一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液及其制备方法。其配方在于，包括以下按照体积比计算的原料：含卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；还包括800-1000单位/毫升口服液的青链霉素。制备时采用高免蛋全蛋得到澄清卵黄抗体口服液。这种方法制备的卵黄抗体口服液不仅使生产过程中损失少、免疫活性物质强多、生物活性高、无临床副作用，同时，含有蛋清中大量的各种蛋白质，可以减少口服时对抗体的不良影响。
【专利说明】一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于禽类用生物制品【技术领域】，涉及一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 小反当兽疫（pestedespetitsruminants,PPR)俗称羊癌，又名小反当 兽假性牛癌（pseudorinderpest)、肺肠炎（pneumoenteritis)、口炎肺肠炎复合症 (stomatitis-pneumoenteritiscomplex),是由小反当兽疫病毒引起的一种急性病毒性传 染病，主要感染小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。
[0003] 本病1942年首次在象牙海岸发生。亚洲的一些国家也报道了本病，据1993年《世 界动物卫生》报道，孟加拉国的山羊有本病发生、印度德拉邦和马哈拉施特拉邦的部分地区 绵羊中发生了类似牛瘟的疾病，最后定名小反刍兽疫。1993年，以色列第一次报道有小反刍 兽疫发生，传染来源不明，为防止本病传播，以色列对其北部地区的绵羊和山羊接种了牛瘟 疫苗。1992年，约旦的绵羊和山羊中发现了本病特异性抗体。1993年，沙特阿拉伯首次发 现133个病例。
[0004] 小反刍兽疫病毒属副黏病毒科麻疹病毒属。与牛瘟病毒有相似的物理化学及免疫 学特性。病毒呈多形性，通常为粗糙的球形。病毒颗粒较牛瘟病毒大，核衣壳为螺旋中空杆 状并有特征性的亚单位，有囊膜。病毒可在胎绵羊肾、胎羊及新生羊的睾丸细胞、Ver0细胞 上增殖，并产生细胞病变（CPE)，形成合胞体。
[0005]目前，临床上常用的疫苗有弱毒疫苗包括：1.常见的Nigeria7511弱毒疫苗和 Sungri/96弱毒疫苗，该疫苗无任何副作用，能交叉保护其各个群毒株的攻击感染，但其热 稳定性差。，还有牛瘟弱毒疫苗，因本病与牛瘟病毒的抗原具有相关性,用此疫苗来免疫绵 羊和山羊进行小反刍兽疫病的预防，具有良好的效果；2.还有采用感染山羊的病理组织 制备小反刍兽疫病毒组织灭活疫苗，灭活剂氯仿效果较好。3.重组亚单位疫苗麻疹病毒属 的表面糖蛋白具有良好的免疫原性。用H蛋白或N蛋白都可作为亚单位疫苗，均能刺激机 体产生体液和细胞介导的免疫应答，产生的抗体能中和小反刍兽疫病毒和牛瘟病毒。4.嵌 合体疫苗是用小反刍兽疫病毒的糖蛋白基因替代牛瘟病毒表面相应的糖蛋白基因。这种疫 苗具有良好的免疫原性，动物血清中不产生牛瘟病毒糖蛋白抗体。5.活载体疫苗将小反刍 兽疫病毒的F基因插入羊痘病毒的TK基因编码区，构建了重组羊痘病毒疫苗。
[0006] 卵黄抗体IgY是的一种免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相当于哺乳动物IgG，但结构 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空间构象。卵黄抗体具有很多优越性。（1)由于鸟 类与哺乳类动物种系发生学的差距，鸟类更适于生产抗哺乳动物抗原的特异性抗体。卵黄 抗体不会激发补体系统，不与抗哺乳动物抗原的抗体发生反应，不与哺乳动物和细菌的Fc 受体结合，这在免疫诊断中具有重要意义。（2)卵黄抗体量大，成本低，便于规模化生产。卵 黄中抗体浓度能长期维持在相当于甚至超过血清抗体浓度的水平上。总的来讲，卵黄抗体 对动物没有毒副作用，用卵黄抗体治疗动物疾病不但避免了血清价格昂贵、产量低的缺点， 而且可以避免血清在治疗过程中引起的副作用，是一种很有前途的新型免疫球蛋白制剂。 因此，卵黄抗体在禽畜疾病诊断、治疗和预防的应用越来越多。
【发明内容】
[0007] 本发明提供一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液及其制备方法，解决注射用的小反刍 兽疫卵黄抗体使用不方便的问题。
[0008] 本发明的目的是通过以下形式实现的： 一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液，包括以下按照体积比计算的原料：含卵黄抗体的全 蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02;还包括800-1000单位/ 晕升口服液的青链霉素。
[0009]制备步骤是： 1) 采用牛瘟弱毒疫苗或Nigeria7511弱毒疫苗对鸡只进行强化免疫：采用三次免疫程 序，每次间隔10天，每只鸡每次疫苗用量为2ml，当抗体效价达到1:(128-256)时，进行高 免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒； 3) 将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化，乳化时间7-10min，然后加入pH为4. 2-4. 3、温 度为4-6°C的盐酸酸化水,盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5. 5-6. 5倍,混匀后,放置 3-5°C，静置18-24小时； 4) 取3)中的上层清液，升温到25-28°C，加入辛酸，搅拌l_2h，静置10-12h，过滤；其中 辛酸体积量：上层清液体积量为（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青链霉素，使卵黄抗体的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的体积 比为（95-105) : (0· 2-0. 3) : (0· 2-0. 3) : (0· 01-0. 02)，青链霉素的含量为 800-1000 单位 / 晕升口服液； 6) 分装，保存。
