5-氨基酮戊酸在制备声动力治疗动脉粥样硬化药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了5-氨基酮戊酸在制备声动力治疗动脉粥样硬化的药物中的应用，属于医药【技术领域】。在本发明中，具体公开了5-氨基酮戊酸在制备通过促进动脉粥样硬化斑块内胆固醇的流出进而达到治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。本发明中，5-氨基酮戊酸在超声辅助下能够促进动脉粥样硬化斑块内胆固醇流出，为动脉粥样硬化的治疗提供了一种新的给药方式和药物作用途径，是一种具有良好产业化前景的治疗药物，具有无创、操作简单、无副作用等优势。
【专利说明】5-氨基酮戊酸在制备声动力治疗动脉粥样硬化药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及5-氨基酮戊酸在制备声动力治疗动脉粥样硬化药物中的应用，具体涉及5-氨基酮戊酸在制备通过促进动脉粥样硬化斑块内胆固醇的流出进而治疗动脉粥样硬化的药物中的应用，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002]动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)疾病已成为发达国家及发展中国家的首要死因。尤其是其引发的血栓性血管疾病，如心肌梗死、脑卒中，是目前致死致残的主要疾病，给家庭和社会带来沉重的生活和经济负担。因此，治疗AS，预防急性血栓性事件的发生，是当前人类面临的严峻的医学挑战。现代观点认为，AS是由于胆固醇潴留在动脉壁内而触发的一种慢性炎症反应性疾病。动脉壁内低密度脂蛋白(LDL)、胆固醇的潴留是AS形成的始动因素。AS消退的前提是斑块内的脂质环境得到有力改善，改善脂质环境，主要包括两方面:一是降低血中LDL浓度以使斑块中潴留的LDL减少；二是促进斑块内的胆固醇流出，使其经血入肝代谢，随胆汁排出体外。目前临床上他汀类药物强化降脂治疗能够有效逆转AS，减少心血管终点事件的发生，证实改善脂质环境是抑制/逆转AS进展的重要机制。除他汀类药物外，尚无其他有效的逆转AS的药物，且他汀类药物强化降脂治疗逆转AS进展需要长期服药才能明显获益，患者依从性和长期副作用方面仍有问题需要解决。目前临床尚无快速促进胆固醇流出的有效方法。因此，寻求一种快速的，有效的促进胆固醇流出的治疗方法可能为治疗AS带来曙光。
【发明内容】
[0003]针对以上问题，本发明公开了 5-氨基酮戊酸在超声波的辅助下能够促进动脉粥样硬化斑块中胆固醇的流出，从而改善动脉粥样硬化斑块内的脂质环境，达到显著抑制动脉粥样硬化进展和减少心血管事件的发生的目的，为声动力治疗动脉粥样硬化提供了一种新的药物。该药物克服了他汀类药物需要长期服药的缺点，在较短时间内即可达到治疗动脉粥样硬化的目的。
[0004]本发明的目的在于提供5-氨基酮戊酸在制备声动力治疗动脉粥样硬化药物中的应用，具体涉及5-氨基酮戊酸在制备通过促进动脉粥样硬化斑块内胆固醇的流出进而治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。
[0005]其中，所述声动力治疗动脉粥样硬化过程包括超声波的辅助作用。
[0006]本发明进一步提供了含有治疗有效量的5-氨基酮戊酸的药物组合物在制备声动力治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。
[0007]其中，所述5-氨基酮戊酸作为活性成分，优选的，在该药物组合物中的重量含量为 0.1%?99.5%。
[0008]其中，优选的，所述药物组合物还含有一种或多种药学上可接受的药用辅料。
[0009]5-氨基酮戊酸(5-ALA)是人体内正常存在的一种物质，参与人体血红素代谢，夕卜源给药后可以被动脉粥样硬化(AS)斑块内的巨噬细胞/泡沫细胞特异性吞噬，巨噬细胞内含量明显高于斑块内其他细胞，经过血卟啉生物合成途径生成原卟啉IX(PpIX)。PpIX在外界刺激(激光或超声)的作用下可以产生活性氧诱导巨噬细胞/泡沫细胞发生线粒体途径的凋亡，凋亡细胞记过吞噬细胞核受体PPAR Y /LXR α -⑶36/ABCA1/ABCG1信号系统。激活这一信号系统可以促进巨噬细胞胆固醇流出，改善炎症环境，从而达到治疗动脉粥样硬化的目的(图1)。
[0010]与现有技术相比，本发明的有益效果在于:
[0011](I)、5_氨基酮戊酸克服了他汀类药物需要长期服药的缺点，在较短时间内有效促进动脉粥样硬化斑块内胆固醇流出，从而达到治疗动脉粥样硬化的目的。
[0012](2)、5_氨基酮戊酸在超声辅助下能够促进斑块内胆固醇流出，为动脉粥样硬化的治疗提供了一种新的给药方式和药物作用途径，是一种具有良好产业化前景的治疗药物，具有无创、操作简单、无副作用等优势。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1为5-氨基酮戊酸(5-ALA)促进动脉粥样硬化斑块中胆固醇流出的原理示意图；
[0014]图2为5-氨基酮戊酸来源的原卟啉IX(ALA-PpIX)在斑块巨噬细胞内特异性聚集图(比例尺:10 μ m)；
