一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法
【专利摘要】本发明公开了一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，所述方法包括如下步骤：将干燥的鸡骨草全草用粉碎机器粉碎并过筛，得出鸡骨草粉末；称取一定重量鸡骨草粉末并按一定比例加入提取溶液，然后进行两次水浴回流提取；将所得提取液过滤除杂后旋干溶剂，得到鸡骨草游离氨基酸粗提物；粗提物加水溶解定容，得出鸡骨草游离氨基酸提取液，并在4℃的温度下保存备用；用茚三酮比色法检测所述鸡骨草游离氨基酸提取液中鸡骨草游离氨基酸的含量。本发明采用了一种操作简单、原材料利用程度高的鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，使得鸡骨草游离氨基酸的提取率得到较大提高。
【专利说明】一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法。
【背景技术】
[0002]鸡骨草(Abrus Cantoniensis Hance)为豆科相思子属植物，包括小叶鸡骨草(即广东相思子)和大叶鸡骨草(即毛相思子)，是广州凉茶成分之一，主要分布在中国的广东、广西、福建、海南等地。鸡骨草全草入药，具有清热解毒、利湿、活血化瘀、舒肝止痛等功效，用于治疗急慢性肝炎、肝硬化腹水、胆囊炎、胃痛、风湿痹痛、毒蛇咬伤、乳腺炎、泌尿系统感染等病症。鸡骨草是常用的中药材，也是我国出口中草药之一，在民间的利用也很广泛，如制作保健药膳鸡骨草煲生鱼汤和鸡骨草红枣汤等，用于去湿毒的保健茶等。
[0003]鸡骨草的活性成分包括生物碱类、留醇化合物、皂苷类、黄酮类、氨基酸类、蒽醌类、糖类等化合物。
[0004]氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质，是构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系。它在抗体内具有特殊的生理功能，是生物体内不可缺少的营养成分之一。
[0005]谷氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸、L 一多巴等氨基酸单独作用治疗一些疾病，主要用于治疗肝病疾病、消化道疾病、脑病、心血管病、呼吸道疾病以及用于提高肌肉活力、儿科营养和解毒等。此外氨基酸衍生物在癌症治疗上出现了希望。
[0006]基于鸡骨草和氨基酸的药用功效，鸡骨草游离氨基酸的成分及功效有一定的研究价值。然而目前没有鸡骨草游离氨基酸提取方法的相关研究报道，研究中多参见其他中草药游离氨基酸提取方法，这样提取率较低；本发明提供了一种针对鸡骨草的游离氨基酸的粗提方法，使其提取率有了较大提升。
【发明内容】
[0007]针对现有技术的不足，本发明旨在提供一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，使得提取鸡骨草游离氨基酸的方法更加简单，提高原材料的利用程度，使得提取率有了较大的提闻。
[0008]为了实现上述目的，本发明旨在提供如下技术方案:
[0009]一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，包括如下步骤:
[0010]步骤I，将干燥的鸡骨草全草用粉碎机器粉碎后过40目筛，得出鸡骨草粉末；
[0011]步骤2，称取一定重量的所述鸡骨草粉末，按质量比10_30ml/g的比例加入提取溶液，然后在温度70-95°C的条件下进行两次水浴回流提取，每次水浴回流提取进行1.5-2.5小时；
[0012]需要说明的是，所述步骤2中最优采用质量比30ml/g，并水浴回流提取的最优条件为95°C下进行2.5小时。
[0013]步骤3，将步骤2得出的提取液过滤除杂，然后旋干过滤除杂后的提取液，得到鸡骨草游离氨基酸粗提物；
[0014]步骤4，将所述鸡骨草游离氨基酸粗提物加水溶解定容，得出鸡骨草游离氨基酸提取液，并在4°C的温度下保存备用；
[0015]步骤5，采用茚三酮比色法检测所述鸡骨草游离氨基酸提取液中所述鸡骨草游离
氨基酸的含量。
[0016]需要说明的是，所述提取溶剂为浓度为60%的乙醇溶液。
[0017]需要说明的是，所述步骤5中用茚三酮比色法检测所述鸡骨草游离氨基酸提取液中鸡骨草游离氨基酸的含量，是以L-酪氨酸为对照品的。
