纳米递送系统的制作方法

纳米递送系统的制作方法【专利摘要】本发明利用用于保护并控制从相反特性的稳定纳米粒子释放疏水性或亲水性的活性剂的双纳米包封的独特方法学。活性剂的保护通过将待被保护的剂装载入纳米载体来实现，该纳米载体随后被包封入亚微米纳米粒子。通过使用新颖的纳米喷雾技术已成功地实现了亚微米纳米粒子的形成。【专利说明】纳米递送系统发明领域[0001]本发明一般涉及纳米递送系统。[0002]背景[0003]RNA干扰（RNAi)的发现开辟了生物学和医学的全新的领域。RNAi特异性地使靶基因沉默的能力不仅已取得了用于基础研究的新工具，而且已提出了开发基于RNAi的药物的概念。RNAi通过序列特异性匹配完成mRNA的靶向作用，并导致靶mRNA的降解或其翻译抑制，导致蛋白表达的缺失。这在药理学上通过引入称为小干扰RNA(siRNA)的小19-21bpdsRNA分子来实现。自10年前发现siRNA以来，已在体外广泛地研究siRNA在治疗各种疾病诸如癌症、神经变性疾病和传染性疾病中的效用。[0004]SiRNA的进一步发展的主要障碍是由于大的分子量（例如，13kDa)和聚阴离子性质（例如40负电荷的磷酸根）而无法在体内有效递送siRNA。裸的siRNA不会自由地穿过细胞膜。另外，未修饰的、裸的siRNA在血液和血清中是相对不稳定的，因为它们迅速地被内切核酸酶和外切核酸酶降解，这意味着其在体内具有短的半衰期。通常，化学修饰可被引入到RNA双链体结构以提高生物稳定性而不会不利地影响基因沉默活性。可选地，其可用递送系统来配制，该递送系统不仅增强细胞摄取，而且提供生物稳定性。对RNA的骨架、碱基或糖的几种化学修饰，已经被用于提高siRNA的稳定性和活性。然而，递送系统仍然需要促进siRNA进入到其作用的细胞内部位。[0005]的确，已开发了各种递送系统以在全身性施用后提高siRNA进入靶组织的吸收。这些包括使用聚合物[1]、脂质[2]或纳米粒子[3,4]。这些载体中的大多数是阳离子的，以确保粒子与带负电荷的siRNA核苷酸的有效相互作用，并促进其进入细胞。然而，这些阳离子粒子全身性地递送siRNA的能力，往往由于被网状内皮（RES)器官的快速吸收[5]而是较差的，从而阻碍这些粒子递送到关心的部位。为了克服这个问题，聚乙二醇（PEG)因为其降低这些颗粒的RES吸收已在制剂中广泛地被使用。此PEG化（PEGylation)由于"增强的渗透性和滞留"现象还允许粒子积累在存在有缺陷的血管系统的部位诸如肿瘤中[6]。[0006]对于基于脂质的递送载体，迄今已报告了用于配制装载多核苷酸的PEG化的粒子的各种方法，包括后插入[7]、反相蒸发法[8]、洗涤剂透析[9]和乙醇透析[10]。然而，这些方法中的大多数虽然是有效的，但需要相对复杂和冗长的配制程序，且使得到的粒子悬浮在含水状态中。这导致了长期贮存问题，包括在含水环境中粒子的聚集和/或融合、月旨质的水解、以及siRNA核苷酸的不稳定性。另外，这些制剂还容易受到运输过程中产生的应力，诸如搅动或温度波动的影响[11]。这些问题，连同使用现有配制程序来大规模生产这些粒子所需要的显著增加的努力，将限制含有siRNA的基于脂质的产品在临床上的广泛采用。显然，存在开发相对简单和有效的方法以配制其中最终产品还适合于长期储存的装载siRNA的纳米载体的需要。[0007]在过去的二十年中，基于在1-1，OOOnm范围内的纳米大小的粒子的一些疗法已经成功地被引入用于治疗癌症、疼痛和感染性疾病中。通常表现差的膜通透性和对环境条件(热、pH、酶降解）的高灵敏性的亲水性生物大分子（诸如肽或siRNA)，被认为是通过纳米载体的细胞内递送的适合的候选者。此类纳米载体可延长遭受短生理学半衰期，随后迅速清除的这些大分子的血液循环时间。然而，用于这种目的的临床上相关的纳米载体的数量是有限的，并且主要挑战，尤其是其经由胃肠外施用途径的有效递送仍然有待解决。siRNA代表其中最需要应用适合的纳米载体以开发其全面的治疗潜力的一类亲水性生物大分子。[0008]参考文献[0009][1]StevensonM.等人，JControlRelease2008,130,ρ·46-56[0010][2]LandenC.Ν·等人，CancerRes.2005,65,ρ·6910-9918[0011][3]PilleJ.等人，Hum.Gene.Ther.2006,17,ρ·1019-1026[0012][4JW02007/083316[0013][5]ZamboniW.等人，Clin.CancerRes.2005,11，p.8230-8234[0014][6]SapraP.等人，Curr.DrugDeliv.2005,2,p.369-381[0015][7]WagnerE.等人，Biomed.Pharmacother.2004,58,p.152-161[0016][8]StuartD.等人，BiochimicaetBiophysicaActa2000,1463,p.219-229[0017][9]WheelerJ.J.等人，GeneTher.1999,6,p.271-281[0018][10]MaurerN.等人，Biophys.J.2001，80,p.2310-2326[0019][ll]AnchordoquyT.J.等人，Arch.Biochem.Biophys.1997,348,p.199-206[0020][12]KosterV.S.等人，Inti.J.Pharmaceu.1996,134(1-2)，p.235-238[0021][13]PetrosR.A.andDeSimoneJ.M.,NatureRev.DrugDiscovery2010,9(8),p.615-627[0022][14]MaedaH.等人，J.Control.Release2000,65(1-2)，p.271-284[0023][15]VeroneseF.M.和PasutG.,DrugDiscoveryToday2005,10(21),p.1451-1458[0024][16]Heng,D.等人，ExpertOpin.DrugDeliv.2011，8(7)，p.965-972[0025][17]WangJ.等人，AAPSJournal2010,12(4)，p.492-503[0026][18]KurreckJ.，Eur.J.Biochem.2003,270(8)，p.1628-1644[0027][19]FessiH.等人，Inti.J.Pharmaceu.1989,55(1)，p.R1-R4[0028][20]LinW.等人，J.DrugTarg.1993,1，p.237-243[0029][21]HagigitT.等人Eur.J.Pharmaceu.Biopharmaceu.2008,70(1)，p.248-259[0030][22]WartlickH.等人，J.Control.Release2004,96(3)，p.483-495[0031][23]LeeS.H.等人，Inti.J.Pharmaceu.2011，403,p.192-200[0032][24]SchmidK.等人，Respir.DrugDeliv.Europe2009,p.323-326[0033]发明概述[0034]本发明利用用于保护和控制从相反特性（疏水性或亲水性）的稳定的纳米粒子释放为疏水性剂或亲水性剂的活性剂诸如siRNA(或其不同的化学衍生物诸如胆固醇标记的siRNA)的双重纳米包封的独特的方法学。活性剂的保护通过将待保护的剂装载入纳米载体来实现，该纳米载体随后被包封入亚微米纳米粒子。亚微米纳米粒子（纳米囊(nanocapsule)或纳米球）的形成通过使用新颖的纳米喷雾技术已成功地被实现。[0035]本发明的递送系统提供用于全身性递送改进药物的半衰期、生物分布和药代动力学的亲水性生物大分子（诸如siRNA)或疏水性生物大分子的平台。[0036]因此，本发明还涉及包括双重包封的活性剂，能够稳定亲水性活性剂或疏水性活性剂，并允许其靶向递送到细胞中的药物递送系统。[0037]在本发明的方面中的一个中，本发明提供包封多种纳米载体（一种或多种）的纳米粒子，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径。[0038]在一些实施方案中，形成根据本发明的纳米粒子的活性剂的双包封是可通过纳米喷雾获得的，如本文描述的。纳米喷雾的方法还可包括干燥通过纳米喷雾方法获得的纳米粒子。干燥可通过使用，例如，冷冻干燥、热干燥、减压、溶剂萃取和其他技术蒸发介质溶剂来实现。[0039]在另外的实施方案中，纳米粒子选自：[0040]i.当活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且纳米粒子材料是亲水性的；[0041]ii.当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的，且纳米粒子材料是疏水性的；[0042]iii.当活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且纳米粒子材料是疏水性的；以及[0043]iv.当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的，且纳米粒子材料是亲水性的。[0044]在其他实施方案中，活性剂是siRNA。在一些实施方案中，当活性剂是siRNA时，纳米载体还包含聚阳离子脂质。在一些实施方案中，聚阳离子脂质是1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（D0TAP)。[0045]如本领域技术人员可理解，术语"材料"是指由其制成纳米粒子或纳米载体的材料。因此，术语"纳米载体材料"是指由其制成纳米载体的材料。类似地，"纳米粒子材料"是由其制成纳米粒子的材料。多种纳米载体可由不同的材料制成。在一些实施方案中，纳米载体材料不同于纳米粒子材料。[0046]在一些实施方案中，纳米载体可由金属材料组成，或可包含与非金属材料组合的金属材料。在一些实施方案中，纳米载体是金纳米球。[0047]材料的疏水性或亲水性，可能是由于材料对水的内在行为，如下面进一步讨论的，或可通过以下中的一种或多种修饰材料来实现（或调整）：交联所述材料、材料的衍生化、电荷引入所述材料（使得其带正电荷或带负电荷）、将所述材料络合或缀合至另一种材料以及通过本领域中已知的任何其他方法。[0048]因此，根据本发明，材料的选择可基于材料的固有特性或基于材料经历此类前述的修饰以使其变得或多或少疏水性或亲水性的能力。[0049]在一些实施方案中，纳米粒子材料和/或纳米载体材料可被交联，以减小材料的亲水性（降低在水介质（aqueousmedia)中的溶解度）。[0050]在本发明的另一个方面中，提供了包封多种纳米载体的纳米粒子，所述多种纳米载体（一种或多种）中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子通过纳米喷雾制备，如本文所定义。[0051]在一些实施方案中，所述纳米粒子具有小于4微米的平均直径。在其他实施方案中，所述纳米粒子具有小于2微米的平均直径。在其他实施方案中，所述纳米粒子具有小于1微米的平均直径。在另外的实施方案中，所述纳米粒子具有小于950nm的平均直径。在一些实施方案中，所形成的纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径。[0052]在一些实施方案中，所述纳米粒子选自：[0053]i.当活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且纳米粒子材料是亲水性的；[0054]ii.当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的，且纳米粒子材料是疏水性的；[0055]iii.当活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且纳米粒子材料是疏水性的；以及[0056]iv.当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的，且纳米粒子材料是亲水性的。[0057]在另外的实施方案中，纳米粒子材料和/或纳米载体材料可被交联以减小材料的亲水性（降低在水介质中的溶解度）。[0058]在其他实施方案中，活性剂是siRNA。在一些实施方案中，当活性剂是siRNA时，纳米载体还包含聚阳离子脂质。在一些实施方案中，聚阳离子脂质是1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（D0TAP)。