缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法，该缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法包括：准备鼠李糖乳杆菌、准备种子培养基、种子培养、菌种活化与传代、扩大培养、原料的混合、造粒、活菌数的检测。本发明利用鼠李糖乳杆菌生产对酒精性肝损伤有缓解作用的颗粒食品，生产原料易得，生产成本较低，产品得率较高，生产工艺简单，产品对人体无任何副作用，且对酒精性肝脏有很好的保护作用。
【专利说明】缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品加工【技术领域】，尤其涉及一种缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌 颗粒食品的制作方法。
【背景技术】
[0002] 20世纪60年代，大量流行病学调查资料显示，全世界每年死于肝硬化者至少30万 人。中国是酒业消费和生产大国，酒类产量逐年升高，目前中国酗酒者已高达3亿多人。近 年来，我国由酒精所致的肝损害的发病率呈逐年上升趋势，已成为仅次于病毒性肝炎的第 二大肝病，酒精性肝病在我国发病情况不容忽视。中国嗜酒人数众多，过量饮酒不仅危害健 康，增加国家和个人医疗费用支出，而且还会造成社会主要劳动力的减少，制约中国经济的 发展。因此，对酒精性肝病治疗药物的研究，不仅是临床诊断治疗的需求，也是全社会的需 求。
[0003] 目前有关酒精性肝病的临床治疗主要采取戒酒、营养支持和对症治疗等综合方 法，其目的是改善酒精性肝病临床症状、纠正继发性营养不良、阻止酒精性肝病的进一步发 展、抑制肝硬化的形成。一些治疗措施都是在戒酒的基础上进行的。有关酒精性肝病的治 疗，目前尚无特效药物。皮质激素是目前研究最多的药物，但东区实验表明，地塞米松等皮 质激素等皮质激素类药物不但不能降低白酒灌喂大鼠的死亡率，而且通过肝脏电镜观察发 现对肝损伤亦无保护作用，可见皮质激素的治疗还有争论，有带进一步研究。近年来，临床 上采取补充S-辅酶-L-甲硫氨酸、S0D、谷胱甘肽、水飞蓟素、VA和VE等抗氧化剂的方法， 减低氧化损伤，阻止病情发展，但临床疗效均不佳。
[0004] 益生菌是一类能在肠道内定制，维护肠道菌群平衡，并调节肠道上皮细胞间的连 接，对改善上皮细胞的屏障动能有重要影响的有益微生物群落。在预防和治疗酒精性肝损 伤方面，益生菌能抑制肠道内革兰氏阴性细菌生长、保护肠上皮细胞的屏障功能，从而阻止 内毒素从肠道转移到肝脏。大量动物和临床实验证明鼠李糖乳杆菌能够耐受动物消化道 环境，并能够在人和动物肠道内定植，起到调节肠道菌群、排除毒素和提高机体免疫力等作 用。由于鼠李糖乳杆菌对酒精性肝脏有一定的保护作用，且对人体无副作用，它为缓解酒精 肝提供了新途径。
[0005] 现有治疗酒精性肝病的方法存在的治疗效果不佳，副作用较大。
【发明内容】
[0006] 本发明实施例的目的在于提供一种缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品 的制作方法，旨在解决现有治疗酒精性肝病的方法存在的治疗效果不佳，副作用较大的问 题。
[0007] 本发明实施例是这样实现的，一种缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的 制作方法，该缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法包括：
[0008] 步骤一，准备鼠李糖乳杆菌；
[0009] 步骤二，准备种子培养基:MRS培养基按要求配制后115°C灭菌15min;
[0010] 步骤三，种子培养：将鼠李糖乳杆菌的菌种接种于已灭菌的冷却的种子培养基中 37°C下进行培养18个小时，得种子液；
[0011] 步骤四，菌种活化：将得到的种子液进行活化两次，接种量为3%?5%，37°C培养 18个小时；
[0012] 步骤五，扩大培养：将得到的发酵液按3%?5%的接种量接种于灭菌的200ml培 养基中，37°C摇床培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟；
[0013] 步骤六，原料的混合：将低淀粉、脱脂奶粉、乳清蛋白粉、微晶纤维素、麦芽糖按 40 :10 :10 :9 :9的配比进行混合，然后加上述混合物总重30%?50%的发酵液，搅拌均匀；
[0014] 步骤七，造粒：将混合物料分批加入摇摆颗粒机中进行滚压成条处理，35°C鼓风干 燥哄干，真空密封，得到最终成品；
[0015] 步骤八，活菌数的检测：将得到的成品取lg，无菌生理盐水或PBS缓冲液梯度稀释 后采用涂布法计算活菌数。
[0016] 进一步，在步骤六中原料混合，加入发酵液是要缓慢加入，边加入边搅匀，不能一 次加入，造粒前物料的最佳状态是手握成团，松手后又能散开。
