专利名称：一株头棒束孢霉及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株头棒束孢霉及其应用。
背景技术：
目前世界在治疗肿瘤方面行之有效的方法就是手术，还有手术之后的化疗与放疗，但是如果仅凭手术治疗肿瘤，这样治好的肿瘤，在以后肿瘤复发率是相当高的，还得需要进行食疗来辅助，而且化疗放疗对人体的副作用是非常高的，给患者带来很大的痛苦，所以实际呢在某些时候在放化疗之后患者生存的时间比没有比化疗放疗前生存的时间更长，所有现代医学开始进行综合治疗方案，什么是综合治疗呢？所谓综合治疗就是在手术前后，进行放化疗手术的同时服用具有能够缓解抵抗放化疗之后对身体的伤害与疼痛的保健食品。所以，开发能够缓解抵抗放化疗之后对身体的伤害与疼痛的保健食品对肿瘤的治疗具有重要的意义。
发明内容
本发明的一个目的是提供一株头棒束孢霉及其应用。本发明所提供的头棒束孢霉菌株是头棒束孢霉(Isaria cretacea) A_01,其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No. 6204。该菌种已于2012年06月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCOo头棒束孢霉(Isaria cretacea) A-01是蔡春于1987年8月从中国四川阿坝地区采集的虫草蝙蝠蛾幼虫(Hepialius armoricanus)上分离的菌种(其培养特征及形态特征如下在蛋白胨葡萄糖培养基25°C培养，菌落呈白色，绒毛状，有浅皱，培养三四天菌丝出现束状，后编结明显，两至三周，散生和丛生的白色孢梗束生长旺盛，下部有柄，上端稍扁，呈分枝状，孢梗束长达2. 5-4. 5厘米，直径为O. 6-2. O毫米。孢梗束由许多平行及交错的菌丝体编结组成，周围呈粉末状，孢梗束外周布满大量分生孢子及散生菌丝。该菌菌丝透明、有隔、分枝，直径2. 2-2. 8微米，瓶梗从菌丝或从一短梗上长出，无色透明，单生、互生或对生，中上部稍膨大，顶端收缩。分生孢子呈卵形或椭圆形，大小为2. 5-3. 5X2. 2-2. 8微米，无色光滑透明，聚生于瓶梗顶部。本发明的另一个目的是提供一种微生物菌剂。本发明所提供的微生物菌剂，它的活性成分是头棒束孢霉(Isaria cretacea)A-01,具体可为头棒束孢霉(Isaria cretacea) A-Ol的分生孢子和/或菌丝体。该菌剂具有下述至少一种作用I)对X射线照射的动物骨髓和小肠具有保护作用；2)对动物染色体损伤具有保护作用；3)增强射线对肿瘤杀伤的作用；4)细胞免疫调节作用；
5)体液免疫调节作用；6)治疗心悸；7)治疗气短；8)治疗乏力；9)治疗胸闷；10)治疗纳差；11)治疗便秘；
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12)治疗失眠；13)治疗多梦。该菌剂可按照包括以下步骤的方法制备将头棒束孢霉(Isaria cretacea) A-Ol接入PDA培养基中，在16-20°C，每天24小时黑暗条件下培养14天，将培养容器内的所有培养物干燥粉碎得到所述菌剂。实施例2-6的实验证明，头棒束孢霉(Isaria cretacea) A_01及以其为活性成分的菌剂可用于制备具有下述至少一种功能的产品I)对X射线照射的动物骨髓和小肠具有保护作用；2)对动物染色体损伤具有保护作用；3)增强射线对肿瘤杀伤的作用；4)细胞免疫调节作用；5)体液免疫调节作用；6)治疗心悸；7)治疗气短；8)治疗乏力；9)治疗胸闷；10)治疗纳差；11)治疗便秘；12)治疗失眠；13)治疗多梦。所述产品具体可为药物或保健品。囷种名称头棒束抱霉拉丁名Isariacretacea菌株编号A-01保藏机构中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏机构简称CGMCC地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号保藏日期2012年06月07日保藏中心登记入册编号CGMCC No. 6204下面结合具体实施例详细描述本发明，这些实施例用于理解而不是限制本发明。
