranylgeranylacetone ameliorates ischemic acute renal failure viainduction of Hsp70. Kidney Int 2005;67:2210-20; Fujiki M， Kobayashi H， Inoue R，Tatsuya R， Ishii K. Single oral dose of geranylgeranylacetone for protectionagainst delayed neuronal death induced by transient ischemia. Brain Res2004;1020:210-213; Yasuda H， Shichinohe H， Kuroda S， Ishikawa T， Iwasaki Y.Neuroprotective effect of a heat shock protein inducer, geranylgeranylacetonein permanent focal cerebral ischemia. Brain Res 2005; 1032:176-182)。替普瑞酮是否可以用于防治吗啡所致的肾脏损伤尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种替普瑞酮的新用途，即替普瑞酮在制备防治吗啡所致的肾脏损伤的药物中的应用。本发明所述的应用是以替普瑞酮为活性成分在制备防治吗啡所致的肾脏损伤的药物中的作用。本发明所述应用中还可以加入一种或多种药物上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂和稳定剂等，必要时还可加入香味剂、色素和甜味剂等。本发明所述应用除制成胶囊外，还可以制成丸齐IJ、粉剂、片齐IJ、粒剂、口服液和注射液等多种形式。本发明动物实验结果显示(I)预先口服GGA，2小时后注射吗啡，连续7天后，检测小鼠肾脏细胞内pro-caspase-9的表达情况。发现预先口服一定浓度的GGA,能够抑制吗啡导致的caspase-9的激活；(2)预先口服GGA，2小时后注射吗啡，连续7天后，检测小鼠肾脏细胞内caspase-3的表达情况，发现预先口服一定浓度的GGA，能够抑制吗啡导致的caspase-3的激活；(3)预先口服GGA，2小时后注射吗啡，连续7天后，检测小鼠肾脏细胞内丙二醛(MDA)的表达水平，发现预先口服一定浓度的GGA，能够抑制吗啡导致的丙二醛(MDA)的增加；上述实验结果表明在肾脏中GGA可以抑制吗啡所致的细胞凋亡和脂质过氧化损伤。因此，替普瑞酮可用于防治吗啡所致的肾脏损伤。
由于替普瑞酮在制备防治吗啡所致的肾脏损伤的药物中的作用是首次发现，因此，无论是GGA单独使用为活性成分制成的药剂，还是利用GGA防治吗啡所致的肾脏损伤的作用与其他活性成分配合使用制成的药剂，均在本专利的保护范围之内。本发明的药物具有以下优点(1)疗效显著；(2)安全性高；(3)价格低廉，可以减轻病人的经济负担。(4)老药新用，无需临床药物毒性的实验。
图I是替普瑞酮在肾脏中抑制吗啡所致的caspase-9的激活的实验分析结果。图2是替普瑞酮在肾脏中抑制吗啡所致的caspase-3的激活的实验分析结果。图3是替普瑞酮在肾脏中抑制吗啡所致的丙二醛(MDA)的增加的实验分析结果。图中为不添加，“ + ”为添加。
具体实施例方式下面通过附图和实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。本发明实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，本发明实施例中使用的细胞、试剂、材料取材、蛋白提取方法、蛋白免疫印迹法检测肝脏方法如下
I、实验动物=SPF级C57BL/6小鼠，雄性，6_7周龄，体重22_25g，由重庆医科大学实验动物中心提供。小鼠单笼隔离饲养，饲喂专用饲料，自由饮食和饮水。2、药品替普瑞酮(日本卫材公司生产，分子量330. 55)，盐酸吗啡注射液(东北制药集团公司沈阳第一制药厂)，丙二醒(MDA) ELISA试剂盒(美国RD公司),抗caspase-9抗体和抗caspase-3抗体(美国Santa Cruz公司)。3、组织取材方法小鼠猝死后，用生理盐水进行灌流，然后取出小鼠的肾脏组织，液氮冷冻后，-80°C保存。4、蛋白提取将肾脏组织在冰浴下匀浆，并加入700微升的细胞裂解液(150 mMNaCl, 0. 5% NP-40, IOmM Tris-HCl, pH 7. 2，0. ImM PMSF, 2ug/ml aprotinin, 200ug/ml NaN3),然后转移到离心管中，冰浴下放置裂解30min (中间振荡2 3次)，4°C下15000rpm离心15min，转上清至新离心管中，_80°C保存。5、蛋白免疫印迹法
