一种降糖组合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于制药【技术领域】，具体而言，涉及一种降糖组合物及其应用。本发明所述的一种降糖组合物，由冬虫夏草，人参，向天果，苦瓜，仙人掌组成，其中，所述冬虫夏草为10-30份，人参为50-80份，向天果为150-200份，苦瓜为30-60份，仙人掌为25-55份。本发明的有益效果在于：本发明所述的降糖组合物，主要针对于治疗2型糖尿病，全面平衡肝胆胰胃肾的关系，逐步改善综合代谢能力，平稳恢复和降低糖化血红蛋白水平，减少糖尿病合并症状态，同时没有任何毒副作用，长期服用安全可靠。
【专利说明】一种降糖组合物及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于制药【技术领域】，具体而言，涉及一种降糖组合物及其应用。
【背景技术】
[0002]向天果(学名Fructus Swietenia Macrophylla),属于楝科植物,又名天仙果,源产于南太平洋所罗门群岛，向天果树高约30公尺至40公尺，因其果实向天生长而得名，向天果被誉为”植物之后”，它能调整身体代谢功能，使自身的胰岛素得以“复活”而充分发挥作用，具有直接降血糖作用，同时具有的保肝作用，可以减轻或防止一些口服降血糖药物对肝脏的损害。 [0003]糖尿病的发病率逐年升高，目前，世界上大约有2.85亿糖尿病患者，占世界人口的6.4%，预计到2030年，这一数字将达到4.38亿。糖尿病是由于人体内胰岛素抵抗及分泌缺陷而引起的以血糖升高为特征的代谢病。主要分为I型(TlDM)和2型(T2DM)。前者是由于胰岛β-细胞不能产生足够的胰岛素(胰岛素绝对缺乏)所致，多发生于青少年；后者是由于胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗(胰岛素相对缺乏)所致，多见于中老年人。糖尿病患者中，约有90%~95%属于T2DM，故成为药物研发的主要类型。T2DM治疗的局限性在于大多治疗药物均存在明显的不良反应，例如二甲双胍会引起明显的胃肠道反应，导致腹泻、恶心、乳酸中毒等；磺脲类药物和胰岛素会引起低血糖和体重增加；噻唑烷二酮类也会引起体重增加和水肿现象；新发现的药物如肠降血糖素类似物会引起恶心、呕吐、腹泻。另外，即使几种口服降血糖药联合应用也很难达到有效控制血糖的目的。
[0004]钠依赖的葡萄糖运载体(SGLTs)是一类在小肠黏膜和肾近曲小管中发现的转运基因家族，肾脏重吸收葡萄糖的过程主要由SGLTs介导。其中，SGLTl和SGLT2最为重要，SGLT2起主导作用。选择性地抑制SGLT2能显著降低机体对葡萄糖的重吸收，通过增加尿糖的排出从而降低血糖水平。SGLT2抑制剂是一种创造性的治疗策略，其作用靶点和机制与现有降糖药均不同，成为降糖药物研究的热点。因此，急需开发一种基于新机制的抗T2DM的药物以克服上述缺点，SGLT2抑制剂的发现有望弥补目前降糖药物的缺点，成为新一类的有效降糖制剂。
【发明内容】
[0005]为解决上述技术问题，本发明提供一种降糖组合物及其应用。
[0006]本发明所述的一种降糖组合物，由冬虫夏草，人参，向天果，苦瓜，仙人掌组成，其中，所述冬虫夏草为10-30份，人参为50-80份，向天果为150-200份，苦瓜为30-60份，仙人掌为25-55份。
[0007]进一步的，所述冬虫夏草为15-25份，人参为61-69份，向天果为170-180份，苦瓜为45-55份，仙人掌为34-48份。
[0008]进一步的，一种降糖组合物和药学上可接受的载体组成。
[0009]所述载体包括进一步的，所述药物为颗粒剂、丸剂、汤剂、片剂、胶囊剂或散剂。
[0010]所述剂型均为常规工艺制得。
[0011]进一步的，该制备方法包括如下步骤:将原料粉碎成细粉、过筛、按比例混合均匀，即得。
[0012]其中，降糖药物优选为用于降糖的含有向天果的药物组合物。
[0013]本发明还提供了所述的药物组合物作为有效成分在制备降糖药物中的应用。
[0014]本发明所述的药物制备方法为:将前述的原料按相应的重量配比混合，先用清水清洗除杂，然后将其用等质量的30-50°C的温水浸泡l_3h，然后，加入原料重量3-5倍的水，在75-90°C提取3-5次，冷却过滤后，在65°C以下浓缩成为与原料等质量的流浸膏状，摇匀密封，至于阴凉通风处保存。上述浸膏可直接作药用，也可用于如动物降糖模型试验。
