一种含地钱提取物的抗肝癌药及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种含地钱提取物的抗肝癌药，包括口服型或注射型，口服型药包括如下成分：地钱总黄酮提取物300-325份、地钱萜烯提取物50-100份、淀粉100-110份、乙基纤维素100-150份；注射型药包括如下成分：地钱总黄酮提取物130-180份、地钱萜烯提取物120-200份、吐温-8010-20份、5%的葡萄糖注射液300-500份；其制备方法具体包括如下步骤：地钱粗提物的制备、地钱提取物的制备、配料、口服型和注射型抗肝癌药制备。本发明提供的一种抗肝癌药，其含有地钱总黄酮和萜烯提取物，具有抑制肝癌细胞的作用。
【专利说明】一种含地钱提取物的抗肝癌药及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗肝癌药，尤其涉及一种含地钱提取物的抗肝癌药及其制备方 法。
【背景技术】
[0002]地钱属植物（Marchantineae)属于苔藓植物门（Bryophyta)苔纲（Hepaticae) 地钱目（Marchantiales)。又名：脓痂草（陕西），地浮萍、一团云、地梭稷(贵州），地龙皮 (西藏），龙眼草(秦岭巴山），巴骨龙、米海苔（陕西）（参见高谦等.东北苔类植物志.北 京：科学出版社，1981 ;192)。我国地钱属植物除有地钱/7〇心伽9/77力<3 L.) 分布外，还有拳卷地钱Gao et Chang)、粗裂地钱（ifercAafltia panaceaBert.)和风兜地钱Mont.)等3种，它们混生在一起， 难以区别（参见中国科学院植物研究所编.中国高等植物图鉴（第一册）.北京：科学技 术出版社，1972 ;27)。地钱是地钱目的代表植物，是具有叶状体的苔类植物中形态构造最 复杂，进化比较高等的种类；是苔藓植物中最常见的草药之一。地钱属植物的药用始载 于《名医别录》，明代李时珍《本草纲目》中谓之"石衣"，味淡，性凉，归肝经，有清热利湿， 解毒敛疮，清心明目之功效(参见胡人亮，苔藓植物学.高等教育出版社，1987 ;2)。拳卷 地钱coflrahteGao Chang)为苔藓植物门苔纲地钱属植物，为中国特有植 物(参见朱华等，商品药材地钱原植物叶状体显微构造特征及检索，世界卫生杂志，2003 ;3 : 110，）。国外对地钱属植物的化学成分研究取得了不少进展，但对我国的传统草药地钱有 效成分的提取、分离和结构鉴定研究却是一个空白。相关文献及查新报告表明，国外学者 对日本、德国、南非和印度的地钱科植物进行了广泛的研究，而很少涉及到中国出产的地 钱。植化研究表明，地钱主要含有黄酮类化合物和挥发油类化合物(参见[1]肖建波，等， 反相高效液相色谱法用于地钱中黄酮类化合物的分离和测定，分析试验室，2005;4:17 ;
[2] 肖建波，等，拳卷地钱中挥发油的C02超临界流体萃取及其GC-MS分析，中药新药与临床 药理，2005 ; 3:33 ;[3]曹慧，等，拳卷地钱不同提取部位的GC-MS分析比较和部分生物活 性研究.质谱学报，2005，1:1; [4]朱华，等，硅胶柱色谱/RP-HPLC/LC-ESI-MS分离纯化 鉴定拳卷地钱中芹菜素-7-0-P-D-葡萄糖醛酸甙，天然产物研究与开发，2005,1:38 ;[5] 邹登峰，等，地钱、拳卷地钱和粗裂地钱的紫外谱线组法鉴别，天然产物研究与开发，2005， 4:463和[6]肖建波，等，拳卷地钱中黄酮类化合物的含量测定，天然产物研究与开发， 2005, 2:186)。关于地钱的治疗作用未见相关报道。
[0003]应用方面，未见地钱及其它地钱属植物作为药物的专利和文献。
[0004]肝癌是全球高发恶性肿瘤之一，在我国肝癌的死亡率居各种恶性肿瘤第二位。目 前肝癌有有效的根治措施是早期肝癌的肝叶切除术或肝移植术，但肝癌起病隐匿，早期确 诊机会并不多，而肝移植术供体肝有限，费用高昂，难以普及。其他治疗比如肝动脉栓塞化 疗、经皮肝穿瘤内无水乙醇或乙酸注射、射频或冷冻治疗、超声波治疗等，均可在一定程度 上抑制肿瘤的生长，但均属姑息性治疗。因此，很多肝癌患者自确诊后其平均生存期不到一 年，术后复发和转移、化疗药物的毒副作用、肝功能衰竭等是影响患者预后及生存期的主要 因素。现己公认，治愈肝癌最有希望的手段是包括手术、栓塞化疗、免疫及生物治疗等在内 的综合治疗，其中生物治疗近年来发展尤有前景。
【发明内容】
[0005] 本发明所解决的技术问题在于提供一种含地钱提取物的抗肝癌药及其制备方法， 从而解决上述【背景技术】中的问题。
[0006] 本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现： 一种含地钱提取物的抗肝癌药，包括口服型或注射型，所述口服型包括片剂、胶囊剂、 软胶囊剂、颗粒剂、丸剂、水剂、糖浆剂，所述注射型包括冻干粉针、水针。