[0059]在本发明的另一个方面中，提供了包封多种纳米载体（一种或多种）的纳米粒子，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，使得：[0060]当所述活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且所述纳米粒子材料是亲水性的；纳米粒子材料还任选地被交联以减小其在水介质中的溶解度；或[0061]当所述活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的、任选地交联的，且纳米粒子材料是疏水性的。[0062]在一些实施方案中，纳米粒子具有小于4微米的平均直径。在其他实施方案中，纳米粒子具有小于2微米的平均直径。在其他实施方案中，纳米粒子具有小于1微米的平均直径。在另外的实施方案中，所述纳米粒子具有小于950nm的平均直径。在仍然另外的实施方案中，纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径。[0063]在一些实施方案中，所述纳米粒子通过纳米喷雾干燥形成。[0064]在其他实施方案中，活性剂是亲水性的。在一些实施方案中，当活性剂是siRNA时，亲水性的活性剂是siRNA。在此类实施方案中，纳米载体还包含聚阳离子脂质。在一些实施方案中，聚阳离子脂质是1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（D0TAP)。[0065]在本发明的另一个方面中，提供了包封多种纳米载体的纳米粒子，所述多种纳米载体（一种或多种）中的至少一种含有至少一种活性剂，其中所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，其中：[0066]当所述活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且所述纳米粒子材料是亲水性的；纳米粒子材料还任选地被交联以减小其在水介质中的溶解度；或[0067]当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的、任选地交联的，且纳米粒子材料是疏水性的。[0068]在一些实施方案中，所述纳米粒子通过纳米喷雾形成。[0069]在其他实施方案中，活性剂是亲水性的。在一些实施方案中，当活性剂是siRNA时，亲水性的活性剂是siRNA。在此类实施方案中，纳米载体还包含聚阳离子脂质。在一些实施方案中，聚阳离子脂质是1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（D0TAP)。[0070]在本发明的另一个方面中，提供了包封多种纳米载体（一种或多种）的纳米粒子，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，其中所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，其中：[0071]当所述活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且所述纳米粒子材料是亲水性的；纳米粒子材料还任选地被交联以减小其在水介质中的溶解度；或[0072]当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的、任选地交联的，且纳米粒子材料是疏水性的。[0073]其中所述纳米粒子通过纳米喷雾形成。[0074]在又一个方面中，本发明提供了包封多种纳米载体（一种或多种）的纳米粒子，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，其中所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，所述纳米粒子通过纳米喷雾来制备，如本文中所定义的。[0075]在一些实施方案中，所述纳米粒子选自：[0076]i.当活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且纳米粒子材料是亲水性的；[0077]ii.当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的，且纳米粒子材料是疏水性的；[0078]iii.当活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且纳米粒子材料是疏水性的；以及[0079]iv.当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的，且纳米粒子材料是亲水性的。[0080]在另外的实施方案中，纳米粒子材料和/或纳米载体材料可被交联以减小材料的亲水性（降低在水介质中的溶解度）。[0081]在其他实施方案中，活性剂是siRNA。在一些实施方案中，当活性剂是siRNA时，纳米载体还包含聚阳离子脂质。在一些实施方案中，聚阳离子脂质是1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（D0TAP)。[0082]本发明的"纳米粒子"是粒子载体、纳米囊（NC)或纳米球（NS)，其是生物相容的并且足够耐化学和/或物理破坏，以使得足够量的纳米粒子在施入人或动物身体之后基本上保持完整并持续足以到达所需的靶器官（组织）的时间段。通常，纳米粒子的形状是球状的，具有大至2μm(微米）的平均直径，而大多数纳米粒子具有小于1μm(微米）的平均直径。[0083]如上文所指出的，在本发明的一些方面和实施方案中，纳米粒子具有小于1微米的平均直径。在一些方面和实施方案中，纳米粒子具有在约400和950nm之间的平均直径。在其他实施方案中，所述纳米粒子的平均直径在约400和900nm之间。在一些其他实施方案中，平均直径在约400和800nm之间。在另外的实施方案中，平均直径在约400和700nm之间。在另外的方面和实施方案中，纳米粒子具有在400和600nm之间的平均直径。[0084]应注意的是，纳米粒子的平均直径可通过本领域技术人员已知的任何方法来测量。术语"平均直径"是指测量的直径的算术平均值，其中直径在平均值的±25%、±15%、±10%、或±5%的范围内。当纳米粒子不是球状的时，该术语是指为粒子的最大尺寸的有效平均直径。[0085]本发明的纳米粒子应足够大以便能够容纳多种纳米载体，但同时具有足够小的尺寸以能够经历内在化。[0086]被包含在本发明的纳米粒子内的多种（一种或多种）"纳米载体"，本身是粒子载体，每一种具有小于300、小于250、或小于200nm的平均直径。纳米载体可呈纳米囊（NC)或纳米球（NS)的形式。通常，纳米载体的形状是球状的。当纳米载体的形状不是球状的时，直径是指粒子的最长尺寸。[0087]被包封在根据本发明的单个纳米粒子内的纳米载体的数量可取决于例如纳米载体的尺寸或纳米载体和纳米粒子的相对尺寸而变化。通常，每个纳米粒子可含有1种和数(6-7)十种纳米载体（即所述多种纳米载体）。在一些实施方案中，每个纳米粒子包括2种和50种之间的纳米载体。在一些实施方案中，每个纳米粒子包括2种和40种之间的纳米载体。在一些实施方案中，每个纳米粒子包括2种和30种之间的纳米载体。在一些实施方案中，每个纳米粒子包括2种和20种之间的纳米载体。在一些实施方案中，每个纳米粒子包括2种和10种之间的纳米载体。[0088]在一些实施方案中，每个纳米粒子包括2种以上的纳米载体。[0089]据说纳米载体，"包含"所述至少一种活性剂。如下文所示例的，至少一种活性剂可被包含在所述纳米载体的核，和/或可被包含在组成纳米载体的材料基体中，和/或可与所述纳米载体的表面区域（一个或多个，或整个表面）缔合。[0090]在一些实施方案中，当所述纳米载体是金属粒子时，例如，金纳米球，至少一种活性剂与所述金属粒子的表面区域（一个或多个，或全部表面）缔合。[0091]在一些实施方案中，纳米载体本身通过纳米喷雾来制备，如本文所描述的。[0092]在一些实施方案中，纳米载体的平均直径为至少约50nm。[0093]在一些实施方案中，纳米载体的平均直径在约100和300nm之间。在其他实施方案中，平均直径在约200和300nm之间。在其他实施方案中，平均直径在约50和300nm之间。在其他实施方案中，平均直径在约50和250nm之间。在另外的实施方案中，平均直径在约50和200nm之间。在另外的实施方案中，平均直径在约50和150nm之间。在另外的实施方案中，平均直径在约50和100nm之间。[0094]如本领域技术人员将理解，材料的"亲水性"是表现出对水的亲和力的材料的特性，而"疏水性"的材料具有相反的对水的响应。[0095]纳米粒子在水介质中的可溶性或不溶性可通过交联纳米载体或最终纳米粒子材料来增加或减小在此类介质中的最终纳米粒子的溶解度而改变。[0096]对于所选择的应用，纳米粒子和/或纳米载体可以是"纳米囊"的形式，即具有核/壳结构，具有聚合物壳和可能是空的或者可包含至少一种油相或水相的核。可选地，纳米粒子和/或纳米载体可是不具有明显的核/壳结构特征的基本均匀的组合物，即作为连续材料的"纳米球"（NS)。[0097]在一些实施方案中，本发明的纳米粒子和包含在其中的多种纳米载体是纳米囊的形式。在其他实施方案中，纳米粒子和纳米载体都是纳米球。在一些其他实施方案中，纳米粒子可以是纳米囊的形式而纳米载体可以是纳米球的形式。在另外的实施方案中，纳米粒子可以是纳米球的形式而纳米载体可以是纳米囊的形式。[0098]术语"包封"（或其任何语言的变化形式）是指，例如，将至少一个纳米载体容纳在纳米粒子中，或指将活性材料容纳在纳米载体中（如上文所定义的）。因此，根据一些实施方案，纳米粒子被说成包封一个或多种纳米载体。[0099]在一些其他实施方案中，纳米粒子包封选自纳米囊、纳米球及其混合物的多种纳米载体。尽管纳米载体（NS和/或NC)的极性的形式，本发明的纳米粒子可包封不同材料的多种纳米载体和/或不同的活性剂。本发明的纳米粒子，例如，可包含具有一种或多种不同活性剂的相同聚合材料的多种纳米载体（从而具有相同的亲水性/疏水性）。类似地，本发明的纳米粒子可含有不同聚合物材料的多种纳米载体，但是各自含有相同的活性剂。[0100]在本发明的一些方面中，提供了本发明的纳米粒子的混合物，所述混合物包含一种或多种类型的纳米粒子，所述一种或多种纳米粒子类型在以下中的至少任何一个中彼此不同：[0101]1.纳米载体材料，[0102]2.纳米粒子材料，[0103]3.活性剂，[0104]4.纳米粒子/纳米载体形式（NS或NC)，[0105]5.纳米粒子/纳米载体的尺寸。[0106]如上所述，在本发明的一些方面和实施方案中，纳米粒子是通过纳米喷雾可获得的。该方法包括通过具有预定尺寸（直径）的一个或多个孔（洞、开口、穿孔、针孔）的筛(例如，网孔）输送（例如，递送、喷射）包括在液体介质中的多种纳米载体和纳米粒子材料例如聚合物材料的胶体组合物，所述多种纳米载体包括至少一种活性剂，并且所述纳米粒子材料是至少部分溶于所述液体介质中，所述孔的尺寸确定纳米粒子的（最大）尺寸（直径）。[0107]在一些实施方案中，孔允许生产具有以下的平均直径的纳米粒子：小于4微米、或小于2微米、或小于1微米、或小于950nm，或在400和950nm之间、或在约400和900nm之间、或在约400和800nm之间、或在约400和700nm之间、或在400和600nm之间。[0108]为了允许此类纳米粒子的尺寸，孔尺寸（洞直径）被选择为从7微米至1微米的范围。在一些实施方案中，筛是4至6微米之间的网孔尺寸。在一些实施方案中，筛为4微米的网孔尺寸。[0109]在一些实施方案中，胶体组合物通过在液体介质中混合多种纳米载体与纳米粒子材料例如聚合物材料来制备。[0110]在一些实施方案中，纳米喷雾方法还包括干燥纳米粒子的步骤。[0111]在一些实施方案中，纳米载体通过纳米喷雾获得。[0112]本发明的纳米粒子主要包括聚合物。术语"聚合物"包括均聚物、共聚物，诸如例如，嵌段共聚物、接枝共聚物、无规共聚物和交替共聚物以及三元共聚物，还包括它们的衍生物，其组合及共混物。除了上述之外，该术语包括这样的结构的所有几何构型，包括直链、嵌段、接枝、无规、交替、支链结构及其组合。[0113]在纳米粒子的结构中使用的聚合物是可生物降解的，S卩，它们在体内使用过程中降解。一般而言，可归因于生物可降解性的降解涉及可生物降解聚合物降解成其组分亚基，或例如，通过例如通过酶进行的生化过程，将聚合物消化成较小的非聚合物亚基。降解可在以下的一种或两种中进行：涉及裂解聚合物基体中的键的生物降解，在此情况下，单体和低聚物通常会产生，或涉及裂解侧链内部的键或连接侧链至聚合物骨架上的键的生物降解。在一些实施方案中，生物降解包括两种一般类型的生物降解。此外，聚合物是生物相容的，即它们基本上是无毒的或对它们所接触的活组织或活体系统缺乏损害性影响。[0114]本发明的纳米粒子可被用作药物递送平台，使得能够渗透并释放活性剂进入靶细胞或细胞内的细胞器。为了促进细胞膜穿透，本发明的纳米粒子可与不同的靶向剂缔合。[0115]在一些实施方案中，纳米粒子的外表面与至少一种靶向剂缔合。