本发明涉及癌症治疗领域，具体涉及膀胱原位癌治疗和用于其治疗用途的药物组合物的提供。本发明进一步涉及治疗原位癌的方法，以及给予本发明药物组合物的方法。
发明背景
膀胱癌(BC)是尿路最常见的恶性肿瘤，并且是男性第7常见的癌症和女性第17常见的癌症。世界年龄标准化发病率为男性9/100,000和女性2/100,000(2008数据)。在欧盟(EU)中，年龄标准化发病率为男性27/100,000和女性6/100,000。地区和国家之间发病率不同；在欧洲，西班牙已报告最高年龄标准化发病率(男性41.5和女性4.8)并且芬兰报告了最低年龄标准化发病率(男性18.1和女性4.3)(参见Guidelines on Non-muscle-invasive Bladder Cancer(TaT1 and CIS)；European Association of Urology(EAU)，2013)。世界全球年龄标准化死亡率为男性3/100,000对女性1/100,000。在2008，膀胱癌是欧洲癌症特异性死亡的第8最常见病因。在US，早期(非肌肉浸润性)膀胱癌(NMIBC)感染大约500,000人。
原位癌(CIS，也被称为Tis)总体上描述了通过不存在肿瘤细胞到周围组织中的浸润——通常在穿过基膜前——来定义的癌症早期形式。因此，一般在原位癌中，瘤细胞在其正常细胞环境中增殖。例如，在Bowen病(皮肤原位癌)中，瘤表皮细胞仅在表皮内积累，而不穿透到较深的真皮中。因此，CIS通常不形成肿瘤并且病变颇为平坦(例如，在皮肤、颈部)或追随器官的现有细胞结构(例如，在胸部、肺部)。膀胱的原位癌癌症因此被定义为平坦(例如，非乳头状)、高级别、尚未非肌肉浸润性的泌尿道上皮癌。因此，CIS膀胱癌已相当于实际的恶性肿瘤。膀胱CIS因此不是恶性肿瘤的前体，而是实际的恶性肿瘤。分子生物学技术和临床经验已经证实CIS膀胱癌的高恶性潜力。在不经任何治疗的情况下，多于50％的CIS膀胱癌患者发展成肌肉浸润性疾病。
根据肿瘤、结节、转移(TNM)分类系统，局限于粘膜的乳头状肿瘤通常被归类为Ta阶段，已经浸润固有层的肿瘤被归类为T1阶段。大约75％的膀胱癌患者呈现局限于粘膜的疾病(阶段Ta)，包括局限于粘膜下层的高级别肿瘤(阶段T1)。局限于粘膜的膀胱癌被归类为原位癌膀胱癌(膀胱癌CIS)。
根据国际膀胱癌组织(IBCG)的癌症分阶也认识到和反映出CIS膀胱癌的高恶性潜力：IBCG基于NMIBC当前实践指导的评论提出下列风险实践定义：“低风险”：单独性、原发性、低级别(Ta)肿瘤；“中等风险”：多发性或复发性低级别肿瘤；和“高风险”：任何T1和/或高级别和/或CIS(参见Brausi等，J.Urol 2011；186：2185-67)。后者肿瘤具有高复发和进展风险，其中进展成例如肌肉浸润性疾病是主要顾虑。
CIS膀胱癌的治疗大体上涉及膀胱肿瘤经尿道切除术(TURB)、单独术后立即灌注化疗、膀胱内化疗和卡介苗(BCG)治疗——一般膀胱内给予(参见，例如，“Guidelines on non-muscle invasive bladder cancer(TaT1 and CIS)”，European Association of Urology，2013)。
根据患者数据，男性(具体地，超过60岁的男性)罹患CIS的风险高于同龄女性：大约75％的呈现中等风险膀胱癌的患者是男性，并且约80％的呈现高风险膀胱癌的患者是男性(参见Witjes等，BJU Int.2013，10月；112(6)：742-50)。具体地，被诊断患有呈现2-7个肿瘤的中等风险癌症(中等风险被定义为多发性或复发性低级别肿瘤(TaG1，TaG2))并且年长于45岁的男性罹患CIS的风险最高。其次是年长于74岁呈现相同病理的患者。
如果发现并发性CIS膀胱癌与肌肉浸润性膀胱癌(MIBC)有关，根据浸润性肿瘤来确定癌症疗法。CIS带有TaT1肿瘤的检测增加了TaT1肿瘤的复发和进展风险并且必须进一步治疗。患者数据表明，在第一次切除术时呈现CIS和随后阳性尿液细胞学的患者显现具有较高复发风险，需要第二次TURB。
总体而言，CIS膀胱癌无法单独通过内窥镜程序被治愈，因为内窥镜程序，即乳头状癌的一般治疗选择，在CIS膀胱癌治疗中不是充分有效。CIS膀胱癌通常以弥漫性表观为特征，因此难以视觉化，使得癌症的外科治疗和/或移除不足以作为移除患病细胞和/或组织的治疗选择。因此，CIS膀胱癌的组织学诊断必须跟进进一步治疗，例如，膀胱内BCG灌注或根治性膀胱切除术。关于应当优选保守治疗(膀胱内BCG灌注)还是积极治疗(根治性膀胱切除术)没有共识。缺少灌注治疗和早期根治性膀胱切除术作为主要立即治疗的随机化试验。CIS膀胱癌早期根治性膀胱切除术后的肿瘤特异性存活率是优异的，但多达40-50％的患者可能被过度治疗。
一般用于膀胱癌治疗的BCG源自在1904年被转移至Albert Calmette和Camille Guerin的牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)。该菌株，最初极具毒性，随后在胆汁-马铃薯介质上经历了多于230次传代并且被证实无毒，允许其用作疫苗。Old和Clarke在1950年代的研究(Old等，Nature 1959；184：291)能够证明，BCG给予对小鼠的移植肿瘤具有抑制效果。
患者通常耐受BCG良好，但严重和可能致命的毒性可能出现(Lamm，Clin Infect Dis 2000；31(Suppl.3)：S86-90)。BCG治疗可导致刺激性膀胱症状，其一般在第二次或第三次灌注后开始并且持续1-2天。因此很多患者(多达上至近60％)因其副作用而中断BCG治疗，其副作用大体上包括低级别发热和局部(膀胱相关)刺激性症状，如例如，轻度膀胱疼痛、尿漏或失禁。
BCG严重反应或感染源于生物体的i.v.吸收，最常见源于创伤性套管术。困难布置的导管产生的出血因此对于BCG灌注是绝对禁忌症。在经历BCG治疗带来的持续副作用的患者中，考虑BCG的对数剂量减少。患有BCG脓毒病或局部感染的患者除革兰阴性和抗结核抗生素治疗外还需要类固醇。此外，BCG不应当用作术后立即膀胱内灌注，因为细菌脓毒病并且可能死亡的风险很高。对于BCG应用的其他禁忌症包括例如诸如尿路感染和免疫抑制的状况(Sylvester，International Journal of Urology(2011)，113-120)。
除在患者中观察到的副作用外，BCG的应用还给操作BCG的健康护理工作人员和医生以及与接受BCG的患者接触的患者带来健康风险：健康护理工作人员和医生的BCG感染已有报告，主要来源于给予BCG准备过程中的意外针刺或皮肤撕裂导致的暴露。接受胃肠外药物的患者的医院BCG感染已有报告。在这些情况下，药物在重构BCG的区域被准备并且导致药物污染。
已进行BCG和干扰素治疗的患者有60％-70％的机会有完全和持久响应——如果其之前从未经过BCG治疗或如果其仅有一次在前诱导(induction)失败或距诱导超过一年复发(Grossmann等，Rev.Urol.(2008)，第10卷，第4期，第281-289页)。然而，上至40％的患者最终膀胱内BCG治疗失败。这些患者通常具有不良预后，膀胱癌结果进展至浸润性疾病和死亡的风险高。因此，通过例如手术(TURB)、已建立的化疗和/或通过膀胱内BCG给予被常规治疗的CIS膀胱癌患者由于这些治疗选择的成功有限而具有不良预后。
因此非常需要治疗高恶性CIS膀胱癌的新治疗选择的开发。因此本发明的一个目的是提供药物组合物，其允许治疗CIS膀胱癌患者，并且安全性提高和效力情况良好。
技术实现要素：
本发明人已经确定，包括免疫响应改性剂咪喹莫特(imiquimod)的药物组合物在治疗原位癌(CIS)(膀胱癌的最具攻击性形式)时具有意外好的效力。发明人发现，包括咪喹莫特的本发明药物组合物在原位癌膀胱癌中具有抗瘤活性。
因此，本发明提供包括咪喹莫特的药物组合物，用于治疗原位癌膀胱癌用途——例如，通过膀胱内给予。
根据一个实施方式，本发明的药物组合物包括咪喹莫特和至少一种药学上可接受的赋形剂和任选地载体。
更具体地，上文限定的本发明药物组合物包括的咪喹莫特量为约0.005％(w/v)至约2％(w/v)。
根据进一步实施方式，本发明药物组合物可包括至少一种有机酸，以提高咪喹莫特在水溶液中的溶解性质。因此，本发明药物组合物可进一步包括乙酸和/或乳酸，例如，本发明药物组合物可包括乙酸、或乳酸、或二者——乳酸和乙酸。
根据更具体的实施方式，用于治疗CIS膀胱癌用途的本发明药物组合物可进一步包括至少一种热敏剂。更具体地，本发明药物组合物可包括至少一种热敏剂，该热敏剂呈现的具体低临界溶解温度”(LCST)在约15℃至约35℃范围内，更优选在约15℃至约30℃范围内，还更优选在约15或20℃或25℃至约30℃范围内，最优选在约15或20℃至约25℃范围内。更具体地，本发明药物组合物包括的至少一种热敏剂量为约0.1％(w/v)至约40％(w/v)。
因此，本发明药物组合物包括至少一种热敏剂，该热敏剂选自聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烷)共聚物(也称作PEO-PPO-PEO或泊洛沙姆)或壳聚糖或其衍生物。
根据更优选的实施方式，本发明药物组合物包括至少一种热敏剂，该热敏剂选自聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烷)共聚物(也称作PEO-PPO-PEO或泊洛沙姆)。因此，本发明药物组合物的至少一种热敏剂可以是泊洛沙姆407和/或泊洛沙姆188或泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的混合物。
根据更优选的实施方式，本发明药物组合物进一步包括一种或多种环糊精，该环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、δ-环糊精和ε-环糊精，优选β-环糊精，包括羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)。