[0007] 口服型抗肝癌药包括如下成分： 地钱总黄酮提取物300-325份 地钱萜烯提取物 50-100份 淀粉 100-110份 乙基纤维素 100-150份； 注射型抗肝癌药包括如下成分： 地钱总黄酮提取物130-180份 地钱萜烯提取物120-200份 吐温-80 10-20份 5%的葡萄糖注射液300-500份； 吐温-80,又称聚山梨酯-80,易溶于水，溶于乙醇、植物油、乙酸乙酯、甲醇、甲苯，不溶 于矿物油，低温时成胶状，受热后复原，有特臭，味微苦。对酞菁绿的分散有一定帮助，有乳 化作用，可作混悬剂的润湿剂和非离子型表面活性剂，供配制水包油乳剂或乳膏时，用作乳 化剂。也可用于油类的助溶(如挥发油）。
[0008] -种含地钱提取物的口服型抗肝癌药的制备方法，具体包括如下步骤： (1) 地钱粗提物的制备：将地钱原料粉碎，加溶媒10-20倍量，于50-KKTC条件下，提取 2-3次，每次0. 5-1. 5小时，提取液过滤，浓缩至干，得地钱粗提物； (2) 地钱提取物的制备：将地钱粗提物依次分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，正 丁醇萃取液减压蒸馏，回收溶剂，浓缩至干，甲醇溶解后，通过硅胶层析柱后，分成两部分， 将其中一部分用氯仿洗柱，再经甲醇洗柱或通过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用乙醇洗 脱，甲醇或乙醇洗脱液于40-50°C减压浓缩，经真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥得到地钱总 黄酮提取物；将剩余部分用二氯甲烷洗脱，二氯甲烷洗脱液于30-40°C减压浓缩，浓缩液经 真空干燥得到地钱萜烯提取物； (3)配料：称取地钱总黄酮提取物300-320份、地钱萜烯提取物50-100份，淀粉100-110份，乙基纤维素100-150份； (4)口服型抗肝癌药的制备：按称量好的地钱总黄酮提取物、地钱萜烯提取物、淀粉、乙 基纤维素充分混合，灭菌，成型，包装即得。
[0009] -种含地钱提取物的注射型抗肝癌药的制备方法，具体包括如下步骤： (1)地钱粗提物的制备：将地钱原料粉碎，加溶媒10-20倍量，于50-KKTC条件下，提取 2-3次，每次0. 5-1. 5小时，提取液过滤，浓缩至干，得地钱粗提物； (2) 地钱提取物的制备：将地钱粗提物依次分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，正 丁醇萃取液减压蒸馏，回收溶剂，浓缩至干，甲醇溶解后，通过硅胶层析柱后，分成两部分， 将其中一部分用氯仿洗柱，再经甲醇洗柱或通过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用乙醇洗 脱，甲醇或乙醇洗脱液于40-50°C减压浓缩，经真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥得到地钱总 黄酮提取物；将剩余部分用二氯甲烷洗脱，二氯甲烷洗脱液于30-40°C减压浓缩，浓缩液经 真空干燥得到地钱萜烯提取物； (3) 配料：称取130-180份地钱总黄酮提取物、120-200份萜烯提取物，10-20份吐 温-80, 300-500份5%的葡萄糖注射液； (4) 注射型抗肝癌药的制备：将称量好的地钱总黄铜提取物和地钱萜烯提取物，溶解， 过滤后加以合并溶解液，加入按配液体积计算为〇. 01-0. 02%的活性炭煮沸，放冷，过滤至 澄清，加入按配液体积计算为〇. 1-0. 5%的吐温-80,补加适量5%的葡萄糖注射液，用氢氧化 钠溶液调PH值至6-8,粗滤，精滤，灭菌，灌封即得。
[0010] 本发明具有如下有益效果： 本发明提供的一种其含有地钱总黄酮和萜烯提取物的药剂，具有抑制肝癌细胞的作 用，其细胞试验证实如下： (1)地钱总黄酮提取物在2. 2. 15细胞培养3d后对HBeAg具有抑制作用。
[0011] 地钱总黄酮提取物的最大无毒浓度为40 li g/mL，4个稀释浓度40 li g/mL、20 li g/ mL、10 y g/mL和5 y g/mL的3批试验结果显示：各浓度地钱总黄酮提取物对2. 2. 15细胞 培养第3d后上清液中HBeAg均有抑制作用，其平均抑制率分别为28. 68%、27. 92%、15. 30%、 13. 38%，而阳性药物对照为23. 52%，抑制抗原半数有效浓度IC5Q为35. 48 ii g/mL。
[0012] (2)地钱总黄酮提取物在2. 2. 15细胞培养3d后对HBsAg具有抑制作用。
[0013] 40ii g/mL、20ii g/mL、lOii g/mL、5ii g/mL 4个剂量组的地钱总黄酮提取物对 2. 2. 15细胞培养第3d上清液对HBsAg的平均抑制率分别为28. 53%、26. 94%、26. 31%和 18.86%。而阳性药物对照为14. 58%，抑制抗原半数有效浓度IC5Q为24. 45iig/mL。
