专利名称：降血压剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有肽作为有效成分的降血压剂。
背景技术：
在全世界，高血压和起因于高血压的疾病已成为第I位死因，可以说在全世界，在相当于约10亿人的成人中，每4个人中就有I个人罹患这些疾病。特别是糖尿病患者由高血压引起的心血管系统并发症的危险性比不患糖尿病的患者高2倍至4倍，因而在国际糖尿病联盟中提倡严格控制血压的必要性。但是实际情况是，尽管进行各种治疗，仍然有约70%的高血压患者、还有近90%的并发糖尿病和高血压的患者不能将血压降到目标值。虽然认识到高血压是脑中风和心肌梗塞等心血管疾病的主要危险因素，但是不能充分控制血压的情况(特别是隐性高血压)是更加危险的这一情况却并不广为人知。事实上有报告，约有9成发生脑梗塞的高血压患者在发病前正在进行血压治疗，这正表明因为降压治疗不充分而引起了脑中风。另外，根据临床试验的结果，也明确了即使将收缩期血压仅仅只降低IOmmHg,就可以将脑中风的发病减少约40%，由此也可知血压“高lOmmHg”具有非常大的危险性。
在现在的高血压药物治疗中，根据其作用机理，大致使用着下述6种药物:(A)利尿药、(B)钙拮抗药、(C)血管紧张素受体拮抗药、(D)血管紧张素转换酶抑制药、(E) β 阻滞剂、(F) α 阻滞剂。另外，在最近，具有降低血压作用的降压肽受到关注。作为降压肽，具体而言，除了作为机体所产生的肽的利尿钠肽(ANP、BNP, CNP)(参照非专利文献I 3等)和肾上腺髓质素(参照非专利文献4)之外，还可以列举白蛋白的酶水解物Arg-Pro-Leu-X-Pro-Trp (X是His、Lys或Arg)(序列号7)(参照专利文献I)和大豆蛋白质的酶水解物(参照非专利文献5)。高血压的发病认为与生活习惯密切相关，在饮食生活正在被重新评价的现在，特别是专利文献I和非专利文献5所记载的来自白蛋白和大豆蛋白质的肽，不仅安全，而且在摄入白蛋白或大豆后，在体内由消化而生成肽，因此认为其利用价值高。非专利文献 I:F.Yoshihara, et al., Plasma atrial natriuretic peptideconcentration in versely correlates with left atrial collagen volumefraction in patients with atrial fibrillation.Plasma ANP as a possiblebiochemical marker to predict the outcome of the maze procedure.J Am CollCardiol, 39，288-294，2002非专利文献 2:Τ.Horio, et al.Gene expression, secretion, and autocrineaction of C—type natriuretic peptide in cultured adult rat cardiac fibroblasts.Endocrinology, 144, 2279-2284，2003非专利文献 3:Y.Takami, et al.Diagnostic and prognostic value of plasmabrain natriuretic peptide in non-dialysis-dependent chronic renal failure.Am JKidney Dis, 44，419-429，2004非专利文献4:F.Yoshihara, et al.Possible involvement of oxidative stressin hypoxia-1nduced adrenomedullin secretion in cultured rat cardiomyocytes.EurJ Pharmacol, 436, 1-6, 2002非专利文献5:松井利郎，((7S V 口 I 'J Oh O血压低下 7°千K SVY ^高度生成i O生理機能評価》，大豆t h白質研究Vol.6 (2003)，73-77专利文献1:日本特开2002·-80496号公报
发明内容
本发明的目的在于，提供一种含有低分子量的肽、特别是来自珠蛋白分解物的肽作为有效成分的降血压剂。另外，鉴于糖尿病患者起因于高血压的心血管系统并发症的危险性比未患糖尿病的患者高2倍至4倍的实际情况，本发明的目的还在于提供一种除了降血压作用以外还具有抗糖尿病作用、可以特别适合地用于改善糖尿病患者或处于糖尿病前期阶段的患者的高血压的降血压剂。为了达到上述目的，本发明的发明人进行了深入研究，发现已知具有抑制血糖上升作用或胰岛素分泌亢进作用、对糖尿病的治疗有效的珠蛋白分解物(参照W02006/052031A1)、以及其中所包含的由Val-Val-Tyr-Pro (序列号I)、Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列号 2)、Trp-Gly-Lys_Val (序列号 3)、Trp_Gly_Lys (序列号 4)、Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列号5)和Phe-Glu-Ser (序列号6)的氨基酸序列构成的各肽，对血压高的患者发挥降血压的效果，确认作为解决上述课题的生理活性肽是有效的。