图I为头棒束孢霉(Isaria Cretacea) A_0ICGMCC No. 6204的菌种袋培养物照片。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的培养基每IL蛋白胨葡萄糖培养基由如下物质制成蛋白胨10g、葡萄糖10g、琼脂20g和水。其中，用水将培养基定容至1000ml。每IL PD培养基由如下物质制成200g 土豆、20. Og葡萄糖和水。其中，用水将培 养基定容至1000ml。每IL PDA培养基由如下物质制成200g土豆、20.(^葡萄糖、2(^琼脂和水。其中，用水将培养基定容至1000ml。ro培养基的配制方法如下将切成小块的去皮土豆煮沸半小时，然后用纱布过滤，在滤液中，加入葡萄糖，用水定容至IOOOmL,得到H)培养液，再把ro培养液150ml装入300ml三角瓶中，121 °C湿热灭菌30min得到H)培养基。籼米培养基的配制方法如下先将150g籼米装于准备好的菌种袋中，加入75ml未灭菌的ro培养液，用棉塞封口，再用牛皮纸包扎好，高温灭菌制备。其中高温灭菌条件I. lkPa，121°C条件下，湿热灭菌半个小时。PDA培养基的配制方法如下将切成小块的去皮土豆煮沸半小时，然后用纱布过滤，在滤液中，加入葡萄糖和琼脂，用水定容至IOOOmL,再121 °C湿热灭菌30min得到PDA培养基。蛋白胨葡萄糖培养基的配制方法如下将琼脂放入水中煮熔，再加入蛋白胨和葡萄糖后搅拌溶解，调pH值至6. 5 7，用水定容至IOOOmL,再121 °C湿热灭菌30min得到蛋
白胨葡萄糖培养基。实施例I、头棒束抱霉(Isaria Cretacea)A_0ICGMCC No. 6204 菌种的制备将头棒束孢霉(Isaria Cretacea)A_0ICGMCC No. 6204接种于PDA培养基的斜面上，在18 °C,黑暗条件下培养14天，得到头棒束孢霉(Isaria Cretacea) A-OICGMCCNo. 6204 菌种。实施例2、头棒束抱霉(Isaria Cretacea) A_0ICGMCC No. 6204菌丝粉的制备I、菌种液的制备将头棒束抱霉(Isaria Cretacea)A~0ICGMCC No. 6204菌种接种于ro培养基中，在22°C，转速150rpm，黑暗条件下进行振荡培养72小时得到菌种液。2、制备菌丝粉将灭菌好的籼米培养基,隔着菌种袋揉碎,每袋在无菌条件下接种入菌种液15ml，继续无菌操作，用棉塞封好口，隔着菌种袋揉匀后，放入培养室，在培养架上以不接触棉塞为标准尽量摊平摆放培养。在黑暗条件下，18°C环境中，培养21天。21天后，将菌种袋内的所有培养物(如图I，包括培养基、分生孢子和菌丝)在80°C条件下烘干72小时，干燥后粉碎后过120目筛，得到头棒束孢霉(Isaria Cretacea)A-OICGMCC No. 6204菌丝粉。实施例3、头棒束孢霉(Isaria Cretacea) A_0ICGMCC No. 6204对X射线照射小鼠的骨髓和小肠具有保护作用
本实施例采用脾结节形成法观察BALB/c小鼠服用实施例2的头棒束孢霉(IsariaCretacea) A-OICGMCC No. 6204菌丝粉后受不同剂量X线照射后骨髓干细胞的存活情况，以单纯受照射及正常小鼠为对照；以小肠隐窝细胞再生法观察BALB/c和KM小鼠在服用实施例2的头棒束孢霉(Isaria Cretacea) A-OICGMCC No. 6204菌丝粉不同时间受不同剂量X线照射后的小肠隐窝细胞再生情况与单纯照射组相比较。材料与方法I、脾克隆(脾结节)形成实验
小鼠供体小鼠及受体小鼠均为BALB/c纯系小鼠,雌、雄各半,体重18-22克，。照射条件实验采用SL75-20直线加速器，8MeV_X线，SSD :80cm，剂量率468cGy/min.照射前进行剂量校准，照射时将小鼠置于有机玻璃盒内，表现覆盖2cm腊块，作全身照射。实验方法供体鼠BALB/c纯系小鼠120只(雌、雄各半)，均分两大组单纯照射组(对照组)和加药组。加药组用如下含药料喂养在普通饲料中加入实施例2的头棒束孢霉(IsariaCretacea)A-OICGMCC No. 6204菌丝粉制成含药料，该含药料中的头棒束孢霉(IsariaCretacea) A-OICGMCC No. 6204菌丝粉的含量使每只小鼠的给药量达3g菌丝粉/kg体重。单纯照射组用普通饲料喂养。喂养10天后，将加药组和单纯照射组的各60只小鼠均分为6小组，分六个剂量点(0Gy、lGy、2Gy、3Gy、4. 5Gy和6Gy)于清醒状态下分别进行全身照射。照射后2小时内断颈处死小鼠。无菌情况下剥离股骨，用O. 9%生理盐水灌注到骨髓腔内，反复冲洗三次，将同一剂量组的骨髓混合制成单细胞悬液。显微镜下计数有核细胞数并根据不同照射剂量将细胞稀释到所需浓度，低温保存备用。受体鼠BALB/c纯系小鼠120只(雌、雄各半)，全身照射8.5Gy后，分成与供体鼠实验条件相对应的12组，每组10只小鼠。