菠萝叶提取物的新用途
【专利摘要】本发明涉及菠萝叶提取物在制药领域中的新用途，特别涉及菠萝叶提取物在医药方面的第二种新用途。本发明经过分离提取，得到含有30～80％的总酚成份的菠萝叶提取物。经实验研究表明，菠萝叶提取物具有促进小肠平滑肌蠕动的作用，对于肠收缩力下降所引起的疾病有较好的缓解作用。具体的说，该提取物可在制备治疗肠平滑肌收缩力下降、肠蠕动减慢、肠轻瘫及由此引起的一些疾病的药物中的应用。
【专利说明】菠萝叶提取物的新用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种以菠萝叶为原料制备的含有多种活性成分的中药提取物、制备方 法及其在医药方面的新用途，属中药【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 菠萝，为凤梨科植物凤梨 Ananas comosus (L. )Merr. [Bromelia comosa L.; A. sativus Schult. Et Schult. f.]的果实。原产美洲，现广植于热带地区，我国福建、广东、 海南、广西、云南等地均有种植。本品始载于清.吴其睿《植物名实图考》，以露兜子为名。 该书记载："露兜子产广东，一名波罗，生山野间，实如萝卜，上生叶一簇，尖长深齿，味色香 具佳。果熟金黄色，皮坚如鱼鳞状，去皮食肉，香甜无渣，六月熟"。
[0003] 古时对于菠萝叶无明确记载，现代人们常用菠萝叶纤维作为编织和造纸 的原料（《中国高等植物图鉴.第5册》科学出版社1976)。近时有记载菠萝叶具 有消食和胃，止泻的功效，主治夏日暑泻，消化不良，胃脘胀痛等（《中华本草.第 8卷》上海科学技术出版社1999)。近时的研宄报道菠萝叶有明确的调血脂和降 血糖 作用(ffeidong Xie, et al. Hypolipidemic mechanisms of Ananas comosus L.leaves in mice!Different from fibrates but similar to statins. Journal of Pharmacological Sciences，2007，103,267-274 ;Weidong Xiej et al.Effect of ethanolic extracts of Ananas comosus L.leaves on insulin sensitivity in rats and HepG2. Comparative Biochemistry and Physiology Part C:Toxicology and Pharmacology，2006，143(4)，429-35 ;Weidong Xiej et al. Ananas comosus L.Leaf Phenols and p-Coumaric Acid Regulate Liver Fat Metabolism by Upregulating CPT-lExpression. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2014, Article ID 903258. 2014. doi :10. 1155/2014/903258.严孝金，等。菠萝叶 酚对小鼠急性糖脂负荷吸收及其小肠脂肪酶活性的影响.世界科学技术-中医药现代化， 2014, 16(4) :796-800)。
[0004] 菠萝叶作为药用的记载比较少见，尤其未见报道菠萝叶或菠萝叶提取物在制备治 疗因肠平滑肌收缩无力小肠蠕动和排便异常等疾病的药物中的应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供菠萝叶提取物在医药方面的新用途，尤其是提供一种菠萝叶 提取物的第二种医药方面的新用途，即在制药中的新应用。
[0006] 本发明的技术方案提供菠萝叶提取物的医药方面的新用途，该用途为：
[0007] 菠萝叶提取物在制备治疗促进肠蠕动的药物中的应用。
[0008] 菠萝叶提取物在制备治疗大便不畅的药物中的应用。
[0009] 菠萝叶提取物在制备治疗高脂血症和糖尿病人伴有大便不畅的药物中的应用。
