专利名称：疫苗的制作方法
疫苗本申请为申请号200680015245. 5的分案申请，要求2005年3月3日的的优先权。本发明涉及能诱导针对水痘带状疱疹病毒的免疫应答的组合物。水痘带状疱疹病毒(VZV)是人疱疹病毒，它是水痘和带状疱疹的病原体。初期感染或原发感染导致水痘，通常在幼年时感染上，此时是相对良性的。然而，对于幼年时未接触过水痘的成人，以及有时在免疫受损的个体中VZV可以是致命的。同样地，VZV感染对于新生儿可以是致命的，因为该病毒能穿越胎盘。人们知道，水痘是极易通过直接接触而传播的传染性疾病。与大多数疱疹病毒一样，VZV趋向于感染某些病毒发育在其中受到抑制的细胞。在一段不同的潜伏期之后，水痘带状疱疹(VZ)病毒可被释放，开始感染其他细胞。这种VZ病毒的重激活每年大约引起5百万例带状疱疹(Plotkin等，Postgrad Med J 61:155-63(1985))。带状疱疹的特征是大脑神经节和外周神经炎症并伴有剧痛。
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现已表明，用VZV减毒株接种的人由VZV感染获得了保护性免疫(Arbeter等，J. Pediatr 100886-93(1982)和 Brunell 等，Lancet ii 1069-72 (1982)) 特别是 VZV 的OKA毒株已用于预防带状疱疹和带状疱疹后神经痛的试验。该OKA毒株还已用于制备水痘疫苗多年且得到了充分的描述——例如参见EP651789及其中参考文献。The New England Journal of Medicine 2005, number 22, Volume352 2271-2284 (M. N. Oxman等)已公布了 OKA毒株用于带状疱疹适应症的大量临床试验。仍然需要改良的抗带状疱疹以及诸如带状疱疹后神经痛(PHN)的相关病症的疫苗。
发明内容
第一方面在第一方面，本发明提供了一种包含与减毒活VZV或全灭活VZV组合的VZV抗原或其免疫原性衍生物的免疫原性组合物。本发明进一步涉及一种包含与减毒活VZV或全灭活VZV组合的VZV抗原或其免疫原性衍生物的疫苗组合物。本发明进一步涉及一种预防带状疱疹和/或带状疱疹后神经痛(PHN)和/或减少其严重程度的方法，包括递送给个体包含与减毒活VZV或全灭活VZV组合的VZV抗原或其免疫原性衍生物的免疫原性组合物。在另一个实施方案中，本发明涉及一种预防带状疱疹和/或带状疱疹后神经痛和/或减少其严重程度的方法，该方法包括连续或同时递送给个体VZV抗原或其免疫原性衍生物和减毒活VZV或全灭活VZV。在另一个实施方案中，本发明涉及一种包含减毒活VZV或全灭活VZV以及与之分离的VZV抗原或其免疫原性衍生物的试剂盒，所述组分适于连续或同时递送，或适于在递送前混合为单一组合物。本发明还涉及一种制造免疫原性组合物的方法，该方法包括将减毒活VZV或全灭活VZV与VZV抗原或其免疫原性衍生物组合。本发明进一步涉及减毒活VZV毒株或全灭活VZV以及VZV抗原或其免疫原性衍生物在制备用于预防带状疱疹和/或带状疱疹后神经痛和/或减少其严重程度的免疫原性组合物中的应用。第二方面本发明涉及一种包含与THl-佐剂组合的gE或其免疫原性衍生物或免疫原性片段的免疫原性组合物和/或疫苗。本发明还涉及包含与THl-佐剂组合的gE或其免疫原性衍生物或免疫原性片段的组合物在制备用于预防或改善带状疱疹重激活和/或带状疱疹后神经痛的药物中的应用。本发明也涉及一种预防或改善带状疱疹重激活和/或带状疱疹后神经痛的方法，该方法包括递送给有需要的个体包含与THl-佐剂组合的gE或其免疫原性衍生物或免疫原性片段的免疫原性组合物或疫苗。附1显示了截短的VZV gE的序列。图2-4显示了在使用本发明组合物的人临床试验中获得的体液应答。图5和6显示了在使用本发明组合物的人临床试验中获得的细胞介导的免疫。详述在其最主要方面中 ，本发明涉及本文所述用于激发对VZV的免疫应答的组合物和方案。在一方面，当与没有经历暴露于本发明组合物的个体所获得的免疫应答相比时，暴露于上述组合物所产生的免疫应答适宜地可重现地更高并且是统计显著的。