在此类实施方案中，至少一种靶向剂选自单克隆抗体，诸如识别实体肿瘤中过表达的HER-2受体的曲妥珠单抗（Herceptin#);识别Η铁蛋白的AMBLK8,识别EGFR受体的西妥昔单抗（Erbitux?);识别CD20的利妥昔单抗（MabTherau');抑制刺激新血管形成的称为"血管内皮生长因子"（VEGF)的天然蛋白的功能的贝伐单抗（Avastii/);提供对VEGF-A的更强结合的兰尼单抗,(Lucentisu);小分子诸如叶酸或叶酸盐；透明质酸或透明质烷；一般约6-15kDa的肿瘤穿透肽；表皮生长因子（EGF);转铁蛋白；铁蛋白；精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)肽；上皮细胞粘附分子（EpCAM);细胞间粘附分子l(ICAM-l);癌胚抗原（CEA);血管活性肠肽；CA15-3抗原；MUC1蛋白；⑶20;⑶33;整合蛋白；淋巴靶向部分（诸如LyP-Ι);适体，诸如PSMA适体或VEGF适体；低聚糖和其他。[one]在一些实施方案中，靶向剂是贝伐单抗(Avasti'nκ)或兰尼单抗（Lucentis1。[0117]如本文所用，术语"缔合"或其任何语言的变化形式是指化学的或物理的相互作用，其保持两个实体在一起（例如，纳米粒子和祀向剂，纳米载体表面与连接体部分或与活性剂，或称为这样的任何相互作用）。这种相互作用可以是本领域技术人员已知的任何类型的化学或物理键合的相互作用。此类相互作用（缔合）的非限制性实例包括离子键合、共价键合、配位键合、络合、氢键合、范德华键合、疏水性-亲水性相互作用，等等。在一些实施方案中，缔合是通过共价键合。在其他实施方案中，缔合是通过配位键合。本领域技术人员应该理解，在一些情况下，两个原子或两个化学实体之间的缔合的相互作用可涉及多于一种类型的化学的和/或物理的相互作用。[0118]一旦在体内或体外的活细胞内，活性剂必须被递送到正确的细胞器中，或可替代地逃脱区域化进入细胞的细胞器，诸如内涵体和溶酶体，并在细胞内为可生物利用的。因此，在一些实施方案中，所述至少一种纳米载体具有阳离子脂质（诸如D0TAP)或含有赋予该肽正电荷的各种氨基酸，诸如精氨酸残基或赖氨酸残基的细胞穿透肽。这些肽可穿透细胞并在细胞质中释放纳米载体的装载物。此类肽可选自HIV-TAT、穿透肽、短杆菌肽S、MSI-103、MSI-103-Arg、PGLA、PGLA-Arg、马盖宁2、马盖宁-2-Arg、KIGAKI、BP100、MAP、MAP-Arg、SAP、PEP-1、运输因子（transportan)、FP23和其他。[0119]在一些实施方案中，阳离子脂质是DOTAP。[0120]如上注明的，纳米粒子可包括至少一种纳米载体，纳米载体是包含亲水性基体(材料）的纳米球，其中至少一种活性剂是亲水性的并分布在亲水性基体中。[0121]在一些实施方案中，纳米球亲水性材料选自葡聚糖、透明质酸盐（hylauronate)、正常的或交联的人血清白蛋白（HSA)、正常的或交联的牛血清白蛋白（BSA)、壳聚糖、虫胶、胶原、明胶、阿拉伯树胶、聚乙烯醇、环糊精，各自为单独的或与前述中的一种或多种组合。在其他实施方案中，亲水性材料是人血清白蛋白（HSA)、牛血清白蛋白（BSA)或透明质酸。[0122]在一些实施方案中，亲水性材料是具有约66,500Da的平均分子量的人血清白蛋白（HSA)、或具有从20,000高至1，000,OOODa的大小范围内的平均分子量的透明质酸。[0123]根据此类实施方案，亲水性活性剂可选自治疗性肽或蛋白，诸如艾塞那肽、胰岛素、生长激素、醋酸曲普瑞林、布舍瑞林、那法瑞林和其他；DNA、RNA、siRNA、tRNA或其衍生物或片段。[0124]在一些实施方案中，亲水性剂是siRNA。[0125]在其他实施方案中，siRNA具有SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12的核苷酸序列。[0126]在一些实施方案中，亲水性材料被交联以降低纳米载体在水介质中的溶解度。[0127]在一些实施方案中，当纳米载体在性质上是亲水性的时，纳米粒子可以是包括疏水壳的纳米囊的形式（即包封亲水性纳米载体的疏水性纳米粒子）。这种布置能够包封和稳定通常稳定和递送都有问题的亲水性剂。[0128]在此类实施方案中，疏水性壳是选自以下的聚合物：乳酸、聚（D，L_乳酸-共-乙醇酸）（?〇1丫(0，1^-1&(：1:;[(3-(30-815^01;[0&(^(1))(?11^)、聚（0，1^-乳酸）（?1^\)、聚（￡-己内酯）、聚（2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）均聚物、聚（2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）-b-聚（乙二醇）_α-甲氧基-ω-甲基丙烯酸酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯、聚酐聚合物以及其组合。[0129]在一些实施方案中，疏水性壳是选自以下的聚合物的PEG化的衍生物：乳酸、聚(D，L-乳酸-共-乙醇酸）（PLGA)、聚（D，L-乳酸）（PLA)、聚（ε-己内酯）、聚（2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）均聚物、聚（2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）-b-聚（乙二醇）-α-甲氧基-ω-甲基丙烯酸酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯、聚酐聚合物以及其组合。[0130]在其他实施方案中，疏水性壳选自乳酸、聚（D，L_乳酸-共-乙醇酸）（PLGA)以及其组合，包括其PEG化的衍生物（单独的或组合）。在此类实施方案中，PLGA具有在约4,000和100,OOODa之间的分子量。[0131]为了降低细胞膜阻止因素（deterrence)，疏水性壳可具有与至少一种聚乙二醇(PEG)部分缔合的外表面。[0132]在本发明的其他实施方案中，纳米粒子可包括至少一种纳米载体，纳米载体是包含疏水性聚合物基体（hydrophobicpolymericmatrix)的纳米球；包含在所述纳米球中的至少一种活性剂也是疏水性的。[0133]在此类实施方案中，疏水性聚合物基体可选自乳酸、聚（D，L_乳酸-共-乙醇酸）(PLGA)、聚（D，L-乳酸）（PLA)、聚（ε-己内酯）、聚（2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）均聚物、聚（2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）-b-聚（乙二醇）-α-甲氧基-ω-甲基丙烯酸酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯、以及其组合和它们的PEG化的衍生物。[0134]在其他实施方案中，疏水性聚合物基体选自乳酸、聚（D，L_乳酸-共-乙醇酸）(PLGA)以及其组合，包括具有其PEG化衍生物的混合物。[0135]在一些其他实施方案中，所述PLGA具有在约4,000和100,OOODa之间的分子量。[0136]在另外的实施方案中，疏水性活性剂选自镇痛药或抗炎剂（诸如阿洛普令、金诺芬、阿扎丙宗、贝诺酯、二氟尼柳、依托度酸、芬布芬、非诺洛芬钙、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、甲氯芬那酸、甲芬那酸、萘丁美酮、萘普生、羟基保泰松、保泰松、吡罗昔康、或舒林酸）；驱虫剂（诸如阿苯达唑、轻萘节芬宁（bepheniumhydroxynaphthoate)、坎苯咕唑（cambensazole)、双氯酌·、伊维菌素、甲苯咪唑、奥沙尼喹、奥芬咕唑（oxefendazole)、双羟萘酸酚嘧啶、吡喹酮、双羟萘酸噻嘧啶、或噻苯达唑）；抗心律不齐剂（诸如胺碘酮、丙吡胺、氟卡尼或硫酸奎尼丁）；抗菌剂（诸如苯乙苄胺青霉素、西诺沙星、环丙沙星、克拉霉素、氯法齐明、氯唑西林、地美环素、强力霉素、红霉素、乙硫异烟胺、亚胺培南、萘啶酸、呋喃妥因、利福平、螺旋霉素、苯甲酰磺胺、磺胺多辛、磺胺醋酰、磺胺甲嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺异噁唑、磺胺甲基异噁唑、磺胺吡啶、四环素、或甲氧苄啶）；抗凝血剂（诸如双香豆素、双嘧达莫、醋硝香豆素或苯茚二酮）；抗抑郁剂（诸如阿莫沙平、马普替林（meprotiline)、米安色林、去甲替林、曲唑酮、或马来酸曲米帕明（tirimipraminemaleate);抗糖尿病药(诸如醋磺（acetothexamide)、氯磺丙脲、格列本脲、格列齐特、格列批嗪、妥拉磺脲、或甲苯磺丁脲（tolbutramide));抗癫痫（诸如贝克拉胺、卡马西平、氯萘唑啉（clonazepine)、乙苯妥英、美芬妥英、甲琥胺、甲苯比妥、奥卡西平、甲乙双酮、苯乙酰脲、苯巴比妥、安替披林（phenyloin)、苯琥胺、扑米酮、舒噻美、或丙戊酸）；抗真菌剂（诸如两性霉素、硝酸布康唑、克霉唑、益康唑、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黄霉素、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑、那他霉素、制霉菌素、硫康唑、特比萘芬、特康唑、噻康唑、或i^一烯酸）；抗痛风剂（诸如别嘌呤醇、丙磺舒或磺批酮（sulphin-pyrazone));抗高血压药（诸如氨氯地平、贝尼地平、达罗地平、地尔硫卓（di1itazem)、二氮嗪、非洛地平、胍那苄、伊拉地平、米诺地尔、尼卡地平、硝苯地平、尼莫地平、酚苄明、哌唑嗪、利血平（reseprine)或特拉唑嗪）；抗疟疾药（诸如阿莫地喹、氯喹、氯丙胍、卤泛群、甲氟喹、氯胍（proganil)、乙胺嘧啶、或硫酸奎宁）；抗偏头痛药剂（诸如双氢麦角胺甲磺酸盐、酒石酸麦角胺、美西麦角、马来酸苯噻啶或琥珀酸舒马曲坦）；抗毒蕈碱剂（诸如阿托品、苯海索、比哌立登、普罗吩胺、莨菪碱、溴美喷酯、羟苄利明（oxyphencylcimine)、或托批卡胺）；抗肿瘤剂或免疫抑制剂（诸如氨鲁米特、安吖啶、硫唑嘌呤、白消安、苯丁酸氮芥、环孢霉素、达卡巴嗪、雌莫司汀、依托泊苷、洛莫司汀、美法仑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、二羟基蒽酮、丙卡巴肼、他莫昔芬、睾内酯、他克莫司、或西罗莫司）；抗原虫剂（诸如苄硝唑、氯碘羟喹、地考喹酯、双碘喹啉、二氯尼特、二硝托胺、呋喃唑酮（furzolidone)、甲硝唑、尼莫唑、呋喃西林、奥硝唑、或替硝唑）；抗甲状腺试剂（诸如卡比马唑或丙硫氧嘧啶）；镇痛、镇静、催眠或神经安定剂（诸如阿普唑仑（alparzolam)、异戊巴比妥、巴比妥、苯他西泮、溴西泮、溴哌利多、溴替唑仑、丁巴比妥、卡溴脲、利眠宁、氯美噻唑、氯丙嗪、氯巴占、氯噻西泮、氯氮平、地西泮、氟哌利多、炔己蚁胺、氟阿尼酮（flunanisone)、氟硝西泮、氟丙嗪（fluopromazine)、氟哌噻吨癸酸酯、氟奋癸酯、氟西泮、氟哌啶醇（baloperidol)、劳拉西泮、氯甲西泮、美达西泮、眠尔通、安眠酮、咪达唑仑、硝西泮、奥沙西泮、戊巴比妥、奋乃静匹莫齐特（primozide)、丙氯拉嗪、舒必利、替马西泮、硫利达嗪、三唑仑或佐匹克隆）阻断剂（诸如醋丁洛尔、阿普洛尔、阿替洛尔、拉贝洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、氧烯洛尔、吲哚洛尔、或普萘洛尔）；心脏正性肌力药物（诸如氨力农、洋地黄毒苷、地高辛、依诺昔酮、毛花苷C、或甲地高辛）；皮质类固醇（诸如倍氯米松、倍他米松、布地奈德、醋酸可的松、去氧米松、地塞米松、氟氢可的松、氟尼缩松、氟可龙（flucortolone)、氟替卡松丙酸酯、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松、或曲安西龙）；利尿剂（诸如乙酰唑胺、阿米洛利、节氟噻嗪（bendofluazide)、布美他尼、氯噻嗪、氯噻酮、依他尼酸、呋塞米、美托拉宗、螺内酯、或氨苯蝶啶）；抗帕金森综合征剂（诸如甲磺酸溴隐亭、或马来酸麦角乙脲）；胃肠剂（诸如比沙可啶、西咪替丁、西沙必利、地芬诺酯、多潘立酮、法莫替丁、洛哌丁胺、美沙拉嗪、尼扎替丁、奥美拉唑、昂丹司琼、雷尼替丁、或柳氮磺胺吡啶）；组胺H1受体拮抗剂（诸如阿伐斯汀、阿司咪唑、桂利嗪、赛克力嗪、赛庚啶、茶苯海明、氟桂利嗪、氯雷他定、美克洛嗪、奥沙米特或特非那定）；脂质调节剂（诸如苯扎贝特、氯贝丁酯、非诺贝特、吉非贝齐、或丙丁酚）；硝酸盐或抗心绞痛药剂（诸如亚硝酸异戊酯、三硝酸甘油酯、硝酸异山梨酯、单硝酸异山梨酯或硝酸戊四醇酯）；营养剂（nutritionalagent)(诸如β-胡萝卜素、维生素A、维生素B2、维生素D、维生素Ε和维生素K);HIV蛋白酶抑制剂（诸如非那韦）；阿片样镇痛剂（诸如可待因、右旋丙氧芬（dextropropyoxyphene)、二乙酰吗啡、二氢可待因、美普他酚、美沙酮、吗啡、纳布啡、或喷他佐辛）；性激素（诸如克罗米酚、达那唑、炔雌醇、醋酸甲羟孕酮、美雌醇、甲睾酮、炔诺酮（morethisterone)、炔诺孕酮、雌二醇、缀合的雌激素、孕酮、康力龙、己烯雌酚(stibestrol)、睾酮、或替勃龙）；或刺激剂（诸如安非他命（amephetamine)、右旋苯丙、右芬氟拉明、芬氟拉明或马吲哚）。