专利名称：酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与抗癌药物组合在制备治疗肠癌药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂药物的新用途，具体涉及酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂联合抗癌药物在治疗肠癌中的应用，其中所述酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂为酪酸梭菌和双歧杆菌为主要药物活性成分制成的活菌制剂。
背景技术：
肠癌包括小肠癌和大肠癌，大肠癌也称结肠直肠癌或结直肠癌。肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，严重威胁人类的健康。全世界肠癌的发病率处于恶性肿瘤的第三位，在美国是因癌症死亡的第二大死因。在我国，随着生活水平的提高，饮食结构的变化，肠癌的发病率呈逐年升高的趋势，近25 年来，大肠癌已成为我国增长率最快的恶性肿瘤，为第五位恶性肿瘤。我国的肠癌发病率呈明显上升趋势，而且经济发达的地区似乎上升速度更快，这一事实应该引起我们足够的重视。手术治疗作为大肠癌治疗的首选方法，但其5年生存率仅在50%左右，手术后再配合放疗、化疗、免疫治疗和中药治疗等。中药虽然副作用小，但效果不理想。以5-FU(5-氟尿嘧啶)+LV(甲酰四氢叶酸)为基础的化疗方案是目前大肠癌治疗的经典方案，主要包括FOLFOX (奥沙利钼+5-氟尿嘧啶+亚叶酸钙)和F0LFIRI (伊立替康+5-氟尿嘧啶+亚叶酸钙)。本专利中涉及的环磷酰胺为广谱抗癌药物，对多种恶性肿瘤均有作用。放疗、化疗、免疫治疗虽然效果明显，但副作用非常大，患者很难耐受，有的患者甚至死于副作用。因此，寻找能预防肠癌发生且无毒副作用的药品、保健食品等迫在眉睫，如早期预防结或直肠息肉、血吸虫病、细菌性痢疾、阿米巴、克罗恩病及溃疡性结肠炎等易发展为肠癌的肠道慢性疾病癌变的治疗药物。肠道菌群的变化，或者说菌群平衡失调是引发肠道疾病的极其重要的原因，例如，腹泻、肠炎、肠癌等，大多与肠道菌群平衡失调有密切的关系。微生态制剂主要是根据微生态学原理，利用正常微生物群或促进物研制的制剂，可补充或充实微生物群落，维持或调整微生态平衡，达到防病治病的目的。酪酸梭菌是人的正常肠道菌之一，是一种安全、有效、没有毒副作用的益生菌，通过研究发现酪酸梭菌预防和治疗肠癌的作用机制主要为以下几个方面:①分泌酪酸，营养肠道，修复粘膜；②分泌酪酸，调控基因表达；③抑制肠道有害菌，消除肠道毒素，预防术后感染；④产生激肽酶，溶解癌组织；⑤提高机体免疫力；⑥消除炎症恢复肠道菌群平衡，建立肠道生物屏障。双歧杆菌是构成肠道膜菌群和定植抗力的最主要成分，对维持肠道的微生态平衡起重要作用。它在体内具有抗感染、抗肿瘤、免疫赋活、延缓衰老和降血脂等多种生理功能。双歧杆菌作为人体有益细菌，其数量是衡量人体健康的一个标志，因此，它一直是研究的热点。近年来，关于双歧杆菌抗肿瘤作用机制的报道较多，主要有如下几点:①清除致癌物。双歧杆菌磷壁酸可与亚硝胺或亚硝基胍结合，抑制其致癌活性；②生物拈抗作用。双歧杆菌可抑制结肠中腐败菌的生长，减少致癌物的产生调节免疫作用。双歧杆菌可激活体内巨噬细胞和淋巴因子激活的杀伤细胞的吞噬作用，并产生一定量的细胞毒性效应分子和介质，其中TNF-a可直接杀死肿瘤细胞，抑制肿瘤血管的形成，破坏肿瘤血管，导致肿瘤缺血坏死；④诱导肿瘤细胞凋亡或诱导细胞成熟分化诱导肿瘤细胞老化或异质化，促进肿瘤坏死因子和巨噬细胞的识别和捕杀，达到清除肿瘤的目的促进肠道蠕动，减少肠粘膜与致癌物质的接触时间，促进致癌物的排泄，维持宿主基因组的稳定性，降低肿瘤细胞的增殖活性。酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂为一种已经上市应用的药物，适用于急性非特异性感染引起的急性腹泻、抗生素、慢性肝病等多种原因引起的肠道菌群失调及相关的急慢性腹泻和消化不良。本发明尝试使用酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂和抗肠癌药物结合用于肠癌的治疗，意外的发现其具有协同增效作用。
发明内容
本发明提供了酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与抗癌药物组合在制备治疗肠癌药物中的应用，即在使用抗癌药物的基础上，联合酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂，达到治疗肠癌的目的；酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与抗癌药物组合具有更加有效的治疗肠癌的作用，延长肠癌患者寿命，提高肠癌患者的生活质量。本发明所述酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂的主要药物成分为酪酸梭菌和双歧杆菌。其中，所述酪酸梭菌选自但不限于酪酸梭菌(Clostridium butyricum)、CGMCC、保存编号0313.1;双歧杆菌选自但不限于双歧杆菌(bifidobacterium)、CGMCC、保存编号0313.2，两者均为现有技术。本发明所述酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂，是以有效剂量的酪酸梭菌和双歧杆菌作为主要药物活性成分，根据现有技术制成的适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂、其他液体制剂或栓剂等临床所需剂型。本发明所指有效剂量是指以酪酸梭菌和双歧杆菌根据上面所述作为主要药物活性成分制成的最终活菌制剂包含的酪酸梭菌活菌数不能低于lX107CFU/g，一般在I X 108CFU/g以上；双歧杆菌活菌数不能低于I X 106CFU/g 一般在I X 108CFU/g以上。酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂包含以酪酸梭菌和双歧杆菌为主要活性成分的药品、保健食品、饮品。本发明所述酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂可通过口服、灌肠或注入组织内等方式给药。本发明所述抗癌药物，选自任何一种适用于肠癌的药物，优选环磷酰胺和异环磷酰胺，它们都属于现有技术， 可以根据现有技术制备和使用。