[0015]图3为5-氨基酮戊酸(5-ALA)在超声的辅助下诱导斑块内巨噬细胞凋亡及吞噬图(比例尺:1 μ m)；
[0016]图4为声动力治疗组在治疗后I天、3天和28天以及对照组的斑块脂质含量图(比例尺:10 μ m)；
[0017]图5为声动力治疗组和对照组的泡沫细胞内脂质含量图(比例尺:0.I μ m)。
【具体实施方式】
[0018]下面通过实验并结合实施例对本发明做进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。
[0019]实施例1声敏剂ALA-PpIX在斑块巨噬细胞内特异性聚集
[0020]本发明采用的5-氨基酮戍酸购于美国sigma公司，纯度为99.9%。
[0021]ApoE-7-小鼠高脂喂养12周，建立动脉粥样硬化模型，尾静脉注射5_氨基酮戊酸，浓度为2.5mg/10g ApoE+小鼠体重,2小时后取材。选择小鼠主动脉根部斑块为观察目标，其中，用免疫组化方法对巨噬细胞和平滑肌细胞分别进行特异染色(绿色荧光)，用4’, 6- 二脉基-2-苯基 Π 引哚(4’, 6-diamidino-2-pheny I indole, DAP I)对细胞进行特异染色(蓝色荧光)，5_氨基酮戊酸代谢成的原卟啉IX(ALA-PpIX)发红色荧光；用荧光显微镜观察并拍照，结果见图2。由图2可知，ALA-PpIX特异红色荧光与巨噬细胞特异绿色荧光位置重合，说明ALA-PpIX在巨噬细胞内分布较多。
[0022]在动脉粥样硬化斑块中，巨噬细胞吞噬脂质是动脉粥样硬化中脂质的重要存在形式，ALA能够特异分布在巨噬细胞内是ALA可以促进脂质转运的基础。
[0023]实施例2声动力治疗诱导斑块内巨噬细胞凋亡及吞噬
[0024]对ApoE+动脉粥样硬化模型小鼠随机分为治疗组和对照组，进行不同处置:治疗组给予尾静脉注射5-氨基酮戍酸药物(ALA),浓度为2.5mg/10g ApoE+小鼠体重，同时给予超声干预，超声参数为频率IMHz，能量2W/cm2，作用时间为15min，对照组给予等计量的生理盐水。治疗后I天取材并染色，DAPI标记细胞核。绿色荧光为免疫荧光标记的巨噬细胞特异蛋白CD68，红色荧光为TUNEL法标记的凋亡小体，黄色为绿色荧光与红色荧光叠加，代表吞噬细胞。用荧光显微镜观察并拍照，结果见图3。由图3可知，治疗组中巨噬细胞凋亡增加，并被吞噬。
[0025]实施例3声动力治疗减少ApoE+小鼠动脉粥样硬化斑块内的脂质含量
[0026]对ApoE-/-动脉粥样硬化模型小鼠随机分为治疗组和对照组，进行不同处置:治疗组给予尾静脉注射5-氨基酮戊酸药物(ALA)，浓度为2.5mg/10g ApoE^小鼠体重，同时给予超声干预，超声参数为频率IMHz，能量2W/cm2，作用时间为15min，对照组给予等计量的生理盐水。分别在治疗后I天、3天和28天取材并用油红O对脂质染色(红色)，用光学显微镜观察并拍照，结果见图4。分析不同分组中斑块内脂质含量，可见治疗组脂质含量明显下降，并随时间延长逐渐减少，从而证明了 ALA能够促进脂质转运。
[0027]实施例4声动力治疗后泡沫细胞内的脂质含量减少
[0028]用人单核白血病细胞系(THP-1)佛波酯(PMA)孵育72h诱导成巨噬细胞后，加入氧化低密度脂蛋白(oxLDL)孵育24h诱导成泡沫细胞，泡沫细胞随机分为对照组和治疗组，对照组不给任何处置，治疗组给予ImM ALA并给予超声辅助，超声参数为频率1MHz，能量
0.3ff/cm2,作用时间为5min，24h后进行油红O染色，用光学显微镜观察并拍照，结果见图5。由图5可知，治疗组泡沫细胞内脂质明显减少，说明ALA在超声的辅助下能够使泡沫细胞内脂质减少，在离体水平下，验证了 ALA有促进脂质转运的作用。
[0029]以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围内。
【权利要求】
1.5-氨基酮戊酸在制备声动力治疗动脉粥样硬化的药物中的应用，其特征在于，所述声动力治疗动脉粥样硬化的药物是通过促进动脉粥样硬化斑块内胆固醇的流出进而达到治疗动脉粥样硬化的目的。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述声动力治疗动脉粥样硬化包括超声波的辅助作用。
3.含有治疗有效量的5-氨基酮戊酸的药物组合物在制备声动力治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其中所述5-氨基酮戊酸作为活性成分，在该药物组合物中的重量含量为0.1 %?99.5%。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其中所述药物组合物还含有一种或多种药学上可接受的药用辅料。
【文档编号】A61P9/10GK104436192SQ201410605036
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年10月31日 优先权日:2014年10月31日
【发明者】田野, 王欢, 旦菊花, 孙鑫, 程佳丽, 郭淑媛, 杨阳, 王巍, 杨力明, 田振, 吴继超 申请人:哈尔滨医科大学