总蛋白加样量为20 ii g，与2XSDS凝胶加样缓冲液混合后，95°C热变性5 min，用15%的SDS-PAGE胶电泳分离后，将蛋白条带电转移到PVDF膜上，用10 %脱脂牛奶4°C封闭过夜；取出PVDF膜，用含0. I % Tween-20的TPBS冲洗后，加入500倍稀释的一抗室温孵育60 min ;用含0. I % Tween-20的TPBS冲洗，加入10000倍稀释的二抗室温孵育60 min ;用含0. I % Tween-20的TPBS冲洗，将PVDF膜浸入发光底物溶液中反应3 min后，用X射线胶片曝光。
实施例I :替普瑞酮在肾脏中抑制吗啡所致的caspase-9的激活小鼠分成4组(每组6只)对照组(saline)、吗啡组(Mor)、GGA和吗啡组(GGA+Mor)、GGA组。从第I天到7天，Saline组和Mor组预先灌胃给予生理盐水，GGA+Mor组和GGA组预先灌胃给予GGA (800 mg/kg)，2 h后Saline组和GGA组腹腔注射生理盐水，Mor组和GGA+Mor组腹腔注射吗啡(每天注射的剂量为10、20、40、60、80、100 and 100 mg/kg)。在最后一次吗啡注射2 h后，分离小鼠的肾脏组织，提取蛋白，用蛋白免疫印迹法检测肾脏细胞内pro-caspase-9的表达变化情况。图I结果显示，预先灌注GGA可以抑制吗啡所致的pro-caspase-9的减少,这说明替普瑞酮在肾脏中可抑制吗啡所致的caspase-9的激活,抵抗吗啡对线粒体的损伤。实施例2 :替普瑞酮在肾脏中抑制吗啡所致的caspase-3的激活
小鼠分成4组(每组6只)对照组(saline)、吗啡组(Mor)、GGA和吗啡组(GGA+Mor)、GGA组。从第I天到7天，Saline组和Mor组预先灌胃给予生理盐水，GGA+Mor组和GGA组预先灌胃给予GGA (800 mg/kg)，2 h后Saline组和GGA组腹腔注射生理盐水，Mor组和GGA+Mor组腹腔注射吗啡(每天注射的剂量为10、20、40、60、80、100 and 100 mg/kg)。在最后一次吗啡注射2 h后，分离小鼠的肾脏组织，提取蛋白，用蛋白免疫印迹法检测肾脏细胞内caspase-3的表达变化情况。图2结果显示,预先灌注GGA可以抑制吗啡所致的activecaspase-3的增加,这说明替普瑞酮在肾脏中可抑制吗啡所致的caspase-3的激活,抵抗吗啡所致的细胞凋亡。
实施例3 :替普瑞酮在肾脏中抑制吗啡所致的丙二醛(MDA)的增加小鼠分成4组(每组6只)对照组(saline)、吗啡组(Mor)、GGA和吗啡组(GGA+Mor)、GGA组。从第I天到7天，Saline组和Mor组预先灌胃给予生理盐水，GGA+Mor组和GGA组预先灌胃给予GGA (800 mg/kg)，2 h后，Saline组和GGA组腹腔注射生理盐水，Mor组和GGA+Mor组腹腔注射吗啡(每天注射的剂量为10、20、40、60、80、100 and 100 mg/kg)。在最后一次吗啡注射2 h后，分离小鼠的肾脏组织，在冰浴中用磷酸盐缓冲液制备成10 %的匀浆，高速冷冻离心机离心10 min (4 0C >4000 rpm条件下)，取上清液，使用丙二醛(MDA)ELISA试剂盒检测丙二醛(MDA)的含量。图3结果显示，预先灌注GGA可以抑制吗啡所致的丙二醛(MDA)的增加(与saline组小鼠对比，*/ < 0. 05 ;与Mor组小鼠对比，#p < 0.05)。这说明替普瑞酮在肾脏中可抑制吗啡所致的脂质过氧化，抵抗吗啡所致的氧化损伤。
权利要求
1.替 普瑞酮在制备防治吗啡所致的肾脏损伤的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及替普瑞酮在制备防治阿片类药物所致的肾脏损伤的新用途。本发明公开了替普瑞酮可以保护肾脏细胞免受吗啡的毒害，可以抑制吗啡引起的细胞凋亡，减弱吗啡所致的脂质过氧化损伤。替普瑞酮可用于吗啡所致的肾脏损伤的预防与治疗。
文档编号A61K31/121GK102764249SQ201210240768
公开日2012年11月7日 申请日期2012年7月12日 优先权日2012年7月12日
发明者白洁, 罗富成, 邓娟 申请人:昆明理工大学