[0017] 进一步，在步骤七中，原料滚压成条的长度为0. 5cm，通过控制添加在粉末中发酵 液的量来控制成条的长度，在抛圆机进行抛圆时，技术参数为风速25HZ，转速为35HZ? 40HZ，烘干温度应低于37°C。
[0018] 进一步，在步骤八中，对菌液稀释时，用无菌生理盐水或PBS缓冲液，活菌数大于 108CFU/g食品。
[0019] 进一步，该缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法的具体步骤 为：
[0020] 步骤一，菌种的选择：选择鼠李糖乳杆菌；
[0021] 步骤二，准备种子培养基:MRS培养基按要求配制后，115°C灭菌15min;
[0022] 步骤三，种子培养：将步骤一的菌种接种于已灭菌的冷却的种子培养基中37°C下 进行培养18个小时，得种子液；
[0023] 步骤四，菌种活化：将步骤三得到的种子液进行活化两次，接种量为3%?5%， 37 °C培养18个小时；
[0024] 步骤五，扩大培养：将步骤四得到的发酵液按3%?5%的接种量接种于灭菌的 200ml培养基中，37°C摇床培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟；
[0025] 步骤六，原料的混合：将淀粉、脱脂奶粉、乳清蛋白粉、微晶纤维素、麦芽糖按40: 10 :10 :9 :9的配比进行混合，然后加混合物总重30%?50%的步骤五中鼠李糖乳杆菌发 酵液，搅拌均勻；
[0026] 步骤七，造粒：将步骤六中的粉末分批加入摇摆式造粒机中进行造粒，35°C鼓风干 燥哄干，真空密封，得到最终成品；
[0027] 步骤八，活菌数的检测：将步骤七中得到的成品取lg，用无菌生理盐水或PBS缓冲 液梯度稀释后采用涂布法计算活菌数。
[0028] 本发明提供的缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法，利用鼠李 糖乳杆菌生产对酒精性肝损伤有缓解作用的颗粒食品，生产原料易得，生产成本较低，产品 得率较高，生产工艺简单，产品对人体无任何副作用，且对酒精性肝脏有很好的保护作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0029]图1是本发明实施例提供的缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作 方法的流程图；
[0030]图2-图5是本发明实施例提供的对血清中甘油三酯（TG)、脂多糖（LPS，内毒素）、 谷丙转氨酶（ALT)和肿瘤坏死因子（TNF-a)分析结果示意图。
【具体实施方式】
[0031] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于 限定本发明。
[0032] 下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0033] 如图1所示，本发明实施例的缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作 方法包括以下步骤：
[0034] SlOl:准备鼠李糖乳杆菌；
[0035]S102:准备种子培养基:MRS培养基按要求配制后115°C灭菌15min;
[0036]S103:种子培养：将鼠李糖乳杆菌的菌种接种于已灭菌的冷却的种子培养基中 37°C下进行培养18个小时，得种子液；
[0037]S104:菌种活化：将得到的种子液进行活化两次，接种量为3%?5%，37°C培养18 个小时；
[0038]S105:扩大培养：将得到的发酵液按3%?5%的接种量接种于灭菌的200ml培养 基中，37°C摇床培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟；
[0039]S106:原料的混合：将低淀粉、脱脂奶粉、乳清蛋白粉、微晶纤维素、麦芽糖等按 40:10:10 :9 :9的配比进行混合，然后加上述混合物总重30%?50%的发酵液，搅拌均匀；
[0040]S107:造粒：将混合物料分批加入摇摆颗粒机中进行滚压成条处理，35°C鼓风干 燥哄干，真空密封，得到最终成品；
[0041]S108:活菌数的检测：将得到的成品取lg，无菌生理盐水或PBS缓冲液梯度稀释后 采用涂布法计算活菌数。
[0042] 在步骤S106中原料混合，加入发酵液是要缓慢加入，边加入边搅匀，不能一次加 入，造粒前物料的最佳状态是手握成团，松手后又能散开；
[0043] 在步骤S107中，原料滚压成条的长度大约为0. 5cm，通过控制添加在粉末中发酵 液的量来控制成条的长度，在抛圆机进行抛圆时，技术参数为风速25HZ，转速为35HZ? 40HZ，烘干温度应低于37°C，37°C是鼠李糖乳杆菌的最佳生长温度；
[0044] 在步骤S108中，对菌液稀释时，可以用无菌生理盐水或PBS缓冲液，活菌数大于 108CFU/g食品.
