一种不对称囊泡的制备方法
【专利摘要】一种不对称囊泡的制备方法，它涉及一种囊泡的制备方法。本发明的目的是要解决现有制备不对称囊泡的方法稀缺的问题。制备方法：使用微流控芯片将油相和水相混合，得到乳液；再将乳液和接收液混合，再使用有机溶剂和液体石蜡的混合溶液进行洗涤，再加入含有DOPC磷脂的有机溶剂，静置，再将含有不对称囊泡的溶液加入到葡萄糖水溶液中，静置，去除上层的油相，即完成了不对称囊泡的制备和保存。本发明制备的不对称囊泡形貌完整、大小均一，尺寸为100μm～150μm。本发明可获得一种不对称囊泡的制备方法。
【专利说明】一种不对称囊泡的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种囊泡的制备方法。
【背景技术】
[0002]囊泡(vesicle)是由密闭双分子层所形成的球形或椭球形单间或多间隔室所组成。由天然磷脂所形成的囊泡称为脂质体(liposome)。由于囊泡与细胞膜的结构非常相似，所以一直作为生物膜模型而得到广泛的研究。利用这种生物膜可以和细胞膜融合的特点，泡囊在生物膜模拟、药物的固载和靶向释放、纳米粒子的合成以及作微反应器等方面都有着重要的应用价值。不对称囊泡是由不同分子层(leaflet)组成的泡囊结构，因其分子层的不对称性，在生物膜和细胞、以及生物医药领域有重要的理论价值和现实意义。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是要解决现有制备不对称囊泡的方法稀缺的问题，而提供一种不对称囊泡的制备方法。
[0004]一种不对称囊泡的制备方法，具体是按以下步骤完成的:
[0005]一、将span80溶解到液体石腊中，得到油相；将浓度为200mmol/L?500mmol/L的蔗糖水溶液作为水相；将油相和水相分别从不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液；
[0006]步骤一中所述的span80的质量与液体石腊的体积比为0.0lg:1mL ；
[0007]步骤一中所述的水相在微流控芯片中的流速为I μ L/min ；
[0008]步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为I μ L/min?5 μ L/min ；
[0009]二、将乳液与接收液混合，室温下反应25min?60min，得到混合液体A ;再使用有机溶剂和液体石蜡的混合溶液对混合液体A进行洗涤3次?5次，得到洗涤后的混合液体A ；
[0010]步骤二中所述的乳液的体积与接收液的体积比为1:10 ;
[0011]步骤二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液体石蜡组成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与癸烷的质量比为1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与液体石蜡的体积比为1:200 ;
[0012]步骤二中所述的有机溶剂和液体石蜡的混合溶液中有机溶剂与液体石蜡的体积比为I: 10 ；
[0013]三、向洗涤后的混合液体A中加入含有DOPC磷脂的有机溶剂，混合均匀后静置2h?4h，得到含有不对称囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液，将含有不对称囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液中，静置2h?4h，去除上层的油相，即完成了不对称囊泡的制备和保存；
[0014]步骤三中所述的含有DOPC磷脂的有机溶剂中DOPC磷脂的浓度为10mg/mL ；
[0015]步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL?Img/mL0
[0016]本发明的优点:
[0017]一、本发明利用自组装和微流控技术制备了不对称囊泡；利用微流控芯片产生油包水(W/0)的乳液，在接收液中形成聚合物的微胶囊，最后通过DOPC磷脂与微胶囊表面的分子间力完成最后组装；
[0018]二、本发明通过对微流控反应条件的改变，可以控制微胶囊的尺寸，进而控制不对称囊泡的尺寸；
[0019]三、本发明使用三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷和DOPC磷脂形成不对称双分子层的磷脂囊泡；
[0020]四、本发明利用微流控方法可以控制形成的不对称囊泡形貌完整、大小均一；
[0021]五、本发明可以通过控制水相和油相的流速，微流控芯片的尺寸控制不对称囊泡的尺寸；
[0022]六、本说明制备不对称囊泡的方法操作简单，反应时间短，可重复性好，制备的不对称囊泡可作为药物载体；
[0023]七、本发明制备的不对称囊泡使用的药品低毒、无害、绿色环保；制备的不对称囊泡的形貌、尺寸可控，通过本发明的方法得到的不对称囊泡可用于药物运载和释放等领域。
[0024]本发明可获得一种不对称囊泡的制备方法。
【具体实施方式】
[0025]【具体实施方式】一:本实施方式是一种不对称囊泡的制备方法具体是按以下步骤完成的:
[0026]一、将span80溶解到液体石腊中，得到油相；将浓度为200mmol/L?500mmol/L的蔗糖水溶液作为水相；将油相和水相分别从不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液；
[0027]步骤一中所述的span80的质量与液体石腊的体积比为0.0lg:1mL ；
[0028]步骤一中所述的水相在微流控芯片中的流速为I μ L/min ；
[0029]步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为I μ L/min?5 μ L/min ；
[0030]二、将乳液与接收液混合，室温下反应25min?60min，得到混合液体A ;再使用有机溶剂和液体石蜡的混合溶液对混合液体A进行洗涤3次?5次，得到洗涤后的混合液体A ；
[0031]步骤二中所述的乳液的体积与接收液的体积比为1:10 ;