更具体地，上文限定的本发明药物组合物是水溶液，其中溶液的pH在约pH 4.0-5.0范围内，优选在约pH 4.1-4.7范围内。
根据进一步方面，本发明提供上文限定的本发明药物组合物对于制备用于治疗原位癌(CIS)的药物的应用。
根据另一方面，本发明提供治疗原位癌的方法，包括给予有其需要的人治疗活性量的上文限定的药物组合物。方法可包括膀胱内给予上文限定的本发明药物组合物。
更具体地，本发明提供上文限定的本发明药物组合物对于膀胱内给予的应用。不考虑给予途径，本发明药物组合物可以约2-7天时间间隔被给予，优选2、3、4、5、或6天的时间间隔，更优选本发明药物组合物以3-6天的时间间隔或7天的时间间隔(例如，一周一次)被给予。本发明药物组合物可被给予至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周，优选约4-12周、约4-8周、约6-12周，还更优选约6-8周。因此，上文限定的本发明药物组合物可通过总共至少3、4、5、6、7或至少8剂或通过例如4-36剂被给予。
更具体地，本发明药物组合物可被提供，使得其在膀胱中保留(膀胱内保留时间)至少约0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h或约4h，优选约0.5h-2h、或约1h。最终，本发明药物组合物可以约10-100ml的体积被给予。
因此，本发明还提供治疗CIS膀胱癌的方法，其中方法包括向有其需要的人给予上文限定的本发明药物组合物。
具体实施方式
虽然下文详细描述本发明，但要理解，本发明不限于本文描述的具体方法、方案和试剂，因为这些是可做出改变。还要理解，本文使用的命名是仅仅为了描述具体实施方式，而非意图限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求限制。除非另外说明，本文使用的所有技术和科学术语都与本领域普通技术人员的普遍理解具有相同的含义。
下文将描述本发明的要素。这些要素在具体实施方式中被列出，然而，应理解，其可以任何方式和任何数量组合，以产生另外的实施方式。描述的各种实施例和优选实施方式不应被解释为将本发明限制在明确描述的实施方式。这种描述应被理解为支持和包括将明确描述的实施方式与任何数量的公开和/或优选要素组合的实施方式。此外，本申请描述的所有要素的任何排列和组合应被认为已被本申请的描述公开，除非上下文另外指明。
贯穿说明书和所附权利要求书，除非上下文另外规定，术语“包括”和变型如“包含”和“含有”会被理解为隐含包括所述成员，整数或步骤，但不排除任何其他未陈述的成员、整数或步骤。术语“由……组成”是术语“包括”的具体实施方式，其中不包括任何其他未陈述的成员、整数或步骤。在本发明的语境中，术语“包括”包括术语“由……组成”。
在描述本发明的语境中(特别是在权利要求的语境中)使用的术语“一个”、“一种”和“所述”以及类似指代将被解释为涵盖单数和复数，除非本文另外指明或上下文明确否认。本文数值范围的记载仅仅意图作为分别指代落入该范围内的各个单独数值的速记方法。除非本文另外指明，每个个体数值均被引入说明书，如同其被单独记载在本文中。说明书的表述将不被解释为暗示任何未声明的、本发明实践必需的要素。
本说明书全文引用了若干文件。本文无论上文还是下文引用的每个文件(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商规格、说明等)其全部内容均被引入本文作为参考。本文不被解释为承认本发明不先于这些公开定名是因为其是在先发明。
在本发明的药物组合物的环境下，术语咪喹莫特指代具有下列结构的化合物1-异丁基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺：
或其任何药学上可接受的盐。
在根据本发明的药物组合物的环境下，药学上可接受的盐意为保留咪喹莫特的生物学有效性和性质并且不是生物学或其他方面不期望的那些盐，该盐由下列形成：无机酸，如氢氯酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸、及类似物；和有机酸，如乙酸、三氟乙酸、己二酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、丁酸、樟脑酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、二葡糖酸、乙磺酸、谷氨酸、乙醇酸、甘油磷酸、半硫酸、己酸、甲酸、富马酸、2-羟基乙烷-磺酸(羟基乙磺酸)、乳酸、羟基马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、均三甲苯磺酸、甲磺酸、萘磺酸、烟酸、2-萘磺酸、草酸、扑酸、果胶酯酸、苯基乙酸、3-苯基丙酸、特戊酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、p-甲苯磺酸、十一烷酸。
惊讶地发现，不易治疗的CIS膀胱癌可通过给予咪喹莫特(优选通过其膀胱内灌注)被成功治疗。因此，本文关于药物组合物(具体地，包括咪喹莫特的药物组合物)公开的所有内容也适用于咪喹莫特(本身)。例如，其适用于待治疗CIS膀胱癌患者，具体地优选待治疗患者群，例如患有并发性CIS膀胱癌的患者，以及适用于药物组合物的进一步实施方式，根据本发明的药物组合物的应用和包括给予根据本发明的药物组合物的治疗膀胱CIS的方法。
术语“膀胱癌”指代产生于泌尿道上皮的膀胱(恶性或非恶性)瘤疾病的若干类型中的任一种。根据本发明所要治疗的术语“原位癌”(CIS)优选指代局限于粘膜的平坦(例如，非乳头状)、高级别非肌肉浸润性膀胱肿瘤。
原位癌可显示为与炎症难区分的绒样淡红色区域。在很多情况下，其可以完全不可见。然而，CIS膀胱癌患者通常显示尿血(hematoria)作为早期症状。而且，CIS患者通常诉说疼痛症状。为诊断CIS膀胱癌，具体地为区分CIS膀胱癌与非肌肉浸润性膀胱癌的其他形式，成像技术，具体地超声图像检查和静脉内尿路造影术以及CT尿路造影术，通常是非决定性的并且在CIS诊断中没有任何作用。不论何时看到泌尿道上皮的异常区域，均优选采取活组织检查，例如，利用异常区域切除环的活组织检查。CIS诊断优选通过细胞检查、尿液细胞检查和膀胱活组织检查组织学检查进行。细胞检查在CIS检测中特别灵敏，因为大多数患者呈现CIS膀胱区域上皮层细胞凝集损失。因此，更大量的细胞漂浮在尿液中。可选地或另外地，通过荧光膀胱镜检查(fluorescent cystoscopy)进行的光动力诊断可有效用于CIS检测，具体地用于细胞检查阳性的患者。
一般，CIS膀胱癌患者不呈现T1阶段肿瘤浸润固有层。在某些情况下，患者还可部分呈现分离的癌症细胞，该分离的癌症细胞不局限于粘膜，但可位于粘膜下层区域中。在这种过渡阶段中，没有T1阶段肿瘤迹象可以是通过常规方法(如例如，组织学)可检测的。
CIS膀胱癌患者可以是任何年龄的任何女性或男性。CIS膀胱癌一般在男性中比女性中更常观察到，其中男性和女性CIS膀胱癌患者通过咪喹莫特被同等治疗，待治疗患者一般是任何种族的男性，优选至少40岁的男性，更优选至少50岁的男性，最优选至少60岁的男性，例如，年龄在60-80岁、年龄在60-70岁的男性。因此，根据本发明所要治疗的CIS膀胱癌患者优选是年龄在40-80岁、年龄在40-70岁、年龄在50-70岁、年龄在40-60岁、年龄在60-80岁、年龄在45-70岁、年龄在50-75岁、年龄在55-80岁、年龄在65-80岁的男性，更优选年龄在50-75岁的男性，例如年龄在55-75岁、年龄在60-75岁、年龄在65-75岁的男性。
被诊断有高风险肿瘤的男性或女性患者群可呈现至少一个，例如，1到上至7个，根据本发明通过咪喹莫特治疗的肿瘤位点。优选地，待治疗患者一般可以是年长于60岁的男性。因此，一般，呈现高风险膀胱癌(被诊断带有CIS)的患者群是男性并且年长于60岁，并且可例如呈现至少2个CIS肿瘤位点。
待治疗患者可显示上尿路、前列腺管和/或尿道中的CIS膀胱癌病灶。一般的患者群显示在上述身体部位中的任一个中多病灶癌症发生。
待治疗原位癌患者可选自下文限定的亚群中的任一种：原发性CIS膀胱癌患者，呈现分离的CIS，并且无在前或并发性外生肿瘤，具体地无在前或并发性乳头状泌尿道上皮肿瘤；继发性CIS膀胱癌患者，显示在前肿瘤病史，具体地在前乳头状泌尿道上皮肿瘤；或并发性CIS膀胱癌患者，在外生肿瘤存在的情况下，具体地在乳头状泌尿道上皮肿瘤存在的情况下显示CIS。
因此，优选根据本发明的男性或女性(优选男性)CIS膀胱患者群患有选自下列的CIS膀胱癌：原发性CIS膀胱癌、继发性CIS膀胱癌和并发性CIS膀胱癌。换句话说，优选膀胱的原位癌(CIS)选自原发性膀胱原位癌(CIS)、继发性膀胱原位癌(CIS)、和并发性膀胱原位癌(CIS)。
因此，根据本发明特别优选患有并发性CIS膀胱癌的CIS膀胱患者。换句话说，特别优选膀胱原位癌(CIS)是并发性膀胱原位癌(CIS)。
进一步，根据本发明所要治疗的男性或女性患者群(一般是男性)包括在前接受过膀胱内BCG治疗并且其中CIS膀胱癌仍存留的患者，作为优选的具体亚群。该亚群可占CIS膀胱癌患者的约40％。
总体而言，根据本发明所要治疗的CIS膀胱癌患者可在前、重叠或同时接受过/接受BCG治疗。利用BCG治疗的CIS膀胱患者可根据本发明来进行治疗，无论患者对BCG治疗有无响应。换句话说，可根据本发明来治疗BCG响应者和BCG不响应者。然而，优选地，根据本发明治疗这种BCG不响应者CIS膀胱癌患者(即接收过/接收BCG治疗，但对其不响应的患者)。
本发明人惊讶地发现，包括咪喹莫特的本发明药物组合物特别有效治疗CIS膀胱癌，例如，呈现被证实的、复发的、原发性、继发性或并发性CIS膀胱癌的患者，该CIS膀胱癌被定义为单单CIS膀胱癌或CIS的Ta阶段或T1阶段，优选地条件是Ta T1阶段肿瘤在治疗前被完全切除。
因此，本发明提供用于治疗膀胱原位癌用途的药物组合物。