本发明的发明人还确认，在上述肽中，由Val-Val-Tyr-PiO (序列号I)的氨基酸序列构成的肽和包含该肽的珠蛋白分解物，如在W02006/052031A1中的记载，具有抑制血糖上升的作用或胰岛素分泌亢进作用，因此，是能够适合用于对糖尿病患者或处于糖尿病前期阶段的患者改善高血压的生理活性肽。本发明就是基于这样的见解而完成的发明，是具有下述形态的发明。( T )降血压剂(1-1) 一种降血压剂，含有选自来自珠蛋白分解物的由下述(I) (6)所示的氨基酸序列构成的肽中的至少I种肽、或者含有这些肽中的至少I种肽的珠蛋白分解物作为有效成分:(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列号 I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列号 2)
(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列号 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列号 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列号 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列号 6)。(1-2)如(1-1)所记载的降血压剂，含有选自由(I)Val-Val-Tyr-PiO的氨基酸序列(序列号I)构成的肽或者含有该肽的珠蛋白分解物作为有效成分。(1-3)如(1-1)或(1-2)所记载的降血压剂，其特征在于，对轻症高血压患者口服给药。(1-4)如(1-2)所记载的降血压剂，其特征在于，对罹患起因于高血糖的疾病或处于其前期状态的高血压病患者给药。(1-5)如(1-1)至(1-4)中任一项所记载的降血压剂，其特征在于，通过口服给药途径，对成人每日以总量Img 500mg的比例每日投与由(I) (6)所示的氨基酸序列构成的肽，或者以0.1g 5g的比例每日投与珠蛋白分解物。(II)改善高血压状态或者预防或治疗起因于高血压状态的疾病的方法(I1-1) 一种改善高血压状态或者预防或治疗起因于高血压状态的疾病的方法，包括对高血压患者投与降血压剂的步骤，该降血压剂含有选自来自珠蛋白分解物的由下述
(I) (6)所示的氨基酸序列构成的肽中的至少I种肽、或者含有这些肽中的至少I种肽的珠蛋白分解物作为有效成分:`
(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列号 I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列号 2)(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列号 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列号 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列号 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列号 6)。(I1-2)—种改善高血压状态或者预防或治疗起因于高血压状态的疾病的方法，包括对患有起因于高血糖状态的疾病的高血压患者投与降血压剂的步骤，该降血压剂含有由
(I)Val-Val-Tyr-Pro的氨基酸序列(序列号I)构成的肽或者含有该肽的珠蛋白分解物作为有效成分。(I1-3)如(I1-1)或(I1-2)所记载的方法，其特征在于，对轻症高血压患者口服给药。(I1-4)如(I1-2)所记载的方法，其特征在于，对罹患起因于高血糖的疾病或处于其前期状态的高血压症患者给药。(I1-5)如(I1-1)至(I1-4)中任一项所记载的方法，其特征在于，通过口服给药途径，对成人每日以总量Img 500mg的比例每日投与由(I) (6)所示的氨基酸序列构成的肽，或者以0.1g 5g的比例每日投与珠蛋白分解物。(III)肽和珠蛋白分解物的用途(II1-1)选自来自珠蛋白分解物的由下述(I) (6)所示的氨基酸序列构成的肽中的至少I种肽、或者含有这些肽中的至少I种肽的珠蛋白分解物在降血压剂的调制中的使用:
(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列号 I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列号 2)(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列号 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列号 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列号 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列号 6)。(II1-2)含有由(I)Val-Val-Tyr-PiO的氨基酸序列(序列号I)构成的肽或者含有该肽的珠蛋白分解物 在针对患有起因于高血糖状态的疾病的高血压患者的降血压剂的调制中的使用。