[0032]步骤二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液体石蜡组成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与癸烷的质量比为1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与液体石蜡的体积比为1:200 ;
[0033]步骤二中所述的有机溶剂和液体石蜡的混合溶液中有机溶剂与液体石蜡的体积比为I: 10 ；
[0034]三、向洗涤后的混合液体A中加入含有DOPC磷脂的有机溶剂，混合均匀后静置2h?4h，得到含有不对称囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液，将含有不对称囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液中，静置2h?4h，去除上层的油相，即完成了不对称囊泡的制备和保存；
[0035]步骤三中所述的含有DOPC磷脂的有机溶剂中DOPC磷脂的浓度为10mg/mL ；
[0036]步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL?Img/
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[0037]本实施方式制备的不对称囊泡保存在200mmol/L的葡萄糖水溶液中是因为不对称囊泡在水环境中保存的时间长，且因为本实施方式制备的不对称囊泡内部包含200mmol/L的葡萄糖水溶液，其在等渗的葡萄糖溶液中更稳定。
[0038]本实施方式的优点:
[0039]一、本实施方式利用自组装和微流控技术制备了不对称囊泡；利用微流控芯片产生油包水(W/0)的乳液，在接收液中形成聚合物的微胶囊，最后通过DOPC磷脂与微胶囊表面的分子间力完成最后组装；
[0040]二、本实施方式通过对微流控反应条件的改变，可以控制微胶囊的尺寸，进而控制不对称囊泡的尺寸；
[0041]三、本实施方式使用三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷和DOPC磷脂形成不对称双分子层的磷脂囊泡；
[0042]四、本实施方式利用微流控方法可以控制形成的不对称囊泡形貌完整、大小均
[0043]五、本实施方式可以通过控制水相和油相的流速，微流控芯片的尺寸控制不对称囊泡的尺寸；
[0044]六、本实施方式制备不对称囊泡的方法操作简单，反应时间短，可重复性好，制备的不对称囊泡可作为药物载体；
[0045]七、本实施方式制备的不对称囊泡使用的药品低毒、无害、绿色环保；制备的不对称囊泡的形貌、尺寸可控，通过本发明的方法得到的不对称囊泡可用于药物运载和释放等领域。
[0046]本实施方式可获得一种不对称囊泡的制备方法。
[0047]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一不同点是:步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为I μ L/min?3μ L/min。其他步骤与【具体实施方式】一相同。
[0048]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一或二之一不同点是:步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为3 μ L/min?5μ L/min。其他步骤与【具体实施方式】一或二相同。
[0049]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一至三之一不同点是:步骤二中将乳液与接收液混合，室温下反应25min，得到混合液体A。其他步骤与【具体实施方式】一至三相同。
[0050]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一至四之一不同点是:步骤二中所述的有机溶剂和液体石蜡的混合溶液中有机溶剂为癸烷或己烷。其他步骤与【具体实施方式】一至四相同。
[0051]【具体实施方式】六:本实施方式与【具体实施方式】一至五之一不同点是:步骤三中向洗涤后的混合液体A中加入含有DOPC磷脂的有机溶剂，混合均匀后静置2h，得到含有不对称囊泡的溶液。其他步骤与【具体实施方式】一至五相同。
[0052]【具体实施方式】七:本实施方式与【具体实施方式】一至六之一不同点是:步骤三中将含有不对称囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液中，静置2h，去除上层的油相，即完成了不对称囊泡的制备和保存。其他步骤与【具体实施方式】一至六相同。
[0053]【具体实施方式】八:本实施方式与【具体实施方式】一至七之一不同点是:步骤三中所述的含有DOPC磷脂的有机溶剂中有机溶剂为癸烷或己烷。其他步骤与【具体实施方式】一至七相同。
[0054]【具体实施方式】九:本实施方式与【具体实施方式】一至八之一不同点是:步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL。其他步骤与【具体实施方式】一至八相同。
[0055]【具体实施方式】十:本实施方式与【具体实施方式】一至九之一不同点是:步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL?0.5mg/mL。其他步骤与【具体实施方式】一至九相同。
[0056]采用以下试验验证本发明的有益效果:
[0057]试验一:一种不对称囊泡的制备方法，具体是按以下步骤完成的:
[0058]一、将0.0lg span80溶解到ImL液体石腊中，得到油相；将浓度为200mmol/L的鹿糖水溶液作为水相；将油相和水相分别从不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液；
[0059]步骤一中所述的水相在微流控芯片中的流速为I μ L/min ；
[0060]步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为3 μ L/min ；
[0061]二、将乳液与接收液混合，室温下反应25min，得到混合液体A ;再使用有机溶剂和液体石蜡的混合溶液对混合液体A进行洗涤5次，得到洗涤后的混合液体A ；
[0062]步骤二中所述的乳液的体积与接收液的体积比为1:10 ;