根据一方面，本发明药物组合物可包括至少一种药学上可接受的赋形剂和任选地稀释剂。因此，本发明药物组合物可包括至少1种、或2、3或4或更多种药物赋形剂和任选地稀释剂。本发明药物组合物的环境下使用的术语“药学上可接受的赋形剂”指代本领域技术人员已知的、与根据本发明的药物组合物的物理和化学特征相容并且不干扰其目的用途(如例如，膀胱内灌注)的任何生理学惰性、药理学无活性材料。药学上可接受的赋形剂包括但不限于，聚合物、树脂、增塑剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、溶剂、共溶剂、缓冲系统、表面活性剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、制药级染料或颜料、和粘性剂。
本发明药物组合物中的制药级染料还可包括这样的染料：例如，附着和/或标记被本发明药物组合物接触的泌尿道上皮，从而允许识别本发明药物组合物接触的区域。这些区域可通过例如内窥镜技术或适于成像泌尿道上皮其他成像技术来视觉化。优选地，荧光染料在暴露于辐射能(例如，光)时是无毒染料和荧光。可用于本发明药物组合物的染料可包括例如，丹酰氯、异硫氰酸若丹明、Alexa 350、Alexa 430、AMCA、氨基吖啶、BODIPY 630/650、BODIPY 650/665、BODIPY-FL、BODIPY-R6G、BODIPY-TMR、BODIPY-TRX、5-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素、5-羧基-2′，4′，5′，7′-四氯荧光素、5-羧基荧光素、5-羧基若丹明、6-羧基若丹明、6-羧基四甲基氨基、Cascade Blue、Cy2、Cy3、Cy5、6-FAM、丹酰氯、荧光素、HEX、6-JOE、NBD(7-硝基苯-2-恶-1，3-二唑)、Oregon Green 488、Oregon Green 500、Oregon Green 514、Pacific Blue、酞酸、对酞酸、异酞酸、甲酚永固紫、甲酚蓝紫、亮甲酚蓝、对氨基苯甲酸、赤藓红、酞菁染料、偶氮甲碱、花青类、黄嘌呤类、琥珀酰荧光素、稀土金属穴状化合物、二胺三双吡啶铕、铕穴状化合物或螯合物、二胺、二氰、La Jolla蓝染料、别藻蓝蛋白(allopycocyanin)、allococyanin B、藻蓝蛋白C、藻蓝蛋白R、硫胺、藻红蓝蛋白(phycoerythrocyanin)、藻红蛋白R、REG、若丹明绿、异硫氰酸若丹明、若丹明红、ROX、TAMRA、TET、TRIT(四甲基若丹明异硫醇)、四甲基若丹明、和Texas Red。
在根据本发明的药物组合物的环境下，药学上可接受的载体一般包括本发明药物组合物的液体基质，例如，无热原水；自由水溶液(free water solution)可以任何适当的比例与水可混溶的药学上可接受的有机溶剂(例如，醇(例如，乙醇或异丙醇))组合；还可使用下列：等渗盐水或缓冲(水性)溶液，例如磷酸盐、柠檬酸盐等缓冲溶液，如下缓冲水溶液——包含例如钠盐，优选至少50mM钠盐，钙盐，优选至少0.01mM钙盐，和/或钾盐，优选至少3mM钾盐。根据优选实施方式，钠盐、钙盐和/或钾盐可以其卤化物(例如，氯化物、碘化物、或溴化物)形式，以其氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐、或硫酸盐等形式存在。不限于以下，钠盐的实例包括，例如，NaCl、NaI、NaBr、Na2CO3、NaHCO3、Na2SO4，任选的钾盐的实例包括，例如，KCl、KI、KBr、K2CO3、KHCO3、K2SO4，和钙盐的实例包括，例如，CaCl2、CaI2、CaBr2、CaCO3、CaSO4、Ca(OH)2。此外，本发明的组合物可包含上述阳离子的有机阴离子。根据更优选的实施方式，上文限定的适于注射目的的本发明组合物可包含选自氯化钠(NaCl)、氯化钙(CaCl2)和任选地氯化钾(KCl)的盐，其中除氯离子外还可存在更多阴离子。CaCl2也可被诸如KCl的另一种盐替代。本发明的组合物相对于具体参考介质可以是高渗，等渗或低渗的，即，本发明的组合物相对于具体参考介质可具有较高、相同或较低盐含量，其中优选地可采用上述盐的这种浓度：不因渗透或其他浓度效应而导致细胞损伤。参考介质例如是出现在“体内”方法中的液体，如血液、淋巴液、细胞溶质液、或其他体液、或例如可用作“体外”方法中的参考介质的液体，如普通缓冲液或液体。这种普通缓冲液或液体是本领域技术人员已知的。
根据优选实施方式，根据本发明的药物组合物一般包括以下含量的咪喹莫特：约0.005％(w/v)至约2％(w/v)、约0.01％(w/v)至约2％(w/v)、约0.1％(w/v)至约1.5％(w/v)、约0.1％(w/v)至约1.25％(w/v)、约0.1％(w/v)至约1％(w/v)、约0.2％(w/v)至约2％(w/v)、约0.2％(w/v)至约1.5％(w/v)、约0.2％(w/v)至约1.25％(w/v)、约0.2％(w/v)至约1％(w/v)、约0.2％(w/v)至约0.9％(w/v)、约0.3％(w/v)至约1％(w/v)、约0.3％(w/v)至约0.9％(w/v)、约0.4％(w/v)至约1％(w/v)、约0.4％(w/v)至约0.8％(w/v)、约0.1％(w/v)至约0.8％(w/v)、约0.2％(w/v)至约0.8％(w/v)、约0.1％(w/v)至约0.5(w/v)，优选约0.2％(w/v)至约0.5％(w/v)。以上数值也可相应地适用于％(w/w)。
根据一个实施方式，本发明药物组合物包括至少一种有机酸。用于本发明药物组合物用途的至少一种有机酸可以是羧酸和/或磺酸，优选至少一种有机酸是选自乳酸、乙酸、甲酸、柠檬酸、草酸、尿酸、苯甲酸、辛酸、二十烷酸、十八烷酸、十六烷酸或十二烷酸的羧酸。
根据本发明的优选实施方式，上文限定的本发明药物组合物包括选自乙酸和/或乳酸或其混合物的有机酸，其浓度为约0.025M至约0.200M，优选约0.025M至约0.100M的浓度、或约0.035M至约0.1M的浓度、或约0.045M至约0.1M的浓度、或约0.055M至约0.1M的浓度、或约0.065M至约0.1M的浓度、或约0.075M至约0.1M的浓度、或约0.085M至约0.1M的浓度、或约0.100M至约0.200M的浓度、或约0.100M至0.150M的浓度、或约0.020M至约0.200M的浓度，例如，下列浓度：约0.025M至约0.200M、约0.030M至约0.200M、约0.035M至约0.200M、约0.040M至约0.200M、约0.045M至约0.200M、约0.050M至约0.200M、约0.055M至约0.200M、约0.060M至约0.200M、约0.065M至约0.200M、约0.070M至约0.200M、约0.075M至约0.200M、约0.080M至约0.200M、约0.085至约0.200M、约0.090M至约0.200M、约0.095M至约0.200M、约0.100M至约0.200M、约0.125M至约0.200M、约0.130M至约0.200M、约0.135M至约0.200M、约0.140M至约0.200M、约0.145M至约0.200M、约0.0150M至约0.200M、约0.155M至约0.200M、约0.160M至约0.200M、约0.165M至约0.200M、约0.170M至约0.200M、约0.175M至约0.200M、约0.180M至约0.200M、约0.185M至约0.200M、约0.190M至约0.200M、或约0.195M至约0.200M、或优选约0.030M至约0.100M的浓度，例如，约0.035M至约0.100M、约0.040M至约0.100M、约0.045M至约0.100M、约0.050M至约0.100M、约0.055M至约0.100M、约0.060M至约0.100M、约0.065M至约0.100M、约0.070M至约0.100M、或约0.075M至约0.100M的浓度、或约0.080M至约0.100M、约0.085至约0.100M、约0.090M至约0.100M、约0.095M至约0.100M、约0.095M至约0.200M的浓度。
因此，上文限定的本发明药物组合物可包括乙酸和/或乳酸或其混合物，例如，本发明药物组合物可包括任何上述总浓度的乙酸、或乳酸、或乙酸和乳酸。因此本发明药物组合物可包括，例如，乳酸，其浓度为约0.225％(w/v)至约1.81％(w/v)，优选约0.27％(w/v)至约1.81％(w/v)、约0.36％(w/v)至约1.35％(w/v)、约0.45％(w/v)至约1.35％(w/v)、约0.54％(w/v)至约1.13％(w/v)、约0.63％(w/v)至约0.9％(w/v)、约0.72％(w/v)至约0.9％(w/v)的浓度，更优选约0.45％(w/v)至约0.9％(w/v)的浓度，最优选约0.51％(w/v)至约0.9％(w/v)的浓度，或由上文限定的这些数值中的任意两个形成的任何范围。上述数值也可相应地适用于％(w/w)。在本发明药物组合物的环境下，术语“乳酸”指代2-羟基丙酸，并且包括(R)-和(S)-2-羟基丙酸两者及其任何消旋混合物。至少一种上文限定的有机酸提高咪喹莫特在水溶液中的溶解性质。
根据具体实施方式，本发明药物组合物可包括一种或多种环糊精——也被称为环直链淀粉。环糊精可用于增强溶解度和有利地增强本发明药物组合物中的咪喹莫特的膜穿透，即使咪喹莫特可以不仅仅通过环糊精而充分溶解。在这种情况下，咪喹莫特的溶解度不仅在最终本发明药物组合物中利用环糊精而增强，而且在形成的中间溶液(原液)中通过咪喹莫特和上文限定的有机酸(例如，乳酸、乙酸或其混合物)而增强。
本发明药物组合物中至少一种环糊精与乳酸和/或乙酸组合应用导致，与仅与乳酸组合的咪喹莫特的溶解度相比，咪喹莫特溶解度的少量但有意义的增加，该增加为至少10％，更优选至少15％或至少约18％。
因此，环糊精可在药物组合物制备中的任何阶段中被用来增强咪喹莫特的溶解度。在本发明的环境下，环糊精优选被理解成环状寡糖家族的成员，由连接在第1和4位之间的5个或更多个α-D-吡喃葡萄糖苷单元组成，如关于直链淀粉(淀粉的片段)已知。在本发明的环境下，环糊精具体包括α-环糊精——构成六元糖环分子、β-环糊精——构成七元糖环分子、γ-环糊精——构成八元糖环分子、δ-环糊精和ε-环糊精。特别优选地，本发明药物组合物包括α-环糊精、δ-环糊精、和/或γ-环糊精，还更优选δ-环糊精，如羟丙基-δ-环糊精(HP-δ-CD)。