[0015]组方中，冬虫夏草是一种真菌，含虫草酸、维生素B12、脂肪、蛋白等，对肾虚阳痿、腰膝酸疼等有良好的疗效。人参，现代实验表明人参提取物、人参多糖、人参多肽、人参茎叶多糖、人参非皂甙部分均有降血糖作用，可用于糖尿病的治疗。向天果，向天果性凉，解热、收敛，种仁味苦、涩，含有多种抗氧化剂、黄酮和多酚，有很好的降低血糖，提高免疫力的作用。苦瓜富含胡萝卜素、视黄醇、硫胺素、核黄素、尼克酸以及硒等维生素和微量元素，尤其富含具有降低血糖作用的苦瓜甙。仙人掌的营养丰富，含有大量的维生素和矿物质，其所含的维生素能抑制脂肪和胆固醇的吸收，并可以减缓对葡萄糖的摄取，从而具有降血糖、降血月旨、降血压的功效。 [0016]本发明的有益 效果在于:本发明所述的降糖组合物，主要针对于治疗2型糖尿病，所述降糖组合物根据现代解剖学新观念，从外消化腺入手，全面平衡肝胆胰胃肾的关系，逐步改善综合代谢能力，平稳恢复和降低(HbAlc)糖化血红蛋白水平，减少糖尿病合并症状态。同时没有任何毒副作用，长期服用安全可靠。降糖组合物口服给药进入胃肠后，能够刺激胃肠滋生和分泌多肽类激素，促进胰岛B细胞分泌胰岛素，进而降低血糖。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0018]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
[0019]实施例1:
中药组合物由下述原料按重量配比为:冬虫夏草为10克，人参为50克，向天果为200克，苦瓜为60克，仙人掌为55克。
[0020]制备方法为:将前述的原料按相应的重量配比混合，先用清水清洗除杂，然后将其用等质量的50°C的温水浸泡lh，然后，加入原料重量5倍的水，在75°C提取3次，冷却过滤后，在65°C以下浓缩成为与原料等质量的流浸膏状，得到降糖组合物I号，摇匀密封，置于阴凉通风处保存。
[0021]实施例2:
中药组合物由下述原料按重量配比为:冬虫夏草为30克，人参为80克，向天果为150克，苦瓜为30克，仙人掌为25克。[0022]制备方法为:将前述的原料按相应的重量配比混合，先用清水清洗除杂，然后将其用等质量的30°C的温水浸泡3h，然后，加入原料重量3倍的水，在80°C提取5次，冷却过滤后，在65°C以下浓缩成为与原料等质量的流浸膏状，得到降糖组合物2号，摇匀密封，置于阴凉通风处保存。
[0023]实施例3:
中药组合物由下述原料按重量配比为:冬虫夏草为10克，人参为50克，向天果为200克，苦瓜为60克，仙人掌为55克。
[0024]制备方法为:将前述的原料按相应的重量配比混合，先用清水清洗除杂，然后将其用等质量的44°C的温水浸泡2.5h，然后，加入原料重量4倍的水，在90°C提取4次，冷却过滤后，在65°C以下浓缩成为与原料等质量的流浸膏状，摇匀密封，得到降糖组合物3号，置于凉通风处保存。
[0025]实施例4:
在本实施例中，通过实验证明了组合物在降糖方面具有良好的效果。
[0026]材料与方法 1.1测试化合物
名称:降糖组合物I号；降糖组合物2号；降糖组合物3号，保存条件:4°C
1.2待测化合物溶液的准备
1.2.1降糖组合物I号溶液的配制
首先，将称量(BS 124 S，Sartorius)的降糖组合物I号100.3mg溶解在5mL DPBS中，润旋lmin、超声IOmin, 1000Orpm离心5min,得到浓度为20mg/mL的母液。然后用DPBS稀释母液，分别至最终浓度含有2，6，20 mg/mL的降糖组合物I号溶液。
[0027]降糖组合物2号溶液的配制
首先，将称量(BS 124 S，Sartorius)的降糖组合物2号10.2mg溶解在5mL DPBS中，涡旋lmin、超声IOmin, 1000Orpm离心5min,得到浓度为2mg/mL的母液。然后用DPBS稀释母液，分别至最终浓度含有0.2，0.6，2mg/mL的降糖组合物2号溶液。
[0028]降糖组合物3号溶液的配制
首先，将称量(BS 124 S，Sartorius)的降糖组合物3号10.1mg溶解在5mL DPBS中，涡旋lmin、超声IOmin, 1000Orpm离心5min,得到浓度为2mg/mL的母液。然后用DPBS稀释母液，分别至最终浓度含有0.2，0.6，2mg/mL的降糖组合物3号溶液。
[0029]检测系统 1.3.1材料
a.人药物转运体SGLT2基因稳定表达HEK293细胞:以插入了人药物转运体SGLT2基因的哺乳类动物表达pcDNA3.1载体转染该细胞，并以geneticin筛选耐性细胞，进而获得细胞膜表面SGLT2稳定高表达的细胞株。
[0030]b.培养基
含有 10% 胎牛血清(Lot N0.1227693，Invitrogen，s Gibco)的高糖 DMEM 培养基(LotN0.NYM1045, Hyclo ne)用于本研究的细胞培养。
[0031]c.胰酶
0.25% Trypsin-EDTA (IX) (Lot N0.1155732, InvitrogenJ s Gibco)d.放射性标记探针底物
Uric acid, [8-14C]- (Lot N0.742-107-0578-B-20121130-SBA, Moravek)
Glucose D, [14C (U)]- (Lot N0.120319，ARC)
e.缓冲溶液
Dulbecco，s Phosphate Buffered Saline, DPBS (Lot N0.070M8306, Sigma-Aldrich)