[0010] 步骤4)过滤时依次通过I. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的滤膜进行过滤。
[0011] 本发明通过对高免蛋全蛋提取、低温酸化处理、辛酸处理后得到澄清卵黄抗体口 服液。本发明将全蛋使用到卵黄抗体的提取中，可以直接在临床上进行口服使用，蛋清中含 有大量的各类蛋白质，可充分利用高免蛋的价值，提高动物机体的免疫力和应激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影响的优点。
【具体实施方式】
[0012] 实施例1 : 一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液的配方包括以下原料：含卵黄抗体的全蛋水溶液 95L、辛酸0. 2L、甲醛0. 3L、硫柳汞0. 02L;以及1000单位/毫升口服液的青链霉素。
[0013] 其制备方法包括以下步骤： 1)采用市售的牛瘟弱毒疫苗进行强化免疫，每只鸡每次疫苗用量为2ml，每次间隔10 天，进行三次免疫程序，当抗体效价达到I:256时，开始收集高免蛋。
[0014] 2)将收集高免蛋整理，0. 2%新洁尔灭消毒，备用。
[0015] 3)水稀释法酸化处理：将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化，乳化时 间7min，然后将乳化后的全蛋液加入pH为4. 2、温度为4°C的盐酸酸化水，盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的6倍，混匀，放置4°C环境中18小时静置沉淀，取上清液；其中，盐酸酸化 水是在水中加入盐酸使其PH值达到4. 2。
[0016] 4)辛酸处理；将步骤3)的上清液，即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量，升温到 25°C，加入辛酸，充分混匀lh，然后静置IOh;其中，按体积比，上层清液：辛酸为95 :0. 2; 5) 对步骤4)所得澄清液依次用I. 0_、0. 45mm、0. 22mm的滤膜过滤，留取滤液； 6) 向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素；按体积比，含卵黄抗体的全蛋水溶 液：辛酸：甲醛：硫柳汞=95 :0. 2 :0. 3 :0. 02;青链霉素在该口服液中的含量为1000单位/ 毫升； 7) 分装，保存。
[0017] 为确定卵黄抗体口服液在常温下的放置有效期，做了以下试验：将本品保存在 37°C培养箱中，保存24个月，分别1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后，用琼脂扩散(AGP)法，测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化，结果见表1。
[0018] 表1.常温放置口服液不同时间段效价的变化
【权利要求】
1. 一种小反刍兽疫卵黄抗体口服液，其特征在于：包括以下按照体积比计算的原料： 含卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;还包括 800-1000单位/晕升口服液的青链霉素。
2. 根据权利要求1所述的小反刍兽疫卵黄抗体口服液的制备方法，其特征在于具体步 骤是： 1) 采用牛瘟弱毒疫苗或Nigeria7511弱毒疫苗对鸡只进行强化免疫：采用三次免疫程 序，每次间隔10天，每只鸡每次疫苗用量为2ml，当抗体效价达到1 : (128-256)时，进行高 免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒； 3) 将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化，乳化时间7-10min，然后加入pH为4. 2-4. 3、温 度为4-6°C的盐酸酸化水，盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5. 5-6. 5倍,混匀后，放置 3-5°C，静置18-24小时； 4) 取3)中的上层清液，升温到25-28°C，加入辛酸，搅拌l_2h，静置10-12h，过滤；其中 辛酸体积量：上层清液体积量为（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青链霉素，使卵黄抗体的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的体积 比为（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青链霉素的含量为 800-1000 单位 / 晕升口服液； 6) 分装，保存。
3. 根据权利要求2所述的小反刍兽疫卵黄抗体口服液的制备方法，其特征在于：步骤 4)过滤时依次通过1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的滤膜进行过滤。
【文档编号】A61P29/00GK104399078SQ201410762606
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月14日 优先权日:2014年12月14日
【发明者】徐进, 郭俊清, 陈建晖 申请人:郑州后羿制药有限公司