因此，上文限定的本发明药物组合物可包括上文限定的环糊精，其含量为约0.1％(w/v)至约30％(w/v)，一般约1％(w/v)至约20％(w/v)的含量，优选约2％(w/v)至约20％(w/v)的含量，更优选约5％(w/v)至约20％(w/v)的含量，还更优选约5％(w/v)至约15％(w/v)的含量，和最优选约5％(w/v)至约10％(w/v)的含量、或约2％(w/v)至约6％(w/v)的含量、或约0.1％(w/v)至约4％(w/v)的含量、或约0.5％至5％的含量，更优选2％至5％的含量，或可选地，约4％(w/v)至约8％(w/v)的含量、或约6％(w/v)至约10％(w/v)的含量、或约8％(w/v)至约12％(w/v)的含量，其中以％(w/v)限定的含量可被理解为基于相对于本发明药物组合物或中间原液的总体积的环糊精重量(在例如作为液体或半液体制剂被提供时)。可选地，上述含量可以％(w/w)限定，其中以％(w/w)限定的含量可在相对于本发明药物组合物总重量的环糊精重量的基础上或在中间原液的基础上确定。
因此，上文限定的本发明药物组合物可包括上文限定的环糊精，其含量为约2％(w/v)至约6％(w/v)，例如，约2.5％(w/v)至约6％(w/v)、约3％(w/v)至约6％(w/v)、约3.5％(w/v)至约6％(w/v)、或约4.5％(w/v)至约6％(w/v)、或约2.5％(w/v)至约5.5％(w/v)，约3％(w/v)至约5.5％(w/v)、约3.5％(w/v)至约5.5％(w/v)、约4％(w/v)至约5.5％(w/v)、约4.5％(w/v)至约5.5％(w/v)、或约5％(w/v)，优选约4％(w/v)至约6％(w/v)。
根据更优选的实施方式，具体地关于特定给予形式，如例如膀胱内给予，根据本发明的药物组合物进一步包括至少一种热敏剂。在本发明的环境下，术语“热敏剂”一般指代能够在从液体或半液体状态变成固体或半固体状态，优选变成固体状态的限定转变点(共作用转变)改变其聚集状态或其粘度的化合物，优选聚合物。更优选术语“热敏剂”一般指代能够在具体转变点(也称作“低临界溶解温度”(LCST)或“凝胶转变温度”)将其聚集状态从液体或半液体状态变成固体或半固体状态(例如，从液体变成凝胶样状态或变成固体状态)的化合物，优选(有机)聚合物，其中具体转变点优选通过如下具体转变温度来限定：在约15℃至约35℃范围内，更优选在约15℃至约30℃范围内，还更优选在约15或20℃至约30℃范围内，最优选在约15或20℃至约25℃范围内。根据本发明的“低临界溶解温度”在环境压力下测量，并且取决于热敏剂的摩尔质量分布。
优选地，上文限定的这种热敏剂允许热敏剂和用其配制的任何化合物或组合物(例如，本发明药物组合物)在体温下原位凝胶形成，而药物组合物一般会显示(半)液体性质。在这种情况下，热敏剂和用其配制的任何化合物或组合物的原位凝胶形成一般在紧随本发明药物组合物给予至待治疗患者的患病位点(如例如，膀胱中(膀胱内给予))之时或之后发生——即，不在给予本发明药物组合物之前。
这种原位凝胶形成特别有利于具体应用，例如，诸如本文限定的本发明药物组合物的膀胱内给予，用于咪喹莫特在膀胱内经过长时期释放(例如，0.5h至约2小时，优选1小时)，因此特别适于治疗膀胱原位癌。
包括热敏剂的本发明药物组合物的一个具体优势是由于上文限定的温度范围的转变点选择方便其给予。更具体地，上文限定的温度范围的转变点选择不仅允许本发明药物组合物以液体或半液体聚集物状态制备或储存——例如，在室温下。其还允许通过例如借助于导管注射给予本发明药物组合物(优选液体)，因为本发明药物组合物在被给予后立即固化或进行凝胶化——因为周围膀胱组织温度增加，周围膀胱组织温度优选高于转变点温度。因此，在膀胱内引起凝胶形成。因此，上文限定的本发明药物组合物的给予可利用非浸润性方法(无手术)进行，如通过具有适当直径的套管的注射针、注射管、内窥镜方法、经尿道导管及类似物。
凝胶形成另外造成本发明的发明药物组合物的生物粘性性质增加，导致咪喹莫特对于TLR7表达细胞的暴露延长和全身药物穿透减少。以这种方式，TLR7表达细胞在本发明药物组合物灌注期间长时期暴露于咪喹莫特，如例如，0.5h-2h、一般约1小时，这足以引起免疫学响应，发挥期望的治疗作用。
另外，包括至少一种热敏剂(例如，下文限定的泊洛沙姆407)的本发明药物组合物有利地避免或至少显著减少一般由咪喹莫特引起的全身性副作用。全身性副作用的减少是缘于咪喹莫特在患病位点(即，膀胱)的局部限制给予——基于本发明药物组合物的体内粘度增加和造成的生物学活性剂向周围膀胱组织(例如，泌尿道上皮)的扩散减少和/或减缓。另外，本发明药物组合物的生物粘性性质增加可有助于咪喹莫特对泌尿道上皮和从而对原位癌的局部限制作用。
此外，包括至少一种热敏剂的本发明药物组合物有利地允许其中包含的咪喹莫特的所谓“延长释放”(或有时被称为“长期释放”)。具体地，本发明药物组合物的凝胶形成导致咪喹莫特以零级动力学的持续药物释放，增强治疗作用的持续时间。本发明药物组合物包含的咪喹莫特的这种延长的治疗作用还避免本发明药物组合物的反复给予——具体地以短时间间隔——这在施用不呈现持续药物释放的药物组合物时一般无法避免。
另外地，本发明药物组合物的LCST被乙酸和乳酸不同程度地影响。两种酸总体上均增加组合物的LCST。然而，例如咪喹莫特完全不影响仅包括乙酸的本发明药物组合物的凝胶转变温度，但增强包括乳酸的组合物的LCST。因此，本文限定的热敏剂的最终百分比可取决于所用酸和是否存在环糊精。
本发明药物组合物可包括下列作为至少一种热敏剂：壳聚糖或其衍生物、或聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烷)共聚物(也称作PEO-PPO-PEO或泊洛沙姆)。
在本发明药物组合物的环境下，壳聚糖一般是由无规分布的β-(1-4)-连接的D-葡萄糖胺和N-乙酰基-D-葡萄糖胺单元组成的线性多糖。壳聚糖可通过用(热)氢氧化钠溶液而使壳质去乙酰化获得。用于本发明药物组合物用途的壳聚糖衍生物可包括例如，N-三甲基-壳聚糖(TMC)、壳聚糖酯(例如，谷氨酸酯、琥珀酸酯、酞酸酯)或壳聚糖缀合物，如例如，壳聚糖-4-硫丁基脒。
在本发明的环境下，泊洛沙姆一般被理解为聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烷)共聚物，也简称为“PEO-PPO-PEO”。因此这种泊洛沙姆是由侧接两个聚氧乙烯(聚(环氧乙烷))亲水链的聚氧丙烯(聚(环氧丙烷))中央疏水链组成的非离子型三嵌段共聚物。这种泊洛沙姆的分子量总体上不具体限定，并且可针对各具体目的适当地变化。由于可定制聚合物嵌段的长度，可提供多种具有略微不同性质的泊洛沙姆。关于上位概念″泊洛沙姆″，这些共聚物通过字母″P″(泊洛沙姆)后接三个数字统一命名，前两个数字x100给出聚氧丙烯核的近似分子质量，最后一个数字x10给出聚氧乙烯百分比含量(例如，P407＝聚氧丙烯分子质量为4,000g/mol并且70％聚氧乙烯含量的泊洛沙姆)。关于普朗尼克(Pluronic)/Lutrol商品名，这些共聚物的编码始于一个字母——限定其在室温下的物理形式(L＝液体，P＝糊剂，F＝碎片(固体))，后接两个或三个数字。数字番号中的第一个数字(三数字编号中的前两个数字)乘以300表示疏水物的近似分子量；并且最后一个数字x10给出聚氧乙烯百分比含量(例如，L61＝聚氧丙烯分子质量为1,800g/mol和10％聚氧乙烯含量的普朗尼克)。在给出的实例中，泊洛沙姆181(P181)＝普朗尼克L61。
适于本发明药物组合物、作为热敏剂的泊洛沙姆优选包括适于本发明目的的任何聚(环氧乙烷)-聚(环氧丙烷)-聚(环氧乙烷)共聚物或这种共聚物的混合物，即，呈现上文限定的热敏性质的任何PEO-PPO-PEO聚合物或这种共聚物的混合物。这种PEO-PPO-PEO聚合物还包括市售PEO-PPO-PEO聚合物和其混合物，例如，普朗尼克F 108Cast Solid Surfacta；普朗尼克F 108Pastille；普朗尼克F 108Prill；普朗尼克F 108NF Prill(泊洛沙姆338)；普朗尼克F 127；普朗尼克F 127Prill；普朗尼克F 127NF；普朗尼克F 127NF 500BHT Prill；普朗尼克F 127NF Prill(泊洛沙姆407)；普朗尼克F 38；普朗尼克F 38Pastille；普朗尼克F 68；普朗尼克F 68Pastille；普朗尼克F 68LF Pastille；普朗尼克F 68NF Prill(泊洛沙姆188)；普朗尼克F 68Prill；普朗尼克F 77；普朗尼克F 77Micropastille；普朗尼克F 87；普朗尼克F 87NF Prill(泊洛沙姆237)；普朗尼克F 87Prill；普朗尼克F 88Pastille；普朗尼克F 88Prill；普朗尼克F 98；普朗尼克F 98Prill；普朗尼克L 10；普朗尼克L 101；普朗尼克L 121；普朗尼克L 31；普朗尼克L 35；普朗尼克L 43；普朗尼克L 44；普朗尼克L 44NF(泊洛沙姆124)；普朗尼克L 61；普朗尼克L 62；普朗尼克L 62LF；普朗尼克L 62D；普朗尼克L 64；普朗尼克L 81；普朗尼克L 92；普朗尼克L44NF INH表面活性剂(泊洛沙姆124)；普朗尼克N 3；普朗尼克P 103；普朗尼克P 104；普朗尼克P 105；普朗尼克P 123表面活性剂；普朗尼克P 65；普朗尼克P 84；普朗尼克P 85；和泊洛沙姆403。此外，这种PEO-PPO-PEO聚合物包括由这些PEO-PPO-PEO聚合物中的任意两种或更多种(3、4、5、6等)形成的混合物。
