一种采用熊胆为基质的中药饮片炮制方法
【专利摘要】本发明属于一种新的中药饮片的炮制方法。该方法在常温下，用一定浓度的鲜熊胆汁或熊胆粉溶于水，对中药材进行均匀喷洒，闷润至熊胆溶液为中药材充分吸收，然后铺展于托盘中，放入烘箱烘烤、烘干后取出，即得熊胆制中药炮制品。本发明利用熊胆本身的特性，以其为基质对中药材进行炮制，药理试验表明炮制后可增强药材原有的功效，如增强了金银花、菊花、薄荷等的清热解毒作用，决明子、夏枯草、枸杞子的清肝明目功效，金钱草、鸡内金等的利胆溶石等作用，山楂、葛根等的降脂活血功效，干蟾皮、虎眼万年青等的抗癌作用。
【专利说明】一种采用熊胆为基质的中药饮片炮制方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于中药【技术领域】，具体一种涉及协同增效的熊胆为基质的中药饮片炮制方法。
[0003]技术背景
熊胆为熊科动物黑熊 Soloimrctos thibetanus Cuvier 或掠熊 Ursus arctosLinnaeus的干燥胆囊，又名黑胆(《诗经》)，黄熊胆(《诗疏》)，猪熊胆，马熊胆(《尔雅翼》)，黑熊胆，人熊胆(《本草纲目》)。
[0004]现临床所用熊胆均为熊科动物黑熊feJeftareiias thibetanus Cuvier经胆囊手术引流的新鲜胆汁或其干燥后的粉末熊胆粉。味苦，寒。归肝、胆、心经。具有清热解毒、凉心平肝、明目之功效，多用于治疗惊风抽搐、恶疮，痔漏，目赤翳障，黄疽、目赤肿痛，咽喉肿痛等症。现代药理研究证实熊胆具有多种药理作用，主要有:利胆、保肝、溶解胆石、镇静、抗惊厥、解痉，抗炎，抑菌，解热，对心血管系统的作用，降血糖作用，另外熊胆还有镇咳，抗缺氧，巩固记忆，健胃、镇痛，抗疲劳作用等。
[0005]
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种中药炮制方法，该方法采用熊胆为基质对中药进行炮制。在常温下，用一定浓度的鲜熊胆汁或熊胆粉溶于水，对中药进行均匀喷洒，闷润至熊胆溶液为中药材充分吸收，然后铺展于托盘中，放入烘箱烘烤、干燥后封存。
[0007]现代研究表明，熊胆粉具有解热镇痛、清肝明目、利胆溶石、降脂活血通脉等功效。因此，以此为溶液喷洒在中药材或中药饮片上，对中药材或饮片有如下功能:经药理实验证实，在采用熊胆汁或熊胆粉溶液为基原炮制后，增强了金银花、菊花、薄荷等的清热解毒作用，决明子、夏枯草、枸杞子的清肝明目功效，金钱草、鸡内金等的利胆溶石等作用，山楂、葛根等的降脂活血功效，干蟾皮、虎眼万年青等的抗癌作用。
[0008]实施本发明的技术路线如下:
1.炮制工艺:
常温下，将50mL鲜熊胆汁加水至200mL，或5克熊胆粉(1mL新鲜胆汁喷雾干燥后可获得Ig熊胆粉)兑入200mL水中，制成溶液，将待炮制的饮片(溶液与药材比例:50mL/kg)铺展于托盘中，用熊胆溶液进行均匀喷雾，闷润至熊胆溶液为中药材充分吸收后放入烘箱烘烤，烘干后取出，封存，即得熊胆制中药炮制品。其中，花类药材烘烤时间为I~2h，烘烤温度为60~80°C ;全草类药材烘烤时间为I~3h，烘烤温度为60~80°C ;果实类药材烘烤时间为3~4h，烘烤温度为70~90°C ;动物类药材烘烤时间为I~4h，烘烤温度为50~60°C。烘干后，封存。
[0009]2.功效考察所用实验模型:
(I)清热解毒实验模型:
①抗菌作用(体外对常见呼吸道细菌的抑制作用):分别取原药材饮片、熊胆制药材饮片提取物适量，加0.5 mL吐温-80，再加营养肉汤稀释配制成浓度为200，100，50，10，5，2.5m g/mL共6个浓度，实验时流通蒸气灭菌。链球菌试验需在灭菌药液中添加I %葡萄糖，肺炎球菌和白喉杆菌试验另加10 %兔血清，白色念珠菌试验应用沙氏培养液稀释药液。空白对照为不含药物的培养基。药液的各个浓度管及空白对照管分别加入1:2000的试验菌液(8 h培养物)0.lmL，37 °C培养24 h观察结果。判定最小抑菌浓度(MIC)。
