一种猴头菌菌丝体提取物在制备抗胃癌药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种猴头菌菌丝体提取物在制备抗胃癌药物中的应用。该提取物是将猴头菌菌丝体经两次常温闪式提取后再减压浓缩，最后真空冷冻干燥而制备出来的。该提取物具有抗胃癌的作用，可用于制备抗胃癌药物。
【专利说明】-种猴头菌菌丝体提取物在制备抗胃癌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药【技术领域】，具体涉及猴头菌菌丝体提取物在制备抗胃癌药物 中的应用。
【背景技术】
[0002] 胃肠道癌如肝癌、胃癌、结、直肠癌是最常见的癌症之一，据美国癌症学会估计约 占所有癌症的25%。胃癌在世界上发病率在癌症中位于第四位，中国有很高的发生率和死亡 率（50%的死亡病例发生在中国），胃肠道癌的治疗包括手术、化学药物治疗、放射治疗与免 疫疗法。化学治疗是最常用的方法虽然无法彻底治疗。过去的几十年里，分子生物学的发 展在胃癌的治疗上取得了一定的进展，但药物耐受和毒性依然限制了治疗方法的进步。因 此，急需寻找和发展高效低毒新抗胃癌的新药。
[0003] 药用真菌是指能治疗疾病，具有药用价值的一类真菌，即在菌丝体、子实体、菌核 或抱子中能产生诸如氨基酸、蛋白质、维生素、多糖及糖蛋白、式类、生物碱、留醇类、意酿 类、黄丽类等多类物质，对人体有保健作用，对疾病有预防抑制或治疗作用的真菌。真菌作 为药用在我国已有2000多年的历史，早在《神农本草经》中就记载了巧冬、猪冬等真菌药 物，《本草纲目》中也收载了 20多种生物药用菌，目前我国传统作为药用及试验证实具有药 效的真菌已超过400种，主要集中在担菌亚口和子囊菌亚口。然而日常广泛应用于临床的 却仅有20余种，《中国药典》2010年版明确收录了 7种，该说明对生物药用菌的研究还很不 完善，开发空间较大。现有的研究主要集中于灵芝、虫草等少数几个品种，并且主要针对真 菌多糖作为剂型的研究及开发应用。
[0004] 随着生物科学和技术的发展，真菌、粘菌、地衣等已能从植物界中分离出来，单独 成立菌物界。除目前久负盛名的灵芝、巧冬、虫草、槐耳种类外，该界入选中药的品种还较 少，但其中高等真菌有数千种，今后无疑将会出现更多此类菌物药，潜力巨大，将会大大丰 富中药宝库。此外，W药用真菌为主体的菌物药，除传统应用子实体外，现代已发展到采用 液体(深层）发酵(应用菌球与发酵液)、固体发酵(应用菌质）等生产工艺。固体发酵产生的 普通菌质其主要药用部位仍只是它所含的菌丝体及其次生物质，但值得注意的是药用菌子 实体除自身可入药外，还可用W进行中药生物工程研究，研制成新药。而发酵工程，尤其是 我国特有的固体发酵工程，它存在的时间已有2000多年历史，通过长时间的固体发酵，产 生了生物代谢产物包括生物酶类物质，其生成的药用菌质比液体发酵药效好。但固体发酵 存在缺陷，容易杂菌污染，现固体发酵技术研究是国内研究热点，主要研究的方向是无菌培 养、二次培养、杂菌抑制、中药材作为营养基实施双向固体发酵技术，突破固体发酵技术的 瓶颈，实现生物药用菌的大规模产业化。
[0005] 猴头菌是一种猴头菌科磨茹(真菌)，在中药用于治疗胃肠道疾病已经超过2000年 的历史了，一系列小分子化合物如erinacines，被认为具有神经再生，并且可W透过血脑屏 障修复受损神经组织，猴头菌还有抗溃瘍，抗炎，抗微生物，免疫调节，提高肝功能，抗衰老， 降低血糖和血脂，提高抗缺氧能力，增加也脏输出、和改善备注循环等作用，包含猴头菌的 医用制剂在中国广泛使用。