更优选地，适于本发明药物组合物、作为热敏剂的泊洛沙姆包括泊洛沙姆或其混合物，该泊洛沙姆选自泊洛沙姆124、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆338、泊洛沙姆403、和泊洛沙姆407。因此，利用BASF的泊洛沙姆编码符号，适当的泊洛沙姆选自普朗尼克/Lutrol F 44(泊洛沙姆124)、普朗尼克/Lutrol F 68(泊洛沙姆188)、普朗尼克/Lutrol F 87(泊洛沙姆237)、普朗尼克/Lutrol F 108(泊洛沙姆338)、普朗尼克/Lutrol F 123(泊洛沙姆403)、普朗尼克/Lutrol F 127(泊洛沙姆407)。
根据还更优选的实施方式，适于本发明药物组合物、作为热敏剂的泊洛沙姆包括泊洛沙姆或其混合物，该泊洛沙姆选自泊洛沙姆188、泊洛沙姆403、和泊洛沙姆407。
还更优选地，这种比例选自泊洛沙姆407：泊洛沙姆188的如下比例：约1∶20、1∶19、2∶18∶、3∶17、4∶16、5∶15、6∶14、7∶13、8∶12、9∶11、10∶10(1∶1)、11∶9、12∶8、13∶7、14∶6、15∶5、16∶4、17∶3、18∶2、19∶1或20∶1、或通过上文限定的数值中的任意两个形成的比例，例如、1∶18、1∶17、1∶16、1∶15、1∶14、1∶13、1∶12、1∶11、1∶10、1∶8、1∶7、1∶6、1∶5、1∶2、或2∶17、2∶15、2∶13、2∶11、2∶9、2∶7、2∶5、2∶3、2∶1、或3∶16、3∶14、3∶13、3∶11、3∶10、3∶8、3∶7、3∶5、3∶4、或4∶15、4∶13、4∶11、4∶9、4∶7、4∶5、或5∶15、5∶13、5∶12、5∶11、5∶9、5∶8、5∶7、5∶6、5∶2、5∶1、或6∶13、6∶11、6∶9、6∶7、6∶5、6∶1、或7∶12、7∶11、7∶10、7∶9、7∶8、7∶6、7∶5、7∶4、7∶3、7∶2、7∶1、或8∶11、8∶9、8∶7、8∶5、8∶3、8∶1、或9∶10、9∶8、9∶7、9∶5、9∶4、9∶2、9∶1、或10∶1、10∶3、10∶7、10∶9、或11∶8、11∶7、11∶6、11∶5、11∶4、11∶3、11∶2、11∶1、或12∶7、12∶5、12∶1、或13∶6、13∶5、13∶4、13∶3、13∶2、13∶1、或14∶5、14∶3、14∶2、14∶1、或15∶4、15∶2、15∶1、或16∶3、16∶1、或17∶2、17∶1、或18∶1，最优选地，这种比例选自泊洛沙姆407∶泊洛沙姆188的如下比例：约7∶3、7.5∶2.5、8∶2、8.5∶1.5、9∶1、或9.5∶0.5、或通过这些数值中的任意两个形成的比例，例如，7∶0.5、7∶1、7∶1.5、7∶2、7∶2.5、或7.5∶0.5、7.5∶1、7.5∶1.5、7.5∶2、或8∶2.5、8∶1.5、8∶1。8∶0.5、或8.5∶0.5、8.5∶1.0、或9.0∶0.5。因此，泊洛沙姆188和泊洛沙姆407在本发明药物组合物中的绝对含量可基于总量和两种泊洛沙姆在本发明药物组合物中的具体比例来确定。
例如，本发明药物组合物可包括泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的混合物作为热敏剂，其总量为约15％(w/v)/(w/w)至约27.5％(w/v)/(w/w)，更优选约15％(w/v)/(w/w)、约20％(w/v)/(w/w)、约25％(w/v)/(w/w)的总量，并且优选泊洛沙姆407∶泊洛沙姆188的比例为约15∶5、16∶4、17∶3、18∶2、19∶1或20∶1、或通过这些数值中的任意两个形成的比例，更优选约9.5∶0.5、约9∶1、约8.5∶1.5、或约8∶2的比例、或通过这些数值中的任意两个形成的比例。因此，当本发明药物组合物包括泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的混合物，泊洛沙姆407可在本发明药物组合物中的存在量为约15％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、约15.5％(w/v)/(w/w)至约26.5％(w/v)/(w/w)，优选约17.5％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)，而泊洛沙姆188可在药物组合物中的存在量为约1.0％(w/v)/(w/w)至约6.0％(w/v)/(w/w)，优选约2.5％(w/v)/(w/w)至约4.5％(w/v)/(w/w)。术语(w/v)/(w/w)意为(w/v)或(w/w)。
在适于本发明药物组合物、作为热敏剂的不同PEO-PPO-PEO聚合物中，泊洛沙姆407被最优先选择，并且是在本发明的环境下生产热响应凝胶的首选聚合物。泊洛沙姆407作为热敏剂可单独使用或与上述其他泊洛沙姆(优选与泊洛沙姆188)共混使用，从而生成在选定温度下，优选在略高于室温(＞20℃)但低于体温(＜37℃)下，“成胶”的热敏剂混合物。
包括热敏剂的根据本发明的药物组合物特别有利。例如，包括热敏剂(如例如，泊洛沙姆407)的根据本发明的药物组合物的膀胱内施用避免了全身性吸收，另外还使咪喹莫特与泌尿道上皮的局部接触增加。因此，热敏剂的添加减少了咪喹莫特从膀胱泌尿道上皮的全身性吸收，并且持续局部浸润免疫细胞。
根据特别优选的实施方式，本发明药物组合物包括上文总体上关于热敏剂限定含量的泊洛沙姆407作为热敏剂，更优选约0.1、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10％(w/v)至约40％(w/v)的含量、或约2％(w/v)至约35％(w/v)的含量，还更优选约2％(w/v)至约30％(w/v)的含量，最优选约10％(w/v)至约25％(w/v)的含量，例如，约10.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约11％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约11.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约12.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约13.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约14.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约15.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约16％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约16.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约17％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约17.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约18％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约18.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约19％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约19.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约20％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约20.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约21％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约21.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约22％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约22.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约23％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约23.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量、约24％(w/v)至约25％(w/v)的含量、或约24.5％(w/v)至约25％(w/v)的含量，或更具体地约12％(w/v)至约24％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约23％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约22％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约21％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约20％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约19％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约18％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约17％(w/v)的含量、约12％(w/v)至约16％(w/v)，或更具体地约13％(w/v)至约24％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约23％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约22％