[0010]②抗内毒素作用(对大肠杆菌内毒素致家兔发热模型的影响):取新西兰兔随机分为4组，分别为模型组，饮片组(2g/kg)，熊胆制饮片组(2g/kg)和阳性对照组(阿司匹林,250mg/kg),每组5只,雄性。实验当天,各兔固定在固定架上,在实验环境中适应I h,测2次体温，取两次体温的平均值为正常体温。除模型组外，各组按20 mL/kg灌胃给与相应药物，模型组给予等量生理盐水。给药后，按0.01 mL/kg耳沿静脉注射内毒素(15 μ g/mL)致热，自进针起0.5，1，2，3，4，5,6 h各测定肛温。以注射内毒素前后的肛温差值为纵坐标，注射后时间为横坐标绘制平均体温变化曲线。
[0011]③解热作用(对干酵母致大鼠发热模型的影响):取SD大鼠，按体重随机分为4组，分别为模型组，饮片组(2 g/kg)，熊胆制饮片组(2g/kg)和阳性对照组(阿司匹林，250mg/kg)，每组5只，雄性。实验前I d，禁食不禁水。实验日给药前测肛温2次，取其两次体温的平均值为正常体温。除模型组外，各组灌胃给药，给药容积为10 mL/kg，模型组给予等量生理盐水。给药0.5h后，各组大鼠按10 mL/kg于背部皮下注射干酵母生理盐水混悬液(0.2 mg/mL),造模后分别于0.5,1,2, 3, 4, 5,6,8 h测定肛温。以注射干酵母生理盐水混悬液前后的肛温差值为纵坐标，注射后时间为横坐标绘制平均体温变化曲线。
[0012](2)清肝明目实验模型:
①对实验性高血脂症兔血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的影响:选用健康雄性新西兰兔20只，观察I周后，空腹耳缘静脉取血，按免疫比浊法试剂盒说明书方法测定给高脂饲料前血清LDL-C的含量，然后均匀分4组:(1)正常对照组(正常组):实验全程喂正常饲料，2周后蒸馏水灌胃；(II)高血脂模型组:实验开始后一直喂高脂饲料(胆固醇0.5 g/kg/d和猪油0.5 mL/kg/d)； (III)原药材组:同闻血脂I旲型组，2周(闻血脂形成)后闻脂词喂的同时灌胃给予原药材饮片提取物(相当于生药2g/kg/d) ; (IV)熊胆制药材组:同高血脂模型组，2周(高血脂形成)后高脂饲喂的同时灌胃给予熊胆制药材饮片提取物(相当于生药2g/kg/d)。上述各组兔实验全程自由饮水，连续给药4周后从兔耳缘静脉取血，测定血清 LDL-C。
[0013]②对溴酸钾(KBr03) /伤寒沙门氏菌脂多糖(LPS)诱发小鼠晶状体氧化应激状态的改善作用:KM种小鼠随机分为正常对照组，LPS/KBr03诱导模型组，LPS/KBr03+原药材饮片组(2g/kg)、LPS/KBr03+熊胆制药材饮片组(2g/kg)。模型组及给药组尾静脉注射2 mg/kg LPS，同时腹腔注射200mg/kg KBr03制备小鼠晶状体氧化应激模型。给药组在注射LPS/KBr03 3 h前及注射同时分别灌胃2次，模型与正常组灌胃同体积水溶液。LPS/KBr03给药6 h后，乙醚麻醉条件下采取小鼠晶状体放入离心管内，进行晶状体抗氧化能力指数(0RAC )和丙二醛(MDA)水平的测定。
[0014]ORAC测定方法:将96孔板每个孔中加入待测样品溶液20 μ L，磷酸钾缓冲液20 μ L，再加入氧自由基诱发剂AAPH 140 μ L至终浓度为12.8 mmol/L，最后添加荧光素钠20 UL至终浓度为63 nmol/L，立即启动反应并迅速将酶标板置于预温37 °C的荧光酶标仪中开始测定。采用动力学方式，每2 min测定一个点，至荧光强度衰减至零为止。ORAC值以lymol/L Trolox在荧光衰减曲线上对应的保护积分面积作为标准对照计算。