可通过使用任何一种概述如下的技术分析CMI应答和/或抗体应答的任何一个或多个方面，从而评估该免疫应答。在另一方面，本发明涉及预防和/或减少带状疱疹和/或带状疱疹后神经痛(PHN)严重程度的方法。为避免产生疑问，在一方面本发明涉及在预防带状疱疹发病率中的应用。在带状疱疹不发生的情况下，与未接种疫苗的对照相比带状疱疹重激活的严重程度适宜地减少(带状疱疹改善)。在另一方面，在带状疱疹发生的情况下，本发明涉及在预防PHN发病率中的应用。在另一方面，在PHN发生的情况下，与未接种疫苗的对照相比PHN的严重程度适宜地减少(PHN改善)。可通过由带状疱疹或PHN所引起的疼痛减少适宜地评估严重程度的减少，例如使用已知的疼痛负荷测量法(如Coplan等J Pain 2004 ;5 (6) 344-56)。还可通过其他标准例如带状疱疹或PHN持续时间、受带状疱疹或PHN影响的身体区域的比例；或带状疱疹/PHN的部位评估严重程度的减少。以上陈述涉及本发明的所有方面。在本发明第一方面中，在使用减毒活毒株情况下，在一方面，该减毒活VZV毒株为
OKA毒株-一种本领域众所周知的毒株，例如在Arbeter等(Journal of Pediatrics,
voI 100，No 6，p886ff)、W09402596及其中的参考文献例如US 3985615中所披露的毒株，所有都在此并入作为参考。任何其他适合的减毒活毒株也可用于本发明。例如，Varilrix 和Varivax 毒株都是合适的并且有市售的，可用于本发明。全灭活VZV毒株例如灭活的VZV OKA也适合用于本发明。用于本发明的VZV抗原可以是任何适合的VZV抗原或其免疫原性衍生物，适宜地是纯化的VZV抗原。在一方面，所述抗原或衍生物是一种当与减毒活VZV毒株或全灭活VZV组合同时或连续递送时能引发免疫应答的抗原或衍生物，所述免疫应答与单独使用减毒活毒株/全灭活毒株或VZV抗原所引发的免疫相比是改善的。这样的应答可以是，例如，在免疫应答量级、免疫应答持续时间、应答者数量或％或应答幅度(如所检测到的抗体或T细胞应答范围)的一个或多个方面的改善，或可提供在发病率临床水平上的改善，疼痛或症状的缓解。利用本领域标准技术可通过例如抗体水平或细胞介导免疫(CMI)活性评估免疫应答的改善；利用已知临床标准还可评估在临床水平上的改善。特别是，在一方面本发明组合物或疫苗所引发的免疫应答显示了以下一种或多种 当与单独使用VZV抗原或减毒活毒株/全灭活毒株相比时，与接种疫苗前水平相比，统计学上显著增加的CMI和/或抗体应答； 当与单独使用VZV抗原或减毒活毒株/全灭活毒株相比时，与接种疫苗前水平相比，改善的多价CMI应答。多价CMI应答考虑到了一系列CM标记，例如(但不限于)IFNY、IL2、TNF α和⑶40L,并且当与单独使用VZV抗原或减毒活毒株/全灭活毒株相比时，在大范围的这样的标记中改善的多价应答诱导了 CMI应答或在一个或多个标记中诱导了更闻的应答； 当与单独使用VZV抗原或减毒活毒株/全灭活毒株相比时，与接种疫苗前水平相比，更持久的CMI或抗体应答。在一方面，在I个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、12个月、24个月、36个月或48个月之后测得有持久的应答。在一方面，在老年人群中评估免疫应答的改善，适宜地在超过50岁的人群中进行评估，因为相对于50岁以下人群他们患带状疱疹或PHN的风险是增加的。还可在免疫受损的人群中研究改善的免疫应答。在一方面，对于本发明的任何一个实施方案，这样的人群是目标人群。在一方面，人群为超过50岁的人群，适宜地为超过60岁、超过70岁、或甚至超过80岁及以上的人群。在一方面，人群为50-70岁的人群。因此，在一方面，本发明涉及本发明的组合物和方法在超过50岁的人中预防和/或减少带状疱疹或PHN严重程度的应用。在一方面，本发明涉及本发明的组合物和方法在免疫受损的个体中预防带状疱疹或PHN和/或减少其严重程度的应用，所述免疫受损的个体例如移植患者或HIV阳性的人。术语‘免疫原性衍生物’包括任何在施用于人之后保留诱导对VZV免疫应答能力的分子。