神经调节蛋白在治疗外周神经损伤中的应用的制作方法

相关申请

本申请要求2012年3月30日递交的美国临时申请序列号USSN 61/618,381、2012年7月20日递交的美国临时申请序列号USSN 61/674,060、2012年8月27日递交的美国临时申请序列号USSN 61/693,589、2012年8月27日递交的美国临时申请序列号USSN 61/693,585和2013年3月14号递交的美国临时申请USSN 61/785,419的优先权，这里提到的每个申请的全部内容通过引证在此全部并入本文。

整合的序列表

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技术领域

本发明主要涉及分子生物学领域，再生性药物和神经外伤或者伤害。这里公开的方法可以通过施用神经调节蛋白同型体或其功能性片段来预防、治疗或者缓解外周神经损伤的症状。这种方法的主体或者具有患上外周神经损伤的风险或者已经具有外周神经损伤。

背景技术：

外周神经通常由于外伤受损，所述外伤包括车祸、摩托车事故、外科手术、刀和发射物创口和生育对孩子和母亲的创伤。神经创伤常见的外科手术原因包括前列腺切除术和乳房切除术。神经损伤之后，由受损伤的神经支配身体区域会丧失感觉和/或功能。神经损伤的常见外科手术原因包括前列腺切除术和根治手术。例如，在前列腺切除术中收到神经创伤之后，通常会导致勃起功能失调。

这里对其他的外周神经创伤治疗法和治疗剂存在需要。而且，在本领域中对既能够预防也能够限制神经损伤后功能丧失程度的治疗剂存在长时间的需要。

技术实现要素：

在多种多样的中枢神经系统疾病和中枢神经系统创伤的动物模型中，神经调节蛋白已经显示出具有神经保护作用和神经恢复作用。本发明公开的某些实施方案涉及通过对患有外周神经损伤或者有患有外周神经损伤风险的主体给药神经调节蛋白或者它的一种功能性片段来治疗或者改善外周神经损伤的方法。这里公开的方法优选的实施方案涉及通过对所述主体给药GGF2或其功能性片段来治疗或者改善外周神经损伤。

本发明公开的内容表明，使用神经调节蛋白治疗外周神经损伤能够减少外周神经功能的损伤，当在收到神经损伤之前或者之后给药神经调节蛋白能够改善或者减少外周神经功能损伤，并且在某些情况下修复外周神经功能。在某些实施方案中，外周神经损伤被避免。在某些实施方案中，一种存在的外周神经损伤被消除。在某些实施方案中，外周神经损伤不能完全避免。在某些实施方案中，一种已经存在的外周神经损伤不能被完全消除。

这里公开的某些实施方案涉及治疗外周神经损伤的方法，本方法包括对患有外周神经损伤的主体或者对具有患上外周神经损伤风险的主体给药有效量的神经调节蛋白。某些实施方案涉及propylaxing或者预防外周神经损伤的方法，本方法包括对患有外周神经损伤的主体给药有效量的神经调节蛋白。术语主体包括哺乳动物，并且尤其是人类主体。

人体外周神经损伤(PNI)可以通过物理创伤获得或者是患病的结果。例如，外周神经是由于外伤受损的结果，所述外伤包括车祸、摩托车事故、外科手术、刀和发射物伤口和分娩过程中对孩子和母亲带来的生产创伤。损伤之后的并发症会导致感觉运动功能障碍和自主神经失调。

这里公开的内容提供了用于预防髓鞘脱失现象和/或用于诱导损伤的外周神经髓鞘再生的组合物和方法。虽然所有的外周神经都被包含，但是在本发明中，本发明方法仅在随后示例性的外周神经中被应用，所述示例性的外周神经包括坐骨神经和海绵神经。

坐骨神经损伤会导致肌肉量损失、肌肉弱化、目标肌肉萎缩性改变、瘫痪和疼痛，通常降低复原程度，影响生活质量。例如，对于坐骨神经损伤，这里公开的组合物能够增加肌肉量、改善肌肉强度、减少肌肉萎缩症、以及减少神经性疼痛和提高感觉恢复。非侵入性三维(3D)超声成像结果说明，与假手术组的动物相比，在受伤的肢体被挤压和断裂之后，随着时间变化腓肠肌和比目鱼肌体积显著减少。例如，给药GGF2能够增加纤维肌的尺寸并减少外周神经周围的纤维化。而且，例如，给药GGF2会增加纤维肌的大小并减少骨骼肌的纤维化。

外周神经损伤可以是外科手术的结果，例如前列腺癌切除术。在任何手术干预的背景下，外周神经损伤可能是组织解剖、组织切除的直接结果，和/活肢体定位和/或压缩的次级结果。在一个特定的实施方案中，神经调节蛋白被用于治疗或者预防会导致勃起功能障碍的外周神经损伤。