[0006] 猴头菌菌丝体中的活性物质最重要的是多糖及糖蛋白，目前国内外对猴头多糖的 研究表明，猴头菌多糖具有多种生物活性和药理作用，能增强巨瞻细胞的吞瞻功能，促进溶 血素的形成，抗白细胞下降，降血糖、抗凝血、抗血栓、抗突变和抗衰老等。因此，猴头菌多糖 备受人们关注，成为近年来分子生物学、医药、食品科学等领域研究和开发应用的热点。《湖 南省中药材标准》2009年版，122-123页记载了猴头菌培养物，本发明所述的猴头菌菌丝体 是该标准记载的猴头菌培养物。
[0007] 当前，从高等真菌及其培养物中进行筛选和发现活性成分，应用于抗肿瘤、抗病 毒、和治疗糖尿病等，不仅成为国家重点研究新药的发展方向，也是当今世界各国开发生物 医药的热点。但是，目前并未见到猴头菌菌丝体的提取物应用于抗胃癌的报道。
【发明内容】
[0008] 本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种猴头菌菌丝体提取物，该猴头菌菌丝 体提取物能杀死胃癌细胞和抑制胃癌移植瘤生长，因此可应用于制备抗胃癌药物。
[0009] 本发明所述的猴头菌菌丝体提取物的制备方法包括如下步骤：
[0010] (1)取猴头菌菌丝体，进行第一次水常温闪式提取，提取15?25分钟，然后进行第 二次水常温闪式提取，提取10?20分钟，第一次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌 丝体重量的4?6倍，优选为5倍；第二次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重 量的2?4倍，优选为3倍；
[0011] (2)将提取液离也后得到的上清液在55?6(TC条件下减压浓缩至有沉淀析出；将 浓缩液在-60?-55C条件下真空冷冻干燥，既得猴头菌菌丝体提取物。
[0012] 其中，所述水常温闪式提取的温度为20?5(TC。步骤（2)中所述提取液离也条件 为；转速3500?4500转/分钟，离也8?15分钟。
[0013] 优选地，所述提取物的制备步骤还包括；将步骤（2)的浓缩液再用重量为该浓缩 液重量4?6倍的且体积百分比浓度为70?80%的己醇溶解，将溶解部分在55?6(TC减 压浓缩至无醇味，将所得浓缩物在-60?-55C真空冷冻干燥。
[0014] 优选地，所述提取物的制备步骤还包括；将步骤（2)的浓缩液再用重量为该浓缩 液重量4?6倍的且体积百分比浓度为70?80%的己醇溶解，将不溶解部分在-60?-55C 真空冷冻干燥。
[0015] 本发明所述猴头菌菌丝体是《湖南省中药材标准》2009年版，122-123页记载的猴 头菌培养物，该猴头菌菌丝体为猴头菌科真菌猴头菌化ricium erinaceum (Bull.ex化.） Pers.的菌丝体与其附生的固体培养基的干燥混合物。
[0016] 本发明常温闪式提取猴头菌菌丝体，在常温或者室温下（20-5(TC )，不加热，加水 动力打浆式水溶出有效成分，无温度破坏，既能溶解有效成分但又不破坏有效成分；6(TC减 压浓缩，不会破坏有效成分，特别是活性酶类物质；为了不影响有关活性物质，本发明采用 了真空冷冻干燥手段。
[0017] 本发明对所得的猴头菌菌丝体提取物进行了体外胃癌细胞的抑制和体内动物抗 胃癌实验，从图1-9和表1，表2的结果可知，该猴头菌菌丝体提取物具有抗胃癌的作用，可 用于制备抗胃癌药物。
【专利附图】
【附图说明】
[001引图1:HTJ#5对NCI-87人胃癌细胞的抑制作用。浓度为0. 156-10毫克/毫升，72 小时药物处理，MTT (喔哇兰）方法测定细胞活性。
[0019] 图2:HTJ#5A对NCI-87人胃癌细胞的抑制作用。浓度为0. 156-10毫克/毫升， 72小时药物处理，MTT (喔哇兰）方法测定细胞活性。
[0020] 图3:HTJ#5对AGS人胃癌细胞的抑制作用。浓度为0. 156 - 10毫克/毫升，72小 时药物处理，MTT (喔哇兰）方法测定细胞活性。
