一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法，工艺步骤是：a.将蜂窝草干燥品粉碎，乙醇超声提取，加活性炭脱色，过滤；b.滤液超滤除杂，纳滤浓缩，放置结晶；c.结晶物用高效逆流色谱分离，根据HPLC-ELSD检测图收集目标成分。本发明的方法工艺简单、污染少、产品纯度高，适合工业化生产。
【专利说明】一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然产物分离领域，涉及一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法。
【背景技术】
[0002]蜂窝草又名打毒金，来源于唇形科绣球防风属植物蜂窝草的全草。蜂窝草气味微苦，口感辛辣，药性温和。
[0003]蜂窝草是常用的中草药，广州部队《常用中草药手册》中描述:“驱风解表，止咳化痰，治感冒，咳嗽，风火牙痛，肠胃不适，百日咳”；《文山中草药》中描述:“解表止咳，明目通经；治感冒，头痛，身窟，支气管哮喘，闭经，消化不良，夜盲症”;《广西药植名录》中描述:“治挤癖，皮肤病”。
[0004]蜂窝草酮具有抑制大肠杆菌和肠炎沙门菌活性的作用，对治疗肠胃不适具有独特的疗效。
[0005]目前，尚未见采用高效逆流色谱分离纯化蜂窝草总黄酮的报道，也未见有相关专利。本发明通过高效逆流色谱分离纯化蜂窝草总黄酮，所得产品质量好、纯度高，该方法工艺简单、适合中小规模生产。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法。
[0007]本发明是通过以下技术方案实现的:
一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法，其特征在于以下步骤:
a.取蜂窝草干燥品粉碎过40目筛，加8-10倍量乙醇超声提取，加入活性炭脱色，过滤；
b.滤液超滤除杂，纳滤浓缩，放置析出结晶；
c.将上述结晶物以乙酸乙酯-乙醇-水为溶剂系统，用高效逆流色谱分离，根据HPLC-ELSD检测图收集目标流分。
[0008]所述步骤a中，乙醇浓度70%_90%，活性炭量为溶液量的0.5%_3%，超声频率为40-65KHZ，超声时间为20-60min，提取2-3次。
[0009]所述步骤b中，超滤膜为1000-3000D的中空纤维式聚砜膜，进口压力为
0.1-0.31MPa，纳滤膜为200-300D的中空纤维式聚砜膜，进口压力为1.0-2.2MPa。
[0010]所述步骤c中，乙酸乙酯-乙醇-水的比例为2-4:5-7:3_5，上相为流动相，下相为固定相。
[0011]所述步骤c中，将固定相充满逆流色谱柱，调整主机转速800-1000rpm，再将流动相泵入色谱柱，平衡后调整流速l_3ml/min，同时取流动相溶解粗结晶物，进样阀进样。
[0012]本发明是采用高速逆流色谱技术对中药粗提物进行分离纯化，简便、快速，同时避免了样品损失。克服了传统制备方法操作繁琐、分离周期长等缺点，并有制备量大、分离效率高、产品纯度好等优点。
【具体实施方式】
[0013]下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0014]实施例1:
取干燥的蜂窝草Ikg,粉碎,过40目筛,加入8kg80%的乙醇超声提取30min,提取2次，超声频率为40KHZ，加入溶液量1%活性炭脱色，过滤。滤液先后经经1000D中空纤维式聚砜膜超滤除杂，进口压力为0.1MPa, 200D中空纤维式聚砜膜纳滤浓缩，进口压力为1.0MPa，放置结晶。
[0015]将乙酸乙酯-乙醇-水按2:5:3体积比混合，超声摇匀，静置分层后分离，下相为固体相，上相为流动相，结晶用上相溶解，将固定相泵满色谱柱，然后调整主机转速为800rmp，再以3ml/min流速泵入流动相，待柱内溶剂系统建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器谱图接收目标流分，蒸干即得蜂窝草酮产品11.Sg，含量94.5%。
[0016]实施例2:
取干燥的蜂窝草3kg,粉碎,过40目筛,加入30kg80%的乙醇超声提取60min,提取3次，超声频率为65KHZ，加入溶液量3%活性炭脱色，过滤。滤液先后经经3000D中空纤维式聚砜膜超滤除杂，进口压力为0.2MPa, 200D中空纤维式聚砜膜纳滤浓缩，进口压力为2.0MPa，放置结晶。
[0017] 将乙酸乙酯-乙醇-水按4:7:5体积比混合，超声摇匀，静置分层后分离，下相为固体相，上相为流动相，结晶用上相溶解，将固定相泵满色谱柱，然后调整主机转速为lOOrmp，再以2ml/min流速泵入流动相，待柱内溶剂系统建立动态平衡后，由进样阀进样，然后根据检测器谱图接收目标流分，蒸干即得蜂窝草酮产品35.2g，含量96.3%。
【权利要求】
1.一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法，其特征在于以下步骤: a.取蜂窝草干燥品粉碎过40目筛，加8-10倍量乙醇超声提取，加入活性炭脱色，过滤； b.滤液超滤除杂，纳滤浓缩，放置析出结晶； c.将上述结晶物以乙酸乙酯-乙醇-水为溶剂系统，用高效逆流色谱分离，根据HPLC-ELSD检测图收集目标流分。
2.如权利要求1所述一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法，其特征在于，所述步骤a中，乙醇浓度70%-90%，活性炭量为溶液量的0.5%-3%，超声频率为40_65KHz，超声时间为20-60min，提取2-3次。
3.如权利要求1所述一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法，其特征在于，所述步骤b中，超滤膜为1000-3000D的中空纤维式聚砜膜，进口压力为0.1-0.31MPa，纳滤膜为200-300D的中空纤维式聚砜膜，进口压力为1.0-2.2MPa。
4.如权利要求1所述一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法，其特征在于，所述步骤c中，乙酸乙酯-乙醇-水的比例为2-4:5-7:3-5，上相为流动相，下相为固定相。
5.如权利要求1所述一种利用高效逆流色谱纯化蜂窝草酮的方法，其特征在于，所述步骤c中，将固定相 充满逆流色谱柱，调整主机转速800-1000rpm，再将流动相泵入色谱柱，平衡后调整流速l_3ml/min，同时取流动相溶解粗结晶物，进样阀进样。
【文档编号】A61P31/04GK104069168SQ201410266486
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年6月16日 优先权日:2014年6月16日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司