于照射后，2小时内行尾静脉注射上述待用的供体小鼠(注射的细胞数量依照射剂量而定)。照射后用普通饲料喂养9天，然后断颈处死小鼠，取脾,!^!!![!!^液固定三天^军剖镜下进行脾克隆形成单位丨⑶]^]!}^。； ^]^ unit of spleen,CFU )计数。结果如表1-3所示,表明在照射前服用实施例2的头棒束孢霉(Isaria Cretacea)A-OICGMCC No. 6204菌丝粉的小鼠，受l_3Gy照射后，骨髓干细胞存活数均高于单纯照射组。在未照射的小鼠中，服用实施例2的头棒束孢霉(Isaria Cretacea)A-OICGMCC No. 6204菌丝粉也能使骨髓干细胞的活性有一定提高。如以细胞存活曲线的形式表示骨髓干细胞的存活情况，可见l_3Gy照射时加药组的骨髓干细胞存活情况均较单纯照射组为高。以Dq比的保护作用(防护系数)为1.677。说明在较低剂量时(即放射治疗时每分次照射剂量范围内)实施例2的头棒束孢霉(Isaria Cretacea) A-OICGMCC No. 6204菌丝粉对骨髓干细胞有显著的保护作用。表I.小鼠脾克隆计数
权利要求
1.头棒束孢霉Isariacretacea),其特征在于所述头棒束孢霉Isaria cretacea)的菌株号为A-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No. 6204。
2.权利要求I所述的头棒束孢霉(Isariacretacea)在生产分生孢子中的应用。
3.权利要求I所述的头棒束孢霉(Isariacretacea)在生产菌丝体中的应用。
4.微生物菌剂，它的活性成分是权利要求I所述的头棒束孢霉(Isariacretacea)。
5.根据权利要求4所述的菌剂,其特征在于所述头棒束孢霉(Isariacretacea)为分生孢子和/或菌丝体。
6.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于所述菌剂具有下述至少一种作用 1)对X射线照射的动物骨髓和小肠具有保护作用； 2)对动物染色体损伤具有保护作用； 3)增强射线对肿瘤杀伤的作用； 4)细胞免疫调节作用； 5)体液免疫调节作用； 6)治疗心悸； 7)治疗气短； 8)治疗乏力； 9)治疗胸闷； 10)治疗纳差； 11)治疗便秘； 12)治疗失眠； 13)治疗多梦。
7.根据权利要求4、5或6所述的菌剂，其特征在于所述菌剂按照包括以下步骤的方法制备将权利要求I所述的头棒束孢霉(Isaria cretacea)接入PDA培养基中，在16-20°C，每天24小时黑暗条件下培养14天，将培养容器内的所有培养物干燥粉碎得到所述菌剂。
8.权利要求4、5或6所述的菌剂的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤将权利要求I所述的头棒束孢霉(Isaria cretacea)接入PDA培养基中,在16_20°C,每天24小时黑暗条件下培养14天，将培养容器内的所有培养物干燥粉碎得到所述菌剂。
9.权利要求I所述的头棒束孢霉(Isariacretacea)、权利要求4、5或6所述的菌剂，在制备具有下述至少一种功能的广品中的应用 1)对X射线照射的动物骨髓和小肠具有保护作用； 2)对动物染色体损伤具有保护作用； 3)增强射线对肿瘤杀伤的作用； 4)细胞免疫调节作用； 5)体液免疫调节作用； 6)治疗心悸； 7)治疗气短； 8)治疗乏力；9)治疗胸闷；10)治疗纳差；11)治疗便秘； 12)治疗失眠；13)治疗多梦。
全文摘要
本发明公开了一株头棒束孢霉及其应用。该头棒束孢霉菌株是头棒束孢霉(Isaria cretacea)A-01，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.6204。头棒束孢霉(Isaria cretacea)A-01及以其为活性成分的菌剂可用于制备具有下述至少一种功能的产品1)对X射线照射的动物骨髓和小肠具有保护作用；2)对动物染色体损伤具有保护作用；3)增强射线对肿瘤杀伤的作用；4)细胞免疫调节作用；5)体液免疫调节作用；6)治疗心悸；7)治疗气短；8)治疗乏力；9)治疗胸闷；10)治疗纳差；11)治疗便秘；12)治疗失眠；13)治疗多梦。
文档编号A61K36/06GK102776129SQ20121027013
公开日2012年11月14日 申请日期2012年7月31日 优先权日2012年7月31日
发明者蔡凡, 蔡春 申请人:蔡凡, 蔡春