[002。 图4:HTJ#5A对AGS人胃癌细胞的抑制作用。浓度为0. 156-10毫克/毫升，72小 时药物处理，MTT (喔哇兰）方法测定细胞活性。
[0022] 图5:HTJ#5和HTJ#5A在浓度为10毫克/毫升对人AGS胃癌细胞形态的影响。
[0023] 图6:图6A为HTJ#5和HU5A的体内抗NCI-87 (胃癌）移植瘤疗效分析；图她 为HTJ#5和HU5A的体内抗NCI-87 (胃癌）移植瘤的动物毒性分析(试验1);对照组、 HTJ#5 (1000毫克/公斤/天）和HTJ#5A (1000毫克/公斤/天）通过连续五天口服给药对 荷胃癌NCI-87移植瘤的SCID鼠的抗移植瘤作用和毒副反应；每组5只动物；
[0024] 图7:HTJ#5和HTJ#5A对胃癌NCI-87移植瘤的个体疗效(试验1)。对照组、 HTJ#5(l〇〇〇毫克/公斤/天，口服）和HTJ#5A(1000毫克/公斤/天，口服）对胃癌NCI-87 移植瘤个体效应；其中，图7A为对照组，图7B为HTJ#5(l〇〇〇毫克/公斤/天，口服），图 7C为HTJ#5A (1000毫克/公斤/天，口服）；图中横坐标为时间(天)，纵坐标为肿瘤重量(毫 克）；
[00巧]图8:图8A为HTJ#5，HTJ5A和五氣尿嚼巧的体内抗胃癌NCI-87移植瘤疗效分析； 图8B为HTJ#5, HTJ5A和五氣尿嚼巧的体内抗胃癌NCI-87移植瘤动物毒性分析(试验2); 对照组，五氣尿嚼巧（30毫克/公斤/天，腹腔注射），HTJ#5 (1000毫克/公斤/天，口服） 和HTJ#5A(1000毫克/公斤/天，口服）通过连续五天给药对荷胃癌NCI-87移植瘤的SCID 鼠的抗移植瘤作用和毒副反应；每组5只动物；
[0026] 图9:HTJ#5,HTJ#5A和五氣尿嚼巧对胃癌NCI-87移植瘤的个体疗效(试验2)。对 照组，HTJ#5(l〇〇〇毫克/公斤/天，口服）和HTJ#5A(1000毫克/公斤/天，口服），五氣尿 嚼巧（30毫克/公斤/天，腹腔注射）对胃癌NCI-87移植瘤的个体效应；其中，图9A为对 照组，图9B为HTJ#5 (1000毫克/公斤/天，口服），图9C为HTJ#5A (1000毫克/公斤/天， 口服），图9D为五氣尿嚼巧（30毫克/公斤/天，腹腔注射）；图中横坐标为时间(天)，纵 坐标为肿瘤重量(毫克)。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
[0028] 实施例1
[0029] -种猴头菌菌丝体提取物，其制备方法包括如下步骤：
[0030] (1)取猴头菌菌丝体，进行第一次水常温闪式提取，提取20分钟，然后进行第二次 水常温闪式提取，提取15分钟；第一次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量 的5倍；第二次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量的3倍；
[0031] (2 )将上述两次提取后获得的提取液离也后得到的上清液在6(TC条件下减压浓缩 至有沉淀析出得到浓缩液；将浓缩液在-6(TC条件下真空冷冻干燥，即得猴头菌菌丝体提 取物。
[0032] 其中，所述水常温闪式提取的温度为3(TC。步骤（2)中所述提取液离也条件为；转 速4000转/分钟，离也10分钟。
[003引 实施例2
[0034] 一种猴头菌菌丝体提取物，其制备方法包括如下步骤：
[00巧](1)取猴头菌菌丝体，进行第一次水常温闪式提取，提取20分钟，然后进行第二次 水常温闪式提取，提取15分钟；第一次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量 的5倍；第二次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量的3倍；