本发明通过给予肠癌动物酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂和治疗肠癌的抗癌药物，意外的发现其对肠癌的治疗有协同增效作用。本发明还包括，上述两种药物的使用方法，其中酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂和抗癌药物在联合治疗肠癌时可同时、先后给予。本友明的使用方法还包括，酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂联合抗癌药物预防和治疗肠道慢性疾病及癌变，可在肠癌手术后应用该组合药物，促进手术创面的愈合、预防手术创面的感染和抗炎、预防肠癌复发和扩散、提高肠癌患者机体免疫力。根据本发明的研究成果，本发明提供一种组合包装，所述组合包装中包括至少一种酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂和至少一种抗肠癌药物制剂。本发明的组合包装，其中所述酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂，是以有效剂量的酪酸梭菌和双歧杆菌作为主要药物活性成分，根据现有技术制成的适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂，口服液体制剂、或栓剂等临床所需剂型。如:420mg /粒的口服酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊，500mg /袋的口服酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌散(有效期内含酪酸梭菌活菌不低于1.0XlO7CFU / g，含双歧杆菌活菌粉不低于
1.0XlO6CFU / g).
本发明的组合包装，其中所述抗肠癌药物制剂选白环磷酰胺制剂和异环磷酰胺制齐U，其为根据现有技术制成的适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂、注射制剂或栓剂等临床所需剂型。如:0。05g /支，O。Ig /支，O。2g /支的环磷酰胺制剂和600mg /支:500mg /支，Ig /支的异环磷酰胺制剂。本发明的组合包装，其中可以包括一次使用剂量的以上两种制剂，或I天使用剂量的两种制剂，也可以包括一个疗程使用剂量的两种制剂，以使用方便快捷为目标。本发明组合包装的使用方法包括，给患者按照常规方法给予环磷酰胺制剂，在整个疗程的治疗过程中，按照常规方法持续给予患者酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂。如环磷酰胺的使用如下:成人常用量:单药静脉注射按体表面积每次500 IOOOmg / m2，力口生理盐水20 30ml，静脉注射，每周I次，连用2次，休息I 2周重复。联合用药500 600mg / m2。儿童常用量:静脉注射每次10 15mg / kg,加生理盐水20ml稀释后缓慢注射，每周I次，连用2次，休息I 2周重复。也可肌内注射。如酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊的使用如下:1、成人口服，一次3粒，一天2次，用凉开水送服。连用3— 7天；或连用14一21天，或遵医嘱。2、儿童口服，一次I粒，一天2次，或遵医嘱。
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本发明的研究采用酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与环磷酰胺联合治疗肠癌，通过试验证明:采用酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂联合环磷酰胺治疗效果明显优于单独使用酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂和单独使用环磷酰胺治疗。本发明优先采用酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与环磷酰胺联合治疗肠癌，取得了较好的效果。国内外文献尚未见酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与环磷酰胺合用治疗肠癌的报道，此方法有望成为一种治疗肠癌的新方法。
图1为酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂联合环磷酰胺对小鼠肠癌生长的抑制作用图，其中:1、生理盐水对照组2、酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂给药组3、环磷酰胺给药组4、酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂联合环磷酰胺给药组
具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。实施例1，组合包装其中包括一天用量的酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊，以及一次用量的注射用环磷酰胺。实施例2，
组合包装其中包括一周用量的酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊，以及一次用量的注射用环磷酰胺。实施例3，组合包装其中包括两周用量的酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊，以及一次用量的注射用环磷酰胺。实施例4，组合包装其中包括一个月用量的酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊，以及一次用量的注射用环磷酰胺。实施例5，组合包装其中包括三天用量的酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊，以及一次用量的注射用环磷酰胺。疗效观察实验例酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂联合环磷酰胺对小鼠肠癌生长的影响1、受试药品:酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂:含酪酸梭菌IXlO8CFU / g，双歧杆菌
