专利名称：丹参酮ⅱa在制备治疗银屑病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及丹參酮II A的新用途，具体涉及丹參酮II A在制备治疗银屑病药物中的应用。
背景技术：
银屑病是ー种由多基因遗传決定的、多环境因素刺激诱导的免疫异常性慢性增生性皮肤病。银屑病的主要病理改变为角质形成细胞异常增生、角化不全、新生血管形成和炎性细胞浸润，其临床特征是在红斑上反复出现多层银白色干燥鳞屑，剥去鳞屑有明显的出血;1^U (Frank O. Nestle, Daniel H. Kaplan, Jonathan Barker. Psoriasis [J].N Engl JMed，2009，361:496-509)。银屑病的病因与发病机制非常复杂，目前尚无完全根治的手段，该病属高发病种，在英美国家其发病率为2%，在我国其发病率为O. 123%。全 球范围内该病患者已愈两千万，且发病率呈持续升高的趋势。(Weger ff. Current statusand new developments in the treatment of psoriasis and psoriatic arthritiswith biological agents[J]. Br J Pharmacol, 2010, 160:810-20 ；Bailey EE,FerenceEH, Alikhan A, et al. Combination Treatments for Psoriasis:A Systematic Review andMeta-analysis[J]. Arch Dermatol, 2012, 148(4):511-522)由于银屑病反复发作，常需反复治疗，因而给患者及其家庭带来沉重的经济负担，对患者的身体健康和精神影响甚大。中医古籍很早就有关于银屑病的记载，称之为“白庀”、“松皮癬”。目前，治疗银屑病的药物，如维A酸、甲氨蝶呤、环孢素、依那西普或地塞米松等糖皮质激素，但这些药物存在不少缺点如毒副作用大，许多患者不能耐受；只能快速控制进行期患者的症状，不能有效延长患者的缓解期；生物制剂如依那西普等价格十分昂贵。中医中药治疗银屑病疗效独特，因此积极开展研究，进ー步筛选中草药中抗银屑病的有效成分，进而开发出新型银屑病的药物具有十分重要的意义。參酮II A是ー种从中药丹參中提取的有效成分，IUPAC命名Phenanthro [1，2_b]furan-10, 11-dione, 6, 7, 8, 9-tetrahydro-l, 6, 6-trimethyl,英文名称 Tanshinone II A,别名丹參醌II，丹參醌II A，分子式C19H1803,分子量294. 33 ；CAS号568_72_9，物理性质桔红色针状结晶(EtOAc)，熔点209 210°C。易溶于こ醇、丙酮、こ醚、苯等有机溶剤，微溶于
水。其结构简式如下H3C CH3
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0Y^h3目前文献报导，所述丹參酮IIA具有抗肿瘤、抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化、抗心律失常等多种药理作用，但国内外尚未见将丹參酮II A用于治疗银屑病的相关报道。
发明内容
本发明的目的是公开丹參酮II A在制备治疗银屑病药物中的应用，以克服现有技术中的不足。试验证明，所述的丹參酮II A，具有明显的抑制HaCaT细胞增值的作用，能够用于制备治疗银屑病药物，所述的丹參酮II A，可采用文献(徐义.丹參酮II A的提取方法研究， 化学工程师，2004,8:64-65)报导的方法制备，或者采用商业化的产品，如东科麦迪森医药科技有限公司、宝鸡市国康生物科技有限公司的产品；本发明还涉及ー种用于治疗银屑病的药物组合物，包括治疗有效量的丹參酮II A和医药学上可接受的载体，所述的载体是指药学领域常规的载体，例如稀释剂、赋形剂如水等；粘合剂如纤维素衍生物、明胶、聚こ烯吡咯烷酮等；填充剂如淀粉等；崩裂剂如碳酸钙、碳酸氢钠；另外，还可以在组合物中加入其他辅助剂如防腐剤、抗菌剂等；本发明的组合物可以制备成胶囊剂、片剂等常用ロ服固体制剂和乳膏、霜剂、凝胶剂等外用制剂；所述用于治疗银屑病的药物组合物中，丹參酮II A的重量含量为I 99% ；本发明的药物组合物，可以通过外用和ロ服的途径施加于需要治疗的患者，ロ服剂量一般为10 30mg/公斤体重/天，外用剂量则是皮损部位100 300mg/cm2/天,具体可根据患者的年龄、病情，由医师决定。综上所述，目前银屑病缺乏有效的治疗手段，本发明的有益效果在于根据银屑病的病因和病理机制，大量筛选了一千多种中草药化合物，终于筛选出能够有效治疗银屑病的丹參酮II A0本发明的丹參酮II A经细胞实验、动物实验和临床试验证实效果显著，安全性好，是ー种新型的银屑病治疗药物，具有较强的发展前景。
具体实施例方式以下通过实施例进ー步说明本发明，但不用来限制本发明。实施例I制备ロ服治疗银屑病的丹參酮II A胶囊(1000粒)，组分的重量如下原料重量(g)供应商
丹参酮IIA100东科麦迪森医药科技
乳糖80广州利源化工
硬脂酸镁5 郑州远大化工