[0010] 本发明的实验结果表明，菠萝叶提取物（该提取物含有30?80 %的总酚性成 分），对小鼠小肠蠕动有明显促进作用；口服给药后可出现小肠推进能力增强；菠萝叶提取 物对小肠平滑肌有直接地促进收缩蠕动的作用，对于促进肠蠕动、促进排便有较好的作用。 [0011] 在治疗大便不畅及其由此引起的疾病时，以菠萝叶提取物为活性成分，以常规的 制剂工艺，单独使用或与其他药物配合制备成在临床上可以使用的各种不同剂型的药物。
【具体实施方式】
[0012] 本发明所述的菠萝叶提取物含有30?80%的总酚性成分，可用下述方法得到：
[0013] 本发明提供的菠萝叶提取物的制备工艺如下：首先用药材重量的5-15倍水或各 种浓度的醇将菠萝叶在30°C?100°C加热提取3次，每次为1?3小时；或室温浸泡2?10 天，得到提取液。所用的醇溶剂可以采用甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等或含水的醇溶剂。然后 将提取液在减压（压力90-98Kpa)，温度在30?100°C下浓缩，再用药材重量的1?10倍 水溶解，离心或静止过滤，弃去沉淀，取上清液；使上清液通过交换柱（大孔吸附树脂、离子 交换树脂、聚酰胺等交换柱），先用水洗脱，洗脱液废弃；再用浓度大于70 %洗脱，洗脱液在 温度为30?90°C (压力98Kpa)减压浓缩，浓缩物减压（压力98Kpa)干燥或冷冻干燥，即 得到菠萝叶提取物。
[0014] 菠萝叶提取物的成分采用紫外分光光度法、比色法等进行测定，总酚含量在30? 80 %之间，其中主要成分为酚酸和黄酮等。
[0015] 在药剂应用上就是将菠萝叶提取物单独地或者加入复方中以常规的制剂工艺制 备成药剂；其药剂可以是临床上能够使用的各种不同剂型，如散剂，丸剂，胶囊剂，片剂，微 囊剂，软胶囊剂，膜剂，栓剂，注射剂，膏剂，酊剂，散剂，冲剂，气雾剂，各种外用制剂等。
[0016] 下述实施例及药效实验资料使本发明所说的菠萝叶提取物的制备及其用途得以 证实，同时又不应将下列实施例看作是对本发明的限制。
[0017] 实施例1 :
[0018] 取菠萝叶1公斤用5倍量的水100°C加热提取3次，每次3小时，提取液减压（压 力98Kpa)温度在100°C浓缩后，用药材重量的1倍水溶解，静止，取上清，通过聚酰胺柱。先 用水洗脱，洗脱液废弃，再用70%乙醇洗脱，洗脱液减压（压力98Kpa) 30°C浓缩，冷冻干燥， 得到提取物。菠萝叶提取物的总酚性成分采用比色法进行测定，提取物中总酚性成分含量 为30%左右。
[0019] 实施例2 :
[0020] 取菠萝叶1公斤用15倍量的70%乙醇60°C加热提取3次，每次2小时，提取液减 压（压力98Kpa)加热60°C浓缩后，用用药材重量的5倍水溶解，离心，取上清，通过大孔吸 附树脂。先用水洗脱，洗脱液废弃，再用95%乙醇洗脱，洗脱液减压（压力98Kpa) 90°C浓缩， 减压（压力98Kpa)干燥，得到提取物。菠萝叶提取物的总酚性成分采用比色法进行测定， 提取物中总酚性成分含量为80%左右。
[0021] 实施例3:
[0022] 取菠萝叶1公斤用5倍量的甲醇30°C加热提取3次，每次1小时，提取液减压（压 力90-Kpa)加热30°C浓缩后，用用药材重量的10倍水溶解，离心，取上清，调PH值为弱酸 性，通过阴离子交换树脂。先用水洗脱，洗脱液废弃，再用80 %乙醇洗脱，洗脱液减压（压力 98Kpa)30°C浓缩，减压（压力98Kpa)干燥，得到提取物。菠萝叶提取物的总酚性成分采用 比色法进行测定，提取物中总酚性成分含量为60%左右。
[0023] 实施例4 :
[0024] 取菠萝叶1公斤用15倍量的95%乙醇室温浸泡2天，提取液减压（压力90-Kpa) 加热50°C浓缩后，用药材重量的5倍水溶解，离心，取上清，通过大孔吸附树脂。先用水洗 脱，洗脱液废弃，再用80%乙醇洗脱，洗脱液减压100°C浓缩，冷冻干燥，得到菠萝叶提取 物，提取物中的总酚性成分采用比色法进行测定，提取物中总酚性成分含量为50%左右。
[0025] 菠萝叶提取物总酚性成分测定，采用比色法对其总酚性成分进行含量测定。
[0026] 1、试药与仪器
[0027] 紫外分光光度计（TU-1800PC);分析天平，咖啡酸对照品（购自中国药品生物制品 检定所），菠萝叶总酚提取物；其余试剂均为分析纯。
[0028] 2、方法与结果