[0015]MDA测定方法:将各组小鼠的眼球置于离心管内，加入生理盐水制成40 %的组织匀浆液。然后以3000 r/min离心10 min，取上清液并分别按照MDA检测试剂盒说明操作进行MDA活性的测定。
[0016](3)利胆溶石实验模型:
体外溶石作用观察:将外形一致、重量相近的胆固醇、混合性、胆色素结石，随机分组4，每组5粒，分别与原药材饮片提取液和熊胆制药材饮片提取液(浓度均为0.5g/mL)各5mL，置于37°C水浴箱内的试管内，每天更换溶液，记录20天后溶石的重量。同时以生理盐水，鹅去氧胆酸(100mg/mL)为对照。
[0017](4)降脂活血实验模型:
①采用高血脂症小鼠模型考察对小鼠血清总胆固醇及甘油三酯的影响:取健康小鼠60只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只，即:空白对照组；高脂血症模型对照组；原药材饮片组(5 g/kg);熊胆制药材饮片组(5 g/kg)。禁食16 h后，各给药组灌胃给药，容量均为0.2 mL/10 go2 h后除空白对照组外，每鼠腹腔注射75%蛋黄乳液0.1 mL/10 g (取新鲜鸡蛋黄用生理盐水配成75%蛋黄乳液)，6 h后每组再次灌胃相应溶媒或药物，剂量同前，于注射蛋黄乳液14 h后眼眶静脉取血、离心、分离血清，采用氧化酶法测定总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)含量。
[0018]②采用剪尾法观察对小鼠出血时间和凝血时间的影响:小鼠适应性喂养48h后，应用随机数字表进行完全随机化分组，分为4组，每组6只。空白对照组(给同体积生理盐水)，阿司匹林组，原药材饮片组，熊胆制药材饮片组，各组均采用灌胃给药，连续给药7天，每天灌胃一次，末次给药30min后，将小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，在小鼠尾尖约5mm处剪断，自血液溢出开始记时，每隔30s用滤纸吸去溢出血液，自计时开始至无血液溢出(自然止血)为止的时间，即出血时间。
[0019](5)抗癌作用实验模型:
①采用MTT法检测体外抗癌活性:取处于对数生长期，状态良好的人肝癌细胞株HepG2细胞，吹散成单细胞悬液，用血球计数板计数后，以IX 15个/孔接种于96孔板，培养24 h贴壁后，分别加入一定浓度梯度的药材提取物，作用24 h后弃去培养基，每孔加含浓度为0.5 mg/mL的MTT的培养基，37°C继续培养3 h.弃去培养液，每孔加入200 μ L DMSO溶解蓝紫色的甲瓒颗粒，用酶标仪在波长570 nm下测定吸光度值(OD)。对照组细胞存活率设定为100%，其他处理组OD值与对照组相比较，计算各自肿瘤细胞的生长抑制率。
[0020]②采用小鼠H22肝癌移植瘤模型研究体内抗癌作用:接种肿瘤细胞:取腹腔传代6~8 d生长良好的乳白色腹水，用生理盐水稀释至lXlOVmL。取40只小鼠，雌雄各半，在小鼠右前肢腋下皮下注射接种0.2 mL肿瘤细胞悬液，制成实体瘤实验动物模型。接种次日称量，小鼠随机分为4组，即阴性对照组(灌胃给予等体积的生理盐水)、阳性对照组(灌胃给药环磷酰胺30mg*kg 1,3 d给药I次)、原饮片组和熊胆制饮片组(提取液灌胃给药，剂量均为5g/kg)，连续给药7 d，l次/d。末次给药24 h后称重，颈椎脱臼处死动物。剥离肿瘤组织，用滤纸吸干后称瘤重，计算抑瘤率，抑瘤率= (1-实验组瘤重/阴性对照组瘤重)X 100%。
[0021]【专利附图】
【附图说明】:
