专利名称：一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物制品领域，具体的说是提供一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护 剂。
背景技术：
枯草芽孢杆菌是专性需氧菌，夺氧能力很强，但在厌氧状态下却不能生长。在禽类 肠道中，虽然可以查到枯草芽孢杆菌，但为数很少，即或有些增殖，也会很快代谢。因此研制 开发枯草芽孢杆菌制品，通过外源方式补充枯草芽孢杆菌在体内肠道定植的数量，对于调 整肠道微生态平衡，提高免疫力，促进健康，具有重要意义。近年来，国内外枯草芽孢杆菌制品行业发展迅猛，成为全球发展最快的行业之一， 占有越来越重要的地位，产品种类繁多。然而，目前上市的许多枯草芽孢杆菌制品普遍存在 活菌含量低、活菌保藏期短等质量问题。尤其是液态制品。采用冷冻保藏的方法，虽然可以 显著延长液态活菌保藏期，但维持冷冻费用较高，运输不方便，对冷冻保藏中心的依赖性过 强。枯草芽孢杆菌活菌液体制剂采用枯草芽孢杆菌优良菌种经液体发酵培养，浓缩分离，与 保护剂介质混溶。液体制剂不仅活菌含量高、保藏期长，而且保藏和运输方便，机械化程度 高，便于工业化批量生产；既可直接口服，又可作为饲料添加剂，具有广阔的推广前景。因此研究枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂很有意义，在最大限度保持枯草芽孢杆 菌的存活率，使枯草芽孢杆菌活菌制剂易于长期保存并且活力不降低，更加适用于工业化 生产的需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂。本发明所提供的用于枯草芽孢杆菌活菌制剂的专用保护剂，由下述组分(W/V)组 成乳糖3-4. 5%、羧甲基纤维素钠0.5-1%、山梨酸钾0.5-1%、维生素E 0. 1-0. 5%、维生 素 C 0. 1-0. 5%、水质柠檬0. 1-0. 2%。上述枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂，优选含量(W/V)乳糖4. 5%、羧甲基纤维素 钠0.5%、山梨酸钾0.5%、维生素E 0. 1%、维生素C 0. 1%、水质柠檬0. 1%。上述枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂，其特征在于每Iml保护剂中含有 1. OXlO9-L OX 1014cfu。本发明的有益效果为含有本发明保护剂的枯草芽孢杆菌活菌制剂在常温下保存 12个月活菌数仍保持在较高的水平，并且在温度较高(37°C)的环境下，可以保持6个月有 效。而且本发明操作简便，适合大批量制备枯草芽孢杆菌活菌制剂，解决了用常规方法生产 的枯草芽孢杆菌制品常温保存困难的问题，具有很高的应用价值。
具体实施例方式下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1 枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备枯草芽孢杆菌菌种活化将菌种接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上。然后放进温箱中培养，在37°C，培养16h ；枯草芽孢杆菌的发酵培养将上述已活化培养的菌落洗脱，以无菌操作法加入到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，370C，200转/min，培养16h。枯草芽孢杆菌活菌制剂的制备将上述发酵的发酵液通过管道导入离心机，在低温 (40C )的条件下，用大容量离心机离心，6000rpm，离心15min。收集离心筒中泥状菌体，40°C 减压干燥，得枯草芽孢杆菌干菌粉10g，检验活菌数，为2. 2X1016cfu/g。保护剂配制称取乳糖45g，羧甲基纤维素钠5. Og,山梨酸钾5. 0g，维生素El. Og, 维生素Cl. 0g，水质柠檬l.Og，取适量牛肉膏蛋白胨液体培养基溶解后，混合均勻，定容至 1000ml。添加保护剂取上述保护剂溶液500ml，加入上述枯草芽孢杆菌干菌粉4. 55g，搅拌 均勻，并用保护剂溶液定容至1000ml。实施例2 枯草芽孢杆菌活菌制剂的稳定性检测将按照实施例1的方法制备的枯草芽孢杆菌活菌制剂分成2份，放置于室温及 37°C留样箱，室温放置的样品每3个月取样检测一次活菌数和活菌指数，37°C放置的样品 每个月取样检测一次活菌数。活菌数检测方法1.充分振摇液体样品，吸取0. 5ml液体样品于试管中，加入4. 5ml稀释液，充分振 摇，既成1 10供试液；2.稀释吸取0. 5ml供试液，加入4. 5ml稀释液到另一试管中，充分混勻，使成 1 100的供试液，重复上述操作，进行10倍系列稀释，直至所需的稀释度；3.滴样吸取所需测定的稀释度(一般是倒数3个稀释度)的菌液0. 2ml滴于无 菌平皿，倒入无菌温浴的牛肉膏蛋白胨培养基，混勻后静置凝固，共做6个平皿，每个稀释 度重复2次；4.培养待平皿凝固后倒放于培养箱中，37°C培养16小时；5.菌落计数培养后观察每个平皿菌落的生长情况并在平皿上点记菌落数，如有 2个或2个以上菌落重叠在一起，应全部计数，注意平皿菌落数应在20-300个之间，否则应 调整稀释液，重新测定，点计后，按公式计算活菌数，填写记录；6.计算公式活菌数(cfu/ml) = 2个平皿菌落数之和/2 X 5 X稀释度室温放置的制剂的活菌数检测结果如表1所示，结果表明，按照实施例1的方法制 备的活菌液体制剂，在室温12个月后活菌数仍在2X 109CfU/ml以上；37°C放置的活菌制剂的活菌数检测结果如表2所示，结果表明，应用本发明活菌 制品，37°C放置6个月后仍高于2 X 109Cfu/ml以上。表1本发明制备的活菌制剂室温保藏情况
权利要求
1.一种用于制备枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂，其特征在于由下述组分(w/ν)组 成乳糖3-4. 5%、羧甲基纤维素钠0. 5-1%、山梨酸钾0. 5-1%、维生素E 0. 1-0. 5%、维生 素 C 0. 1-0. 5%、水质柠檬0. 1-0. 2%。
2.根据权利要求1所述的保护剂，其特征在于其所述组分含量(W/V)优选为乳糖 4.5%、羧甲基纤维素钠0.5%、山梨酸钾0.5%、维生素E 0.1%、维生素C 0.1%、水质柠檬 0.1%。
3.根据权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂，其特征在于每Iml保 护剂中含有 1. OXlO9-L OXlO14Cfu0
全文摘要
本发明公开了一种枯草芽孢杆菌活菌制剂的保护剂，由下述组分(W/V)组成乳糖3-4.5％、羧甲基纤维素钠0.5-1％、山梨酸钾0.5-1％、维生素E 0.1-0.5％、维生素C 0.1-0.5％、水质柠檬0.1-0.2％。本发明的保护剂，解决了常规方法生产的枯草芽孢杆菌制剂常温保存困难的问题，具有方法简便、易操作，适合大批量制备枯草芽孢杆菌制剂，具有很高的应用价值。
文档编号A61K47/38GK102000343SQ200910070309
公开日2011年4月6日 申请日期2009年9月1日 优先权日2009年9月1日
发明者王小娥 申请人:天津瑞普生物技术股份有限公司