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约21％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约20％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约19％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约18％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约17％(w/v)的含量、约13％(w/v)至约16％(w/v)的含量、或更具体地约14％(w/v)至约24％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约23％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约22％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约21％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约20％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约19％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约18％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约17％(w/v)的含量、约14％(w/v)至约16％(w/v)的含量，或更具体地约15％(w/v)至约24％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约23％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约22％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约21％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约20％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约19％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约18％(w/v)的含量、16％(w/v)至约18％(w/v)的含量、约15％(w/v)至约17％(w/v)的含量，最优选约15％(w/v)至约16％(w/v)的含量，其中以％(w/v)限定的含量可被理解为基于，相对于本发明药物组合物或中间原液(在例如作为液体或半液体制剂被提供时)的总体积的本文限定的热敏剂的重量。可选地，上述含量可以％(w/w)限定，其中以％(w/w)限定的含量可被理解为基于，相对于本发明药物组合物的总重量的本文限定的热敏剂的重量。
据此，本发明药物组合物可因此包括如下(总)量的泊洛沙姆407作为热敏剂：约10％(w/v)/(w/w)至约25.0％(w/v)/(w/w)，更优选如下总量：约11％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、约12.0％(w/v)/(w/w)至约25.0％(w/v)/(w/w)、约12.0％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、约13％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、约14.0％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、约15.0％(w/v)/(w/w)至约25.0％(w/v)/(w/w)、约15.0％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、约15.5％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、约16.0％(w/v)/(w/w)至约22.5％(w/v)/(w/w)、或约11％(w/v)/(w/w)至约20.0％(w/v)/(w/w)、约12.0％(w/v)/(w/w)至约20.0％(w/v)/(w/w)、约13％(w/v)/(w/w)至约20.0％(w/v)/(w/w)、约14.0％(w/v)/(w/w)至约20.0％(w/v)/(w/w)、约15.0％(w/v)/(w/w)至约20.0％(w/v)/(w/w)、约15.5％(w/v)/(w/w)至约20.0％(w/v)/(w/w)、约16.0％(w/v)/(w/w)至约20.0％(w/v)/(w/w)、或约11％(w/v)/(w/w)至约19.0％(w/v)/(w/w)、约12.0％(w/v)/(w/w)至约19.0％(w/v)/(w/w)、约13％(w/v)/(w/w)至约19.0％(w/v)/(w/w)、约14.0％(w/v)/(w/w)至约19.0％(w/v)/(w/w)、约15.0％(w/v)/(w/w)至约19.0％(w/v)/(w/w)、约15.5％(w/v)/(w/w)至约19.0％(w/v)/(w/w)、约16.0％(w/v)/(w/w)至约19.0％(w/v)/(w/w)、或约11％(w/v)/(w/w)至约18.0％(w/v)/(w/w)、约12.0％(w/v)/(w/w)至约18.0％(w/v)/(w/w)、约13％(w/v)/(w/w)至约18.0％(w/v)/(w/w)、约14.0％(w/v)/(w/w)至约18.0％(w/v)/(w/w)、约15.0％(w/v)/(w/w)至约18.0％(w/v)/(w/w)、约15.5％(w/v)/(w/w)至约18.0％(w/v)/(w/w)、约16.0％(w/v)/(w/w)至约18.0％(w/v)/(w/w)、或约11％(w/v)/(w/w)至约17.0％(w/v)/(w/w)、约12.0％(w/v)/(w/w)至约17.0％(w/v)/(w/w)、约13％(w/v)/(w/w)至约17.0％(w/v)/(w/w)、约14.0％(w/v)/(w/w)至约17.0％(w/v)/(w/w)、约15.0％(w/v)/(w/w)至约17.0％(w/v)/(w/w)、约15.5％(w/v)/(w/w)至约17.0％(w/v)/(w/w)、约16.0％(w/v)/(w/w)至约17.0％(w/v)/(w/w)、或约11％(w/v)/(w/w)至约16.5％(w/v)/(w/w)、约12.0％(w/v)/(w/w)至约16.5％(w/v)/(w/w)、约13％(w/v)/(w/w)至约16.5％(w/v)/(w/w)、约14.0％(w/v)/(w/w)至约16.5％(w/v)/(w/w)、约15.0％(w/v)/(w/w)至约16.5％(w/v)/(w/w)、约15.5％(w/v)/(w/w)至约16.5％(w/v)/(w/w)。术语(w/v)/(w/w)意为(w/v)或(w/w))或由上文限定的这些数值中的任意两个形成的任何范围。
根据一个特别优选的实施方式，上文限定的本发明药物组合物包括乙酸和/或乳酸，其浓度为约0.025M至约0.2M，优选浓度为0.05M至约0.150M；咪喹莫特，其含量为约0.1％(w/v)至约1％(w/v)；环糊精，其含量为约2％(w/v)至约8％(w/v)；和泊洛沙姆407，其含量为10％(w/v)至约25％(w/v)，优选含量为约12％(w/v)至约25％(w/v)。
根据进一步特别优选的实施方式，上文限定的本发明药物组合物可包括乳酸，其浓度为约0.025M(相当于0.225％(w/v))至约0.2M(相当于1.81％(w/v))，优选浓度为约0.03M(相当于0.27％(w/v))至约0.15M(相当于1.36％(w/v))、约0.035M(相当于0.315％(w/v))至约0.15M(相当于1.36％(w/v))、约0.04M(相当于0.36％(w/v))至约0.125M(相当于1.125％(w/v))、约0.05M(相当于0.45％(w/v))至约0.100M(相当于0.9％(w/v))；咪喹莫特，其浓度为约0.1％(w/v)至约1％(w/v)，优选含量为约0.2％(w/v)至约1％(w/v)、约0.3％(w/v)至约0.9％(w/v)、约0.4％(w/v)至约0.8％(w/v)、约0.5％(w/v)至约0.7％(w/v)；泊洛沙姆407，其含量为约12％(w/w)至约18％(w/w)，优选含量为约13％(w/w)至约17％(w/w)、约14％(w/w)至约16％(w/w)、约15％(w/w)至约16％(w/w)、约16％(w/w)至约18％(w/w)；羟丙基-β-环糊精，其含量为约2％(w/v)至约8％(w/v)，优选含量为约3％(w/v)至约8％、约3.5％(w/v)至约7％(w/v)、约4％(w/v)至约6％(w/v)、约4.5％(w/v)至约6％/w/v)、约5％(w/v)至约7％(w/v)、约5％/w/v)至约6％(w/v)。
在最优选的实施方式中，上文限定的本发明药物组合物包括约0.4％(w/w)咪喹莫特，约16％(w/w)含量的泊洛沙姆407、约5％(w/w)含量的羟丙基-β-环糊精和约0.51％(w/w)含量的乳酸。本发明药物组合物可任选地进一步包括载体。
因此，上文限定的本发明药物组合物是水溶液，其pH值为约3至约8，优选约3至约7，更优选约3至约6，还更优选约3至约5，和最优选pH值为约3.5至约5——包括下列范围的pH值：约3.8至约4.9、约3.8至约4.8、约3.9至约4.7、约3.9至约4.6、约4.0至约4.8、约4.0至约4.7、约4.0至约4.6、约4.0至约4.5、约4.0至约4.4、或4.1至约5.0、约4.1至约4.9、约4.1至约4.8、约4.1至约4.3、约4.1至约4.2，或最优选约4.1至约4.7。本发明药物组合物可在上文限定的pH值下制备和给予。如需，pH值可针对具体治疗和给予要求被进一步调节，例如，调节至更中性的pH值——约5，6、或7(pH 5至7)，只要咪喹莫特的溶解度不受影响，例如，咪喹莫特不析出或形成任何种类的聚集物——聚集物将干扰本发明药物组合物的预期治疗作用。本发明的水性药物组合物的pH可通过碱(如例如，氢氧化钠(NaOH)或任何其他适当的OH-供体)滴定来调节。
