用于治疗由剪接异常引起的疾病的抑制剪接机理的化学分子的制作方法
【专利摘要】本发明涉及式I-XXI之一的化合物；包含至少一种这样的化合物的药物组合物；和至少一种这样的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于在受试者中治疗由至少一种剪接异常引起的遗传疾病。
【专利说明】用于治疗由剪接异常引起的疾病的抑制剪接机理的化学分子
[0001]本申请是申请日为2009年I月12日、申请号为200980106361.1、发明名称为“用于治疗由剪接异常引起的疾病的抑制剪接机理的化学分子”的中国发明专利申请的分案申请。
【技术领域】
[0002]本专利申请要求2008年I月10日提交的法国专利申请FR08/50144的优先权，它通过参考并入本文。
[0003]本发明涉及新的吲哚衍生的化合物，其用于制备可用于治疗剪接过程的变化引起的疾病的组合物。
【背景技术】
[0004]已经知道某些吲哚衍生的化合物例如玫瑰树碱衍生物和氮杂-玫瑰树碱衍生物作为嵌入分子用于校正基因表达，尤其是DNA复制中的功能异常。它们已经被更具体地描述用于治疗癌症、白血病或AIDS等疾病(具体参见专利FR2，627，493，FR2, 645，861，FR2, 436，786)。
[0005]关于AIDS 的现有治疗，目的在于减少HIV感染的患者的病毒负载的各种方案，利用预期会抑制病毒逆转录酶的酶活性或参与病毒蛋白成熟的蛋白酶的酶活性的分子。关于逆转录酶抑制剂，它们在性质上可以是核苷的(NRTIs)、非核苷的(NNRTIs)或核苷酸的。使用这些化合物的目的是阻止生成逆转录病毒基因组的DNA拷贝，并从而阻止整合进入宿主细胞的基因组中。蛋白酶抑制剂(PIs)会阻碍病毒蛋白的适当成熟，并造成具有改变的感染能力的不完整颗粒的生成。存在另一类抗逆转录病毒的化合物，使用它阻止病毒进入细胞的能力。这些进入的抑制剂可以是干扰病毒糖蛋白gp41或gpl20与⑶4细胞膜融合的肽，或靶向HIV细胞共受体CCR5和CXCR4的分子。还已经利用类似于HIV整合酶的细胞蛋白的缺失，开发抑制该酶活性的新的抗-HIV分子。尽管许多整合酶抑制剂处于临床试验期，还没有分子可在市场上得到。
[0006]关于癌症，超过90 %源自上皮细胞的恶性转化，在大多数病例中，癌症患者死亡不是由于原发性肿瘤，而是由于源自原发性肿瘤的转移。导致转移和它们的后续侵入的该恶化进展最初包含细胞粘附的丧失和能力性的增加，因而允许侵入细胞从起始部位逃逸和迁移到靶组织。在大量的病例中，肿瘤进展机理似乎与异常剪接有关，后者导致具有原-致癌活性的同种型的形成。目前，不存在具有抗侵入功能的分子。这突出了缺乏真正有力的抗击转移的工具。目前在市场上也缺乏这类分子，使它们具有最高级别的经济潜力。
[0007]假肥大性肌营养不良(DMD)是一种严重的疾病，它源自肌养蛋白基因中的突变。该蛋白的缺失导致骨骼肌和心肌的退化。目前构思出几种治疗策略，包括所谓的外显子跳跃，它的原理是从肌养蛋白切掉携带突变的内部外显子，从而生成更短的、但是有功能的肌养蛋白。
[0008]核纤维蛋白病(Laminopathy)是导致令人不满意的生活质量的病症,需要昂贵的护理，且在许多病例中，会导致过早死亡(即，横纹肌组织的核纤维蛋白病和特征在于过早老化的核纤维蛋白病)。核纤维蛋白病是由核纤层蛋白(普遍存在的位于细胞核中的蛋白)和它们的分子伴侣中的功能变化造成的。大多数早衰或过早老化综合症病例是由在外显子11中(即在特异性地编码核纤层蛋白A的基因部分中)发生的复发性新生点突变(c.1824C>T, “G608G”)造成。已经证实，该突变会改变剪接机理，并导致生成截短的核纤层蛋白A前体(“progerin”，核纤层蛋白Δ 50，p.V607_Q656del),对残余的野生型蛋白发挥显性负效应。
[0009]在所有这些病理状态(pathology)中，剪接过程起着关键的作用。该细胞内剪接过程包括，消除前信使RNA中的内含子，以生成可以被细胞的翻译机理使用的成熟信使RNA (SHARP, Cell, vol.77, p.805-815，1994)。在选择性剪接的情况下，相同的前体可以是编码具有不同功能的蛋白的信使RNA的来源(BLACK，Annu.Rev.B1chem.vol.72，p.291-336，2003)。5’和3’剪接位点的精确选择因而是产生多样性和可以根据组织类型或在生物发育过程中调苄基因表达的机理。参与该选择的因子包括称作SR的蛋白两家族，其特征在于存在一个或两个RNA识别基序(RRM)和称作RS结构域的富含精氨酸和丝氨酸残基的结构域(MANLEY&TACKE, Genes Dev.，vol.10, p.1569-1579，1996)。通过结合被称作ESE (外显子剪接增强子)或ISE (内含子剪接增强子)的前-mRNA的短外显子或内含子序列，SR蛋白能以剂量依赖性的方式激活次佳的剪接位点，并确保包含外显子(GRAVELEY, RNA, vol.6，p.1197-1211，2000)。选择性剪接中SR蛋白的活性是特异性的，在对应的基因失活的情况下是致命的(WANG等人，Mol.Cell, vol.7，p.331-342，2001)。
