地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂的制作方法
【专利摘要】一种应用于微生物【技术领域】中的地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂，一种地衣芽孢杆菌合生元组合物，包括地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉、寡糖类益生元，寡糖类益生元是乳果糖、棉籽糖、水苏糖、低聚甘露糖、抗性糊精的一种，地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉与寡糖类益生元的质量比例为1：1.25-56，优选1:3-45；在耗氧和厌氧状态下，每种益生元对地衣芽孢杆菌都具有增殖作用，且每种益生元对地衣芽孢杆菌的增殖作用与种子培养基中的添加量有关，将该组合物制备成口服制剂，普通片剂。该发明在耗氧和厌氧条件下，乳果糖、水苏糖、棉籽糖、低聚甘露糖和抗性糊精等均可显著促进地衣芽孢杆菌CMCC63516的增殖，在抑菌试验中，上述益生元能够显著增强CMCC63516对金黄色葡萄球菌的抑制作用，在治疗腹泻等肠道疾病时起效更快，疗程更短。
【专利说明】地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物【技术领域】中的一种地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂。
【背景技术】
[0002]微生态制剂按照成分属性分为三类，益生菌、益生元和合生元制剂。其中合生元是新一代的微生态调节剂，其定义由Gibon在1995年首先提出，它是指益生菌与益生元联合使用的一种微生态制品。在合生元组合中，益生元不仅可以通过与肠道细菌群相互作用发挥自身的益生功效，还能够延长益生菌存活时间，选择性增加摄入宿主体内的益生菌数量，使益生菌的作用更显著持久。益生元与益生菌的组合不是简单的功能相加，其对于微生态系统和免疫应答的效果以及强化屏障功能的效果远远超过益生菌和益生元的协同或相加作用[2]，是未来微生态调节剂发展的主要方向。
[0003]多年来大量临床数据表明，合生元具有功效主要有:纠正肠道菌群失调，抑制过度的炎症反应；降低变应原活性，维持适度的免疫应答；提高肠道酶活性；调节人体糖脂代谢以及抗肿瘤等生物学活性。虽然目前已有很多关于合生元的研究，但大多集中在益生元与乳杆菌、双歧杆菌等肠道原籍菌组合上，其他益生菌如芽孢杆菌的研究较少。
[0004]乳果糖在肠道中被消化道菌群转化成低分子量有机酸，促进结肠蠕动。治疗便秘和肝性脑病的医用有效用量为每日6.7-10g。水苏糖能够迅速改善人体消化道内环境，抑制内源致癌物产生和吸收，推荐剂量为每日0.5-3.0g。棉籽糖兼有膳食纤维同等功效，改善人体的消化功能，促进人体对钙的吸收，增强人体免疫力，同时有显著抗衰老效果，还可用于糖尿病人饮食中。抗性糊 精也是具有低分子水溶性膳食纤维功效的寡糖，具有降低血糖，调节血脂的功效，日服用量为每日5-15g。低聚甘露糖能够平衡肠道菌群，抑制胆固醇合成，促进微量元素及维生素B吸收，通过直接吸附或结合霉菌毒素，降低其致病几率，摄入量每日小于1.5g。
[0005]在整肠生临床应用二十余年中，冯婉玉等人报道临床中大剂量CMCC63516比较常规剂量更有利于对急性腹泻的治疗，而且也有患者为了达到快速止泻目的，自主加大服用剂量。专利CN103099821A中提出高剂量CMCC63516给药能够缩短治疗周期，该发明虽然能够在提高用药剂量的基础上提高病人顺从性，但高剂量意味着生产规模的扩大，人工费用的增长，高剂量制剂价格相应提高，无疑增加了病人的经济负担。专利CN101537020A提出，低聚木糖等益生元对地衣芽孢杆菌CMCC63516有显著的增殖作用，其中地衣芽孢杆菌活菌粉与寡糖类益生元重量比为1:1-76。但是因为地衣芽孢杆菌为兼性厌氧菌，该结果是在氧气充分的条件下获取的，而肠道中为厌氧条件，由于不同条件下细菌的代谢途径不同，所以专利中公开的结论并不一定适用于地衣芽孢杆菌在肠道环境里。而且该公开发明仅测定了培养24hr的活菌数，大量试验证明，益生元的加入会使菌体生长周期发生改变，24hr已有部分菌体自溶，以24hr作为单一取样点并不能代表菌体最高活菌数。因此，研制开发一种适合在厌氧条件下，即肠道环境下的合生元一直是亟待解决的课题。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂，更有效的治疗和预防肠道菌群失调引起的消化道疾病合生元组合物和制剂，该组合物能够在耗氧和厌氧条件下显著增加益生菌的增殖、增强抑制治病菌的能力。
[0007]本发明的目的是这样实现的:一种地衣芽孢杆菌合生元组合物，包括地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉、寡糖类益生元，寡糖类益生元是乳果糖、棉籽糖、水苏糖、低聚甘露糖、抗性糊精的一种，地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉与寡糖类益生元的质量比例为1:
1.25-56，优选1:3-45 ;在耗氧和厌氧状态下，每种益生元对地衣芽孢杆菌都具有增殖作用，且每种益生元对地衣芽孢杆菌的增殖作用与种子培养基中的添加量有关，种子培养基的成分为:牛肉粉 0.5g/100ml，蛋白胨 1.0g/100ml，NaCl0.5g/100ml，调 pH7.0-7.2 ;益生元添加量占种子培养基的重量百分比是:乳果糖0.01% -0.05% ;水苏糖0.10% -0.50% ;棉籽糖0.05% -0.10% ;低聚甘露糖0.01% -0.05% ;抗性糊精0.10% -0.50%，其中添加剂量为0.05%的乳果糖对地衣芽孢杆菌的增殖效果最优；所述地衣芽孢杆菌合生元组合物制剂每1000份各组分含量为:地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉12.5-50份、益生元35-700份、稀释剂240-600份、粘合剂20-200份、崩解剂15-100份、润滑剂1_25份、包衣剂10-120份、矫味剂1-10份；将该组合物制备成口服制剂，按照常规工艺将地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉、寡糖类益生元和辅料制备成普通片剂或肠溶片剂，普通胶囊或肠溶胶囊剂，普通颗粒或肠溶颗粒剂；地衣芽孢杆菌合生元组合物的辅料中，稀释剂是指乳糖、糊精、鹿糖粉、甘露醇、葡萄糖、山梨醇、淀粉、微晶纤维素、磷酸二氢钙、碳酸钙、碳酸镁中一种或几种；黏合剂是指淀粉浆、糊精、预胶化淀粉、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素钠、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠中的一种或几种；崩解剂是海藻酸、离子交换树脂、羟甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基纤维素钙、低取代羟丙基纤维素、部分α化淀粉中的一种或几种；润滑剂是指硬脂酸镁、硬脂酸钙、蜡类、微粉硅胶、聚乙二醇类、十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂醇醚中的一种或几种；助流剂是指滑石粉、微粉硅胶、小麦淀粉中的一种或几种；包衣剂是指醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、羧甲基乙基纤维素、二氧化钛、II号丙烯酸树脂、III号丙烯酸树脂、聚维酮、泊洛沙姆、邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、欧巴代系列中的一种或几种；矫味剂包括甜味剂和芳香剂，甜味剂是指蔗糖、橙油、山梨醇、甘露醇、阿司帕坦、糖精钠、天冬甜精、蛋白糖、甜菊糖甙、甜蜜素中的一种或几种，芳香剂是指柠檬、薄荷油、薄荷水、桂皮水、苹果香精、香蕉香精、菠萝香精、木瓜香精中的一种或几种。
[0008]本发明的要点在于地衣芽孢杆菌合生元组合物。其原理是该比例下，寡糖类益生元能够在耗氧和厌氧条件下显著促进地衣芽孢杆菌增殖，增强其抑制致病菌能力，迅速调节肠道菌群平衡。
[0009] 地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂与现有技术相比，具有在耗氧和厌氧条件下，乳果糖、水苏糖、棉籽糖、低聚甘露糖和抗性糊精等均可显著促进地衣芽孢杆菌CMCC63516的增殖，而且，在抑菌试验中，上述益生元能够显著增强CMCC63516对金黄色葡萄球菌的抑制作用，在治疗腹泻等肠道疾病时起效更快，疗程更短，还能够避免CMCC63516大量服用后便秘的副作用，对益生菌发挥生理作用有积极的意义等优点，将广泛的应用于微生物【技术领域】中。[0010]下面结合实施例对本发明进行详细说明。
【具体实施方式】
[0011]以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0012]实施例一
[0013]证明有效添加剂量的乳果糖、水苏糖、棉籽糖、低聚甘露糖及抗性糊精在耗氧条件下对地衣芽孢杆菌CMCC63516增殖有显著促进作用，延长地衣芽孢杆菌对数生长期，缩短对数生长期地衣芽孢杆菌细菌倍增时间，降低菌体自溶率。其中部分低聚糖对地衣芽孢杆菌的增殖效果优于大豆低聚糖。
[0014]菌种:地衣芽孢杆菌CMCC63516(中国医学细菌保藏中心的菌株编号)
[0015]种子培养基(g/100ml):牛肉粉0.5，蛋白胨 1.0，NaCl0.5，ρΗ7.0-7.2。
[0016]基础培养基:同种子培养基。
[0017]寡聚糖培养基(g/100ml):牛肉粉0.5，蛋白胨1.0，恥(:10.5，？!17.0-7.2，加入不同浓度寡聚糖(0.01,0.05,0.10,0.50,1.00,5.00)。
[0018]方法:参照专利CN101537020A。