[0014] (3)地钱总黄酮提取物对2. 2. 15细胞形态的具有改变作用。
[0015]当 2. 2. 15 细胞用 40 ii g/mL、20 ii g/mL、10 ii g/mL、5 ii g/mL 地钱总黄酮提取物处理 3天后，在细胞形态上发生明显改变，细胞发生收缩。
[0016] (4)地钱总黄酮提取物在2. 2. 15细胞培养中对细胞内HBV-DNA具有抑制作用。
[0017] 地钱总黄酮提取物的4个稀释浓度4〇Mg/mL、2〇Mg/mL、l〇Mg/mL和5Mg/mL处理 2. 2. 15细胞，第4d分别提取DNA，分别点于硝酸纤维素膜上，用HBV-DNA探针作斑点杂交， 放射自显影洗片（用酶标仪测定各点〇D57(l值可见，地钱总黄酮提取物40|ag/mL组的HBV- DNA与细胞对照HBV-DNA比较，平均抑制率达31. 52% ;20l^g/mL组抑制率达27. 60%山0吒/ mL组抑制率为19. 36% ;5l^g/mL组抑制率为11. 60%。 (5) 地钱萜烯提取物在细胞培养内抑制癌症细胞活性，地钱萜烯提取物对人H印G2肝 癌细胞具有抑制如表1 :
【权利要求】
1. 一种含地钱提取物的口服型抗肝癌药，其特征是：包括如下成分： 地钱总黄酮提取物300-325份 地钱萜烯提取物 50-100份 淀粉 100-110份 乙基纤维素 100-150份。
2. -种含地钱提取物的注射型抗肝癌药，其特征是：包括如下成分： 地钱总黄酮提取物130-180份 地钱萜烯提取物 120-200份 吐温-80 10-20份 5%的葡萄糖注射液 300-500份。
3. -种含地钱提取物的口服型抗肝癌药的制备方法，其特征是：具体包括如下步骤： (1) 地钱粗提物的制备：将地钱原料粉碎，加溶媒10-20倍量，于50-KKTC条件下，提取 2-3次，每次0. 5-1. 5小时，提取液过滤，浓缩至干，得地钱粗提物； (2) 地钱提取物的制备：将地钱粗提物依次分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，正 丁醇萃取液减压蒸馏，回收溶剂，浓缩至干，甲醇溶解后，通过硅胶层析柱后，分成两部分， 将其中一部分用氯仿洗柱，再经甲醇洗柱或通过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用乙醇洗 脱，甲醇或乙醇洗脱液于40-50°C减压浓缩，经真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥得到地钱总 黄酮提取物；将剩余部分用二氯甲烷洗脱，二氯甲烷洗脱液于30-40°C减压浓缩，浓缩液经 真空干燥得到地钱萜烯提取物； (3 )配料：称取地钱总黄酮提取物300-320份、地钱萜烯提取物50-100份，淀粉 100-110份，乙基纤维素100-150份； (4) 口服型抗肝癌药的制备：按称量好的地钱总黄酮提取物、地钱萜烯提取物、淀粉、乙 基纤维素充分混合，灭菌，成型，包装即得。
4. 一种含地钱提取物的注射型抗肝癌药的制备方法，其特征是：具体包括如下步骤： (1) 地钱粗提物的制备：将地钱原料粉碎，加溶媒10-20倍量，于50-KKTC条件下，提取 2-3次，每次0. 5-1. 5小时，提取液过滤，浓缩至干，得地钱粗提物； (2) 地钱提取物的制备：将地钱粗提物依次分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，正 丁醇萃取液减压蒸馏，回收溶剂，浓缩至干，甲醇溶解后，通过硅胶层析柱后，分成两部分， 将其中一部分用氯仿洗柱，再经甲醇洗柱或通过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用乙醇洗 脱，甲醇或乙醇洗脱液于40-50°C减压浓缩，经真空干燥或冷冻干燥或喷雾干燥得到地钱总 黄酮提取物；将剩余部分用二氯甲烷洗脱，二氯甲烷洗脱液于30-40°C减压浓缩，浓缩液经 真空干燥得到地钱萜烯提取物； (3) 配料：称取130-180份地钱总黄酮提取物、120-200份萜烯提取物，10-20份吐 温-80, 300-500份5%的葡萄糖注射液； (4) 注射型抗肝癌药的制备：将称量好的地钱总黄铜提取物和地钱萜烯提取物，溶解， 过滤后加以合并溶解液，加入按配液体积计算为〇. 01-0. 02%的活性炭煮沸，放冷，过滤至 澄清，加入按配液体积计算为〇. 1-0. 5%的吐温-80,补加适量5%的葡萄糖注射液，用氢氧化 钠溶液调PH值至6-8,粗滤，精滤，灭菌，灌封即得。
【文档编号】A61K36/10GK104382962SQ201410573680
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月24日 优先权日:2014年10月24日
【发明者】徐 明 申请人:徐 明