(II1-3)在改善高血压状态的方法或者在预防或治疗起因于高血压状态的疾病的方法中使用的、选自来自珠蛋白分解物的由下述(I) (6 )所示的氨基酸序列构成的肽中的至少I种肽、或者含有这些肽中的至少I种肽的珠蛋白分解物:(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列号 I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列号 2)(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列号 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列号 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列号 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列号 6)。(II1-4)在改善患有起因于高血糖状态的疾病的高血压患者的高血压状态的方法或者在预防或治疗该患者的起因于高血压状态的疾病的方法中使用的、由(I)Val-Val-Tyr-Pro氨基酸序列(序列号I)构成的肽、或者含有该肽的珠蛋白分解物。发明的效果如果根据本发明，就可以提供能够使血压下降、改善高血压状态的降血压剂。特别是含有由(I) Val-Val-Tyr-PiO的氨基酸序列(序列号I)构成的肽或者含有该肽的珠蛋白分解物作为有效成分的本发明的降血压剂，不仅具有降血压作用，而且还具有抑制血糖上升的作用或胰岛素分泌亢进作用，因此能够对糖尿病或处于其前期状态的高血压患者更有效地使用。
具体实施例方式本发明的降血压剂的特征在于,含有选自由(I) Val-Val-Tyr-Pro的氨基酸序列(序列号I)构成的肽(以下简称为“肽(VVYP)”)、由(2)Trp-Gly-LyS-Val-ASn的氨基酸序列(序列号2)构成的肽(以下简称为“肽(WGKVN)”)、由(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列号3)构成的肽(以下简称为“肽(WGKV)”)、由(4) Trp-Gly-Lys (序列号4)构成的肽(以下简称为“肽(WGK)”)、由(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列号5)构成的肽(以下简称为“肽(AAWGK)”)和由(6) Phe-Glu-Ser (序列号6)构成的肽(以下简称为“肽(FES)”)中的至少I种肽、或者含有这些肽中的至少I种肽的珠蛋白分解物作为有效成分。这些肽都可以使用公知的肽合成法通过化学合成调制。例如，作为肽合成法，可以例示叠氮法、酰基氯法、酸酐法、混合酸酐法、DCC法、活性酯法、碳酰咪唑(carboimidazole)法、氧化还原法、DCC-加成(HOMB、HOBt> HOSu)法(《The Peptide))第 I卷(1966 年)，Schreder&Luhke 著，Academic Press, New York, USA ;或((^ 7。千 F合成》泉谷等著，丸善株式会社(1975年)等)等肽合成法。这些肽合成法能够采用固相合成法或液相合成法的任意一种方法进行。在上述肽合成法中，具有侧链官能团的氨基酸，例如酪氨酸和苏氨酸，优选将该侧链官能团保护起来。作为保护基，可以使用公知的保护基，例如可以使用苄氧羰基(Cbz-)、叔丁氧基羰基(Boc-)、苄基(Bz-)等。在本发明的肽合成工序中，该保护基可以由公知的方法进行脱保护。另外，由于这些肽均被包含在血红蛋白和肌红蛋白等珠蛋白的水解物(以下称为“珠蛋白分解物”)中，所以也能够从该珠蛋白分解物中分离精制而获得。另外，也可以将珠蛋白以外的例如鱼肉蛋白、鱼粉、玉米蛋白质(zein)等的水解物作为原料分离精制。另外，当该珠蛋白是动物性蛋白质时，其供给源没有特别限定，可以广泛地使用牛、猪、羊、人和马等的血液。另外，也可以将包含大量畜肉或鱼肉等的肌红蛋白的肉类作为其供给源使用。关于珠蛋白水解的操作，可以按照在国际公开号W089/06970公报中记载的方法进行。水解通常使用酸性蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶中的I种或2种以上的水解酶进行。具体而言，在水解珠蛋白时，可以例示下述方法:首先在水中加入含有珠蛋白的物质，分散成5 30重量％ (作为固态成分)，用酸或碱调整至最适合蛋白酶的pH，一次性或逐次添加蛋白酶，在20 70°C的温度下使该酶反应3 48小时。从这样得到的珠蛋白分解物中分离生成本发明的肽的方法可以采用蛋白质或肽相关的公知的精制方法。例如，使用盐析法、透析法、离子交换树脂法、超滤法、反相色谱法等，另外，根据需要，通过适当组合这些方法，能够得到包含各肽[肽(WYP)、肽(WGKVN)、肽(WGKV) Ji(WGK)Ji(AAWGK)或肽(FES)]的成分，再从该成分中分离得到上述各肽。在上述精制方法中，反相色谱法优选酸性下的反相色谱法、或者组合该酸性下的反相色谱法和中性下的反相色谱法。成分中的蛋白量能够采用公知的蛋白定量法，例如茚三酮法等测定。另外，筛选出的成分中所含的肽的氨基酸序列可以采用公知的方法(氨基酸分析法)鉴定，由此，能够确认本发明作为对象的肽(VVYP )、肽(WGKVN)、肽(WGKV )、肽(WGK )、肽(AAWGK )或肽(FES )的存在。