[0045] 本发明的具体步骤为：
[0046] (1)菌种的选择：本发明选择鼠李糖乳杆菌（LactobacillusrhamnosusB10);
[0047] (2)准备种子培养基：MRS培养基按要求配制后，115°C灭菌15min;
[0048] (3)种子培养：将步骤（1)的菌种接种于已灭菌的冷却的种子培养基中37°C下进 行培养18个小时，得种子液；
[0049] (4)菌种活化：将步骤（3)得到的种子液进行活化两次，接种量为3%?5%，37°C 培养18个小时；
[0050] (5)扩大培养：将步骤四得到的发酵液按3%?5%的接种量接种于灭菌的200ml 培养基中，37°C摇床培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟；
[0051] (6)原料的混合：将淀粉、脱脂奶粉、乳清蛋白粉、微晶纤维素、麦芽糖按40 :10: 10 :9 :9的配比进行混合，然后加混合物总重30%?50%的步骤（5)中鼠李糖乳杆菌发酵 液，搅拌均匀；
[0052] (7)造粒：将步骤（6)中的粉末分批加入摇摆式造粒机中进行造粒，35°C鼓风干燥 哄干，真空密封，得到最终成品；
[0053] (8)活菌数的检测：将步骤（7)中得到的成品取lg，用无菌生理盐水或PBS缓冲液 梯度稀释后采用涂布法计算活菌数。
[0054] 本发明加入发酵液是要缓慢加入，边加入边搅匀，不能一次加入。造粒前粉末的最 佳状态是手握成团，松手后又能散开。
[0055] 本发明原料造粒成条的长度大约为0.5cm，通过控制添加在粉末中发酵液的量来 控制成条的长度。烘干温度应低37°C，保证产品活菌数不受影响。
[0056] 结合本发明的具体实施例和试验队本发明的应用效果做进一步的说明：
[0057] -、实施例：
[0058] (1)菌种：鼠李糖乳杆菌（LactobacillusrhamnosusB10);
[0059] (2)准备种子培养基：称取22gMRS培养基溶解在200ml蒸馏水中，115°C灭菌 15min；
[0060] (3)种子培养：在无菌操作台中，用接种环挑取鼠李糖乳杆菌冻干粉接种于已灭 菌的冷却的培养基中，37°C下进行培养18个小时，得种子培养液；
[0061] (4)菌种活化：将种子液进行活化两次，接种量为3%，37°C培养18个小时；
[0062] (5)扩大培养：将步骤（4)得到的发酵液按3%的接种量接种于200ml培养基中， 200ml培养基装在IOOOml的烧瓶中，37°C摇床培养18个小时，摇床的转速IOOrpm/分钟；
[0063] (6)原料的混合：称取淀粉200g、脱脂奶粉50g、乳清蛋白粉50g、微晶纤维素45g、 麦芽糖45g混合，然后缓慢加入160ml的发酵液，搅拌均勻；
[0064] (7)造粒：将上述得到的粉末分批加入摇摆颗粒机中进行滚压成0. 5cm左右的长 条，35°C鼓风干燥哄干，真空密封，得到最终成品；
[0065] (8)活菌数的检测：称取Ig产品，生理盐水梯度稀释后，取合适稀释度各0.ImL 涂平板，37 °C恒温培养24个小时，观察到平板上长出菌落，计算平均数，结果平均为 4. 6*109cfu/g;
[0066] 二、酒精肝损伤功能评价试验：
[0067] 1、动物试验设计：
[0068] 酒精性肝损伤小鼠模型，取C57BL/6小鼠60只，体重18?22g，按体重随机分为 4组，分组见表1，采用Lieber-DeCarli液体饲料（40%脂肪，5%酒精或等能量麦芽糖）饲 喂，取鼠李糖乳杆菌颗粒食品按IO8CFU二/小鼠/天用量与LiberDiCarli酒精饲料混合 均匀，第1组，与第2组摄食量等量喂养（以等能量麦芽糖代替酒精）；第2-3组，任意摄食； 每天测定小鼠的食物摄入量，每周测体重一次，喂养8周后，处死，收集血液和组织，为了观 察鼠李糖乳杆菌颗粒食品是否具有预防和改善酒精肝损伤功能，第3组动物酒精刺激6周 后，再进行鼠李糖乳杆菌颗粒食品干预；
[0069] 表1动物分组
[0070]
【权利要求】