[0036] (2)将上述两次提取后获得的提取液离也后得到的上清液在6(TC条件下减压浓缩 至有沉淀析出得到浓缩液；
[0037] (3)将步骤（2)的浓缩液再用重量为该浓缩液重量5倍的且体积百分比浓度为80% 的己醇溶解，将溶解部分在6(TC减压浓缩至无醇味，将所得浓缩物在-6(TC真空冷冻干燥， 得进一步提取的猴头菌菌丝体提取物。
[0038] 其中，所述水常温闪式提取的温度为3(TC。步骤（2)中所述提取液离也条件为；转 速4000转/分钟，离也10分钟。
[00測 实施例3
[0040] 一种猴头菌菌丝体提取物，其制备方法包括如下步骤：
[0041] (1)取猴头菌菌丝体，进行第一次水常温闪式提取，提取20分钟，然后进行第二次 水常温闪式提取，提取15分钟；第一次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量 的5倍；第二次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量的3倍；
[0042] (2)将上述两次提取后获得的提取液离也后得到的上清液在6(TC条件下减压浓缩 至有沉淀析出得到浓缩液；
[0043] (3)将步骤（2)的浓缩液再用重量为该浓缩液重量5倍的且体积百分比浓度为80% 的己醇溶解，将不溶部分在-6(TC真空冷冻干燥，得进一步提取的猴头菌菌丝体提取物。
[0044] 其中，所述水常温闪式提取的温度为3(TC。步骤（2)中所述提取液离也条件为；转 速4000转/分钟，离也10分钟。
[0045] 实施例4
[0046] 猴头菌菌丝体提取物功能鉴定试验1-对人胃癌细胞NCI-87和AGS的杀伤作用
[0047] -、材料与方法
[0048] 1、细胞和培养：NCI-87和AGS胃癌细胞，来自美国模式培养物研究所（American Type Cuhure Collection, ATCC;Manassas, VA, UA巧。细胞饲养于 DMEM 培养液含 10% 小牛 血清（Atlanta Biological, Lawrenceville, GA, USA), 100 单位 / 毫升青霉素和 0. 1 微克 / 毫升链霉素（Invitrogen, Grand Island, NY, USA).。
[0049] 2、药物；由实施例2制备方法最终获得的猴头菌菌丝体提取物，命名为HTJ#5 ;由 实施例3制备方法最终获得的猴头菌菌丝体提取物，命名为HTJ#5A ;将前述猴头菌菌丝体 提取物分别溶于含0. 1%DMS0的DMEM培养液中。
[0050] 3、药物浓度与方案：HTJ#5和HTJ#5A药物浓度在0. 156 - lOmg/ml (毫克/毫升） 连续72小时药物处理。
[0051] 4.抑制胃癌肿瘤细胞生长活性；72小时药物处理，然后用MTT (喔哇兰)方法测定 细胞活性。
[0052] 实施例5
[0053] 猴头菌菌丝体提取物功能鉴定试验2-胃癌移植瘤的体内抗瘤疗效
[0054] -、材料与方法
[00巧]1、动物；8?12周的SCID雌鼠（重量18?22g)，来自Roswell Park Cancer Institute 炬uffalo, NY, USA)，并按规定饲养。
[0056] 2、药物；由实施例2制备方法最终获得的猴头菌菌丝体提取物，命名为HTJ#5 ;由 实施例3制备方法最终获得的猴头菌菌丝体提取物，命名为HTJ#5A ;将前述猴头菌菌丝体 提取物分别溶于含10%DMS0的无菌盐水，五氣尿嚼巧巧-fluorouracil,5-即,50mg/ml)购 于 Hoffmann-La Roche, Inc (Nutley, NJ, USA) W无菌生理盐水稀释。.