1.3.2实验步骤
a.HEK293单层细胞培养
胰酶消化后，药物转运体SGLT2基因表达细胞接种于赖氨酸包被24孔培养盘(Lot N0.20130801，CHI SCIENTIFIC)，细胞接种密度为 IO5 cells/well，在 37°C、5% C02、饱和湿度的培养箱内培养2天。
[0032]b.放射性标记探针底物浓度
制备浓度为60μΜ的Uric acid, [8_14C]-，然后与待测化合物等体积混合，使其最终浓度为30μΜ。
[0033]制备浓度为60μΜ的Glucose D, [14C (U)]，然后与待测化合物等体积混合，使其最终浓度为30μΜ。
[0034]c.非标记化合物浓度
各种待测样品(2 X终浓度)，并与60 μΜ放射性标记Uric acid, [8_14C]_和60μΜ的Glucose D, [14C (U)]等体积混合。Al的最终浓度为1、3、10 mg/mL,BI的最终浓度为0.1、
0.3、lmg/mL，Cl 的最终浓度为 0.1,0.3、lmg/mL，FSMl 的最终浓度为 0.03,0.1,0.3、1、3、10mg/mL, FSM2 的最终浓度为 0.03,0.1,0.3、1、3、10mg/mL。
[0035]d.细胞摄入试验
先移去培养板内培养液，将培养细胞用DPBS清洗两次，并在37° C DPBS缓冲液中温浴lOmin，然后以500μL含放射性标记的探针底物溶液置换DPBS开始药物的细胞内摄入；2min后，用冰浴DPBS缓冲液终止反应，并清洗3次；然后各孔添加500μ1 0.lmol/L NaOH裂解细胞；提取裂解液于闪烁瓶中，添加3mL的闪烁液(Aquasol-2)，并用Tr1-Carb 2910TR液闪仪(PerkinElmer,Waltham, USA)测定样品中的放射性强度。细胞摄入试验中每个浓度重复3次(n=3)。
[0036]结果分析
1.4.1抑制作用
将不含非放射性标记的探针底物和待测化合物的放射性标记的探针底物的摄入活性定义为100% (control)，以此为标准计算各种化合物存在条件下的吸收百分比。
[0037]统计学方法
Mean土standard error (SD)用 Microsoft? Excel 2010 软件计算。每个数值代表一个实验的两个测定值的平均值。GraphPad Prism 5.0软件用于绘制非线性回归曲线图，并计算化合物对药物转运体转运活性影响的IC5(I。
[0038]结果
表1:降糖组合物I号、2号、3号对葡萄糖转运体(SGLT2)介导的14C-Gluc0se转运活性的影响，没有添加抑制剂条件下，SGLT2对14C-Glucose的摄入比例定义为100%(control)。不同浓度降糖组合物I号、2号、3号的添加，使SGLT2介导的14C-Gluc0se摄入比例随降糖组合物I号、2号、3号浓度的增加明显下降，并具有显著的统计学差异。由各浓度点计算得到降糖组合物I号的IC5tl为2.14mg/mL,降糖组合物2号的IC5tl为0.27mg/mL,降糖组合物3 号的 IC50 为 0.97mg/mL。
[0039]结论
试验结果显示，降糖组合物I号、2号、3号对SGLT2的转运活性均有抑制作用，其中对SGLT2的抑制作用活度顺序为降糖组合物2号(IC5tl=0.27mg/mL) >降糖组合物3号(IC50=0.97mg/mL) > 降糖组合物 I 号(IC5Q=2.14mg/mL)。
[0040]表1.降糖组合物I号、2号、3号对葡萄糖转运体介导的14C-Gluc0se转运活性的影响(n=3)
【权利要求】
1.一种降糖组合物，其特征在于，由冬虫夏草，人参，向天果，苦瓜，仙人掌组成，其中，所述冬虫夏草为10-30份，人参为50-80份，向天果为150-200份，苦瓜为30-60份，仙人掌为25-55份。
2.根据权利要求1所述的一种降糖组合物，其特征在于，所述冬虫夏草为15-25份，人参为61-69份，向天果为170-180份，苦瓜为45-55份，仙人掌为34-48份。
3.根据权利要求1所述的降糖组合物，其特征在于和药学上可接受的载体组成。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的降糖组合物，其特征在于，所述药物为颗粒剂、丸剂、汤剂、片剂 、胶囊剂或散剂。
5.根据权利要求1-3任意一项所述的降糖组合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤:将原料粉碎成细粉、过筛、按比例混合均匀，即得。
6.—种如权利要求1所述的药物组合物作为有效成分在制备降糖药物中的应用。
【文档编号】A61K36/58GK104000877SQ201410238109
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年5月30日 优先权日:2014年5月30日
【发明者】金鑫 申请人:金鑫