IX IO10CFU / g;样品密闭包装置4°C冰箱保存。取Ig酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂溶于IOml无菌生理盐水的三角烧瓶中，内放玻璃珠数粒，摇10-20分钟混匀，每日用前现配。环磷酰胺:注射用环磷酰胺IOOmg /支。取200mg环磷酰胺溶于50ml生理盐水中，配成4mg / ml的环磷酰胺溶液，无菌分装8支，每日用I支。2、试验动物:Balb / c小鼠，SPF级，体重:18±2克，四周龄，雌性；由中国医学科学院实验动物中心繁育场提供，合格证:京动许字017。实验动物使用许可证号:syxk (京)2009-0016。3、试验方法:3.1瘤株及实体肿瘤移植:肠癌细胞(C26)从液氮内取出，37°C迅速解冻复苏后，接种于Balb / c小鼠的右侧腋窝皮下，2周后移植肿瘤生长达1.5—2.0cm直径左右，处死小鼠，在无菌条件下，剥离肿瘤按常规方法传代。3.2肿瘤接种:肿瘤生长良好的荷瘤鼠处死后剥离肿瘤，去除坏死组织，挑选生长良好的肿瘤组织，切割成2_直径大小的组织块，用玻璃匀浆器研磨肿瘤，过200目细胞筛制成癌细胞悬液，计数并配置成2X IO7的细胞原液,每只小鼠腋窝皮下接种0.2ml (4X IO6细胞)。3.3将试验小鼠随机分为4组，每组10只。(I)对照组:在接种后的第二天开始，于瘤组织内注射生理盐水0.2ml/只，连续注射7天。(2)酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂给药组:在接种后的第二天开始，于瘤组织内注射酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂溶液(其中酪酸梭菌IXlO7CFU / ml，双歧杆菌I X IO9CFU / ml)0.2ml / 只，连续注射 7 天；(3)环磷酰胺给药组:在接种后的第二天开始，于腹腔注射环磷酰胺溶液(4mg /ml)0.2ml /只，连续注射7天；(4)酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂联合环磷酰胺给药组:在接种后的第二天开始，于瘤组织内注射酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂(其中酪酸梭菌I X IO7CFU / ml,双歧杆菌I X IO9CFU / ml)0.2ml /只，腹腔注射环磷酰胺溶液(4mg / ml)0.2ml /只，连续注射7天。实验第14天，称量每组实验小鼠的肿瘤重量并按肿瘤重量计算抑瘤率。
权利要求
1.酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与抗癌药物组合在制备治疗肠癌药物中的应用。
2.按权利要求1所述的应用，其特征在于，其中酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂的主要药物成分为酪酸梭菌和双歧杆菌。
3.按权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗癌药物选白环磷酰胺。
4.按权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂选白:片剂、胶囊剂、散剂、液体制剂、栓剂、灌肠剂。
5.按权利要求 1所述的应用，其特征在于，所述酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂和抗癌药物在联合治疗肠癌时可同时、先后给予这两种药物。
6.按权利要求1所述的应用，其特征在于，患者按照常规方法给予环磷酰胺制剂，在整个疗程的治疗过程中，按照常规方法持续给予患者酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂。
7.按权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括预防肠道慢性疾病癌变药物中的应用，以及在制备肠癌手术后辅助治疗组合物中的应用，包括促进手术创面的愈合、预防手术创面的感染和抗炎、预防肠癌复发和扩散、提高肠癌患者机体免疫力。
8.一种组合包装，其特征在于，所述组合包装中包括至少一种酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂和至少一种抗肠癌药物制剂。
9.按权利要求8所述的组合包装，其特征在于，其中所述酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂，是以有效剂量的酪酸梭菌和双歧杆菌作为主要药物活性成分，根据现有技术制成的适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂，口服液体制剂、或栓剂等临床所需剂型。如:420mg /粒的口服酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌胶囊，500mg /袋的口服酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌散。
其中所述抗肠癌药物制剂选白环磷酰胺制剂和异环磷酰胺制剂，其为根据现有技术制成的适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂、注射制剂或栓剂等临床所需剂型。如:0.05g /支，0.1g /支，0.2g /支的环磷酰胺制剂和600mg /支:500mg /支，Ig /支的异环磷酰胺制剂。
10.按权利要求8所述的组合包装，其特征在于，其中可以包括一次使用剂量的两种制齐U，或I天使用剂量的两种制剂，也可以包括一个疗程使用剂量的两种制剂。
全文摘要
本发明提供了酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与抗癌药物组合在制备治疗肠癌药物中的应用，是在使用抗癌药物的基础上，联合酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂，达到治疗肠癌的目的；酪酸梭菌、双歧杆菌二联活菌制剂与抗癌药物组合具有更加有效的治疗肠癌的作用，延长肠癌患者寿命，提高肠癌患者的生活质量。
文档编号A61K35/74GK103202861SQ201310129539
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月15日 优先权日2013年4月15日
发明者何询, 于萍, 何社辉, 窦娟 申请人:山东科兴生物制品有限公司