[0010]人基因组的测序和EST(已表达序列标志)库的分析已经揭示，65%的基因以选择性剪接的变体形式表达(EWING&GREEN, Nat.Genet., vol.25，p.232-234，2000 ；JOHNSON等人，Science, vol.302，p.2141-2144，2003)。该机理因而是可以影响参与调节剪接的因子的修饰和影响该调节必需的序列的突变的有利靶标。目前，据估计大约50%的引起遗传疾病的点突变会诱导异常剪接。这些突变可以通过灭活或建立剪接位点来干扰剪接，但是也通过修饰或产生调节元件例如特定基因中的剪接增强子或剪接沉默子来干扰剪接(CARTEGNI 等人，Nat.Rev.Genet.，vol.3，p.285-298，2002 ；TAZI 等人，TIBS, vol.40，p.469-478，2005)。
[0011]目前开发的校正这些剪接缺陷的策略依赖于各类分子的应用(TAZI等人，同上，2005)。
[0012]一种策略是针对开发新的分子来校正或消除异常剪接，例如，依赖于干扰这类剪接的蛋白的过表达(NISSM-RAFINIA 等人，Hum.Mol.Genet.，vol.9，p.1771-1778，2000 ；H0FINANN 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.，vol.97，p.9618-9623，2000)。
[0013]其它策略依赖于反义寡核苷酸(SAZANI等人，Nat.B1technol.，vol.20, p.1228-1233，2002 ；SAZANI&K0LE, Prog.Mol.Subcell.B1l.，vol.31，p.217-239，2003)或PNA(CARTEGNI 等人，Nat.Struct.B1l.，vol.10，p.120-125，2003)的应用，它们分别能抑制或激活剪接事件。
[0014]另一种策略依赖于影响目标前-mRNA的剪接效率的化合物的鉴定(ANDREASSI等人,Hum.Mol.Genet., vol.10, p.2841-2849，2001)。
[0015]最后，已经描述了基于使用反式剪接来替换突变型外显子的策略(LIU等人，Nat.B1technol., vol.20, p.47-52，2002)。
[0016]上述开发校正或消除异常剪接的策略的缺点之一是它们的生产成本。的确，生产必须修饰以提高它们的稳定性的反义寡核苷酸和PNA分子的成本很高。
[0017]上述开发策略的另一个缺点是，它们需要使用表达载体，例如，用于基于使用反式剪接的策略。
[0018] 申请人:提交的要求法国优先权FR0310460和FR0400973的国际申请W005023255，公开了吲哚衍生物用于治疗与细胞中前信使RNA剪接过程有关的疾病的用途。
[0019]因而，最近证实，某些吲哚衍生物可以特别有效地治疗转移癌和AIDS(BAKK0UR等人,PLoS Pathogens, vol.3, p.1530-1539，2007)。
[0020]但是，所述的化合物具有含有4个环的扁平结构，其具有嵌入DNA碱基之间的缺点，因而可以导致细胞毒性。
[0021]为了使这些吲哚衍生物嵌入DNA碱基之间的风险最小化，本发明人开发了可以特别有效地治疗与剪接过程有关的疾病的新的化合物，而它们以令人惊奇的方式，具有明显小于现有技术的吲哚衍生物的细胞毒性。另外，这些化合物能选择性地抑制某些剪接事件。
【专利附图】
【附图说明】
图1显示了得到的聚丙烯酰胺凝胶的细节，显示出从未处理的细胞(Clt)或用化合物IDC16、C48、C49、C55或C56处理过的细胞得到的不同的同种型(Nef2, RevU Rev2、Nef3,Nef4.Nef5.Tatl 和 Tat2)。
图2表明，与阴性对照(CTL)相比，化合物MB260、FMB008和FMMB22.3强烈抑制细胞迁移。
【发明内容】
[0022]本发明的第一个目的因而涉及下式(I)-(XXI)之一的化合物:
[0023]
【权利要求】
1.一种化合物，所述化合物具有下式(IX):