1. 一种缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法，其特征在于，该缓解 酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法包括： 步骤一，准备鼠李糖乳杆菌BlO冻干菌粉； 步骤二，准备种子培养基：MRS培养基MRS培养基：牛肉膏10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、 葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、吐温80取0. ImU硫酸镁0. 58g、硫酸锰0. 28g、加适 量蒸馏水溶解后定容至1000ml，调节pH6. 2?6. 4,按要求配制后115°C灭菌15min备用； 步骤三，种子培养：将鼠李糖乳杆菌的菌种接种于已灭菌的冷却的种子培养基中37°C 下进行培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟，得种子液； 步骤四，菌种活化：将得到的种子液接种于5mLMRS培养基，进行传代两次，接种量为 3%?5%，37°C培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟，得工作发酵剂； 步骤五，扩大培养：将得到的工作发酵剂按3%?5%的接种量接种于灭菌的200ml培 养基中，37°C摇床培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟，得发酵液； 步骤六，原料的混合：将低淀粉、脱脂奶粉、乳清蛋白粉、微晶纤维素、麦芽糖按40 :10 : 10 :9 :9的配比进行混合，然后加上述混合物总重30%?50%的发酵液，搅拌均匀； 步骤七，造粒：将混合物料分批加入摇摆颗粒机中进行滚压成条处理，35°C鼓风干燥哄 干，真空密封，得到最终成品； 步骤八，活菌数的检测：将得到的成品取lg，无菌生理盐水或PBS缓冲液梯度稀释后采 用涂布法计算活菌数。
2. 如权利要求1所述的缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法，其特 征在于，在步骤六中原料混合，加入发酵液是要缓慢加入，边加入边搅匀，造粒前物料的最 佳状态是手握成团，松手后又能散开。
3. 如权利要求1所述的缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法，其特 征在于，在步骤七中，原料滚压成条的长度为0. 5cm，通过控制添加在粉末中发酵液的量来 控制成条的长度，在抛圆机进行抛圆时，技术参数为风速25HZ，转速为35HZ?40HZ，烘干温 度应低于37 °C。
4. 如权利要求1所述的缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法，其特 征在于，在步骤八中，对菌液稀释时，用无菌生理盐水或PBS缓冲液，活菌数大于108CFU/g 食品。
5. 如权利要求1所述的缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法，其特 征在于，该缓解酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌颗粒食品的制作方法的具体步骤为： 步骤一，菌种的选择：选择鼠李糖乳杆菌； 步骤二，准备种子培养基：MRS培养基按要求配制后，115°C灭菌15min ; 步骤三，种子培养：将步骤一的菌种接种于已灭菌的冷却的种子培养基中37°C下进行 培养18个小时，得种子液； 步骤四，菌种活化：将步骤三得到的种子液进行活化两次，接种量为3%?5%，37°C培 养18个小时； 步骤五，扩大培养：将步骤四得到的发酵液按3 %?5 %的接种量接种于灭菌的200ml 培养基中，37°C摇床培养18个小时，摇床的转速为100转/分钟； 步骤六，原料的混合：将淀粉、脱脂奶粉、乳清蛋白粉、微晶纤维素、麦芽糖按40 :10 : 10 :9 :9的配比进行混合，然后加混合物总重30%?50%的步骤五中鼠李糖乳杆菌发酵液， 搅拌均匀； 步骤七，造粒：将步骤六中的粉末分批加入摇摆式造粒机中进行造粒，35°C鼓风干燥哄 干，真空密封，得到最终成品； 步骤八，活菌数的检测：将步骤七中得到的成品取lg，用无菌生理盐水或PBS缓冲液梯 度稀释后采用涂布法计算活菌数。
【文档编号】A61K35/747GK104305168SQ201410378347
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年7月29日 优先权日:2014年7月29日
【发明者】王玉华, 张予心, 宋秋梅, 朴春红, 刘俊梅, 于寒松, 张晓蕾, 武岩峰 申请人:吉林农业大学