使用小鼠勃起功能障碍模型作为体内系统来说明神经调节蛋白在治疗外周神经损伤中的效果。在某些方面，这里公开的内容涉及治疗由外周神经损伤造成的勃起功能障碍，但是这里的公开不局限于勃起功能障碍。神经调节蛋白可以有效作为单一治疗剂用于治疗任意一种外周神经损伤，并且不需要与天然神经管或者人造神经管共同使用进行治疗，也不需要与其他细胞治疗剂(例如，雪旺氏(Schwann)细胞)共同使用治疗。通过在大鼠中进行双边粉碎模型检验神经调节蛋白1肽(GGF2)，大鼠中的双边粉碎模型是一种广泛接受的海绵体神经创伤模型；这种模型已经被用于检验西地那非(sildenifil)及其他勃起功能失调(ED)药物。如这里所阐述的，在创伤之后5周对神经进行电刺激得到GGF2改善的功能性结果，并且测定睾丸内压力(ICP)。

进一步的实施方案涉及勃起功能失调的治疗，所述勃起功能失调是由于外科手术对与勃起功能有关的外周神经(例如，海绵体神经和/或阴茎神经)创伤引起的。海绵体神经创伤常常作为前列腺癌症切除术的结果；这种创伤会产生勃起功能失调(ED)。

目前的药物干预能够治疗创伤之后造成的功能性缺陷，所述创伤是由于向海绵体增加血液流动促进阴茎勃起而导致的创伤。目前存在的医疗器械干预能够治疗由创伤引起的功能性缺陷，所述创伤是由于增加阴茎体积导致一种类似于正常阴茎勃起的状态而引起的。目前存在的用于治疗勃起功能失调(ED)的所有干预都是由缺陷的。

这里公开的内容提供了一种组合物，该组合物包括在治疗和/或预防与外周神经损伤有关的疾病的方法中使用的神经调节蛋白。一种优选的神经调节蛋白是NRG-1，并且一种优选的同型体是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在有风险患上外周神经损伤的主体中预防或者治疗外周神经损伤的组合物，该组合物包括有效量的神经调节蛋白。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，外周神经可以是海绵体神经。在该实施方案的一个方面，所述外周神经损伤可能会导致勃起功能障碍。在优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在有风险患上外周神经损伤的主体中改善肌肉功能的组合物，该组合物包括有效量的神经调节蛋白。肌肉功能的改善，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的实施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纤维大小)，增加肌肉强度，减少肌肉萎缩和/或减少肌肉纤维化。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在有风险患上外周神经损伤的主体中治疗感觉和/或运动机能缺陷和/或过度敏感的组合物，这种组合物中包括有效量的神经调节蛋白。可以被这里所公开的方法进行治疗的感觉缺陷和/或过度敏感的非限制性实施例包括，糖尿病性神经病、外伤性神经病和/或化疗性神经病(例如，在给药顺铂或者紫杉醇之后)。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在有风险患上外周神经损伤的主体中治疗自主神经系统功能障碍的组合物，这种组合物中包括有效量的神经调节蛋白。在该实施方案的一个方面，自主神经系统功能障碍包括交感神经系统和/或副交感神经系统的功能障碍。可以被本发明公开的方法治疗的自主功能障碍的非限制性实施例包括，区域血流量功能障碍(例如，由于勃起功能障碍导致的海绵状神经损伤)、肠道动力分泌物功能障碍、呼吸系统改变功能障碍、膀胱改变功能障碍和视觉改变功能障碍。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对有风险患上外周神经损伤的主体给药一种包括有效量神经调节蛋白的组合物来治疗或者预防外周神经损伤。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，外周神经可以是海绵体神经。在该实施方案的一个方面，所述外周神经损伤可能会导致勃起功能障碍。在优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对有风险患上外周神经损伤的主体给药一种包括有效量的神经调节蛋白的组合物来改善肌肉功能。肌肉功能的改善包括，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的实施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纤维大小)，增加肌肉强度，减少肌肉萎缩和/或减少肌肉纤维化。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对有风险患上外周神经损伤的主体给药一种包括有效量的神经调节蛋白的组合物来治疗感觉和/或运动机能缺陷和/或过度敏感。可以被这里所公开的方法治疗的感觉缺陷和/或过度敏感的非限制性实施例包括，糖尿病性神经病、外伤性神经病和/或化疗性神经病(例如，在给药顺铂或者紫杉醇之后)。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对有风险患上外周神经损伤的主体给药一种包括有效量的神经调节蛋白的组合物来治疗自主神经系统功能障碍。在该实施方案的一个方面，自主神经系统功能障碍包括交感神经系统和/或副交感神经系统的功能障碍。可以被本发明公开的方法治疗的自主功能障碍的非限制性实施例包括，区域血流量功能障碍(例如，由于勃起功能障碍导致的海绵状神经损伤)、肠道动力分泌物功能障碍、呼吸系统改变功能障碍、膀胱改变功能障碍和视觉改变功能障碍。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在本发明公开的组合物和方法的一个实施方案中，主体由于外科手术而具有患上外周神经损伤的风险。示例性的外科手术过程包括但是不局限于组织解剖或者肿瘤切除术。作为选择或者另外，示例性的外科手术过程包括，但是不局限于，骨盆手术、腹腔手术或者结肠直肠手术。在该实施方案的一个方面，在手术过程中解剖或者除去的组织或者肿瘤可以是恶性的或者良性的。恶性组织或者肿瘤可以是癌症的一种或者更多种。示例性的癌症类型包括，但是不局限于，实体肿瘤、前列腺癌和乳腺癌。在该实施方案的一个方面，示例性的外周神经损伤类型包括，但是不局限于神经切断，神经损伤和神经脱髓鞘作用。在该实施方案的一个方面，所述外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，所述外周神经可以是海绵体神经。在该实施方案的一个方面，所述外周神经损伤可能会导致勃起功能障碍。