其中， ?Xl代表氮原子或CRlO基团，其中RlO选自氢原子或NR11R12或ORll基团，其中Rll和R12彼此独立地代表氢原子、C1-C3烷基或三氟甲基； ?Rl代表氢原子、NR11R12或0R12基团，其中Rll和R12如上面所定义，当Rl代表NR11R12或0R12基团时，Xl代表CH基团；?Y2代表氮原子或CRll基团，其中Rll选自氢原子、
基团或
基团，其中RH代表: ?氢原子，或 ?直链的或支链的C1-C3烷基，其中一个或多个碳原子可以被氮原子置换，所述烷基被一个或多个-OH和/或=O基团任选地取代；当R8或R8’不是氮原子或CH基团时且当R8’不是氢或卤素原子时，Y2代表氮原子或CRll基团,其中Rll是氢原子， ?R8和R8’代表氢或卤素原子、
或c( = 0)NR18R19基团，其中R18和R19彼此独立地代表: ?氢原子，或 ?直链的或支链的C1-C3烷基，其中一个或多个碳原子可以被氮原子置换，所述烷基被一个或多个-OH和/或=O基团和/或诸如下述的取代的或未取代的基团任选地取代:
当Y2不是氮原子或CH基团时且当R8’不是氢或卤素原子时，R8代表氢或卤素原子；和 当Υ2不是氮原子或CH基团时且当R8不是氢或卤素原子时，R8’代表氢或卤素原子； ?R4代表氢原子或C1-C3烷基或
基团，当R5或R6不是氢原子时，R4代表氢原子或C1-C3烷基；
?R5代表氢原子、C( = 0)NR14R15基团或
基团，当R4或R6不是氢原子时，R5代表氢原子；
?R6代表氢原子或C ( = 0)NR14R15基团或基团’且当R5不是氢原子时或当R4不是氢原子或C1-C3烷基时，R6代表氢原子； ?R14和R15彼此独立地代表: 氢原子，或 直链的或支链的Cl-ClO烷基，其中一个或多个碳原子可以被氮原子置换，所述烷基被一个或多个-OH和/或=O基团和/或诸如下述的取代的或未取代的基团任选地取代:
?R21和R22代表氢原子或甲基； 所述化合物的药学上可接受的盐、其异构体和/或它们的混合物。
2.一种化合物，所述化合物选自: ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-[4- ((E) -2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]_苯甲酰胺；?N-(3-甲基-丁基)-3-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?(N- 二乙氨基)-3-(1-{3-[4-((Ε)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1H-1, 2，3-三唑-4-基)-甲胺; ?3-(1-{3-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1Η-1，2，3-三唑-4-基)-丙-1-醇；?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-甲基-4- [4- ((E) -2-吡啶_4_基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?3-甲基-N-(3-甲基-丁基)-4-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?3-(1-{4-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1Η-1，2，3-三唑-4-基)-丙-1-醇； ?4-甲基-N-(3-甲基-丁基)-3-[3-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-[3- ((E) -2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]_苯甲酰胺； ?N-(3-甲基-丁基)-3-[3-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?