一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从甘草废渣中提取甘草黄酮的方法，具体涉及一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法。将甘草废渣加入8~10倍的70~80%的乙醇溶液，再加入原料重量0.5~2%的复合酶，搅拌均匀，置于双频超声提取器中提取，得到酶解液，高温灭活，离心，取上清液，石油醚萃取；取乙醇层浓缩至原体积的1/10，上经过预处理的大孔吸附树脂柱，5~7BV的80~90%的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩；含盐酸1~10%的乙醇溶液重结晶，得到甘草黄酮。本发明以甘草废渣为原料，达到了资源合理开发利用的目的，该方法工艺简单、原料易得、收率高，适用于大规模工业化生产。
【专利说明】一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从甘草废渣中提取甘草黄酮的方法，具体涉及一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法。
【背景技术】
[0002]甘草黄酮是中药材甘草中最重要的活性成分之一，有抗溃疡、抗菌、抗炎、解痉、降血脂、镇痛等作用，1986年以来还发现甘草黄酮具有防治艾滋病的功效。迄今为止，已从甘草中分离出150多个黄酮类化合物，它们分别属于黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、查尔酮类、二氢黄酮类、二氢查尔酮类等十几大类。对甘草黄酮的研究越来越引起人们的注意和重视，可以预测，甘草黄酮具有广阔的应用前景。而我国甘草呈逐年减少之势，市场需求面临“断饮”困境。长期以来，工业化生产只把甘草中的甘草酸作为主要有效成分进行提取，而提取后的甘草废渣则被遗弃，造成了环境污染和资源浪费。甘草废渣中含大量有医用价值和经济价值的黄酮类化合物及少量的甘草酸等。因此，从甘草废渣中提取甘草黄酮，不仅可以保护生态环境，还可以获得经济效益，一举两得。
[0003]目前常用于甘草黄酮的提取分离方法有以下几种:水提取法、乙醇/水溶剂提取法、碱提酸沉法、大孔树脂吸附分离法、超临界流体萃取法等。其不足之处在于，溶剂提取法成本高，周期长；碱提酸沉法只能萃取部分甘草黄酮；超临界流体提取法设备投入大，难于工业化生产。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是，提供一种从甘草废渣中提取甘草黄酮的方法，用该方法提取的甘草黄酮，提取率高，纯度能达到80%以上，可实现工业化生产。
[0005]本发明的技术方案按照下列步骤进行:
将甘草废渣加入8~10倍的70-80%的乙醇溶液，再加入原料重量0.5^2%的复合酶(纤维素酶:果胶酶:蛋白质酶为0.4:0.4:0.2)，搅拌均匀，置于双频超声提取器中提取l(T30min，超声频率分别为25Hz、40Hz，超声功率为30(T400W，酶解液于80 °C高温灭活15min,离心，取上清液，石油醚萃取，取乙醇层浓缩至原体积的1/10，上经过预处理的大孔吸附树脂柱，5~7BV的80-90%的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩，含盐酸f 10%的乙醇溶液重结晶2次，得到甘草黄酮。
[0006]本发明所述的超声功率为双频超声作用时总功率(25KHz与40KHz各取一半)。
[0007]本发明所述的大孔吸附树脂的预处理方法为先用乙醇充分浸泡树脂，然后用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊，再用去离子水洗至无醇味，改用5%的HCl溶液浸泡3h，再用去离子水洗至PH值为中性，接着用5%的NaOH溶液浸泡3h，最后用去离子水洗至PH值为中性。
[0008]本发明所述的大孔吸附树脂型号为HP-20、D-101或NKA-9。
[0009]本发明具有如下优点:(1)本发明以甘草废渣为原料，有利于缓解现存的甘草资源匮乏的危机，保护生态环境，具有较好的社会效益和经济效益；
(2)本发明利用复合酶协同双频超声提取甘草黄酮法可以达到以下效果:提取时间短，提取率高，能源消耗低；
(3)采用石油醚萃取，可去除甘草废渣中的脂溶性杂质；
(4)经过这些预处理，上柱液有效的去除了杂质，上柱后对树脂的污染小，产品产率高，纯度大，适合于大规模生产。
[0010]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0011]实例1:
将Ikg甘草废渣加入8倍的80%的乙醇溶液，再加入原料重量0.5%的复合酶(纤维素酶:果胶酶:蛋白质酶为0.4:0.4:0.2)，搅拌均匀，置于双频超声提取器中提取30min，超声频率分别为25Hz、40Hz，超声功率为300W，酶解液于80°C高温灭活15min，离心，取上清液，石油醚萃取，取乙醇层浓缩至原体积的1/10，上经过预处理的D-101大孔吸附树脂柱，5BV的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩，含盐酸1%的乙醇溶液重结晶2次，得到甘草黄酮30g，经UV检测，纯度为85.4%。
[0012]实例2:
将Ikg甘草废渣加入9倍的75%的乙醇溶液，再加入原料重量1.5%的复合酶(纤维素酶:果胶酶:蛋白质酶为0.4:0.4:0.2)，搅拌均匀，置于双频超声提取器中提取20min，超声频率分别为25Hz、40Hz，超声功率为400W，酶解液于80°C高温灭活15min，离心，取上清液，石油醚萃取，取乙醇层浓缩至原体积的1/10，上经过预处理的HP-20大孔吸附树脂柱，7BV的90%的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩，含盐酸5%的乙醇溶液重结晶2次，得到甘草黄酮29g，经UV检测，纯度为86.2%。
[0013]实例3: 将1kg甘草废渣加入10倍的70%的乙醇溶液，再加入原料重量2%的复合酶(纤维素酶:果胶酶:蛋白质酶为0.4:0.4:0.2)，搅拌均匀，置于双频超声提取器中提取lOmin，超声频率分别为25Hz、40Hz，超声功率为350W，酶解液于80°C高温灭活15min，离心，取上清液，石油醚萃取，取乙醇层浓缩至原体积的1/10，上经过预处理的NKA-9大孔吸附树脂柱，6BV的85%的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩，含盐酸10%的乙醇溶液重结晶2次，得到甘草黄酮32g，经UV检测，纯度为84.1%。
【权利要求】
1.一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法，其特征在于:将甘草废渣加入8~10倍的70-80%的乙醇溶液，再加入原料重量0.5^2%的复合酶，搅拌均匀，置于双频超声提取器中提取l(T30min，超声频率分别为25Hz、40Hz，超声功率为30(T400W，酶解液于80°C高温灭活15min，离心，取上清液，石油醚萃取，取乙醇层浓缩至原体积的1/10，上经过预处理的大孔吸附树脂柱，5~7BV的80-90%的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩，含盐酸f 10%的乙醇溶液重结晶2次，得到甘草黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法，其特征在于，所述的复合酶为纤维素酶、果胶酶和蛋白质酶。
3.根据权利要求1或2所述的一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法，其特征在于，所述的纤维素酶、果胶酶和蛋白质酶的重量比为0.4:0.4:0.2。
4.根据权利要求1所述的一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法，其特征在于，所述的超声功率为双频超声作用时总功率(25KHz与40KHz各取一半)。
5.根据权利要求1所述的一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法，其特征在于，所述的大孔吸附树脂的预处理方法为先用乙醇充分浸泡树脂，然后用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊，再用去离子水洗至无醇味，改用5%的HCl溶液浸泡3h，再用去离子水洗至PH值为中性，接着用5%的NaOH溶液浸泡3h，最后用去离子水洗至PH值为中性。
6.根据权利要求1所述的一种复合酶协同双频超声提取甘草黄酮的方法，其特征在于，所述的大孔吸附 树脂型号为HP-20、D-101或NKA-9。
【文档编号】A61P29/00GK104069157SQ201410266464
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年6月16日 优先权日:2014年6月16日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司