根据一个进一步实施方式，本发明涉及上文限定的本发明药物组合物在制备用于治疗原位癌膀胱癌和/或用于辅助治疗原位癌膀胱癌用途的药物中的应用。
本发明药物组合物可被给予至少一周一次，例如，一周一次、两次或三次。
更具体地，本发明药物组合物可被给予例如，至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周，优选约3-12周、约4-12周、约4-8周、约6-12周，还更优选约6-8周。因此，本发明药物组合物可被给予大约例如，4周(例如，一周一次、两次或三次)、约5周(例如，一周一次、两次或三次)、约6周(例如，一周一次、两次或三次)、约7周(例如，一周一次、两次或三次)、约8周(例如，一周一次、两次或三次)、约9周(例如，一周一次、两次或三次)、约10周(例如，一周一次、两次或三次)、约11周(例如，一周一次、两次或三次)或约12周(例如，一周一次、两次或三次)、或约例如5-12周、或约7-11周、或约8-12周、或约9-12周、或约10-12周、或约11-12周或约3-10周、或约4-9周、或约5-8周。治疗方案将例如取决于肿瘤疾病严重程度、患者健康状况、性别、年龄、副作用等。
根据本发明的药物组合物可优选以如下时间间隔被给予：约2-7天，例如，2、3、4、5、6或7天，优选7天。因此，上文限定的本发明药物组合物可在例如第0、2、4、6、8天等等、或在第0、3、6、9、12、15天等等、或在第0、4、8、12、16、20天等等、或在第0、5、10、15天等等、或第0、6、12、18、24天等等、或第0、7、14、21、28天等等被给予，直到上文限定的给药时间间隔结束。在此，“第0天”表示第一次治疗那天，例如，进行本发明药物组合物的第一次给予(例如，第一次膀胱内灌注)的那天。上文限定的本发明药物组合物的膀胱内灌注可通过适于具体目的的、本领域技术人员已知的任何手段来进行，例如，通过经尿道导管。
因此，本发明药物组合物可被给予共计例如，至少3剂、至少4剂，优选至少5剂、至少6剂、至少7剂或至少8剂、或例如，3-12剂、4-11剂、5-10剂、6-9剂、7-8剂、或例如，10剂，12剂，14剂、16剂、18剂、20剂、22剂、24剂、26剂、28剂、30剂、32剂、34剂、36剂、或例如约3-36剂、约4-32剂、约6-30剂、约8-28剂、约10-26剂、约12-24剂、约14-20剂、约16-22剂、约18-20剂、或例如，4剂、5剂、6剂、7剂、8剂、9剂、10剂、11剂、12剂、13剂、14剂、15剂、16剂、17剂、18剂、19剂、20剂、21剂、22剂、23剂、24剂、25剂、26剂、27剂、28剂、29剂、30剂、31剂、32剂、33剂、34剂、35剂、36剂。
根据更具体的实施方式，本发明药物组合物(例如，根据选择的咪喹莫特浓度、或例如患者膀胱容积)可以如下体积被给予：例如，约10-100ml，优选如下体积：例如，约20ml、约30ml、约40ml、约50ml、约60ml、约70ml、约80ml、约90，或如下体积：约25ml-100ml、约30ml-100ml、约35ml-100ml、约40ml-100ml、约45ml-100ml、约50ml-100ml、约55ml-100ml、约60ml-100ml、约65ml-100ml、约70ml-100ml、约75ml-100ml、约80ml-100ml、约85ml-100ml、约90ml-100ml、约95ml-100ml，或如下体积：例如，约25-50ml、约30-55ml、约35-60ml、约40ml-65ml、约45ml-70ml、约50ml-75ml、约55ml-80ml、约60ml-85ml、约65ml-90ml、约70ml-95ml，更优选约40ml-70ml的体积、或例如约50ml的体积。
根据本发明的药物组合物被配制使得上文限定的本发明药物组合物的膀胱内保留时间可以为例如，至少约0.5h、至少约1h、至少约1.5h、至少约2h、至少约2.5h、至少约3h、至少约3.5h、或约4h，优选例如0.5h至约2h之间、约0.75h至约2h之间、约1h至约1.5h之间、约1.5h至约2h之间、约2h至约4h之间、约2.5至约3h之间、约2.5h至约3.5h之间、或例如，约0.6h、约0.7h、约0.8h、约0.9h、约1h、约1.1h、约1.2h、约1.3h、约1.4h、约1.5h、约1.6h、约1.7h、约1.8h、约1.9h、约2h。在上文限定的本发明药物组合物的环境下使用的保留时间将指代本发明药物组合物的膀胱内保留时间，或例如也可指代例如药物组合物的至少50％(例如，60％、70％)的咪喹莫特被泌尿道上皮吸收的时间。
不受下文限制，本发明药物组合物将包含或释放足量活性咪喹莫特，以向对象提供如下剂量的咪喹莫特或其盐：约10、20、50、或100纳克/千克(ng/kg)至约50毫克/千克(mg/kg)，优选约10微克/千克(μg/kg)至约5mg/kg。因此，本发明药物组合物将包含或释放足量咪喹莫特，以提供如下剂量：例如，约0.0001、0.001、0.01或0.01mg/m2至约5.0mg/m2(按照Dubois法计算)，其中对象体表面积(m2)利用对象体重来计算：m2＝(wtkg0.425x高cm0.725)x 0.007184——虽然在一些实施方式中方法可通过给予此范围外的剂量的化合物或盐或组合物来实施。在这些实施方式中的一些中，方法包括给予足量咪喹莫特，以向对象提供约0.0001、0.001、0.01、或0.1mg/m2至约2.0mg/m2的剂量，例如，约0.004、0.04、或0.4mg/m2至约1.2mg/m2的剂量。
关于本发明的一些实施方式，下列项目中的一个或多个适用：
本发明药物组合物的局部(topical)使用优选不被包括在本发明范围内。此外，包括油的组合物，例如乳液，优选不被包括在本发明内，配制成w/o(油包水)或o/w(水包油)制剂的药物组合物也优选不被包括。配制成包括油相中4％(w/w)咪喹莫特和水相中按重量计1％(w/w)乳酸(85％)的乳膏的药物组合物也优选不被包括。胃肠外给予的药物组合物优选不被包括。包括1％(w/w)咪喹莫特和/或1％或2％(w/w)乳酸(85％)或0.6％(w/w)乙酸的胃肠外给予的药物组合物优选不被包括。此外，包括乙酸和脱水山梨糖醇单油酸酯20肉豆蔻酸酯或肉豆蔻酸异丙酯的药物组合物不被包括，和/或包括通过混合壳聚糖乙酸溶液与咪喹莫特获得的咪喹莫特壳聚糖纳米颗粒的药物组合物不被包括。US 2004/0265351 A1公开的长效制剂也优选从本发明范围排除，例如，在人体之中或之上保留超过4小时的长效制剂。
根据一个实施方式，本发明涉及治疗原位癌膀胱癌的方法，其中方法包括步骤：向有其需要的人给予治疗有效量的上文限定的本发明药物组合物。
因此，方法包括膀胱内给予上文限定的本发明药物组合物，其中本发明药物组合物可被如下给予：例如，经过1min-60min、经过2min-50min、经过3min-45min、经过4min-40min、经过5min-35min、经过10min-30min、经过15min-20min，优选例如、经过2min-15min、或经过3min-15min、或经过4min-12min、或经过5min-10min，更优选经过3min-9min、或经过3min-8min、或4min-8min，最优选经过3min-5min。方法进一步包括经过以下过程给予本发明药物组合物：例如，至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周，优选约3-12周、约4-12周、约4-8周、约6-12周，还更优选例如约6-8周。因此，本发明的治疗方法可包括给予本发明药物组合物，例如约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、或大约例如5-12周、或约7-11周、或约8-12周、或约9-12周、或约10-12周、或约11-12周或约3-10周、或约4-9周、或约5-8周。
因此，根据本发明的治疗CIS膀胱癌的方法可包括在第0天开始以上文限定的任何时间间隔(如例如，上文限定的第0、7、14、21、28天等等)膀胱内灌注上文限定的本发明药物组合物，例如灌注至少4周、或至少5周、或至少6周、或至少7周、或至少8周、或上文限定的任何时段。
根据更具体的实施方式，本发明的治疗CIS膀胱癌的方法可包括本发明药物组合物的如下膀胱内保留时间：例如，至少约0.5h、至少约1h、至少约1.5h、至少约2h、至少约2.5h、至少约3h、至少约3.5h、至少约4h，优选例如0.5h至约2h之间、约0.75h至约2h之间、约1h至约1.5h之间、约1.5h至约2h之间、约2h至约4h之间、约2.5至约3h之间、约2.5h至约3.5h之间、或例如约0.6h、约0.7h、约0.8h、约0.9h、约1h、约1.1h、约1.2h、约1.3h、约1.4h、约1.5h、约1.6h、约1.7h、约1.8h、约1.9h、约2h。
根据CIS膀胱癌的严重程度，可相应调整治疗方案，例如，可影响治疗选择的因素可以是患者年龄、CIS膀胱癌严重程度(阶段)和癌症治疗过程中的不利效果。例如，可减少或延长癌症治疗的持续时间，同时增加本发明药物组合物的各个灌注之间的时间间隔，例如，从第0、3、6、9天等等的给予间隔增至例如，第0、5、10、15、20天等等、或增至例如第0、7、14、21、28天等等。同样，可根据CIS膀胱癌严重程度减少或增加上文限定的膀胱内保留时间。因此，本发明药物组合物中咪喹莫特的浓度可根据疾病严重程度而变化，例如，本发明药物组合物可包括上文限定或附加实施例中示例的咪喹莫特含量中的任一种。