[0137]在一些实施方案中，当纳米载体是疏水性质的时，纳米粒子可以是包含亲水性壳的纳米囊。在此类实施方案中，亲水性壳可选自单独或组合的葡聚糖、透明质酸盐、人血清白蛋白（HSA)、牛血清白蛋白（BSA)、壳聚糖、虫胶、胶原、明胶、阿拉伯树胶、聚乙烯醇、环糊精。如果需要的话，所述聚合物中的每一种可以是交联的。[0138]根据一些实施方案，亲水性材料是人血清白蛋白（HSA)、牛血清白蛋白（BSA)或透明质酸。[0139]根据其他实施方案，亲水性基体是具有约66,500Da的平均分子量的人血清白蛋白（HSA)。[0140]本发明的药物递送系统可基于被携带在其中的活性剂（材料）被定制或修改。携带多种纳米载体的纳米粒子可用于携带和递送一种或多种活性材料。例如，疏水性活性材料可被包封在疏水性纳米载体（纳米球或纳米囊）中，而为亲水性的另外的活性材料可被包埋在纳米粒子材料的亲水性材料基体中。类似地，亲水性纳米载体可包封一种以上的亲水性活性材料而疏水性纳米粒子材料可容纳一种或多种疏水性活性材料。[0141]取决于最终的应用和/或递送系统的性质，活性剂为疏水性的还是亲水性的，活性剂可通过化学键（如上文所定义，例如，极性、离子、范德华力，等等）与初级纳米载体(疏水性的或亲水性的）缔合，并且通过添加'协助脂质'（诸如D0TAP)用于聚阴离子大分子。活性剂与纳米载体或纳米粒子的这种化学缔合防止活性剂的泄漏，并且包封过程的有效性被保持或确保（取决于最终的应用和/或特定的递送系统，这种方法可能是有用的）。[0142]待包封在多种纳米载体内或在纳米载体和/或纳米粒子的聚合物基体中的"活性齐Γ可选自：维生素、蛋白、抗氧化剂、核酸、短的或长的寡核苷酸（以不同的构象）、siRNA和其化学衍生物、肽、多肽、脂质、碳水化合物、激素、抗体、单克隆抗体、疫苗和其他预防剂、药物、诊断剂、造影剂、营养剂（nutraceuticalagent)、小分子（具有小于约l，OOODa或小于约500Da的分子量）、电解质、免疫剂（immunologicalagent)和任何前面提到的任何组合。[0143]在一些另外的实施方案中，待包封在根据本发明的系统中的特别的剂包括艾塞那肽、胰岛素和其他。[0144]在其他实施方案中，活性剂是siRNA。[0145]在另外的实施方案中，待包封的siRNA选自具有SEQIDNO:1至12的核苷酸序列中的任何一种的siRNA。[0146]为了修改某些活性材料的疏水性/亲水性，可在材料上附加负电荷或正电荷或附加亲脂性（疏水性）部分。[0147]在一些实施方案中，所述活性剂是带负电荷的并且纳米载体也是带负电荷的。在此类实施方案中，阳离子脂质选自1，2_二油酰-3-三甲基铵-丙烷（D0TAP)、硬脂酰胺、和油胺。[0148]根据一些实施方案，阳离子脂质是D0TAP。[0149]在一些实施方案中，当活性剂与纳米载体表面的至少一个区域缔合时，缔合（一般如上面定义的）可直接对存在于纳米载体粒子的表面上的化学基团，或可通过一个或多个连接基团，其以化学方法或以物理方法将表面区域与活性材料缔合。连接基团可以是单原子或一组原子，并且可以非限制性的方式选自硫醇、氢氧化物、胺、烷基基团、磷酸盐、羧酸盐、PEG、以及本领域中已知的其他连接基团。[0150]本发明提供了包封多种纳米载体（一种或多种）的纳米粒子，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，活性剂是siRNA。[0151]在一些实施方案中，纳米载体还包括聚阳离子脂质，聚阳离子脂质是1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（D0TAP)。[0152]在其他实施方案中，所述纳米粒子具有在400和950nm之间的平均直径。[0153]在一些其他实施方案中，纳米粒子材料是疏水性的。在此类实施方案中，纳米粒子材料选自PLA、PLGA以及其混合物。[0154]在本发明的另一个方面中，本发明提供了包含如本文所公开的多个纳米粒子的组合物。在一些实施方案中，组合物是药物组合物，并且还包含药学上可接受的载体。[0155]本文所述的"药学上可接受的载体"，例如，媒介物、佐剂、赋形剂或稀释剂，是本领域技术人员熟知的并且是公众容易得到的。药学上可接受的载体是对活性化合物是化学惰性的且在使用条件下不具有有害的副作用或毒性的载体是优选的。[0156]载体的选择将部分地由特定的活性剂，以及由用于施用组合物的具体方法来确定。因此，存在多种本发明的药物组合物的适合的制剂。下面用于口服、胃肠外、静脉内、肌内或腹腔内施用的制剂仅仅是示例性的而决不是限制性的。[0157]药物组合物可适于通过各种途径施用，包括口服、直肠、阴道、皮下、静脉内、肌内、肺、局部或经皮、眼滴和鼻内。此类药物组合物以制药领域中熟知的方式制备。在制备本发明的药物组合物中，前面提到的组分通常与赋形剂混合，由赋形剂稀释，或包封在可以被操作为需要的形式的此类载体中。基于施用的具体模式，药物组合物可配制成片剂、丸剂、胶囊、小药囊、颗粒剂、粉剂、口香糖、混悬剂、乳剂、霜剂、软膏剂、无水或含水的局部制剂和溶液。[0158]药学上可接受的载体，例如，媒介物、佐剂、赋形剂或稀释剂，是本领域技术人员众所周知的并且是公众容易得到的。药学上可接受的载体是对活性制剂和其组分中的每一种是化学惰性的且在使用条件下不具有有害的副作用或毒性的载体是优选的。[0159]载体的选择将部分地由本发明的特定制剂，以及由用于施用组合物的具体方法来确定。因此，存在多种本发明的药物组合物的适合的制剂。[0160]在一些实施方案中，所述药物组合物适合作为用于将治疗剂口服地、肠胃外地或静脉内输送入受试者的循环系统（心血管系统）的递送系统。[0161]适合于口服施用的制剂可由以下组成：(a)液体溶液，诸如溶解于稀释剂诸如水、盐水、或果汁（例如橙汁）中的有效量的纳米粒子、或包含有效量纳米粒子的组合物；(b)胶囊、小药囊、片剂、糖锭、和锭剂，每个含有预定量的以固体或颗粒形式的活性成分；（c)粉剂；(d)适合液体中的悬浮液；以及（e)适合的乳液。液体制剂可包括稀释剂，诸如水和醇，例如乙醇、苯甲醇、和聚乙烯醇，或添加或不添加药学上可接受的表面活性剂、助悬剂或乳化剂。胶囊形式可以是普通的硬壳或软壳的明胶类型，含有例如，表面活性剂、润滑剂和惰性填充剂，诸如乳糖、蔗糖、磷酸钙、和玉米淀粉。片剂形式可包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸、微晶纤维素、阿拉伯树胶、明胶、瓜尔胶、胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、硬脂酸，以及其他赋形剂、着色剂、稀释剂、缓冲剂、崩解齐U、润湿剂、防腐剂、调味剂和药理学上相容的载体中的一种或多种。糖锭形式可包括香料中的活性成分，通常是蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶，以及包含惰性基质中的活性制剂的软锭剂，诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯树胶，乳剂，凝胶以及除了活性制剂之外含有如本领域已知的此类载体的类似物。[0162]胃肠外制剂通常将在溶液中含有从约0.5%至约25%重量的活性成分。适合的防腐剂和缓冲剂可在此类制剂中使用。为了减轻或消除对注射部位的刺激，此类组合物可含有一种或多种具有从约12至约17的亲水-亲油平衡值（HLB)的非离子型表面活性剂。表面活性剂在此类制剂中的量的范围为按重量计从约5%至约15%。适合的表面活性剂包括聚乙烯山梨糖醇脂肪酸酯，诸如脱水山梨糖醇单油酸酯和通过环氧丙烷与丙二醇的缩合形成的环氧乙烷与疏水性基质的高分子量加合物。胃肠外制剂可存在于单位剂量或多剂量密封容器中，诸如安瓿和小瓶，并且可储存在冷冻干燥（冻干）条件下，仅需要在使用前立即加入无菌液体载体，例如水，用于注射。可从先前描述的种类的无菌粉末、颗粒、和片剂制备临时注射溶液和悬浮液。[0163]本发明的化合物可制成可注射制剂。对用于可注射组合物的有效药物载体的需求是本领域普通技术人员熟知的。参见PharmaceuticsandPharmacyPractice,J.B.LippincottCo.，Philadelphia,Pa.，Banker和Chalmers,编著，238-250页（1982)，以及ASHPHandbookonInjectableDrugs,Toissel,第4版，622-630(1986)页。[0164]在一些实施方案中，递送系统适于治疗有效量的活性剂的促进的靶向治疗递送和控制释放施用。[0165]如已知的，用于本文目的的"有效量"可通过如本领域已知的此类考虑事项来确定。量必须是有效的以获得所需的治疗效果，取决于待治疗的疾病的类型和严重程度和治疗方案以及其他。有效量通常在合理设计的临床试验（剂量范围研究）中被确定且本领域技术人员将了解如何适当地进行此类试验以确定有效量。如众所周知的，有效量取决于多种因素，包括配体与受体的亲和力、其在体内的分布概况、多种药物参数诸如在体内的半衰期、不希望的副作用（如果有的话）、诸如年龄和性别的因素以及其他。[0166]根据本发明的含有活性材料的纳米粒子可因而被用于引起至少一种效果，例如"治疗效果"，或可与至少一种其他剂共轭缔合以通过治疗或预防受试者的不想要的病状或疾病来引起、增强、抑制或减少至少一种效果或副作用。至少一种其他剂（物质、分子、要素、化合物、实体或其组合）可选自治疗剂和非治疗剂，所述治疗剂，即当以治疗有效量施用时能够引起或调节治疗效果的剂，所述非治疗剂，即其单独地不引起或调节治疗效果但是其可赋予纳米粒子所选择的特征，如将在下文进一步公开的。[0167]本发明的药物组合物可被选择为治疗、预防或诊断任何病理或病状，取决于包含在纳米粒子中的活性材料。如本文所用的，术语"治疗"或其任何语言的变化形式，指的是施用有效减轻与疾病相关的不期望的症状的治疗量的本发明的组合物或系统，以在它们发作之前预防此类症状的表现，以减缓疾病的发展、减缓症状的恶化，以增强缓解期的开始、减缓在疾病发展慢性阶段引起的不可逆的损害，以延迟所述发展阶段的开始，以减轻疾病的严重程度或治愈疾病，以提高存活率或更快的恢复，或以预防疾病免于发作或以上两种或更多种的组合。[0168]在另一个方面，本发明还提供了包含如本文描述的本发明的组合物和使用说明书的试剂盒、或商业包装。在一些实施方案中，本发明的组合物或由其衍生的部分可存在于试剂盒中的单独的隔室或小瓶中。[0169]试剂盒还可包括可用于溶解活性组分、其稀释或通常可用于制备组合物的至少一种载体、稀释剂或溶剂。组合物可由最终用户（消费者或医师）根据提供的说明书或最终用户的体验和/或训练来制备。[0170]试剂盒还可包括用于测量各组分（活性成分和/或载体）的重量、体积或浓度的测量工具。[0171]在本发明的另一个方面，本发明提供了用于获得本发明的纳米粒子的方法，如本文描述的，方法包括：[0172]-获得至少一种纳米载体，所述纳米载体包含至少一种活性剂；以及[0173]-将所述至少一种纳米载体包封入纳米粒子。[0174]取决于待包含在本发明的系统中的活性剂（材料）或多种活性剂（材料）的性质，本发明的方法可以以各种等效形式来进行。大体上，方法包括：[0175]-根据活性剂是疏水性的还是亲水性的，分别选择具有疏水性特性或亲水性特性的聚合物；[0176]-将聚合物和活性剂溶解在液体介质中；[0177]-用另一种液体处理包括聚合物和活性剂的所述液体介质（其中液体介质是有机的，另一种液体是水，反之亦然）；以及[0178]-分离所述纳米载体。[0179]在一些实施方案中，当活性剂是疏水性的时，纳米载体材料是疏水性的，且纳米粒子材料是亲水性的，用于制备本发明的纳米粒子的方法包括：[0180]-将疏水性聚合物溶解在任选的水可混溶的有机溶剂中以形成有机相；在一些实施方案中，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷（DCM)、乙醚、丙酮和乙腈（ACN);[0181]-使所述有机相与水相接触，以由此获得所述纳米载体，水相任选地包括表面活性剂；以及[0182]-将所述纳米载体与所述活性剂的溶液一起温育以允许所述活性剂与所述纳米载体的表面的至少一部分缔合。[0183]在一些实施方案中，可混溶的有机溶剂选自乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷（DCM)、乙醚、丙酮和乙腈（ACN)。