生产エ艺将丹參酮II A、乳糖混合均匀，用水润湿，然后过20目筛，干燥，再次过22目筛，然后加入硬脂酸镁，混合均匀，装入胶囊。实施例2制备外用治疗银屑病的丹參酮II A乳膏，组分的重量百分比如下
原料比例(%) 供应商
A相
十六十八醇15 晨茜化工
尿囊素0.2 东雄化工
硬脂酸5 晨茜化工
白凡士林4 晨茜化工
26号白油30
单硬脂酸甘油酯3 晨茜化工
液体石蜡I 晨茜化工B相
甘油晨茜化工
丹参酮IIA5 东科麦迪森医药科技
吐温一800.1 成冠化工
尼泊尔金甲酯0.1 锐谷生物科技
尼泊尔金丙酯0.2 锐谷生物科技
去离子水余量生产エ艺I.称取A相所有组分，90°C条件下混合；2.称取B相所有组分，90 V条件下混合；3.将A相缓慢加入B相中，边加边搅拌，时间约20分钟；4.均质20分钟后，降至室温即得乳膏。实施例3丹參酮II A抑制人角质形成细胞(HaCaT细胞)增值的实验研究报告I.材料与方法
I. I材料丹參酮II A标准品购自中国药品生物制品检定所；阳性对照药物地蒽酚购自武汉同兴生物科技公司；3-(4，5_ ニ甲基噻唑-2)-2，5-ニ苯基四氮唑溴盐(MTT)购自北京鼎国生物技术有限公司；H0echeSt 33258荧光染料购自美国sigma公司；Annexin V细胞凋亡检测试剂盒购自联科生物技术有限公司。I. 2仪器日本奥林巴斯公司BX-61荧光显微镜；美国贝克曼库尔特有限公司FC-500流式细胞仪；美国BIOTEK公司Epoch酶标仪。I. 3 方法I. 3. IMTT检测细胞增殖及IC5tl计算选择对数生长期HaCaT细胞，消化液消化，MEM完全培养液调制成I. 5 X 104/ml细胞悬液，接种在96孔培养板内，姆孔100 μ I, 24h后见细胞完全贴壁,分别换入含丹參酮II A或地蒽酚的MEM液，每孔100 μ 1，使药物终浓度分别为O. 1,0. 2,0. 5,1. 0,2. 0,5. 0,10. O、20. Omg/ml，对照组加入MEM液，每组浓度均设6个复孔。培养48小时后，每孔加入MTT 10μ l(5mg/ml),继续孵育4小吋，此时镜检可观察到、活细胞内形成的颗粒状蓝紫色結晶。小心吸去上清，加DMSO 150μ1/孔终止反应。在微型振荡器上摇匀15min，溶解形成的结晶，立即比色，在主波长570nm，參比波长655nm处用酶标仪检测吸光度A值。比色以空白孔调零，细胞増殖率=(A实验组-A对照组)/A对照组X 100%,増殖抑制率=(I-増殖率)X 100%,每组实验重复3次。根据增殖抑制率计算IC5(I。I. 3. 2Annexin V-FITC，PI双染，流式细胞仪器检测细胞早期凋亡选择对数生长期HaCaT细胞，消化液消化，MEM完全培养液调制成5 X 105/ml细胞悬液，接种在60mm培养板内，姆孔5ml, 24h后见细胞完全贴壁,分别换入含隐丹參酮、丹參酮I和丹參酮IIa的MEM液，使药物终浓度分别为O. 5、I. 0,5. O、10. Omg/ml，对照组加入MEM液，培养48h后，弃去培养基，PBS洗一遍，O. 25%胰酶(无EDTA)消化细胞呈单细胞悬液，离心收集细胞，PBS洗一遍,重悬细胞于O. 5ml binding buffer,分别加入FITC突光标记的Annexin V (100 μ g/ml) 5 μ I 和 PI (10 μ g/ml) 10 μ 1，室温下避光孵育 5min，流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。2.结果2. I丹參酮II A对HaCaT细胞增值抑制作用MTT实验结果显示，作用24小时最小抑制浓度为O. lmg/mL, IC50采用直线回归方程分析，作用24小时为2. 26mg/mL,与地蒽酚(IC50=L 31mg/mL)在同一数量级。2. 2流式细胞仪检测细胞周期的变化及细胞凋亡不同浓度的丹參酮II A作用于HaCaT细胞48小时后，G2/M期细胞百分比与对照组相比明显增加，G1期百分比減少，细胞阻滞于G2/M期，且随着浓度增加，G2/M期比例不断上升，G1期比例不断減少(表I)。表I不同浓度丹參酮II A作用48小时对HaCaT细胞周期的影响(％)
权利要求
1.丹參酮IIA在制备治疗银屑病药物中的应用。
2.一种用于治疗银屑病的药物组合物，其特征在于，包括治疗有效量的丹參酮II A和医药学上可接受的载体。
3.根据权利要求2所述的用于治疗银屑病的药物组合物，其特征在于，为胶囊剂、片剂等常用ロ服固体制剂或乳膏、霜剂、凝胶剂等外用制剂。
4.根据权利要求2所述的用于治疗银屑病的药物组合物，其特征在于，丹參酮IIA的重量含量为I 99%。
5.根据权利要求I至4任ー项2所述的用于治疗银屑病的药物组合物，其特征在于，通过外用和ロ服的途径施加于需要治疗的患者。
全文摘要
本发明公开了丹参酮ⅡA在制备治疗银屑病药物中的应用。试验证明，所述的丹参酮ⅡA，具有明显的抑制HaCaT细胞增值的作用，能够用于制备治疗银屑病药物。本发明的有益效果在于，动物实验和临床试验证实效果显著，安全性好，是一种新型的银屑病治疗药物，具有较强的发展前景。
文档编号A61K31/58GK102824349SQ201210342420
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月14日 优先权日2012年9月14日
发明者卢传坚, 朱伟, 贺嵩敏 申请人:广东省中医院