[0018]本发明的有益效果在于:本发明采用了一种操作简单、原材料利用程度高的鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，使得鸡骨草游离氨基酸的提取率有了较大的提高。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1为本发明的实施流程图；
[0020]图2为标 准L-酪氨酸吸光度曲线。
[0021]具体实施方法
[0022]以下将结合附图对本发明作进一步的描述，需要说明的是，本实施例以本技术方案为前提，给出了最佳的实施步骤，但并不限于实施例。
[0023]如图1所示，所述一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法包括如下步骤:
[0024]步骤1，取干燥的鸡骨草全草用粉碎机粉碎，然后用40目筛过滤，过滤后得出的鸡骨草粉末备用；
[0025]步骤2，称取2.5g鸡骨草粉末，按30ml/g的质量比加入60%乙醇，充分混合后在温度95°C的条件下进行第一次水浴回流提取；取出第一次提取液后再加等体积60 %乙醇并重复提取一次；每次水浴回流提取进行2.5小时。
[0026]步骤3，将步骤2得出的提取液进行过滤除杂，用旋转蒸发仪将过滤除杂后的所述提取液旋干。
[0027]步骤4，加水溶解提取物，并定容至25ml，即得游离氨基酸提取液，4°C保存备用。
[0028]步骤5，取 25ml 比色管 9 支，分别加入 O, 0.5，1.0, 1.5，2.0, 2.5, 3.0, 4.0, 5.0ml标准L-酪氨酸溶液(0.lmg/ml),分别做茚三酮显色反应。具体操作为:
[0029](I)往各比色管中加入浓度为2%的茚三酮溶液I ml和pH = 6.7的磷酸盐缓冲液2ml,摇匀后于水浴加热15min ；
[0030](2)迅速取出冷却至室温，用蒸馏水定容至25ml ；
[0031](3)取显色液用紫外分光光度计在568nm处测定吸光度。
[0032]标准L-酪氨酸显色反应吸光度测量结果记录见表1。
[0033]表1
[0034]
~I23456789
酪氨酸浓 OI46810 12 16 20
度(mg/1 )
Abs ( 568 ) 0.008 0.013 ~θ7θ76 0.1ll 0.133 0.216 0.324 丨 O 5” | 0.666~[0035]步骤6，如图2所示，以氨基酸标准溶液的浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制出标准曲线。求得回归方程为y = 0.0346x-0.0690 (R = 0.976，浓度单位为mg/1)，结果表明线性关系良好。
[0036]步骤7，将步骤7中测得的吸光度带入到步骤6的回归方程中，求得步骤4中的游离氨基酸提取液的游离氨基酸浓度；
[0037]步骤8，可求得步骤I中鸡骨草的游离氨基酸含量根据以下公式算出:
[0038]
【权利要求】
1.一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤: 步骤I，将干燥的鸡骨草全草用粉碎机器粉碎后过40目筛，得出鸡骨草粉末； 步骤2，称取一定重量的所述鸡骨草粉末，按质量比10-30ml/g的比例加入提取溶液，然后在温度70-95°C的条件下进行两次水浴回流提取，每次水浴回流提取进行1.5-2.5小时； 步骤3，将步骤2得出的提取液过滤除杂，然后旋干过滤除杂后的提取液，得到鸡骨草游离氨基酸粗提物； 步骤4，将所述鸡骨草游离氨基酸粗提物加水溶解定容至25ml，得出鸡骨草游离氨基酸提取液，并在4°C的温度下保存备用； 步骤5，采用茚三酮比色法对所述鸡骨草游离氨基酸提取液进行游离氨基酸含量检测。
2.根据权利要求1所述的一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，其特征在于，所述提取溶剂为浓度为60%的乙醇溶液。
3.根据权利要求1所述的一种鸡骨草游离氨基酸的粗提方法，其特征在于，所述步骤5中以L-酪氨酸为对照 品。
【文档编号】A61K36/48GK103989733SQ201410234118
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年5月29日 优先权日:2014年5月29日
【发明者】曾琦, 聂发玉, 夏玉琼, 陈丹, 张象涵, 王俊影, 薛锦文, 齐元博, 梁继民 申请人:西安电子科技大学