(N- 二乙氨基)_3_(1-{3-[3-((E)-2-吡卩定-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1H-1, 2，3-三唑-4-基)-甲胺; ?3-(1-{3-[3-((E)-2-吡 P定 _4_ 基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1H-1, 2, 3- 二唑-4-基)-丙-1-醇； ?N-(3- 二乙氨基-丙基)-3-甲基-4-[3-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-4- [3- ((E) -2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-[3- ((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-3- [3-((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-甲基-4- [3- ((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N-(3-甲基-丁基)-3-甲基-4-[3-((E)-(4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-4-[3- ((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N-(3- 二乙氨基-丙基)_3_[3-((E)-2-吡唳-2-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酸胺； ?N-(3-甲基-丁基)-3-[3-((E)-2-吡啶-2-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?3-(1- {3- [4- ((E) -2-批 P定 _4_ 基乙烯基)-苯基氨基]-苯基} -1H-1, 2, 3- 二唑-4-基)-丙-1-醇； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-4- [3- ((E) -2-吡啶-2-基-乙烯基)-苯基氨基]_苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-3-甲基-4- [3- ((E) -2-吡啶-2-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺；和 3-(1- {3- [3- ((E) -2-批 P定 _2_ 基乙烯基)-苯基氨基]-苯基} -1H-1, 2, 3- 二唑-4-基)-丙-1-醇。
3.一种药物组合物，其中所述药物组合物包含权利要求1的至少一种化合物,和任选的药学上可接受的载体。
4.权利要求1的至少一种化合物在制备药物中的应用，所述药物用于在受试者中治疗与细胞中前信使RNA的剪接过程有关的疾病，所述疾病是由剪接过程的改变引起的遗传疾病，所述疾病选自=Frasier综合症，与染色体17有关的额颞叶痴呆，利氏综合症，非典型囊性纤维化病，与Tau蛋白突变有关的阿尔茨海默病，影响活运动神经元基因的肌萎缩，与血清素剪接的失调有关的抑郁症，和乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、子宫癌。
5.权利要求4的应用，其中所述疾病是癌症，该癌症选自:乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌和子宫癌。
6.权利要求1的至少一种化合物在制备药物中的应用，所述药物用于在受试者中治疗与细胞中前信使RNA的剪接过程有关的疾病，其中所述疾病与老化一起出现，所述疾病选自:动脉粥样硬化、胰岛素抵抗的II型糖尿病、白内障、骨质疏松症和皮肤老化。
7.权利要求1的至少一种化合物在制备药物中的应用，所述药物用于在受试者中治疗与细胞中前信使RNA的剪接过程有关的疾病，其中所述疾病是病毒起源的疾病。
8.权利要求1的至少一种化合物在制备药物中的应用，所述药物用于在受试者中治疗与细胞中前信使RNA的剪接过程有关的疾病，其中所述疾病是AIDS。
9.权利要求1中至少一种化合物在制备药物中的应用，所述药物用于在受试者中治疗与基因突变有关的疾病，该疾病可以通过外显子跳跃进行治疗。
10.权利要求1中至少一种化合物在制备药物中的应用，所述药物用于在受试者中治疗与基因突变有关的疾病 ，该疾病是假肥大性肌营养不良。
【文档编号】A61P25/28GK104130242SQ201410301260
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2009年1月12日 优先权日:2008年1月10日
【发明者】J·塔泽, D·格里尔森, F·马于托-贝茨尔, P·鲁 申请人:国家科研中心, 居里研究所, 蒙彼利埃第二科学与技术大学