根据CIS膀胱癌的严重程度，需要根据本发明的CIS膀胱癌治疗的患者可需要多于一个治疗周期，例如，患者可需要反复上文限定的本发明CIS膀胱癌治疗方法，例如，至少2、3、4、5或6次。
优选地，根据本发明的药物组合物在组合治疗中被给予，其中(i)向患者给予根据本发明的药物组合物以治疗CIS膀胱癌，和(ii)同时治疗并发性外生肿瘤。因此，如果CIS膀胱癌是并发性CIS膀胱癌，则这种组合治疗特别有用。在这种组合治疗中，可如上所述给予根据本发明的药物组合物，并且可同时治疗并发性外生肿瘤，具体地乳头状泌尿道上皮肿瘤——具体地通过手术和/或药物，例如，通过化疗。优选地，外科移除并发性外生肿瘤。
在根据本发明的组合治疗中，“同时治疗”意为根据本发明的药物组合物可在并发性外生肿瘤治疗之前、期间或之后被给予。例如，可在上述根据本发明的药物组合物治疗周期之前、期间或之后进行并发性外生肿瘤的药物治疗(例如，化疗)和/或手术。
因此，在并发性外生肿瘤治疗之前的给予指代任何这样的治疗周期：其中根据本发明的药物组合物的最后一次治疗在并发性外生肿瘤治疗开始之前完成。优选地，根据本发明的药物组合物的最后一次治疗不晚于并发性外生肿瘤治疗开始前7、6、5、4、3、2、或1天完成，更优选地，根据本发明的药物组合物的最后一次治疗不晚于并发性外生肿瘤治疗开始前48h、36h、24h、20h、16h、12h、8h、或4h完成，还更优选地，根据本发明的药物组合物的最后一次治疗不晚于并发性外生肿瘤治疗开始前180min、120min、90min、60min、45min、30min、20min、10min、9min、8min、7min、6min、5min、4min、3min、2min、或1min完成。
因此，在并发性外生肿瘤治疗之后的给予指代任何这样的治疗周期：其中根据本发明的药物组合物的第一次治疗在并发性外生肿瘤治疗完成之后开始。优选地，根据本发明的药物组合物的第一次治疗不晚于并发性外生肿瘤治疗完成后7、6、5、4、3、2、或1天开始，更优选地，根据本发明的药物组合物的第一次治疗不晚于并发性外生肿瘤治疗完成后48h、36h、24h、20h、16h、12h、8h、或4h开始，还更优选地，根据本发明的药物组合物的第一次治疗不晚于并发性外生肿瘤治疗完成后180min、120min、90min、60min、45min、30min、20min、10min 9min、8min、7min、6min、5min、4min、3min、2min、或1min开始。
因此，在并发性外生肿瘤治疗期间的给予指代任何与并发性外生肿瘤治疗重叠的根据本发明药物组合物的治疗周期。因此，在并发性外生肿瘤治疗期间给予(根据本发明的药物组合物)是在根据本发明的组合治疗中特别优选的。
要理解，本发明不限于本文描述的具体方法、方案和试剂，因为这些可改变。还要理解，本文采用的命名仅仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制本发明的范围，本发明的范围将仅通过所附权利要求来限制。除非另外限定，本文使用的所有技术和科学术语均与本领域普通技术人员的普遍理解具有相同含义。
实施例
实施例1
用于治疗膀胱原位癌用途的包括咪喹莫特的根据本发明的药物组合物的液体制剂实施例：
上述液体制剂用于膀胱内给予，其中各剂一般具有大约例如50ml的体积。液体制剂通过导管经过一般约3-5分钟的时段被给予到患者的膀胱中。(半)液体制剂在患者膀胱中的保留时间一般为约1小时。
上述药物组合物被给予总共6周，其中治疗方案包括在6周区间内的第0、7、14、21、28和35天给予药物组合物。“第0天”表示第一次膀胱内灌注本发明药物组合物的那天。
实施例2
咪喹莫特在原位癌(CIS)膀胱癌患者内的II期试点研究
研究目的是通过经历完全响应(CR)的患者数量评估CIS膀胱癌治疗中的咪喹莫特活性。在此，CR被定义为在最后一次咪喹莫特灌注后5至7周无疾病迹象(组织学阴性，细胞检查阴性)。此外，评估一周一次被给予6周的咪喹莫特的安全性和耐受性——通过尿液的药效学指标和用药前和用药后肿瘤活组织检查来测量。
研究设计：
本研究是开放标记式、试点II期研究，考察CIS膀胱癌患者对膀胱内咪喹莫特的响应。在美国多个(4个)研究中心招收12名患者，以获得6名可评价的患者。一旦第六名患者是可评价的或在总共12名患者被确认进入研究时(无论先发生哪个)，招收结束。这时招收的所有患者将被允许完成研究。
已被诊断患有CIS膀胱癌的患者是本研究的潜在候选者。CIS病变(一个或多个)可以是原发性、继发性、或复发性的，并且可与Ta或T1病变并存，条件是Ta或T1病变已被完全切除。
在提供书面知情同意书后，在第0天(即，研究药物给予的第一天)之前的28天(4周)内的筛选期期间评价患者的研究适格性。所要进行的筛选评价包括病史、体检、生命征、东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group，ECOG)体力状态、血液学和临床化学、以及尿分析和培养(urinalysis with culture)。筛选评价还包括膀胱的膀胱镜检查——其中第-28天和第-14天之间所有疑似区域进行映像和活组织检查，然后膀胱清洗以进行细胞检查。已经过这种检查(作为诊断过程一部分，在本研究之外)的患者不需要再次进行该程序，条件是该检查在指定时间框内发生并且阳性玻片可被获得用于中心病理和细胞检查复查。
通过组织学确认CIS膀胱癌并且满足所有其他适格标准的患者将被在第0天(研究药物给予的第一天)招收在本研究中。所有患者将每周一次接受体积50mL(200mg在50mL中)的咪喹莫特0.4％(w/w)，6周(在第0、7、14、21、28、和35天)总共6剂。在治疗期间，患者将在研究中心接受咪喹莫特，并且在7、14、21、28、和35天进行研究评价。
患者将在最后一剂咪喹莫特后5至7周出席研究中心复查，以进行细胞检查和采集活组织检查。在无可视病变的情况下，在之前阳性位点进行至少一次活组织检查，并且另外进行至少1次随机活组织检查。基于尿液细胞检查和组织样本组织学结果来确定治疗响应。
患者数量
招收12名患者以获得6名可评价的患者(即，在筛选期间具有阳性膀胱CIS组织学，接受了全6剂咪喹莫特，并且在最后一剂咪喹莫特后5至7周接受了膀胱膀胱镜检查和膀胱清洗，并获得了可读组织学和细胞检查样本的患者)。
诊断和主要入选标准
满足全部下列标准的患者被认为适格入选研究：
1.男性或女性患者年龄≥18岁。
2.患者患有病理证实的复发性、原发性、继发性、或并发性原位癌疾病(通过患有单单CIS或患有CIS的Ta或T1限定)，条件是Ta或T1病变(一个或多个)已被完全切除。在带有T1肿瘤病变的情况下，固有肌层组织应在切除样本中，以确认其是无肿瘤的。
3.患者已进行在第-28天和第-14天之间的膀胱映像，其中至少一次活组织检查提供膀胱CIS的病理确认。
4.患者已进行在第-28天和第-1天之间的膀胱清洗以进行细胞检查。Ta或T1病变(一个或多个)被切除的患者的膀胱清洗必须在切除后进行。
5.患者具有0-2的ECOG体力状态。
6.患者在第0天前4周内具有足够的骨髓、肝和肾功能。
显示例如肌肉浸润性疾病迹象(即，T2或更高级别膀胱癌)或据报告不能耐受至少1小时灌注的患者、或疑似对咪唑并喹啉化合物、泊洛沙姆407、羟丙基β环糊精、或乳酸过敏的患者不入选本研究。
测试产品、用药和给药模式
咪喹莫特在包含50mL在室温下稳定并且准备在膀胱中灌注的无菌无色液体溶液的塑料袋中供应。塑料袋配置有泌尿系统连接器，并且被铝四箔(aluminum quadruplex foil)包裹。所有患者接受50mL的相同体积和0.4％(w/v)咪喹莫特(200mg咪喹莫特在50mL中)的相同剂量。在需要剂量减少的情况下，也供应包含咪喹莫特0.2％的袋子。
经由标准导管通过重力经3至5分钟膀胱内给予咪喹莫特。如果重力不足以适当灌注，允许研究人员轻轻压迫袋子以经3至5分钟灌注咪喹莫特。支持保留时间为1小时。患者每周一次接受膀胱内咪喹莫特0.4％，6周。
安全性
安全性通过记录不利事件(AE)、临床实验室测试(血液学、临床化学、尿分析、和尿培养)、体检、和生命征测量来确定。
效力
通过确定对于患者的临床效益(定义为在咪喹莫特剂后5至7周对于治疗的完全响应(CR))来评价效力。基于尿液细胞检查和组织样本组织学结果来进行CR的确定。
结果
研究招收了12名患者，代表未经治疗患者和经过大量在前治疗患者的异基因CIS患者群。在招收的12名患者中，8名完成了治疗，同时4名患者仍在进行治疗。5名患者经过评价，另外7名患者还未进行后续评价，其结果如下：
患者1
在2012年11月呈现CIS/高级别乳头状膀胱癌和在2013年3月呈现CIS的患者1从2012年12月至2013年1月接受了BCG治疗。在咪喹莫特治疗前，患者在组织学方面呈现局部和中心CIS。在根据研究设计的咪喹莫特治疗方案后，通过组织学检测不到肿瘤。初步结果表明，在后续评价中该患者检测不到肿瘤。
患者2
患者2自2008年呈现低级别乳头状膀胱癌以及高级别阶段癌症并在2011年呈现原位癌。该患者接受了化疗、BCG和9x TURBT。在组织学方面，对局部CIS进行检测。在根据研究设计的咪喹莫特治疗后，仍检测到CIS，然而，恶性与非恶性细胞的比例似乎得到改善。该患者可被认为是部分响应者。进一步评价仍在进行。
患者3
患者3在2013年2月被诊断患有膀胱癌，并且在研究入选前还未接受过任何在前癌症治疗。在组织学方面，患者3呈现TIS、乳头状高级别和低级别癌症以及CIS和乳头状低级别和高级别癌症。在根据研究设计的咪喹莫特治疗后，通过细胞检查或组织学再也检测不到肿瘤。
患者5
患者5在2011年呈现CIS和在2013年呈现CIS。在前抗癌症治疗包括BCG和丝裂霉素治疗。在组织学方面，患者呈现CIS膀胱癌。在根据研究设计的咪喹莫特治疗后，通过组织学检测不到肿瘤。
总而言之，结果显示，上述研究的显著男性CIS膀胱癌患者，在接受根据实施例1的本发明药物组合物的治疗(参见上文)时，呈现显著健康改善，即，肿瘤衰退：在被分析的5名患者中，4名不成功地经历了在前癌症治疗(参见表2，患者1、2、4、5)。通过组织学评估(参见：表2，患者1、3、4、5)，这组的4名患者的确呈现CIS膀胱癌完全缓解。表2总结了咪喹莫特研究的结果。