专利名称：黄连提取物与纳米银抑菌组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，尤其涉及一种中药抑菌组合物。
背景技术：
黄连属多年生草本，根茎黄色，常分枝，密生多数须根，为毛茛科的黄连，三角叶黄连或者云莲的干燥根茎。其主要分布于四川、贵州、湖南、湖北、陕西南部，具有清热燥湿，泻火解毒的功效。盐酸小檗碱(黄连素)是其主要的有效成分。现代药理实验研究表明黄连具有抗病原微生物作用，同时对金黄色葡萄球菌、大肠埃氏菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、铜绿假单胞菌、脑膜炎双球菌、痢疾杆菌、炭疽杆菌、流感病毒、乙肝病毒等都具有抑制作用。除此之外，黄连还有降血糖、抗肿瘤、抗腹泻、利胆、抗心律失常、抗炎以及免疫调节等作用。黄连因其具有较高的药用和保健价值，广泛引起了人们关注。
中药制剂浓缩液制成口服液或抑菌组合物、涂覆剂等一次用剂量大，且长期使用影响人体健康。
发明内容
针对黄连抑菌组合物一次用量大和长期使用影响人体健康问题，本发明人经过大量实验，发现纳米银能有效增强黄连提取液抑菌性能，减少黄连抑菌剂的用量，且采用两种低剂量的抑菌组合物，更加的安全。本发明的目的在于提供一种黄连纳米银抑菌组合物，减少黄连抑菌剂一次的用剂量和降低药品对人体的毒性。本发明提供如下技术方案
一种抑菌组合物，含有黄连提取液、水溶性纳米银；
黄连提取液制备包括如下步骤取干药材黄连，加水量为黄连重量的9倍，经95 °C水浴提取4 h，再经过减压浓缩得到提取液；所得提取液经O. 22 μ m滤膜过滤。所得提取液经高效液相色谱法对黄连素进行标准定量。抑制大肠杆菌0157:H7时，黄连提取液、水溶性纳米银的体积比为26. 6 30: I。抑制藤黄微球菌时，黄连提取液、水溶性纳米银的体积比为广1.2:1。在算体积时提取液中黄连素的含量为28 mg/mL，水溶性纳米银浓度为10 mg/mL。水溶性纳米银颗粒粒径为3 10 nm,纳米银外表包覆两性聚合物。水溶性纳米银粒径为3 10 nm,外表为羧基，依照下列方法制备取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氢氧化钠析出沉淀，过滤，将沉淀加入到100 mL浓度为10 mol/L水溶性的硝酸银溶液中得到十四烷酸银；称取6. 7 g浓度为20 mmoL/L十四烧酸银于100 mL烧杯中，向烧杯中加入58 mL浓度为40mmoL/L的三乙胺，80°C下电磁搅拌2 h，白色的十四烷酸银粉末逐渐变成棕色，不溶的前体消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽滤，用丙酮洗涤沉淀数次后，真空干燥，即得到纳米银粒子粉末。依照本方法制备的水溶性纳米银颗粒与黄连提取液具有良好的协同抗菌作用。本发明还涉及上述抑菌组合物在抑制大肠杆菌0157:H7中的应用。
本发明还涉及上述抑菌组合物在抑制藤黄微球菌中的应用。本发明的有益效果是本发明水溶性纳米银的应用能有效增强黄连抑菌性能，降低黄连抑菌剂的用量，更令人意想不到的是两种药物的合用对抑制大肠杆菌0157:H7和藤黄微球菌起到协同作用，同时本抑菌组合物采用两种低剂量的抑菌物质，相对于使用高剂量的黄连或者水溶性纳米银，更加的安全，可以作为安全可靠地外用涂覆剂等。
图I黄连提取液与水溶性纳米银之比为30:1的协同抑菌。图Ia 2 μ L纳米银对大肠杆菌0157:H7的抑制结果，图Ib 60 μ L黄连提取液 对大肠杆菌0157:Η7的抑制结果，图Ic 30 μ L黄连提取液与I μ L纳米银对大肠杆菌0157 :Η7的抑制结果。图2黄连提取液与水溶性纳米银之比为26. 6:1的协同抑菌
图2a表示的是I. 5 μ L纳米银对大肠杆菌0157:Η7的抑菌结果，图2c表示的是40 μ L黄连提取液对大肠杆菌0157:H7的抑菌结果，图2c表示的是O. 75 μ L纳米银、20 μ L黄连提取液混合物对大肠杆菌0157 :Η7的协同抑菌结果。图3黄连提取液与水溶性纳米银之比为I的协同抑菌
图3a表示的是16 μ L纳米银对藤黄微球菌的抑菌结果，图3b表示的是16 yL黄连提取液对藤黄微球菌的抑菌结果，图3c表示的是8 μ L纳米银、8 μ L黄连提取液对藤黄微球菌的协同抑菌结果。图4黄连提取液与水溶性纳米银之比为5:8的协同抑菌
图4a表示的是16 μ L纳米银对藤黄微球菌的抑菌结果，图4b表示的是10 μ L黄连提取液对藤黄微球菌的抑菌结果，图4c表示的是8 μ L纳米银与5 μ L黄连提取液对藤黄微球菌的协同抑菌结果。
具体实施例方式实施例I