[0184]如本文所用，术语"接触"，或其任何语言的变化形式，是指将有机相和水相以使得允许它们之间的紧密接触的方式集合在一起。[0185]应该注意的是，术语"溶液"应给予其最宽泛的定义以包括以下的液体状态：其中一种组分完全溶解在另一种组分中或在液体介质中的液体状态、前体溶液的一种或多种组分在另一种组分中或在介质中的乳液（纳米乳液或微乳液）的液体状态、和前体溶液的一种或多种组分在另一种组分或在介质中的分散体（纳米分散体或微分散体）的状态。[0186]在一些实施方案中，当活性剂是亲水性的时，纳米载体材料是亲水性的，且纳米粒子材料是疏水性的，方法包括：[0187]-将亲水性聚合物溶解在活性剂的水溶液中以形成水相；以及[0188]-在允许形成所述纳米载体的pH下连续将包含去溶剂化剂的有机相加入水相，活性剂被分布在纳米载体内。[0189]在一些实施方案中，方法任选地包括交联所述亲水性聚合物基体。[0190]在其他实施方案中，所述pH在6和9之间，在一些实施方案中，pH为7。[0191]在另外的实施方案中，去溶剂化剂选自丙酮或乙醇、以及乙腈。[0192]在本发明的方法中使用的有机相还包括带正电荷的脂质（阳离子脂质），如本文所定义的。[0193]在制备本发明的纳米粒子的所有方法中，形成包覆在多种纳米载体周围的纳米粒子的最终步骤可通过将纳米载体纳米喷雾成包含纳米粒子聚合物材料的溶液来实现。根据其他实施方案，所述纳米粒子通过在纳米喷雾干燥器中进行的包封来获得。[0194]在一些实施方案中，本发明的方法还包括用至少一种靶向部分来官能化所述纳米粒子的外表面的至少一部分。在其他实施方案中，所述至少一部分是纳米粒子的整个表面。[0195]在一些实施方案中，所述至少一种靶向部分选自PEG、识别实体肿瘤中过表达的HER-2受体的曲妥珠单抗（Herceptinu);识别Η铁蛋白的AMBLK8;识别EGFR受体的西妥昔单抗（Erbitux?);识别CD20的利妥昔单抗（MabThera?);抑制刺激新血管形成的称为"血管内皮生长因子"(VEGF)的天然蛋白的功能的贝伐单抗（Avastii，）;对VEGF-A提供更强结合的兰尼单抗ILucentisI;小分子诸如叶酸或叶酸盐；透明质酸或透明质烷；一般约6-15kDa的肿瘤穿透肽；表皮生长因子（EGF);转铁蛋白；铁蛋白；精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)肽；上皮细胞粘附分子（EpCAM);细胞间粘附分子l(ICAM-l);癌胚抗原（CEA);血管活性肠肽；CA15-3抗原；MUC1蛋白；CD20;⑶33;整合蛋白；淋巴靶向部分（诸如LyP-Ι);适体，诸如PSMA适体或VEGF适体；低聚糖和其他。[0196]根据一些实施方案，祀向剂是贝伐单抗（AvastiW)或兰尼单抗（Lucentis^)。[0197]附图简述[0198]为了理解本公开内容并了解如何在实践中实施本发明，现在将参考附图仅通过非限制性的实施例描述实施方案，附图中：[0199]图1A-1B是纳米喷雾干燥器作用原理（图1B)和由此获得的纳米粒子（图1A)的示意图。[0200]图2A-2B是温育1小时后，通过凝胶阻滞测定（PAGE8%)针对来自洗涤的PLGANS的超滤液的GFP-siRNA的完整性评估。图2A:来自制剂A和B的超滤液-第1泳道-梯形条带（ladder)、第2泳道具有100ngGFP-siRNA作为对照。泳道3、4分别具有A1和A2的10μ1超滤液。泳道5、6分别具有A3和A4的4μ1超滤液。泳道7、8分别具有B1和B2的10μ1超滤液。泳道9、10分别具有Β3和Μ的4μ1超滤液。图2Β:来自制剂D和C的超滤液-第1泳道-梯形条带、第2泳道具有100ngGFP-siRNA作为对照。泳道3、4分别具有C1和C2的16μ1超滤液。泳道5、6分别具有C3和C4的16μ1超滤液。泳道7、8分别具有D1和D2的16μ1超滤液。泳道9、10分别具有D3和D4的16μ1超滤液。在所有样品中，数字1、2表示来自与50μgGFP-siRNA-起温育的制剂的双份（duplicate)，且数字3、4表示来自与100μgGFP-siRNA-起温育的制剂的双份。[0201]图3A-3B是高度稀释的交联的HSANS的SEM表征（平均粒径58±30nm，ZP-38±9)。[0202]图4A-4B是高度稀释的交联的HSANS的SEM表征，所述交联的HSANS具有0.03mg包封siRNA的D0TAP(图4A:具有Chol-GFP-siRNA的NS，图4B:具有GFP-siRNA的NP)。[0203]图5是从交联的HSANS提取的GFP-siRNA和以相同梯度注射的未处理的GFP-siRNA对照的HPLC色谱图，其中所述交联的HSANS用0.03mgD0TAP和200μgsiRNA在pH8时制备。粗线为260nm处的吸光度且细线为280nm处的吸光度。对于siRNA(不像蛋白或肽），比率A26(i/28(i是在1.8至2的范围内。在约7.5处的峰归因于从交联的HSANS提取的GFP-siRNA的存在。[0204]图6是从交联的HSANS提取的Chol-GFP-siRNA和以相同梯度注射的未处理的Chol-GFP-siRNA对照的HPLC色谱图，其中所述交联的HSANS用0.03mgD0TAP和200μgsiRNA在pH8时制备。粗线为260nm处的吸光度且细线为280nm处的吸光度。对于siRNA(不像蛋白或肽），比率A26Q/28Q是在1.8至2的范围内。在约25.0处的峰归因于从交联的HSANS提取的Chol-GFP-siRNA的存在。[0205]图7A-7B是包封PLGANS的葡聚糖NC的SEM显微照片。通过在DDW(40mg)中的0·4%(w/v)葡聚糖40的喷雾干燥方法生产的NC由30mg的PLGANS(?lOOnm,_33mV的ZP)组成。[0206]图8A-8H是包封初级PLGANS的HSANC的SEM显微照片。通过在DDW中的不同％(w/v)HSA的喷雾干燥方法生产的NC由PLGANS(?100nm)组成。图8A-80B:包封30mg的带负电荷的PLGA的NS(ZP-33mV)的1.6%HSA(200mg)。图8C-8D:包封15mg的带正电荷的PLGA的NS(ZP+66mV)的0.75%HSA(56mg)。图8E-8F:包封14mg的带负电荷的PLGA的NS(ZP-33mV)的0·5%HSA(56mg)。图8G-8H:包封7mg的带负电荷的PLGA的NS(ZP-33mV)的0·25%HSA(28mg)。[0207]图9A-9B是包封初级交联的HSANS的PEG-PLGANC的SEM显微照片。通过在丙酮中的PEG-PLGA(10.5mg)的喷雾干燥方法制备的NC由1.6mgHSANS(?lOOnm,ZP-51mV)组成。在喷雾方法期间，观察到在喷雾头上出现壳（crust),导致NC的融合。[0208]图10A-10B是包封初级交联的HSANS的PLGANC的SEM显微照片。通过在丙酮中的PLGA(9.8mg)的喷雾干燥方法制备的NC由1.6mgHSANS(?lOOnm，ZP-51mV)组成。[0209]图11A-11B是包封1.6mg的初级交联的HSANS的PLGANC(A)和包封1.6mg的初级的HSANS的PEG-PLGANC(B)的SEM显微照片以及使用EDS(能量色散X射线光谱法）的其元素分析。氮可仅源自HSANS。[0210]图12是包封初级交联的HSANP的聚合物NC的SEM显微照片。图12A:PLGANC，图12B:PEG-PLGANC。通过在乙腈中的聚合物（16mg)的喷雾干燥方法制备的NC由10mg交联的HSANS(?lOOnm,ZP-43mV)组成。[0211]图13A-13B是样品A0-57的粒度分布和SEM显微照片：包封初级交联的HSANS的PLGA(50kDa)NC。图13C是分散在水中4天后的NC。[0212]图14A-14B是样品A0-66的粒度分布和SEM显微照片：包封装载有GFP-siRNA的初级交联的HSANS的PLGA(50kDa)NC。通过在40ml乙腈中的聚合物（42mg)的喷雾干燥方法制备的NC由12.6mg交联的HSANS(?lOOnm,ZP-43mV)组成。[0213]图15A-15B是样品A0-68的粒度分布和SEM显微照片：包封装载有Chol-GFP-siRNA的初级交联的HSANS的PLGA(50kDa)NC。通过在60ml乙腈中的聚合物(64mg)的喷雾干燥方法制备的NC由15mg交联的HSANS(?lOOnm,ZP-43mV)组成。[0214]图16A-16B是用于评估暴露于不同条件后的游离siRNA完整性的凝胶阻滞测定(PAGE8%)。进行了GFP-siRNA(图16A)和Chol-GFP-siRNA(图16B)的完整性评估。第1泳道-梯形条带，第2、3泳道-分别具有lOOng和50ng的未处理的siRNA的对照。泳道4、6和8,分别具有暴露于pH7、8和9的siRNA。泳道5、7、9分别具有在戊二醛（0.014%(v/v))的存在下暴露于pH7、8和9的siRNA。[0215]图17A-17B是用于评估提取的siRNA的凝胶阻滞测定（PAGES%)。进行了GFP-siRNA(图17A)和Chol-GFP-siRNA(图17B)的完整性评估。第1泳道-梯形条带，第2泳道-具有lOOng的未处理的siRNA的对照。泳道3-8,具有从初级交联的HSANS(在不同pH条件下制备的）提取的siRNA，泳道9和10具有从装载有初级交联的HSA的NC提取的siRNA。[0216]图18A是使用Vivaspin技术制备并洗涤后的BSANS的SEM成像。在涂布一滴分散体后，在载玻片上室温下干燥NS。图18B是在使用Vivaspin技术制备并洗涤后的BSANS的SEM成像。在涂布一滴分散体后，在载玻片上室温下干燥NS。[0217]图19A-19B使用CLSM显示A-431细胞对2%FITC标记的HSANP的摄取。37°C下温育4h(图19A)和22h(图19B)后的摄取。NP浓度为2mg/ml(1.5ml/孔）。[0218]详述[0219]在本发明中，双纳米包封被用于保护和控制大的疏水性或亲水性剂，诸如siRNA的释放。保护的第一道防线通过将siRNA装载到初级纳米载体（?lOOnm)而实现，而稳定性的第二道防线通过将初级纳米载体包封入通常具有锚定到其表面的聚乙二醇（PEG)部分的亚微米纳米粒子而获得。使用纳米喷雾干燥技术进行纳米粒子的形成（通常为纳米囊，或NC)[16,23,24]。[0220]本文中描述了以下两种类型的纳米粒子：[0221](a)使用亲水性涂层聚合物制备装载在纳米囊中的PLGA(聚（D，L-乳酸-共-乙醇酸））NP;以及[0222](b)使用疏水性涂层聚合物制备装载在纳米囊中的HSA(人血清白蛋白）NP。[0223]在两种情况下，阳离子脂质D0TAP(1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷），被添加到初级NP以有效装载带负电荷的siRNA并在NP细胞内在化后进一步促进siRNA的"内体逃逸"。由于所有成分是FDA批准的，此类递送系统提供了用于改进药物的半衰期、生物分布和药代动力学的亲水性生物大分子（诸如siRNA)的全身性递送的平台。[0224]在药物递送中，相比于微粒，纳米粒子（NP)是有利的，不仅由于其增强药物效力的能力，而且由于因为其可被静脉内施用而有利改变选定的药物的药代动力学特性的能力。此外，此类纳米尺寸的系统在其渗透特性和靶向至特定的细胞类型方面优于微粒[12]。NP的靶向效率和延长的循环时间是其成功应用于药物递送的2个最重要的因素[13]。靶向NP可以是主动的（通过将对受体特异性的配体连接在细胞靶部位），或是被动的。在被动靶向时，小NP由于称为"增强的渗透和保留'（EPR)效应的现象在实体肿瘤中积累的倾向被利用[14]。发现NP的细胞摄取是取决于NP的尺寸、几何形状、电荷和细胞类型。在一般情况下，小于1μm的粒子可通过几种胞吞途径被内化到细胞中[13]。此外，聚乙二醇（PEG)部分连接至NP的表面导致空间位阻，空间位阻导致降低的聚集和血浆蛋白的吸附（调理作用），以及被网状内皮系统（RES)的吸收-同时延长血液循环时间[15]。最后，为了防止水相降解并确保NP在长期保存后的稳定性，干燥的粉末状制剂是必需的。通常伴随添加冷冻防护赋形剂的冷冻干燥法（冷冻干燥）、或喷雾干燥方法，是应用于此类目的的2个主要的很好建立的程序。[0225]喷雾干燥是以连续的单一步骤方法将液体或悬浮液转化为干粉的方法。然而，这种技术未能有效形成和收集〈2μm的细粒子[16]。最近，由Buchi开发了新一代的实验室规模的喷雾干燥器，使得对于小样品量（几毫克或毫升）能够以高收率（>70%)产生在300nm至5μm的尺寸范围内的粒子。这一技术允许通过喷雾干燥形成NP，导致图1A中所示的一般结构，图1A是包括多种纳米载体的纳米粒子，纳米载体包含活性剂。图1B中示意性地示出的此纳米喷雾干燥器（NSD)，利用振动筛网技术用于细液滴生成。