图1熊胆制前后薄荷对干酵母所致大鼠发热的体温影响图2熊胆制前后菊花对大肠杆菌内毒素所致家兔发热的体温影响
【具体实施方式】
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实施例1:
将12.5mL鲜熊胆汁兑入10mL水中混匀制成熊胆溶液，取金银花药材1kg，铺展于托盘中，用熊胆溶液进行喷雾，然后放入烘箱烘烤，80°C，烘干Ih后取出，封存，即得熊胆制金银花。
[0022]对炮制前后的金银花药材进行功效比较，取熊胆制后金银花药材各50g，水提取后喷雾干燥的粉末，制成2.5、5、10、50、100和200mg/mL系列浓度，进行体外对常见呼吸道细菌的抑制作用评价，结果见表1 (最小抑菌浓度MIC, mg/mL),从结果可知，除了白色念珠菌外，熊胆制金银花的MIC均小于金银花原药材，故经熊胆炮制后可以提高金银花的清热解毒功效。
[0023]表1熊胆制前后金银花的体外抑菌效果MIC (mg/mL)
【权利要求】
1.一种中药炮制方法，其特征在于，采用熊胆为基质对中药进行炮制； 将鲜熊胆汁或熊胆粉溶于水，对中药材进行均匀喷洒，闷润至熊胆溶液为中药材充分吸收，然后根据中药的材质，进行相应的干燥处理。
2.如权利要求1的方法，喷洒在中药材上的熊胆汁或熊胆粉，以重量份计算，熊胆汁或熊胆粉为中药材的0.01%-50%，优选0.5-50%,更优选2-10%。
3.如权利要求1所述的方法，所述的相应的干燥处理的条件为:花类药材烘烤时间为I~2h，烘烤温度为40~90°C ； 全草类药材烘烤时间为I~3h，烘烤温度为40~90°C ； 果实类药材烘烤时间为3~4h，烘烤温度为40~90°C ； 动物类药材烘烤时间为I~4h，烘烤温度为40~90°C ; 王煙处理后取出，或者地，视干燥程度在常温下继续晾干至水分合格，即得熊胆制中药炮制品。
4.如权利要求1所述的方法，具体的工艺步骤为:常温下，将鲜熊胆汁按1:2~1:6(v/V)的比例加水稀释，或熊胆粉按1:2(Tl:60 (g/mL)比例加水稀释后获得的溶液，将该溶液按5(T200 mL/kg用量均匀喷雾到待炮制的药材上，闷润至熊胆溶液为中药材充分吸收后放入烘箱烘烤:其中，花类药材烘烤时间为I~2h，烘烤温度为60~80°C ;全草类药材烘烤时间为I~3h，烘烤温度为60~80°C ;果实类药材烘烤时间为3~4h，烘烤温度为70~900C ;动物类药材烘烤时间为I~4h，烘烤温度为50~60°C，烘干后取出，封存，即得熊胆制中药炮制品。
5.如权利要求1的方法，能增强中药材原有的清热解毒、清肝明目、利胆溶石、降脂活血及抗癌功效。
6.如权利要求1的方法，对具有清热解毒作用的中药材进行炮制时，能够增强其清热解毒功效；所述的中药材为金银花、菊花、薄荷； 或者地，对具有清肝明目作用的中药材进行炮制时，能够增强其清肝明目功效；所述的中药材为决明子、夏枯草、枸杞子； 或者地，对具有利胆溶石作用的中药材进行炮制时，能够增强其利胆溶石功效；所述的中药材为金钱草、鸡内金； 或者地，对具有降脂活血作用的中药材进行炮制时，能够增强其降脂活血功效；所述的中药材为山楂、葛根； 或者地，对具有抗癌作用的中药材进行炮制时，能够增强其抗癌功效；所述的中药材为干蟾皮、虎眼万年青。
7.—种熊胆制中药炮制品，该中药炮制品由权利要求1 一 7所述的任一项方法制备得IL
8.根据权利要求?_的得到的熊胆制中药炮制品在制备药品或食品中的用途。
【文档编号】A61K36/488GK104069149SQ201310067780
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2013年3月25日 优先权日:2013年3月25日
【发明者】王友智 申请人:北京智正方圆医药科技发展有限公司