[0057] 3、肿瘤细胞：肥1-87胃癌细胞。移植瘤的建立首先注射约1000000个培养细胞并 经过数代肿瘤组织移植。
[0058] 4、药物剂量与方案；HTJ#5和HTJ#5A 口服1000毫克/公斤/天，五氣尿嚼巧腹腔 注射给药30毫克/公斤/天，一天一次，疗程5天。。对照组口服或注射10%DMS0溶液，小 鼠每20克体重给予0. 2-0. 4毫升（与实验组相同）。每组5只小鼠，部分实验中，同一只鼠 荷两种不同的移植瘤。
[0059] 5、肿瘤测量；用游标卡尺测量肿瘤的轴线（L表示长轴，W表示短轴)肿瘤重量按下 式计算：肿瘤重量=1/2 (L X W。（mm). (Img=Imm^，每天同一时间进行肿瘤测量，每周3-4 次。
[0060] 最大耐受剂量(MTD)和毒性评价；最大耐受剂量定义为给药导致小鼠体重减轻在 20%左右，不会导致药物引起小鼠死亡的剂量。接受药物治疗后的前十天，每天测量肿瘤和 小鼠体重，然后是每两天测量一次。
[0061] 6、抗肿瘤活性；抗肿瘤活性评价指标，最大肿瘤生长抑制，W治疗组的平均肿瘤重 量和对照组的肿瘤平均重量来计算；肿瘤体积倍增时间，为肿瘤重量增长到最初重量的两 倍所需的平均时间；肿瘤部分反应（PR),当肿瘤大小减少一半(至最初的50%或W上)时；肿 瘤完全反应（CR)，当无法检测到肿瘤(肿瘤完全消失)时；治愈定义为药物治疗后至少60天 内检测不到肿瘤(达到肿瘤完全反应保持至少60天，此时一般肿瘤不会复发，动物不在保 留)。
[00的]二、实验结果
[0063] W下实验结果及附图中描述了 "HTJ#5, HTJ#5A"的抗肿瘤作用。
[0064] 1. HTJ#5和HTJ#5A对NCI-87和AGS人胃癌细胞的生长抑制作用。
[0065] 我们首先用HTJ#5和HTJ#5A处理培养的胃癌NCI-87和AGS细胞来观察对胃癌 细胞的体外生长抑制作用。试验数据见图1至图5。数据结果表明通过72小时HTJ#5或 HT J#5A对细胞的处理能有效的抑制NCI-87和AGS俩种胃癌细胞的生长，其抑制作用量效曲 线。图1数据表明HTJ#5对NCI-87胃癌细胞的半数杀伤浓度（ICw)为5毫克/毫升，HTJ#5 在10毫克/毫升能杀伤85%的胃癌细胞。图2数据表明HTJ#5A对NCI-87胃癌细胞的半 数杀伤浓度（ICw)为4. 5毫克/毫升，HTJ#5A在10毫克/毫升能杀伤大于90%的胃癌细 胞。图3数据表明HTJ#5在5毫克/毫升能杀伤45%的AGS胃癌细胞，在10毫克/毫升能 杀伤80%的AGS胃癌细胞。图4数据表明HTJ#5A在5毫克/毫升能杀伤55%的AGS胃癌 细胞，在10毫克/毫升能杀伤98%的AGS胃癌细胞。试验结果表明HTJ#5A比HTJ#5对杀 伤NCI-87和AGS俩种胃癌细胞更有效。图5展现了 10毫克/毫升的HTJ#5和HTJ#5A在 显微镜下对胃癌AGS细胞形态学的影响，对照组细胞圆和亮，保持正常形态，但是HTJ#5和 HTJ#5A处理的细胞变大，失去光泽和正常形态。
[0066] 2. HTJ#5和HTJ#5A抗荷NCI-87胃癌移植瘤的SCID小鼠的活性与毒性。
[0067] 我们证明了 HTJ#5和HTJ#5A对胃癌NCI-87和AGS细胞体外的杀伤效果后，再应 用HTJ#5和HTJ#5A治疗SCID小鼠荷人类胃癌NCI-87肿瘤移植瘤的的体内效果的研究。试 验数据见图6至图9和表1-2。图6和表1数据表明NCI-87肿瘤移植瘤生长相对缓慢，肿 瘤倍增时间为12. 8 + 0. 6天，口服HTJ#5 (1000毫克/公斤/天，五天)治疗效果好，肿瘤生 长抑制达到78. 7 + 4. 1，并且肿瘤倍增时间明显提高到29. 5 + 2. 4天。口服HTJ#5A (1000 毫克/公斤/天，五天）肿瘤生长抑制达到85. 4 + 6. 5%，并且倍增时间达到33. 2 + 4. 8天， HTJ#5和HTJ#5A与对照组比较有显著差异P<0. 01。HTJ#5和HTJ#5A对小鼠没有明显毒性。 图7展现了对照组、HTJ#5 (1000毫克/公斤/天）和HTJ#5A (1000毫克/公斤/天）处理 组每组5个NCI-87肿瘤移植瘤的生长曲线。数据表明HTJ#5组中20%的肿瘤HTJ#5A组中 60%的肿瘤减小一半W上。