一般而言，压电晶体驱动的喷雾头结合有小喷雾帽，所述喷雾帽含有具有一系列精确的微米大小的洞的薄穿孔膜（喷雾网孔），其振动时，产生数百万3-15μm范围大小的液滴（取决于网孔尺寸，通常5-7μm的中值尺寸）。此外，不像基于紊流运行的常规喷雾干燥器，这种新技术基于层流运行；因此，温和的加热是可实现的，从而制备对热敏感的生物制药产品相容的系统。[0226]在过去的十年中，除了小分子药物，生物大分子递送，诸如siRNA被认为用于使用NP/NC作为载体的疗法。siRNA(小干扰RNA)，RNA分子的短序列（19-30bp长的双链体）可以以良好定义的机制通过诱导其互补的mRNA的降解而用于使特定基因的表达沉默[17]。由于siRNA的发现，进行了开发基于siRNA的药物的众多尝试。然而，在siRNA的递送中，由于其物理化学性质，出现了较多的障碍。siRNA是大的（?13kDa)、亲水性的、带负电荷的分子，并因此需要转染媒介物以穿透细胞膜并进入细胞溶胶中。此外，细胞渗透（通常通过内吞作用）后，需要'内体逃逸'机制。此外，游离siRNA的全身性施用由于在血液中极短的半衰期和快速的肾清除而被阻碍。为了克服在体内递送siRNA的这些缺点，将各种化学修饰引入siRNA分子，保留其活性，并由此提高其对RNA酶裂解的抵抗力且增加其在人血清中的半衰期[18]。此外，裸的或化学修饰的siRNA基于以下被合并在不同的递送系统中：非病毒脂质（胆固醇、脂质体）、蛋白载体（融合肽或细胞穿透肽）、环糊精、或与阳离子脂质缀合或没有与阳离子脂质缀合的可生物降解的聚乳酸共聚物纳米粒子。[0227]不希望被理论束缚，本发明的纳米载体向包封的亲水性生物大分子（即siRNA)提供保护、生物相容性、改进的稳定性、期望的生物分布和药代动力学特性，产生具有改进的治疗特性的独特的递送系统。[0228]材料方法[0229]材料[0230]PLGA:聚（D,L-乳酸-共-乙醇酸）（50:50)(R504H)MW48,OOODa，和PEG-PLGA(RGP50105)MW5,000+45,OOODa购自Boehringer(Ingelheim,Germany)。以下材料购自以下公司：Dextran40(MW40,000Da),Teva(Jerusalem,Israel);透明质酸钠（HA)，MW200,000Da，Bioberica(Barcelona,Spain);D0TAP(1,2-二油酰-3-三甲基铵-丙烧-盐酸盐），MW698.?a，LipoidGmbH(Frigenstr,Germany);用于i.v.注射并由Hadassahhospital提供的商购人血清白蛋白（HSA)20%溶液（Zenlab20或Biotest),Kamada(Beit_Kama，Israel)。HAS,MW66,500Da，聚乙二醇15轻基硬脂酸醋（SolutolHS15)，获自BASF(Ludwigshafen，Germany)。聚乙二醇（PEG)MW4,000Da，聚山梨酯80(吐温80)，水中的戊二醛8%溶胶，胰蛋白酶（来自猪胰脏），无RNA酶和DNA酶的超纯水和磷酸盐缓冲盐水（?1^)(13;[0代386111:，。!17.4)，所有均购自3丨81]^(31:丄〇11丨8，]\10，1134)。丙酮、乙醇、二氯甲烷，氯仿、乙腈均为HPLC级。其他化学品和溶剂均为分析试剂级并未经进一步纯化就被使用。在整个研究中仅对用siRNA进行的所有实验使用超纯水（Sigm或Beit-Haemek)，而对于所有其他空白系统（无siRNA)使用二次蒸馏水（DDW)。[0231]siRNA[0232]抗EGFR(表皮生长因子受体）siRNA(EGFR-siRNA)(21bp，MW13,400Da)和用于对照目的的乱序siRNA(21bp,MW13,821Da)，购自Ambion(Austin,TX,USA)。[0233]EGFR-siRNA[0234]S(5，-3，）CCAUAAAUGCUACGAAUAUtt(SE0IDNO:1)[0235]AS(5/-3，)AUAUUCGUAGCAUUUAUGGag[0236](SEQIDNO:2)[0237]乱序siRNA[0238]S(5，-3，)UAACGACGCGACGACGUAATT(SEQIDNO：3)[0239]AS(5'-3'）UUACGUCGUCGCGUCGUUATT[0240](SEQIDNO:4)[0241]在以上的序列中，化学修饰由几个LNA修饰组成；小写字母=DNA碱基。[0242]抗绿色荧光蛋白（GFP)siRNA(GFP-siRNA)(21bp，MW14,352Da)，和胆固醇修饰的GFP-siRNA(Chol-GFPsiRNA)(21bp,MW15,079Da)，由Roche(Kulmbach,GmbH)提供并被用于大部分实验（特别用于估算药物载量）。[0243]GFP-siRNA：[0244]S(5，-3，)AuAucAuGGccGAcAAGcAdTsdT(SEQIDNO：5)[0245]AS(5/-3，)UGCUUGUCGGCcAUGAuAUdTsdT[0246](SEQIDNO:6)[0247]Chol-GFPsiRNA」[0248]S，（5'-3，)(Chol-linker-AuAucAuGGccGAcAAGcdTsdT(SEQIDNO：7)[0249]AS(5/-3，)UGCUUGUCGUCGGCcAUGAuAUdTsdT[0250](SEQIDNO:8)[0251]在以上的序列中，化学修饰：小写字母=2'0-甲基化核苷，dT=脱氧胸腺嘧啶，sdT=脱氧胸腺啼陡硫代磷酸酯，加下划线的=突出端。[0252]'在壳中（inhouse)'使用EGFR-siRNA合成的抗-EGFR-siRNA[0253]S*(5;^3')CCAUAAAUGCUACGAAUAUtt[0254](SEQIDNO:9)[0255]AS(5'^3')AUAUUCGUAGCAUUUAUGGtt[0256](SEQIDNO:10)[0257]以及[0258]S*(5'^3')CCAUAAAUGCUACGAAUAUtt[0259](SEQIDNO:11)[0260]AS(5,^3/)AUAUUCGUAGCAUUUAUGGtt[0261](SEQIDNO:12)[0262]在以上的序列中，化学修饰：加下划线的=2'0-甲基化核苷，小写字母=DNA碱基，*还进行将（Choi)连接体或NIR染料分子添加在5'位置上。[0263]方法和实骀方法学[0264]PLGANS制备[0265]基于'聚合物界面沉积'方法进行了纳米球的制备[19]。简言之，聚合物PLGA48kDa溶解在与水可混溶的有机溶剂（丙酮）中。然后快速地并在搅拌下（?900RPM)将有机相添加到水相中，水相通常含有表面活性剂（S〇lut〇rHS15)。当发生丙酮快速逃逸到水相时，疏水性聚合物自发地形成球状带负电荷的纳米球状粒子（50-200nm)。[0266]为了形成带正电荷的PLGANS，将D0TAP(1，2_二油酰-3-三甲基铵-丙烷-盐酸盐）以不同的百分比添加到丙酮相。将制剂进行蒸发（37°C下），以除去所有的丙酮的痕迹，并进一步浓缩至5ml水相的最终体积，然后以4,OOOrpm离心10min，（除去沉淀并干燥-发现为不超过1%(w/w))，并使用VivaSpin_6(300kDa，Vivascience)用DDW洗漆（X10)，以降低吐温的百分比。各组分在经洗涤的制剂中的最终百分比为：1.5%(w/v)PLGA和0%、0.04%、0.2%或0.4%^八)0(7^?(分别为制剂六、8、0和〇。[0267]初级NS的粒径、粒度分布和ζ电位测量结果[0268]使用ZetasizerNanoZS(MalvernInstruments,Malvern,UK)通过动态光散射测量初级NS(由PLGA或由交联的HSA制成的）的物理化学特性。将所有样品在测量之前以1:100稀释在HPLC级水（pH=5.5)。当表征装载siRNA的NS时，使用具有0.01%NaCl的无RNA酶的水（pH=5.5)。[0269]siRNA在PLGANS中的载量效力[0270]对于用siRNA温育，制剂以以上详述的相同方式制成，但不是使用水（HPLC级）作为水相，无RNA酶的水（RNFW)被用于形成和洗涤步骤。简要地，0.lml洗涤的PLGANS取自每种制剂（1.5mgPLGA含量）并与不同量的6ΡΡ---ΚΝΑ(5〇μ8、10〇μ8)在室温下以轻度振摇温育持续1小时。温育后，用RNFW(使用300kDaNanos印离心机，Pall)洗涤（Χ10)每种制剂，且总超滤液被收集，冻干并用500μ1RNFW重建，从其将150μ1注入到HPLC中。基于通过反相HPLC(RP-HPLC)制成的校准曲线计算在超滤液中的GFP-siRNA含量。[0271]高压液相色谱法（HPLC)[0272]用于使用的不同的siRNA的校准曲线使用具有Clarity3um01ig〇-RP柱50X4.6mm(Phenomenex，USA)的HPLC(ShimadzuLC-2010C)进行。在注射前将siRNA溶解在RNFW或RNF缓冲液（100mMNaCl，50MmTris)中。流动相：A-无RNA酶的缓冲液（100mMΤΕΑΑ),Β-乙腈。长梯度（对昍固醇修饰的siRNA):在40min内B/A(10:90)至（90:10)，然后B/A(10:90)的另一个10min。短梯度（对非昍固醇修饰的siRNA):在15min内B/A(10:90)至（40:60)，然后B/A(10:90)的另一个10min。流速：lml/min，紫外线检测：260nm和280nm。[0273]用聚丙烯酰胺凝胶的凝胶电泳（PAGE)[0274]对于siRNA完整性（稳定性）评估，使用8%(19:1)天然聚丙烯酰胺凝胶（PAGE)。以Tris-硼酸盐-EDTE(TBE)作为运行缓冲液，以200V进行电泳持续50min。对于siRNA染色，使用〇.01%EtBr。在UV透射仪下观察凝胶。[0275]用于评估GFP-siRNA对PLGANS的载量效力的方案[0276]将PLGANS溶解在氯仿中直至澄清溶液形成，随后添加等体积的RNFW。样品涡旋并离心（5min，以4,000RPM)。收集上层水相（具有游离的siRNA)。将这个程序重复两次。接着，将收集的水相冷冻干燥。在RNF缓冲液中将冷冻干燥的样品重建后，通过RP-HPLC评估siRNA含量的确定。因为具有D0TAP和siRNA的NS可形成'离子对'，检查将肝素（带高度负电荷的分子）添加到水相中，随后37°C下在温和摇动下温育持续1小时，以确保所有siRNA以其游离形式被释放。[0277]初级交联的HSANS的制备[0278]使用前，将商购HSA在DDW中使用来自MedicellInternational(Liverpoolroad,London)的纤维素膜（MWC014,000)脱盐持续24小时，以除去盐和所有的防腐剂痕迹。为了产生纳米HSANP，应用pH-凝聚[20]的熟知的方法（也被称为去溶剂化技术）。简言之，室温下以恒定快速搅拌（?960RPM或40HZ)，通过连续（?lml/min)添加去溶剂化剂将调整到特定pH的HSA溶液转化为纳米球。持续添加去溶剂化剂直到出现足够的浊度（通常在40至80%(v/v)之间的去溶剂化剂），然后在研磨摇动下室温时用戊二醛进行交联过程持续至少2小时。交联后，将去溶剂化剂蒸发（37°C)并以4,000RPM离心持续10min(将沉淀除去、干燥并通过重量分析确定）。使用vivaspin300kDa(Vivascience)以3个不同的离心周期（4,000RPM，4°C)用DDW洗涤（X10)NS。在某些情况下，丙酮相含有D0TAP。[0279]siRNA对交联的HSANS的载量效力[0280]对于将siRNA包封在交联的HSANS内部，在添加去溶剂化相之前将siRNA添加到HAS溶液。程序的其余部分以以上详述的相同方式准确进行，当代替使用DDW时，使用无RNA酶的水（RNFW)。交联后，洗涤NS，并收集总超滤液，冷冻干燥且用500μ1RNFW重建，从中，将160ul注射到HPLC中。因为观察到游离的siRNA在超滤液中的部分降解，确定NS中siRNA含量的优选的方法是直接确定粒子中siRNA含量（其消化后），而不是基于超滤液中游离的siRNA(未被包封的）。[0281]用于确定交联的HSANS中siRNA含量的方案[0282]以重量分析法定量HSA的总重量/100μ1悬浮液（洗涤后）。然后将l_2mg包封siRNA的洗涤的HSANP用无RNA酶的PBS缓冲液（使用0.5MNa0H溶液调节至pH=7.5)稀释到lml，并且用20μg至150μg胰蛋白酶在37°C下在黑暗和温和摇动下消化持续60、90或180min，直到形成澄清的溶液。在该情况下，添加胰蛋白酶后0或60min，将含有D0TAP、肝素（90yg)的样品添加到水相中。在胰蛋白酶存在或不存在下使用RP-HPLC法确定游离siRNA的量。[0283]可通过使用（酚/氯仿）（1:1)混合物沉淀来除去胰蛋白酶以及消化的HSA的片段。