[0063]步骤二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液体石蜡组成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与癸烷的质量比为1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与液体石蜡的体积比为1:200 ;
[0064]步骤二中所述的有机溶剂和液体石蜡的混合溶液中有机溶剂为癸烷；所述的癸烷和液体石蜡的混合溶液中有机溶剂与液体石蜡的体积比为1:10 ;
[0065]三、向洗涤后的混合液体A中加入含有DOPC磷脂的有机溶剂，混合均匀后静置2h，得到含有不对称囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液，将含有不对称囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液中，静置2h，去除上层的油相，即完成了不对称囊泡的制备和保存；
[0066]步骤三中所述的含有DOPC磷脂的有机溶剂中有机溶剂为癸烷；所述的含有DOPC磷脂的有机溶剂中DOPC磷脂的浓度为10mg/mL ；
[0067]步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL。
[0068]使用荧光显微镜仪器对试验一得到的不对称囊泡进行测试，如图1所示；图1为试验一得到的不对称囊泡的明场照片，从图1可知囊泡形貌完整、大小均一。
[0069]试验一制备的不对称囊泡包裹了水相，具有载药的功能，磷脂层包覆在囊泡表面；试验一制备的不对称囊泡具有载药功能是在制备不对称囊泡的过程中将药物加入到浓度为200mmol/L的蔗糖水溶液作为水相，从而制备的对称囊泡具有载药功能；载有药物的不对称囊泡可以直接注射到人体中。
【权利要求】
1.一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于一种不对称囊泡的制备方法具体是按以下步骤完成的: 一、将span80溶解到液体石蜡中，得到油相；将浓度为200mmol/L?500mmol/L的蔗糖水溶液作为水相；将油相和水相分别从不同的通道入口注射到微流控芯片中混合，得到乳液； 步骤一中所述的span80的质量与液体石腊的体积比为0.0lg:1mL ； 步骤一中所述的水相在微流控芯片中的流速为I μ L/min ； 步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为I μ L/min?5μ L/min ； 二、将乳液与接收液混合，室温下反应25min?60min，得到混合液体A;再使用有机溶剂和液体石蜡的混合溶液对混合液体A进行洗涤3次?5次，得到洗涤后的混合液体A ； 步骤二中所述的乳液的体积与接收液的体积比为1:10 ; 步骤二中所述的接收液由三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷、癸烷和液体石蜡组成；所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与癸烷的质量比为1:20 ;所述的接收液中三氯(1H，1H, 2H, 2H,全氟辛基)硅烷与液体石蜡的体积比为1:200 ； 步骤二中所述的有机溶剂和液体石蜡的混合溶液中有机溶剂与液体石蜡的体积比为1:10 ； 三、向洗涤后的混合液体A中加入含有DOPC磷脂的有机溶剂，混合均匀后静置2h?4h，得到含有不对称囊泡的溶液；以200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液，将含有不对称囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液为保存液中，静置2h?4h，去除上层的油相，即完成了不对称囊泡的制备和保存； 步骤三中所述的含有DOPC磷脂的有机溶剂中DOPC磷脂的浓度为lOmg/mL ； 步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL?lmg/mL。
2.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为I μ L/min?3 μ L/min。
3.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤一中所述的油相在微流控芯片中的流速为3 μ L/min?5 μ L/min。
4.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤二中将乳液与接收液混合，室温下反应25min，得到混合液体A。
5.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤二中所述的有机溶剂和液体石蜡的混合溶液中有机溶剂为癸烷或己烷。
6.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤三中向洗涤后的混合液体A中加入含有DOPC磷脂的有机溶剂，混合均匀后静置2h，得到含有不对称囊泡的溶液。
7.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤三中将含有不对称囊泡的溶液加入到200mmol/L的葡萄糖水溶液中，静置2h，去除上层的油相，即完成了不对称囊泡的制备和保存。
8.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤三中所述的含有DOPC磷脂的有机溶剂中有机溶剂为癸烷或己烷。
9.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL。
10.根据权利要求1所述的一种不对称囊泡的制备方法，其特征在于步骤三中所述的含有不对称囊泡的溶液中DOPC磷脂的浓度为0.25mg/mL?0.5mg/mL。
【文档编号】A61K9/50GK104398492SQ201410751317
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】韩晓军, 张旭男 申请人:哈尔滨工业大学宜兴环保研究院