[0068] 图8-9和表2数据重复了图6-7和表1的试验并与胃癌临床化疗首选药五氣尿 嚼巧（5-FU，30毫克/公斤/天，腹腔注射）在最大耐受剂量进行比较。数据表明对照组 NCI-87肿瘤移植瘤的生长比上次试验相对较快，肿瘤倍增时间为10. 2 + 0. 3天。HTJ#5和 HTJ#5A的抗肿瘤疗效与上次试验结果相似或更好，口服HTJ#5 (1000毫克/公斤/天，五 天)，肿瘤生长抑制达到82. 2 + 5. 2,并且倍增时间提高到30. 3 + 3. 1天。80%的肿瘤减小一 半W上。口服HTJ#5A (1000毫克/公斤/天，五天)，肿瘤生长抑制达到81. 5 + 5. 3,并且 肿瘤倍增时间提高到28. 2 + 3. 8天。60%的肿瘤减小一半W上。SCID荷瘤小鼠给HTJ#5和 HTJ#5A后没有任何毒性。五氣尿嚼巧比HTJ#5和HTJ#5A比较，抗肿瘤疗效明显差毒性明显 高，腹腔注射五氣尿嚼巧（30毫克/公斤/天，五天)，肿瘤生长抑制率69. 2 ±8. 6,肿瘤倍增 时间为14. 2 + 1. 1天。没有（0%)肿瘤减小一半W上。小鼠体重减轻高达21. 1 + 1. 1.图9 展现了对照组、五氣尿嚼巧组（30毫克/公斤/天，五天)，HTJ#5组（1000毫克/公斤/天） 和HTJ#5A组（1000毫克/公斤/天）每组5个NCI-87肿瘤移植瘤的生长曲线。
[006引 V.结论
[0070] 1. HTJ#5和HTJ#5A在体外对人胃癌NCI-87和AGS细胞有明显的杀伤作用。
[0(m] 2. HTJ#5和HTJ#5A (1000毫克/公斤/天，口服5天）对于NCI-187人胃癌有明 显抗肿瘤疗效，并没有毒性。
[0072] 3. HTJ#5和HTJ#5A (1000毫克/公斤/天，口服5天）比最大耐受剂量五氣尿嚼 巧（30毫克/公斤/天，腹腔注射5天）对于NCI-187人胃癌的抗瘤疗效好并且毒性明显 低。
[007引表1HTJ#5和HTJ#5A (1000毫克/公斤/天，口服5天）对NCI-187胃癌的疗效。 [0074]
【权利要求】
1. 一种猴头菌菌丝体提取物在制备抗胃癌药物中的应用；所述猴头菌菌丝体提取物 的制备包括如下步骤： (1) 取猴头菌菌丝体，进行第一次水常温闪式提取，提取15?25分钟，然后进行第二次 水常温闪式提取，提取10?20分钟；第一次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体 重量的4?6倍；第二次水常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量的2?4倍； (2) 将上述两次提取后获得的提取液离心后得到的上清液在55?60°C条件下减压浓 缩至有沉淀析出得到浓缩液；将浓缩液在-60?_55°C条件下真空冷冻干燥，即得猴头菌菌 丝体提取物。
2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，猴头菌菌丝体提取物制备方法中第一次水 常温闪式提取中，水的重量为猴头菌菌丝体重量的5倍；第二次水常温闪式提取中，水的重 量为猴头菌菌丝体重量的3倍。
3. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，猴头菌菌丝体提取物制备方法中水常温闪 式提取的温度为20?50°C。
4. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，猴头菌菌丝体提取物制备方法的步骤（2)中 所述提取液离心条件为：转速3500?4500转/分钟，离心8?15分钟。
5. 如权利要求1至4之一所述的应用，其特征在于，猴头菌菌丝体提取物制备方法 的步骤还包括：将步骤（2)的浓缩液再用重量为该浓缩液重量4?6倍的且体积百分比 浓度为70?80%的乙醇溶解，将溶解部分在55?60°C减压浓缩至无醇味，将所得浓缩物 在-60?-55 °C真空冷冻干燥。
6. 如权利要求1至4之一所述的应用，其特征在于，猴头菌菌丝体提取物制备方法的步 骤还包括：将步骤（2)的浓缩液再用重量为该浓缩液重量4?6倍的且体积百分比浓度为 70?80%的乙醇溶解，将不溶解部分在-60?-55°C真空冷冻干燥。
【文档编号】A61P35/00GK104224855SQ201310222598
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2013年6月6日 优先权日:2013年6月6日
【发明者】何述金, 常耀台, 曹寿松 申请人:湖南新汇制药股份有限公司