[0284]使用纳米喷雾干燥器将PLGANS包封为NC-含水模式[0285]通过在以'开环'模式操作的纳米喷雾干燥器B-90(BiichiLabortechnikAG,Flawil,Switzerland)上喷雾干燥制备NC，由此空气流经系统。在所有实验中，气体流速为约1201/min。在所有的实验中使用100%喷雾和4μm网孔尺寸的膜。[0286]使用纳米喷雾干燥器将HSANS包封为NC-有机模式[0287]通过在以'闭环'模式操作的NSDB-90上喷雾干燥制备NC，由此，N2(g)和C02(g)代替空气流经系统。在所有实验中，气体流速为约1201/min。将浸有挥发性蒸气和湿气的空气，转移到除湿单元，用于干燥和凝聚，然后在圆形路径中干燥返回至系统。用4μπι网孔尺寸的膜在低温下（Tin=30°-60°C)进行喷雾干燥。[0288]siRNA的解链温度测量[0289]在UV-可见光分光光度计（Cary300)上260nm下，通过以l°C/min的速率将样品温度从20°C提高至85°C进行所使用的不同siRNA(21-mer)的解链温度测量。将所有的siRNA溶解在缓冲液（48mMTris，96mMNaCl，ρΗ7·1)中以获得4-10ng/y1的浓度。[0290]通过差示扫描量热计（DSC)的热分析[0291]DSC测量针对聚合物（PLGA48kDa和PEG-PLGA50kDa)进行，并使用MettlerDSCIStarSystem(以标准品校准）在氮气气氛下，以10°C/min的加热速率，在-20°C至220°C的温度范围内进行。[0292]SEM(扫描电子显微镜）和EDS(能量色散X射线光谱法）[0293]通过具有高稳定的肖特基场发射源（Sirion,型号：Quanta200FEI,Germany)的高分辨率扫描电子显微镜（HR-SEM)以5kV观察喷雾干燥的NC(和包封的NS)的几何形状、尺寸和表面形态。在成像之前，将样品分散到碳粘片上并涂敷有金和钯混合物持续90-120秒。在分散在水中的初级NS的情况下，将样品高度稀释，然后喷溅在玻璃上并放置以蒸发过夜。用X-MAX20SDDInca450EDSLN2free检测器（OxfordInstruments，UK)，通过EDS(能量色散X射线光谱法）使用5kV的低电压，用129eV的光谱分辨率，进行样本的元素分析。[0294]用于评估喷雾干燥的NC的粒度分布的方法[0295]因为常规的ZetasizerNanoZS对小于4μm的粒子以及相对均勻的分散体的测量有限制，喷雾干燥的NC的足够的粒度分布可仅使用Mastersizer2000E(MalvernInstruments,UK)通过激光衍射进行。每个测量需要约4mg的样品以将其分散在120ml的分散剂中。[0296]跨度值计算为：[0297]跨度=(d90_dl0)/d50[0298]其中d50为体积中值粒径；d90,90%的体积具有比d90小的尺寸；dlO,10%的体积具有比dlO小的尺寸。[0299]低跨度值指示窄的粒度分布。[0300]用于确定喷雾干燥包封效力的方案[0301]对于通过尺寸分离不同的NC群，应用尺寸排阻色谱法（SEC)。然后，为了确定包封在大的PLGANC的特定群体中的HSANC的含量，在氯仿中对PLGANC进行首次去溶剂化。然后，离心分离（l〇,〇〇()RPM，15min)之后，初始HSANP作为沉积物被分离，离析，且其含量通过二喹啉甲酸（BCA)蛋白测定试剂盒或通过氮含量（通过简单的微量分析确定的）进行验证。对于包封初级PLGANP的HSANC，具有已知重量的NC在与胰蛋白酶的水溶液（37°C下pH7.5的PBS缓冲液）一起温育时被降解，然后使用BCA定量HSA含量并通过减法估计PLGA的量。当NC包封装载有siRNA的初级NS时，确定离析的siRNA的总含量（NC分解和NS消化后）。[0302]EGFR-siRNA的体外释放动力学曲线确定[0303]从初级NS和次级NC释放的EGFR-siRNA的动力学曲线，将以Hagigit等人[21]详述的相同的方式在体外确定。[0304]细胞培养[0305]A-431人鳞状上皮癌细胞和其他结肠直肠腺细胞，将被保持在Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM)中，该培养基含有10%胎牛血清、2mML-谷氨酰胺和10000U/ml青霉素以及100ug/ml链霉素。每两天将更换培养基。细胞将在37°C，6%C02下，在C02培养箱中生长。在用0.25ml胰蛋白酶溶液（BeitHaemek，Afula,Israel)对培养物进行胰蛋白酶化后，融合瓶将以1:10的比例分离。将根据IS07的要求（10000粒子/m3)在净化室进行所有的实验。[0306]NP在细胞培养基中的稳定性[0307]在A-431细胞培养基中温育不同时间后，以如[22]中详述的相同方式，使用ZetasizerNanoZS进行NS的粒度测量。[0308]NC稳定性评估[0309]在不同的条件（4°C和37°C)下储存持续4、8和12周后对最终NC进行使用MastersizerX的粒度测量和使用SEM的形态学评估。[0310]NP在A-431细胞中的细胞毒性[0311]以[21]中描述的相同方式，在每孔存在5mg/ml、lmg/ml、0.lmg/ml和0.01mg/mlNP浓度下，在144h的时间段内，将测试细胞增殖。[0312]FITC标记的HSANS在A-431细胞中的摄取[0313]为了产生2%FITC-标记的HSANS，将1.9mg的FITC-BSA(牛血清白蛋白）添加到4ml的2%HSA溶液中。只是在黑暗中，以先前详述的相同方式制备粒子。然后通过醋酸纤维素磺酸盐过滤器（〇.2um，Whitman)过滤洗涤的NS。然后，将FITC-标记的HSANP的等分部分（61.2μ1和122.45μ1)以DMEM缓冲液稀释成1.5ml的总体积，以分别产生每孔lmg/ml和2mg/ml的浓度。对于细胞标记，150,000个A-431细胞置于盖玻片上并静置过夜以粘附。次日，将粘附细胞与FITC-标记的HSANS的等分部分一起温育持续4h或22h，随后用磷酸盐缓冲盐水（PBS)洗涤3次。此后，将细胞用4%多聚甲醛（Sigma-Aldrich)固定并用PBS洗涤3次。在阴性对照实验中，FITC-标记的HSANS温育步骤被省略了，而其他步骤保持一样。以FluoViewFV300共聚焦激光扫描显微镜（Olympus,Tokyo,Japan)检查细胞。[0314]使用细胞内NIR模型评估抗EGFR-siRNA在A-431细胞中的沉默效力[0315]基于Cohen等人[23]开发并详述的新颖方法进行抗EGFR-siRNA的沉默效力。使用相关引物通过RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应）证实EGFRmRNA的可分解效力(Knockdownefficacy)，并将通过蛋白质印迹定量EGFR蛋白水平。[0316]小鼠中异种移植瘤的研究[0317]将培养A-431肿瘤细胞。将亚融合的细胞（70%-80%)用0.25%胰蛋白酶简单处理后收获并再悬浮于Hank氏平衡盐溶液中用于接种。将肿瘤细胞悬浮液（3-5X106个细胞）以0.2ml的体积，经SC注射到每只小鼠的右侧腹。8至10只小鼠将被随机分配到各处理组，且处理将进行至多4周。两倍的纳米媒介物以适当的剂量将在颈静脉注射。将定期用手动卡钳进行肿瘤测量（每周至少一次），并且将使用以下式计算肿瘤体积：〇.52X长度X宽度2。在研究结束时，肿瘤将被切下并称重，并然后用于一些研究。与此同时将用NIR标记的EGF探针对肿瘤进行无创生物显像。[0318]结果[0319]在有机相中PLGANS的制各[0320]添加或没有添加阳离子脂质（D0TAP)的情况下从PLGA48kDa(聚（D，L-乳酸-共-乙醇酸），50:50)制备第一类型的初级NS，产生带负电荷或正电荷的NS。使用良好建立的'聚合物界面沉积'方法的技术制备NS。选择4种不同的空白制剂以通过界面相互作用（静电的和疏水性的）测试siRNA的载量效力。4种制剂（见表1)在其D0TAP含量方面不同（制剂八、8、0和（：，分别含有0%、0.04%、0.2%、和0.4%(￥八）的0(^?)。[0321]理化特件[0322]用GFP-siRNA(50μg和100μg)温育（室温下1小时）之前和之后，研究PLGANS的理化特性。结果详述于表1中。[0323]基于这些结果，清楚地观察到GFP-siRNA的吸附，该吸附导致NS(ZP，PDI和尺寸）的理化性质的改变。虽然带负电荷NP(制剂A)的ZP保持是负的，而制剂B从稍正变化到负，甚至具有50yg的GFP-siRNA。对于具有显著的正电荷的NS(制剂D和C-ZP40mV以上），我们观察到ZP的下降；特别是制剂D。[0324]【权利要求】1.一种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径。2.根据权利要求1所述的纳米粒子，所述纳米粒子是通过纳米喷雾可获得的。3.根据权利要求1所述的纳米粒子，其中所述纳米粒子和/或所述纳米载体各自是交联的。4.根据权利要求1所述的纳米粒子，其中所述活性剂是siRNA。5.根据权利要求4所述的纳米粒子，其中所述纳米载体还包括为1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（DOTAP)的聚阳离子脂质。6.根据权利要求1所述的纳米粒子，其中所述纳米载体通过纳米喷雾来制备。7.根据权利要求1至6中任一项所述的纳米粒子，其中所述纳米粒子选自：(i)当所述活性剂是疏水性的时，所述纳米载体材料是疏水性的且所述纳米粒子材料是亲水性的；(ii)当所述活性剂是亲水性的时，所述纳米载体材料是亲水性的且所述纳米粒子材料是疏水性的；(iii)当所述活性剂是疏水性的时，所述纳米载体材料是疏水性的且所述纳米粒子材料是疏水性的；以及(iv)当所述活性剂是亲水性的时，所述纳米载体材料是亲水性的且所述纳米粒子材料是亲水性的。8.根据权利要求的1至7中任一项所述的纳米粒子，其中所述纳米粒子的平均直径小于1微米。9.根据权利要求8所述的纳米粒子，其中所述纳米粒子的平均直径小于950nm。10.根据权利要求9所述的纳米粒子，其中所述纳米粒子的平均直径在约400和950nm之间。11.根据权利要求1至10中任一项所述的纳米粒子，其中所述纳米载体的平均直径小于约300nm。12.根据权利要求11所述的纳米粒子，其中所述纳米载体的平均直径在约50和300nm之间。13.根据权利要求12所述的纳米粒子，其中所述纳米载体的平均直径在约50和100nm之间。14.根据权利要求1至13中任一项所述的纳米粒子，所述纳米粒子呈纳米囊或纳米球的形式。15.根据权利要求1至14中任一项所述的纳米粒子，其中所述纳米载体选自纳米囊、纳米球、或其混合物。16.根据权利要求15所述的纳米粒子，其中所述纳米载体通过纳米喷雾来获得。17.根据权利要求7所述的纳米粒子，其中所述活性剂是疏水性的，所述纳米载体材料是疏水性的且所述纳米粒子材料是亲水性的。18.根据权利要求7所述的纳米粒子，其中所述活性剂是亲水性的，所述纳米载体材料是亲水性的且所述纳米粒子材料是疏水性的。19.根据权利要求7所述的纳米粒子，其中所述活性剂是疏水性的，所述纳米载体材料是疏水性的且所述纳米粒子材料是疏水性的。20.根据权利要求7所述的纳米粒子，其中所述活性剂是亲水性的，所述纳米载体材料是亲水性的且所述纳米粒子材料是亲水性的。21.根据权利要求7至20中任一项所述的纳米粒子，其中所述至少一种疏水性材料选自乳酸、聚（D，L-乳酸-共-乙醇酸）（PLGA)、聚（D，L-乳酸）（PLA)、聚（ε-己内酯）、聚(2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）均聚物、聚（2-二甲氨基-乙基甲基丙烯酸酯）-b-聚(乙二醇）-α-甲氧基-ω-甲基丙烯酸酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯、聚酐聚合物以及其组合。22.根据权利要求21所述的纳米粒子，其中所述疏水性材料选自乳酸、聚（D，L-乳酸-共-乙醇酸）（PLGA)以及其组合。23.根据权利要求22所述的纳米粒子，其中所述PLGA具有在约4,000和100,OOODa之间的分子量。24.根据权利要求1所述的纳米粒子，其中所述纳米粒子材料是疏水性的，所述纳米粒子的外表面与至少一个聚乙二醇（PEG)部分缔合。25.根据权利要求7至24中任一项所述的纳米粒子，其中所述亲水性材料选自葡聚糖、透明质酸盐、正常的或交联的人血清白蛋白（HSA)、正常的或交联的牛血清白蛋白（BSA)、壳聚糖、虫胶、胶原、明胶、阿拉伯树胶、聚乙烯醇、环糊精、以及其组合。26.根据权利要求25所述的纳米粒子，其中所述亲水性材料是人血清白蛋白（HSA)、牛血清白蛋白（BSA)或透明质酸。27.根据权利要求26所述的纳米粒子，其中所述人血清白蛋白（HSA)具有约66,500Da的平均分子量。28.根据权利要求26所述的纳米粒子，其中所述透明质酸具有为从20,OOODa高至1，000,OOODa的平均分子量。