一种孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于天然抗菌药物【技术领域】，具体涉及从顶花板凳果中提取分离得到的一种孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，所述孕甾烷生物碱类化合物分子式为C28H46N2O2，化学结构式为：。本发明的孕甾烷生物碱类化合物DSHP对耐药菌表现出全程的生长抑制作用，在浓度为50μg/mL时也表现出良好的杀菌活性，与传统抗生素相比，对感染的小鼠肝、肾、脾、肺等器官有明显的保护作用且不易产生诱导耐药。
【专利说明】-种孕當烧生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然抗菌药物【技术领域】，具体涉及从顶花板凳果中提取分离得到的一 种孕留焼生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 众所周知，由于抗生素的滥用，各种细菌的耐药性问题日益突出，无药可治的细菌 感染将严重影响人类的生存。特别是近二十年来，随着新型抗菌药物的发明和使用，各种致 病菌的新型耐药性也伴之而来，事实表明目前新抗生素的研发速度完全跟不上细菌变异产 生耐药性的速度，造成了临床用于耐药菌的有效抗菌药物正日趋减少，形势愈发严峻，为有 效对抗日益严重的耐药细菌，寻找具有新型结构且不易产生诱导耐药的抗菌药物，已经成 为全世界高度关注的焦点和当今各国相关学科研究的当务之急。
[0003] 时至今日，在全球新上市的药物中，直接或间接来自于天然产物或其衍生物的仍 占较大比重。生物碱类化合物是人类研究最早和最多的具有生物活性的一类天然有机化合 物，往往是众多天然药物的有效成分，已有大量单体成分及其衍生物应用于临床。黄杨科植 物富含生物碱类成分，由于药理活性广泛，该科许多植物长久W来已被药用，如细叶黄杨、 金丝矮巧巧、顶花板凳果、野扇花、东方野扇花、长柄野扇花、大叶野扇花等均为较有名的药 用植物。板凳果属植物隶属于黄杨科，共有H个种，美洲产一种，我国产有两个种和两个变 种，分别为顶花板凳果、板凳果、多毛板凳果和光叶板凳果，其中顶花板凳果的干燥全草在 陕西俗名为"捆仙走"，是秦岭"太白走药"之一，从该植物获得的生物碱化合物隶属于孕留 焼类富贵草型生物碱，对该生物碱化合物进行抑菌杀菌试验，对耐药菌表现出全程的生长 抑制作用及良好的杀菌活性。
【发明内容】
[0004] 本发明涉及一种来源于顶花板凳果的孕留焼生物碱类化合物在制备抗菌药物中 的应用。本发明涉及的孕留焼生物碱类化合物是从顶花板凳果中分离提取出来，用于对抗 日益严重的耐药细菌，寻找具有新型结构且不易产生诱导耐药的抗菌药物。
[0005] 本发明的技术方案是：一种孕留焼生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，所 述孕留焼生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，所述孕留焼生物碱类化合物分子式为 C2sH4eN2〇2,化学名称为20〇-二甲胺基-3目-二甲帰丙醜胺基-16目-轻基-孕留-5化)-帰， 简称为DSHP，化学结构式如下：
【权利要求】
1?一种孕甾烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特征在于：所述孕甾烷生 物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，所述孕留烷生物碱类化合物分子式为C28H46N 2O2, 化学结构式如下：
2. 根据权利要求1所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特 征在于：所述孕留烷生物碱类化合物的来源是从顶花板凳果千燥全草中提取获得。
3. 根据权利要求2所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特 征在于：所述孕留烷生物碱类化合物的提取方法具体步骤如下：步骤1)取顶花板凳果干燥 全草15 kg，经剪碎后，加入2〇 L质量百分比浓度为90%的乙醇进行回流提取，共提取3次， 每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂，得浓缩的乙醇提取物；步骤2)将浓缩的乙醇提取 物分散于10 L水中，用质量百分比浓度2%稀盐酸调整pH值至2,抽滤除去不能溶解物质得 酸性母液；步骤3)用质量百分比浓度4%氨水调整酸性母液pH值至9,得到的碱性溶液用 等体积石油醚进行萃取脱脂，而后碱水层再用等体积的氯仿萃取两次，浓缩后得氯仿萃取 物即为总生物碱；步骤4)对总生物碱用氧化铝柱层析进行分离提纯，接收流份，并用硅胶 薄层层析检测，收集R f值在0? 25?0? 40处显示黄色斑点的流份进行ODS反相柱层析，以甲 醇-水的混合溶剂洗脱，接收流份经薄层层析检测，合并含该孕留烷生物碱类化合物的第 19?26流份，减压蒸干溶剂后得浓缩物，浓缩物用甲醇溶解，再采用S印hadex LH-20凝胶 柱层析除去大分子类杂质，接收流份进行薄层层析检测，合并含该孕留烷生物碱类化合物 的第15?22流份，减压蒸干溶剂后得到浓缩物，该浓缩物再采用半制备型高效液相色谱进 行分离纯化，得到该孕留烷生物碱类化合物纯品。
4. 根据权利要求3所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特 征在于：所述的对总生物碱用氧化铝柱层析进行分离提纯：以氯仿-甲醇-水的混合溶剂 进行梯度洗脱，取下层作为洗脱液，洗脱液的体积比依次为30 :1:0、20:1:0、10:1 :1、8:1:1、 9:2:1、5: 2:1、7:3:1和6.5:3:1，每个梯度洗脱液用量为2 1，按5〇〇1111为1个流份接收。
5. 根据权利要求3所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特 征在于：所述硅胶薄层层析检测，展开剂为15:4:1氯仿-甲醇-水混合溶剂的下层，显色剂 为改良的碘化铋钾溶液。
6. 根据权利要求3所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特 征在于：所述ODS反相柱层析，以甲醇-水的混合溶剂洗脱，洗脱液的体积比依次为1:2， 1 :1，2:1，3:2和5:1，每个梯度洗脱液用量为40〇1^，按5〇1111为1个流份接收。
7. 根据权利要求3所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特 征在于：所述采用Sephadex LH-20凝胶柱层析除去大分子类杂质，甲醇为流动相，用量为 800ml，按20 mL为1个流份接收。
8. 根据权利要求3所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的应用，其特 征在于：所述半制备型高效液相色谱进行分离纯化，色谱条件为：YMC-Triart C18液相色 谱柱，柱高250 mm,柱半径20 mm，质量百分比浓度78%的甲醇水溶液为流动相,其中含质量 百分比3%的氨水，流速8 mL/min，室温下UV-VIS检测器225 nm波长处检测，保留时间为 18 min，得到孕留烷生物碱类化合物的纯品。
9.根据权利要求1-3任一项所述的一种孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物中的 应用，其特征在于：所述孕留烷生物碱类化合物在制备抗菌药物时能单独使用或与其他辅 料混合，其剂型是注射剂、散剂、丸剂、胶囊剂、片剂、膜剂、膏剂、酊剂、颗粒剂或气雾剂。
【文档编号】A61P31/04GK104224799SQ201410436114
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月29日 优先权日:2014年8月29日
【发明者】汤海峰, 毛水龙, 王啸洋, 薛晓燕, 赵慧, 罗晓星, 华栋, 刘杨, 曹蔚 申请人:中国人民解放军第四军医大学