[0019]不同浓度寡聚 糖培养基制备:按照不同浓度比例分别称取一定量的乳果糖、水苏糖、棉籽糖、低聚甘露糖、抗性糊精和大豆低聚糖干粉置于250ml锥形瓶中，经121°C灭菌15min,冷却后，分别于每个250ml锥形瓶中加入50ml无菌基础培养基,混匀既得寡聚糖培养基。
[0020]种子制备:无菌环境下接种一环斜面种子于种子培养基中，37°C，ISOrpm培养15hr0
[0021]不同浓度寡聚糖对地衣芽孢杆菌的生长影响:采用同样的接种量分别接种于基础培养基和对照培养基，置于37°C，180rpm振荡培养，取17hr和24hr菌液利用平板菌落计数方法测定菌浓，结果见表1。
[0022]表1耗氧条件下益生元对CMCC63516促增殖能力试验结果(活菌数单位:IO8CFU/ml)
[0023]
【权利要求】
1.一种地衣芽孢杆菌合生元组合物，包括地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉、寡糖类益生元，其特征在于:寡糖类益生元是乳果糖、棉籽糖、水苏糖、低聚甘露糖、抗性糊精的一种，地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉与寡糖类益生元的质量比例为1:1.25-56，优选1:3_45。
2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌合生元组合物，其特征在于:在耗氧和厌氧状态下，每种益生元对地衣芽孢杆菌都具有增殖作用，且每种益生元对地衣芽孢杆菌的增殖作用与种子培养基中的添加量有关，种子培养基的成分为:牛肉粉0.5 g/100ml，蛋白胨1.0 g/100ml, NaCl 0.5 g/100ml，调pH 7.0-7.2 ;益生元添加量占种子培养基的重量百分比是:乳果糖0.01%-0.05% ;水苏糖0.10%-0.50% ;棉籽糖0.05%_0.10% ;低聚甘露糖0.01%-0.05% ;抗性糊精0.10%-0.50%，其中添加剂量为0.05%的乳果糖对地衣芽孢杆菌的增殖效果最优。
3.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌合生元组合物的制剂，其特征在于:所述地衣芽孢杆菌合生元组合物制剂每1000份各组分含量为:地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉12.5-50份、益生元35-700份、稀释剂240-600份、粘合剂20-200份、崩解剂15-100份、润滑剂1-25份、包衣剂10-120份、矫味剂1-10份。
4.根据权利要求3所述的地衣芽孢杆菌合生元组合物的制剂，其特征在于:将该组合物制备成口服制剂，按照常规工艺将地衣芽孢杆菌CMCC63516活菌粉、寡糖类益生元和辅料制备成普通片剂或肠溶片剂，普通胶囊或肠溶胶囊剂，普通颗粒或肠溶颗粒剂。
5.根据权利要求3所述的地衣芽孢杆菌合生元组合物的制剂，其特征在于:地衣芽孢杆菌合生元组合物的辅料中，稀释剂是指乳糖、糊精、蔗糖粉、甘露醇、葡萄糖、山梨醇、淀粉、微晶纤维素、磷酸二氢钙、碳酸钙、碳酸镁中一种或几种；黏合剂是指淀粉浆、糊精、预胶化淀粉、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素钠、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠中的一种或几种；崩解剂是海藻酸、离子交换树脂、羟甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基纤维素钙、低取代羟丙基纤维素、部分α化淀粉中的一种或几种；润滑剂是指硬脂酸镁、硬脂酸钙、蜡类、微粉硅胶、聚乙二醇类、十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂醇醚中的一种或几种；助流剂是指滑石粉、微粉硅胶、小麦淀粉中的一种或几种；包衣剂是指醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、羧甲基乙基纤维素、二氧化钛、II号丙烯酸树脂、III号丙烯酸树脂、聚维酮、泊洛沙姆、邻苯二甲酸乙酸纤维素、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、欧巴代系列中的一种或几种；矫味剂包括甜味剂和芳香剂，甜味剂是指蔗糖、橙油、山梨醇、甘露醇、阿司帕坦、糖精钠、天冬甜精、蛋白糖、甜菊糖甙、甜蜜素中的一种或几种，芳香剂是指柠檬、薄荷油、薄荷水、桂皮水、苹果香精、香蕉香精、菠萝香精、木瓜香精中的一种或几种。
【文档编号】A61P1/12GK104013649SQ201410236250
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年5月29日 优先权日:2014年5月29日
【发明者】雷健, 吴楠, 彭勃, 李雪龙, 刘心 申请人:东北制药集团沈阳第一制药有限公司