另外，在本发明的降血压剂中，可以采用由上述方法分离精制后的形态分别配合上述各肽，但只要具有降血压作用，则也可以采用包含各肽的粗精制物的形态配合。作为这样的粗精制物，可以列举包含上述各肽的珠蛋白分解物或其成分。本发明的降血压剂可以是由上述各肽或包含该肽的上述粗精制物(珠蛋白分解物或其成分)组成的降血压剂，但通常在上述有效成分以外，与药学上可接受的载体或添加剂一起调制。在与这样的药学上可接受的载体或添加剂组合调制降血压剂时，其中所配合的各肽的量只要是具有降血压作用的有效量即可，没有特别限制。此外，肽(VVYP)或含有该肽的珠蛋白分解物除降血压作用以外，还具有抑制血糖上升的作用或胰岛素分泌亢进作用。因此，当本发明的降血压剂是以肽(WYP)或含有该肽的珠蛋白分解物作为有效成分而制成的降血压剂时，所配合的该肽的量优选为具有降血压作用、并且发挥抑制血糖上升的作用或胰岛素分泌亢进作用的有效量。在这里，在本发明的降血 压剂中配合的载体，根据制剂的剂型，可以从通常所使用的赋形剂、稀释剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、崩解抑制剂、吸收促进剂、润滑剂、助溶剂、缓冲齐U、乳化剂和悬浊剂等中适当选择。另外，根据制剂的剂型，添加剂可以从通常所使用的稳定剂、保存剂、缓冲剂、等渗剂、螯合剂、pH调整剂、表面活性剂、着色剂、香料、风味剂和甜味剂等中适当选择。另外，这样的降血压剂的单位剂型可以根据给药途径进行各种适当选择，这些剂型大致分类为口服剂、经肺给药齐 、经鼻齐 、舌下剂、非口服剂(注射剂、点滴齐 )等。该降血压剂可以按照通常方法调和成为片剂、丸剂、散剂、粉剂、颗粒剂和胶囊剂等固体剂型；或溶液、悬浊剂、乳剂、糖浆剂和酏剂等液体剂型。另外，也可以作为在使用时通过添加适当的载体而能够成为液状的干燥品而调制。这些都可以按照通常方法调制。本发明的降血压剂中所配合的各肽的比例以总量计，可以列举通常0.001 80重量％左右,优选0.1 50重量％左右，更优选约0.1 10重量％左右。这样所得到的降血压剂的给药量，根据其目的(发挥降血压作用、或者发挥抑制血糖上升的作用或胰岛素分泌亢进作用并且发挥降血压作用)、该降血压剂的给药方法、剂型、投与患者的年龄和体重或症状(疾病的严重程度)等适当选择。具体而言，作为本发明的肽的给药量(组合2种以上的肽给药时为总量)，可以列举成人每日约I 500mg左右、优选约2 IOOmg左右的范围。另外，作为本发明的珠蛋白分解物的给药量，可以列举成人每日
0.1 5g左右、优选约0.5 3g左右的范围。另外，该给药不一定I日I次，也可以分成I日2 4次给药。上述各种形态的制剂可以通过与其形态相适应的适当给药途径来给药，例如注射剂形态可以通过静脉内、肌肉内、皮下、皮内、腹腔内给药等，固体制剂形态的医药制剂可以通过口服给药等。优选口服给药的形态。如在后述实验例中所示，本发明的降血压剂对处于高血压状态的患者发挥降血压作用，改善高血压状态。因此，本发明的降血压剂作为起因于高血压状态的疾病的预防或治疗剂是有效的。另外，在表I中表示由日本高血压学会和WH0/ISH规定的高血压分类。[表1 ]
权利要求
1.一种降血压剂，其特征在于 以由序列号6的Phe-GlU-Ser所示的氨基酸序列组成的肽、或者含有该肽的珠蛋白分解物作为有效成分。
2.如权利要求I所述的降血压剂，其特征在于 对轻症高血压患者口服给药。
3.如权利要求I或2所述的降血压剂，其特征在于 通过口服给药途径，对成人每日以Img 500mg的比例每日投与由序列号6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列组成的肽，或者以O. Ig 5g的比例每日投与含有该肽的珠蛋白分解物。
4.由序列号6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列组成的肽、或者含该肽的珠蛋白分解物在降血压剂的制造中的使用。
5.由序列号6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列组成的肽、或者含该肽的珠蛋白分解物。
6.在改善高血压状态的方法或者在起因于高血压状态的疾病的预防或治疗方法中使用的权利要求5所述的肽、或者含该肽的珠蛋白分解物。
7.如权利要求4所述的使用，其特征在于 所述降血压剂对轻症高血压患者口服给药。
8.如权利要求4或7所述的使用，其特征在于 所述降血压剂通过口服给药途径，对成人每日以Img 500mg的比例每日投与由序列号6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列组成的肽，或者以O. Ig 5g的比例每日投与含有该肽的珠蛋白分解物。
全文摘要
本发明提供降血压剂。本发明的降血压剂以由序列号6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列组成的肽、或者含有该肽的珠蛋白分解物作为有效成分。
文档编号A61P9/12GK103251928SQ201310138240
公开日2013年8月21日 申请日期2008年8月7日 优先权日2007年8月7日
发明者香川恭一, 福滨千津子, 藤野博昭, 东立里纯宁 申请人:爱沐健制药株式会社