本文中免疫原性化合物能适宜地在免疫测定(例如ELISA或T-细胞刺激测定)中与VZV患者的抗血清和/或T-细胞起可检测的反应。可利用本领域技术人员众所周知的技术进行免疫原活性筛选。例如，可利用诸如Harlow和Lane, Antibodies ALaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988中描述的那些方法进行这样的筛选。适合于产生衍生物的方法是本领域众所周知的，包括在例如Sambrook等[Molecular Cloning A Laboratory Manual, third edition,2000, Cold Spring HarborLaboratory Press]中披露的标准分子生物学技术，例如用于添加、缺失、取代或重排氨基酸或对其化学修饰的技术。在一方面，衍生物包括，例如截短形式或其他片段。
在一方面，在本发明上下文中衍生物是包含表位，即实质上负责多肽免疫原性并能引发免疫应答的抗原决定簇的氨基酸序列，在一方面是T细胞表位。在一方面，免疫原性衍生物的免疫原活性的水平为衍生其的肽的免疫原性的至少约50%，在一方面为至少约70%以及在一方面为至少或大于约90%，适宜地通过上述免疫测定技术进行评估。在本发明的某些方面中，免疫原性部分可确认为具有大于相应的全长多肽的免疫原活性水平，如具有大于约100%或150%或更多的免疫原活性。在一方面，VZV抗原为糖蛋白，在一方面,为gE抗原(也称为gpl)或其免疫原性衍生物。该gE抗原、其无锚定(anchorless)衍生物(也是免疫原性衍生物)及其制备描述于EP0405867及其中的参考文献[也参见Vafai A. Antibodybinding sites on truncatedforms of varicalla-zoster virus gpl(gE)glycoprotein 疫苗 199412:1265-9]。EP192902也披露了 gE及其制备。所有引用文件的公开内容在此都并入作为参考。在一方面,gE是具有本文
图1序列的截短的gE,并披露于Virusresearch,vol 40,1996 pl99 ff，在此全文并入作为参考。除非上下文另有明示，在下文中所涉及的gE包括截短的gE。其他适合的抗原包括，例如gB、gH、gC、gl、IE63 (如参见Huang等J. Virol. 1992,66 2664, Sharp 等 J.1nf. Dis. 1992，165 852, Debrus, JVirol. 1995May ；69(5) 3240-5及其中的参考文献)、IE62(如参见 Arvin 等 J.1mmunol. 1991146 257, Sabella JVirol. 1993Dec ；67 (12) :7673_6 及其中的参考文献)、0RF4 或 ORF 10 (Arvin 等 ViralImmunol. 200215507.)。在此本发明还预期抗原组合可与减毒活VZV或灭活VZV —起使用，以及在一方面gE可包括在任何这样的组合内。在一方面，本发明涉及例如gE与IE63以及gE与IE62的组合。可通过在本发明实施例中所述的模型体系中使用或通过人临床试验，测试VZV抗原及其衍生物的适合的免疫原活性。一种或多种下列活性指标适合于在免疫原活性评估中考虑 增加的对VZV或抗原衍生物的⑶4或⑶8T细胞应答。· VZV或抗原衍生物特异性抗体的增加。 增加的诸如干扰素Y或IL-2或TNF α的细胞因子的产生。 增加的⑶4和⑶8Τ细胞上⑶40L的表达。 降低的带状疱疹发病率，低于同样处于危险中的一般人群的发病率，以及同样地减少的疾病严重程度和/或相关的疼痛，低于同样处于危险中的一般人群发病率。如上所述的增加或减少相对于诸如同龄不接种疫苗组的适当对照适宜地为统计显著。在一方面，减毒活VZV或灭活VZV和VZV抗原或抗原衍生物并不明显地互相干扰，使得当组合使用时这2种组分仍能提供对VZV的免疫原应答。在一方面，无论这2种组分是作为组合物使用还是连续给药或同时给药，该应答是保护性免疫原应答。然而，应当理解某些干扰是能容忍的，只要与单独使用原有组分相比，总的保护性免疫应答在某些方面(例如量值增加、增加的％应答者或扩大的抗原应答)得到改善即可。