I、黄连提取液的制备过程称取干药材黄连50 g，加水量为450 mL，在95 °C下提取4h，再经过真空旋转浓缩仪浓缩得到提取液，经O. 22 μ m滤膜过滤后，最后再用高效液相色谱法测得提取液中黄连素的含量为28 mg/mL。2、水溶性银纳米颗粒制备
取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氢氧化钠析出沉淀，过滤，将沉淀加入到100 mL浓度为10 mol/L水溶性的硝酸银溶液中得到十四烷酸银；称取6. 7 g浓度为20 mmoL/L十四烷酸银于100 mL烧杯中，向烧杯中加入58 mL浓度为40 mmoL/L的三乙胺，80°C下电磁搅拌2 h，白色的十四烷酸银粉末逐渐变成棕色，不溶的前体消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽滤，用丙酮洗涤沉淀数次后，真空干燥，即得到纳米银粒子粉末。3、黄连提取液与水溶性纳米银协同抑菌作用。a细菌的培养
挑取LB琼脂培养基上的大肠杆菌0157:H7的单菌落于10 mL LB肉汤培养基中，置于37 °C培养箱中培养16 h，再按I %的接种量接种于5 mL的LB肉汤培养基中，37 °C培养4h后。取I mL上述菌液用O. 1%的蛋白胨水连续稀释三个梯度，最终的菌液大约为IO6 CFU/
Π Τ, ηb水溶性纳米银与黄连提取液在抑菌性能上的协同作用
分别取I mL上述已稀释好的菌液于I. 5 mL灭菌的离心管中，向I号离心管中分别加Λ 60 μ L黄连提取液(黄连素的含量为28 mg/mL,下同)，向2号离心管中加入2 μ L浓度为10 mg/mL的水溶性纳米银，向3号离心管中加入30 μ L黄连提取液和I μ L浓度为10mg/mL水溶性纳米银，不加入任何上述抑菌剂。为保证每管液体最终体积相等，差量用O. 1%的蛋白胨水补齐。置于37 °C培养2 h。每组实验平行三次。c平板计数
将实验组待测液用PBS连续稀释两个梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分别均匀涂布在LB固体平板上；空白组连续稀释四个梯度，从10_2、10_3、10_4三个梯度分别均涂布
在
LB固体平板上。平板吹干后，37°C倒置培养12 h，长出菌落后计数，以30-300个菌落形成单位(CFU)为有效的计数范围。每毫升原菌液活菌数=平板计数*稀释倍数*5实验结果如下
权利要求
1.一种黄连提取物与纳米银抑菌组合物，其特征在于含有黄连提取液、水溶性纳米银；所述黄连提取液制备包括如下步骤加水量为黄连重量的9倍，提取时间为4 h，再经过减压浓缩得到提取液；所述水溶性纳米银依照下列方法制备取22. 8 g十四烷酸溶于140mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氢氧化钠析出沉淀，过滤，将沉淀加入到100 mL浓度为10 mol/L水溶性的硝酸银溶液中得到十四烷酸银；称取6. 7 g浓度为20 mmoL/L十四烧酸银于100 mL烧杯中，向烧杯中加入58 mL浓度为40 mmoL/L的三乙胺，80°C下电磁搅拌2 h，白色的十四烷酸银粉末逐渐变成棕色，不溶的前体消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽滤，用丙酮洗涤沉淀数次后，真空干燥，即得到纳米银粒子粉末。
2.如权利要求I所述的抑菌组合物，其特征在于抑制大肠杆菌0157:H7时，黄连提取液、水溶性纳米银的体积比为26. 6 30: I。
3.如权利要求I所述的抑菌组合物，其特征在于抑制藤黄微球菌时，黄连提取液、水溶性纳米银的体积比为广1.2:1。
4.如权利要求I所述的抑菌组合物，其特征在于所得提取液经O.22 μ m滤膜过滤。
5.如权利要求I所述的抑菌组合物，其特征在于所得提取液经高效液相色谱法对黄连素进行标准定量。
6.如权利要求f5任一所述抑菌组合物在抑制大肠杆菌0157 :H7中的应用。
7.如权利要求f5任一所述抑菌组合物在抑制藤黄微球菌中的应用。
全文摘要
本发明公开了黄连提取物与纳米银抑菌组合物，属于中药领域。抑菌组合物中黄连提取液与水溶性纳米银两种药物的合用对抑制大肠杆菌O157:H7、藤黄微球菌起到协同的作用。本发明的一种黄连提取物与纳米银抑菌组合物与现有的技术相比，解决了常规抑菌方法中黄连抑菌剂用量较大的问题，同时采用两种低剂量的抑菌物质减少了微生物耐药的发生机率、降低了其对人体的毒性，更加的安全。
文档编号A61P31/02GK102895341SQ20121036651
公开日2013年1月30日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者许恒毅, 杨林, 魏华, 曲锋, 徐锋, 万翠香, 熊勇华, 赖卫华 申请人:南昌大学