29.根据权利要求1至28中任一项所述的纳米粒子，其中所述活性剂选自维生素、蛋白、抗氧化剂、核酸、短的或长的寡核苷酸、siRNA及其化学衍生物、肽、多肽、脂质、碳水化合物、激素、抗体、单克隆抗体、疫苗、预防剂、药物、诊断剂、造影剂、营养剂、小分子、电解质、免疫剂以及其组合。30.根据权利要求29所述的纳米粒子，其中所述活性剂是siRNA。31.根据权利要求7至30中任一项所述的纳米粒子，其中所述纳米载体包括至少一种亲水性活性剂。32.根据权利要求30所述的纳米粒子，其中所述亲水性活性剂选自治疗性肽或蛋白。33.根据权利要求30所述的纳米粒子，其中所述亲水性剂选自艾塞那肽、胰岛素、生长激素、醋酸曲普瑞林、布舍瑞林、和那法瑞林。34.根据权利要求7至33中任一项所述的纳米粒子，其中所述纳米载体包括至少一种疏水性剂。35.根据权利要求34所述的纳米粒子，其中所述疏水性剂选自镇痛剂或抗炎剂；驱虫齐U;抗心律失常剂；抗细菌剂；抗凝血剂；抗抑郁剂；抗糖尿病药；抗癫痫药；抗真菌剂；抗痛风药；抗高血压剂；抗疟疾剂；抗偏头痛剂；抗毒蕈碱剂；抗肿瘤剂或免疫抑制剂；抗原虫剂；抗甲状腺剂；镇痛剂、镇静剂、催眠药或精神安定剂；β-受体阻滞剂；心脏正性肌力药物；皮质类固醇；利尿剂；抗帕金森综合征剂；胃肠剂；组胺HI受体拮抗剂；脂质调节剂；硝酸盐或抗心绞痛剂；营养剂；HIV蛋白酶抑制剂；阿片类镇痛药；性激素；和兴奋剂。36.根据权利要求1至35中任一项所述的纳米粒子，其中所述纳米粒子具有与至少一种靶向剂缔合的外表面。37.根据权利要求36所述的纳米粒子，其中所述至少一种靶向剂选自单克隆抗体、小分子、透明质酸或透明质烷、肿瘤穿透肽、表皮生长因子（EGF)、转铁蛋白、铁蛋白、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)肽、上皮细胞粘附分子（EpCAM)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、癌胚抗原（CEA)、血管活性肠肽、CA15-3抗原、MUC1蛋白、⑶20、⑶33、整合蛋白、淋巴靶向部分（诸如LyP-Ι)、适体、和低聚糖。38.根据权利要求37所述的纳米粒子，其中所述单克隆抗体选自曲妥珠单抗(Herceptin?)、AMBLK8、西妥昔单抗（Erbitux?)、利妥昔单抗（MabThera*)、兰尼单抗(Lucentis?)和贝伐单抗（Avastin?)。39.根据权利要求38所述的纳米粒子，其中所述至少一种靶向剂选自兰尼单抗(Lucentis?)和贝伐单抗(Avastin?)。40.根据权利要求37所述的纳米粒子，其中所述小分子选自叶酸和叶酸盐。41.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子，其中纳米载体中的每一种是聚合材料、或金属、或含有金属的非金属材料。42.根据权利要求41所述的纳米粒子，其中所述纳米载体是聚合物材料。43.根据权利要求41所述的纳米粒子，其中所述纳米载体是金属。44.根据权利要求43所述的纳米粒子，其中所述金属是金。45.根据权利要求1所述的纳米粒子，其中所述活性剂被包含在所述纳米载体内或与其外表面的区域缔合。46.根据权利要求42或43所述的纳米粒子，其中所述活性剂与所述纳米载体外表面的区域缔合。47.根据权利要求46所述的纳米粒子，其中所述缔合是直接地或通过连接基团。48.根据权利要求1至47中任一项所述的纳米粒子，其中所述至少一种纳米载体具有与至少一种另外的靶向剂缔合的外表面。49.根据权利要求48所述的纳米粒子，其中所述至少一种靶向剂与所述至少一种另外的靶向剂是相同的。50.根据权利要求48所述的纳米粒子，其中所述至少一种靶向剂不同于所述至少一种另外的靶向剂。51.根据权利要求1至50中任一项所述的纳米粒子，其中所述至少一种活性剂为带负电荷的或带正电荷的。52.根据权利要求51所述的纳米粒子，其中所述活性剂为带负电荷的并且所述纳米载体还包括阳离子脂质或细胞穿透肽。53.根据权利要求52所述的纳米粒子，其中所述阳离子脂质选自1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（DOTAP)、硬脂酰胺、和油胺。54.根据权利要求53所述的纳米粒子，其中所述阳离子脂质是1，2-二油酰-3-三甲基铵-丙烷（DOTAP)。55.根据权利要求52所述的纳米粒子，其中所述细胞穿透肽选自HIV-TAT、穿透肽、短杆菌肽5、]\^1-103、]\^1-1034邙、？61^、？61^4找、马盖宁2、马盖宁-24找、1(16六1(1、8?100、MAP、MAP-Arg、SAP、PEP-1、运输因子、和FP23。56.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子，所述纳米粒子通过包括以下的方法来制备：通过具有预定尺寸的一个或多个孔的筛输送包括在液体介质中的多种纳米载体和纳米粒子材料的胶体组合物，所述多种纳米载体包括至少一种活性剂并且所述纳米粒子材料是在所述液体介质中至少部分可溶的，所述孔的尺寸确定所述纳米粒子的尺寸。57.根据权利要求56所述的纳米粒子，其中所述胶体组合物通过将多种纳米载体与纳米粒子材料在液体介质中混合来制备。58.根据权利要求56或57所述的纳米粒子，还包括干燥所述纳米粒子的步骤。59.根据权利要求58所述的纳米粒子，其中所述干燥是通过冷冻干燥、干燥、减压、或溶剂萃取。60.-种组合物，所述组合物包括多个权利要求1至59中任一项所述的纳米粒子。61.根据权利要求60所述的组合物，所述组合物为药物组合物，并且还包括药学上可接受的载体。62.根据权利要求61所述的组合物，所述组合物适合于静脉内（i.v.)或口服施用。63.根据权利要求60所述的组合物，其中所述纳米粒子被冷冻干燥。64.权利要求1至59中任一项所述的纳米粒子用于制备药物组合物的用途。65.根据权利要求64所述的用途，其中所述药物组合物适于作为用于将治疗剂局部地、口服地、肠胃外地或静脉内输送入受试者的循环系统的递送系统。66.根据权利要求64或65所述的用途，其中所述递送系统适于促进所述活性剂的靶向治疗递送和控制释放施用。67.-种试剂盒，所述试剂盒包括根据权利要求64至66中任一项所述的组合物和使用说明书。68.-种递送系统，所述递送系统包括多个根据权利要求1至59中任一项所述的纳米粒子。69.根据权利要求68所述的递送系统，所述递送系统适于将至少一种活性剂递送入受试者的循环系统。70.-种用于获得根据权利要求1至59中任一项所述的纳米粒子的方法，所述方法包括：(a)获得至少一种纳米载体，所述纳米载体包括至少一种活性剂；以及(b)将所述至少一种纳米载体包封入所述纳米粒子。71.根据权利要求70所述的方法，其中所述纳米载体包括疏水性聚合物基体。72.根据权利要求71所述的方法，其中所述纳米载体通过以下获得：-将疏水性聚合物溶解在有机溶剂中以形成有机相；-使所述有机相与水相接触，所述水相任选地包括表面活性剂，以从而获得所述纳米载体；以及-将所述纳米载体与所述活性剂的溶液温育以允许所述活性剂与所述纳米载体的表面的至少一部分缔合。73.根据权利要求72所述的方法，其中所述有机溶剂为水可混溶的。74.根据权利要求73所述的方法，其中所述有机可混溶溶剂选自丙酮、乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷（DCM)、乙醚、丙酮和乙腈（ACN)。75.根据权利要求70所述的方法，其中所述纳米载体包括亲水性聚合物基体。76.根据权利要求75所述的方法，其中所述纳米载体通过以下获得：-将亲水聚合物溶解在所述活性剂的水溶液中以形成水相；以及-在容许形成所述纳米载体的pH下连续地将包括去溶剂化剂的有机相添加到所述水相，所述活性剂被分布在所述纳米载体中。77.根据权利要求76所述的方法，所述方法任选地包括交联所述亲水性聚合物基体。78.根据权利要求76或77所述的方法，其中所述适合的pH在6和9之间。79.根据权利要求76至78中任一项所述的方法，其中所述去溶剂化剂选自丙酮、乙醇和乙腈。80.根据权利要求76至79中任一项所述的方法，其中所述有机相还包括阳离子脂质。81.根据权利要求70至80中任一项所述的方法，所述方法还包括用至少一种靶向部分来官能化所述纳米粒子的外表面的至少一部分。82.根据权利要求81所述的方法，其中所述至少一部分是所述纳米粒子的全部表面。83.根据权利要求81所述的方法，其中所述至少一种靶向部分选自PEG、曲妥珠单抗(Herceptin?)、AMBLK8、西妥昔单抗（Erbitux?)、利妥昔单抗（MabThera?)、贝伐单抗(Avastniu)、兰尼单抗（LucentisK)、小分子、透明质酸、透明质烷、肿瘤穿透肽、表皮生长因子（EGF)、转铁蛋白、铁蛋白、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD)肽、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、癌胚抗原（CEA)、血管活性肠肽、CA15-3抗原、MUC1蛋白、⑶20、⑶33、整合蛋白、淋巴靶向部分、适体、和低聚糖。84.根据权利要求70至83中任一项所述的方法，所述方法还包括冷冻干燥所述纳米粒子。85.-种用于获得根据权利要求1至59中任一项所述的纳米粒子的纳米喷雾方法，所述纳米喷雾方法包括通过具有预定尺寸的一个或多个孔的筛输送包括在液体介质中的多种纳米载体和纳米粒子材料的胶体组合物，所述多种纳米载体包括至少一种活性剂并且所述纳米粒子材料是在所述液体介质中至少部分地可溶的，所述孔的尺寸确定所述纳米粒子的尺寸。86.根据权利要求85所述的纳米喷雾方法，其中所述胶体组合物通过将多种纳米载体与纳米粒子材料在液体介质中混合来制备。87.根据权利要求85或86所述的纳米喷雾方法，所述纳米喷雾方法还包括干燥所述纳米粒子的步骤。88.根据权利要求87所述的纳米喷雾方法，其中所述干燥是通过冷冻干燥、干燥、减压、或溶剂萃取。89.-种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，所述纳米粒子是通过纳米喷雾可获得的。90.-种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，所述纳米粒子通过纳米喷雾获得。91.一种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，所述纳米粒子和/或所述纳米载体是交联的。92.-种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，其中所述纳米粒子选自：-当所述活性剂是疏水性的时，所述纳米载体材料是疏水性的，且所述纳米粒子材料是亲水性的；所述纳米粒子材料任选地进一步被交联以减小其在水介质中的溶解度；或-当所述活性剂是亲水性的时，所述纳米载体材料是亲水性的、任选地交联的且所述纳米粒子材料是疏水性的。93.-种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，其中所述纳米粒子和/或所述纳米载体各自是交联的并且选自：-当所述活性剂是疏水性的时，所述纳米载体材料是疏水性的，且所述纳米粒子材料是亲水性的；所述纳米粒子材料任选地进一步被交联以减小其在水介质中的溶解度；或-当所述活性剂是亲水性的时，所述纳米载体材料是亲水性的、任选地交联的且所述纳米粒子材料是疏水性的。94.一种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，其中所述纳米粒子和/或所述纳米载体通过纳米喷雾获得并且选自：-当所述活性剂是疏水性的时，所述纳米载体材料是疏水性的，且所述纳米粒子材料是亲水性的；所述纳米粒子材料任选地进一步被交联以减小其在水介质中的溶解度；或-当所述活性剂是亲水性的时，所述纳米载体材料是亲水性的、任选地交联的且所述纳米粒子材料是疏水性的。95.-种纳米粒子，所述纳米粒子包封多种纳米载体，所述多种纳米载体中的至少一种含有至少一种活性剂，所述纳米粒子具有400和950nm之间的平均直径，其中所述纳米粒子通过纳米喷雾获得，所述纳米粒子和/或所述纳米载体是交联的并且选自：-当所述活性剂是疏水性的时，所述纳米载体材料是疏水性的，且所述纳米粒子材料是亲水性的；所述纳米粒子材料任选地进一步被交联以减小其在水介质中的溶解度；或-当所述活性剂是亲水性的时，所述纳米载体材料是亲水性的、任选地交联的且所述纳米粒子材料是疏水性的。【文档编号】A61K9/00GK104159572SQ201280057034【公开日】2014年11月19日申请日期:2012年9月20日优先权日:2011年9月21日【发明者】S·贝妮塔,奥里特·阿姆萨勒姆,T·纳萨尔申请人:耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司