在一方面，本发明涉及gE抗原和OKA毒株的组合用于同时或以任何顺序连续给药。在同时递送的情况下，例如在同一天时将这2种组分递送入不同的注射部位。在一方面，不同的递送途径用于这2种组分，特别是对于诸如OKA的病毒株通过皮下递送，而对于诸如gE的抗原则通过肌内递送。在所述的所有实施方案中，本发明还覆盖了 VZV抗原或衍生物与减毒活VZV毒株或灭活的VZV的组合的应用。在一方面,适合的抗原组合包括gE或其免疫原性衍生物。 组合的组合物、或单种组分或两种组分可额外地包含佐剂或免疫刺激剂，例如但不限于任何来源的去毒脂质A和脂质A的非毒性衍生物、皂苷类和其他能适当地刺激THl型应答的试剂。在一方面，组合物包含能刺激THl型应答的佐剂。高水平的Thl-型细胞因子趋向于促成诱导对给定抗原的细胞介导免疫应答，而高水平的Th2-型细胞因子则趋向于促成诱导对抗原的体液免疫应答。Thl和Th2_型免疫应答的差别并不是绝对的。事实上，个体会维持一种称为Thl占优势或Th2占优势的免疫应答。然而,依照Mosmann和Coffman (Mosmann, T. R.和Coffman,R. L. (1989)THl and TH2 cells !different patterns of lymphokine secretion leadto different functionalproperties. Annual Review of Immunology, 7,pl45-173)在鼠⑶4+ve T细胞克隆中所述，通常便于判断细胞因子家族。传统上，Thl-型应答与T-淋巴细胞的INF-γ和IL-2细胞因子产生有关。其他通常与Thl-型免疫应答诱导直接有关的细胞因子不是T-细胞产生，例如IL-12。与此相反，Th2-型应答与IL-4、IL_5、IL_6、IL-1O的分泌有关。促进Thl占优势的应答的适合的佐剂体系包括单磷酰脂质A或其衍生物，特别是3-脱-O-酰化单磷酰脂质A。尽管肠细菌脂多糖(LPS)在佐剂中的应用因其毒性效应而无法实现，但很久以前就已知道其是一种有效的免疫系统刺激物。Ribi等(1986, Immunologyandlmmunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Pub1.Corp. , NY, p407_419)已描述了通过除去中心碳水化合物基团以及从还原端葡萄糖胺除去磷酸酯所产生的一种无毒的LPS衍生物——单磷酰脂质A(MPL)，并具有以下结构
权利要求
1.包含截短以除去羧基末端锚定区的VZVgE抗原以及TH-1佐剂的免疫原性组合物在制备用于预防或改善带状疱疹和/或带状疱疹后神经痛的药物中的应用，其中所述gE不是融合蛋白的形式，所述佐剂包含QS21、3D-MPL和含有胆固醇的脂质体。
2.根据权利要求1的应用,其中3D-MPL包含于脂质体中。
3.根据权利要求1的应用，其中所述VZVgE抗原由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成。
4.根据权利要求1的应用，用于大于50岁的个体的人群。
5.根据权利要求1的应用，用于免疫受损个体的人群。
6.一种免疫原性组合物或疫苗，包含以下物质与包含QS21、3DMPL以及含有胆固醇的脂质体的佐剂组合的、截短以除去羧基末端锚定区的VZV gE抗原，其中所述gE截短物不是融合蛋白的形式，并且由SEQ ID NO 1的氨基酸序列组成。
全文摘要
本发明涉及疫苗，包含VZV gE或其免疫原性片段以及TH-1佐剂的免疫原性组合物在制备用于预防或改善带状疱疹和/或带状疱疹后神经痛的药物中的应用。还要求保护包含截短的VZV gE抗原以及含有QS21、胆固醇和3D MPL的佐剂的组合物。
文档编号A61K39/00GK103028113SQ20121055276
公开日2013年4月10日 申请日期2006年3月1日 优先权日2005年3月3日
发明者E.J.哈农, J.斯蒂芬尼 申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司