[0029] ①测定波长的选择：分别配置一定浓度的咖啡酸对照品及菠萝叶总酚提取物供试 品，显色前后，分别在200-800nm内记录吸收光谱。结果表明，咖啡酸对照品及菠萝叶总酚 提取物供试品显色后在720nm处均有最大吸收。故选择720土nm作为测定波长。
[0030] ②测定条件中反应时间的考察：吸取一定浓度的咖啡酸对照品，加入甲醇3. 5ml， 0. 3 %十二烷基磺酸钠溶液2ml，0. 6 %铁氰化钾溶液lml，0. 9 %三氯化铁溶液lml，摇匀暗 处静置5min。用0.1mol/L的稀盐酸稀释至10ml。在720nm处，不同的时间测定其吸收度， 结果表明，30min基本反应完全，所以选择反应为30min。
[0031] ③对照品溶液的配置：精密称取咖啡酸对照品10mg，放入IOml容量瓶中，用甲醇 溶解定容，摇匀。精密吸取lml，置50ml容量瓶中加入甲醇定容，摇匀即得20ug/ml的标准 品。
[0032] ④标准曲线的绘制：精密称取咖啡酸对照品溶液0，Iml，1. 5ml，2. Oml，2. 5ml， 3. Oml，3. 5ml，分别置 IOml 棕色容量瓶中，分别加甲醇 3. 5ml，2. 5ml，2. Oml，L 5ml，Iml， 0. 5,0ml，再加0. 3%十二烷基磺酸钠溶液2ml，0. 6%铁氰化钾溶液lml，0. 9%三氯化铁溶 液lml，摇勾暗处静置5min，再用0. lmol/L的稀盐酸稀释至10ml。摇勾暗处静置30min。以 零号管作对照，置Icm的比色杯中，在720nm处测定其吸光度，绘制标准曲线。咖啡酸对照 品浓度分别为 2ug，3ug，4ug，5ug，6ug，7ug/ml，吸光度分别为 0· 21，0· 34,0· 47,0· 58,0· 65， 0. 79。由于咖啡酸在2-7ug/ml范围内的吸光度为一通过原点的直线，故采用对照比较法计 算菠萝叶总酚提取物中总酚含量。结果见表1。
[0033] ⑤样品含量的测定：精密称取菠萝叶总酚提取物10mg，放入IOml棕色容量瓶中， 用甲醇溶解定容，摇匀。精密吸取〇. 〇5ml，分别加甲醇3ml，再加0. 3 %十二烷基磺酸钠溶 液2ml，0. 6 %铁氰化钾溶液Iml，0. 9 %三氯化铁溶液Iml，摇匀暗处静置5min，再用0. Imol/ L的稀盐酸稀释至10ml。摇匀暗处静置30min。在720nm处测定其吸光度，吸光度为0. 35。 按对照品比较法计算含量为62%。
[0034] 药效实验例1 :对小鼠小肠蠕动的作用
[0035] 观察本发明菠萝叶提取物对小鼠小肠蠕动的促进作用。菠萝叶提取物，批号： 130906。用时以生理盐水配制成所需浓度。试验动物雄性为ICR小鼠。体重18-22g，由北 京维通利华实验动物中心提供。动物饲养实验室室温20-22 °C，相对湿度40 %?60%，换气 扇通气，自然光源12小时/日，笼养，每笼5只。
[0036] 取小鼠随机分为4组。其中1组为对照组。另外3组为给药组。取小鼠分别灌胃 含碳素墨汁标记的不同药物。给药后15分钟，处死小鼠，迅速取出小肠，分别测量各小鼠的 小肠全长和碳墨前沿的长度。
[0037] 本试验观察指标及指标表达：小肠推进百分率=(碳墨前沿的小肠长度cm/小肠 全长 cm) X 100%。
[0038] 本试验给药剂量分别为150mg/kg, 300mg/kg和600mg/kg ;给药途径为灌胃给药； 给药体积为〇· 2ml/10g小鼠。
[0039] 本试验空白对照为等体积生理盐水。
[0040] 本试验数据均以Office 2007Excel软件处理。
[0041] 表1菠萝叶提取物对正常小鼠小肠推进的作用（J±s)
[0042]
【权利要求】
1. 菠萝叶提取物在制备治疗促进肠蠕动的药物中的应用。
2. 菠萝叶提取物在制备治疗大便不畅的药物中的应用。
3. 菠萝叶提取物在制备治疗高脂血症和糖尿病人伴有大便不畅的药物中的应用。
【文档编号】A61K36/88GK104435426SQ201410669897
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月20日 优先权日:2014年11月20日
【发明者】余煊, 邢东明, 雷帆, 王欣佩, 杜力军, 袁梽漪, 卢希, 姜敬非, 严孝金, 庞雨浓 申请人:清华大学