在本发明公开的组合物和方法的一个实施方案中，主体由于婴儿的分娩而具有患上外周神经损伤的风险。在该实施方案的一个方面，分娩可能涉及医学治疗或者手术过程。示例性的医学治疗包括但是不局限于，给药药物治疗、发力引导或者对主体胎儿的物理操作。示例性的手术过程包括但是不局限于，在主体身上开一个切口并进行刨妇产。在改实施方案的一个方面，示例性的外周神经损伤类型包括但是不局限于神经切断，神经损伤和神经脱髓鞘作用。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，所述外周神经可以是海绵体神经。

在本发明公开的组合物和方法的一个实施方案中，主体由于外伤事故而具有患上外周神经损伤的风险。示例性的外伤事故包括但是不局限于摩托车意外、刀和放射性伤口以及四肢位置或者四肢挤压之后进行医学或者手术过程造成的次生损伤。在该实施方案的一个方面，外周神经损伤的示例性类型包括但是不局限于神经切断，神经损伤和神经脱髓鞘作用。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，所述外周神经可以是海绵体神经。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在已经患有外周神经损伤的主体中预防或者治疗外周神经损伤的组合物，该组合物包括有效量的神经调节蛋白。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，外周神经可以是海绵体神经。在该实施方案的一个方面，所述外周神经损伤可能会导致勃起功能障碍。在优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在已经患有外周神经损伤的主体中改善肌肉功能的组合物，该组合物包括有效量的神经调节蛋白。肌肉功能的改善，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的实施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纤维大小)，增加肌肉强度，减少肌肉萎缩和/或减少肌肉纤维化。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在已经患有外周神经损伤的主体中治疗感觉和/或运动机能缺陷和/或过度敏感的组合物，这种组合物中包括有效量的神经调节蛋白。可以被这里所公开的方法治疗的感觉缺陷和/或过度敏感的非限制性实施例包括，糖尿病性神经病、外伤性神经病和/或化疗性神经病(例如，在给药顺铂或者紫杉醇之后)。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种能够在已经患有外周神经损伤的主体中治疗自主神经系统功能障碍的组合物，这种组合物中包括有效量的神经调节蛋白。在该实施方案的一个方面，自主神经系统功能障碍包括交感神经系统和/或副交感神经系统的功能障碍。可以被本发明公开的方法治疗的自主功能障碍的非限制性实施例包括，区域血流量功能障碍(例如，由于勃起功能障碍导致的海绵状神经损伤)、肠道动力分泌物功能障碍、呼吸系统改变功能障碍、膀胱改变功能障碍和视觉改变功能障碍。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对已经患有外周神经损伤的主体给药一种包括有效量神经调节蛋白的组合物来治疗或者预防外周神经损伤。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，外周神经可以是海绵体神经。在该实施方案的一个方面，所述外周神经损伤可能会导致勃起功能障碍。在优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对已经患有外周神经损伤的主体给药一种包括有效量的神经调节蛋白的组合物来改善肌肉功能。肌肉功能的改善包括，例如但是不局限于，骨骼肌功能改善。改善的肌肉功能的实施例包括，但是不局限于，增加肌肉量(例如，增加肌纤维大小)，增加肌肉强度，减少肌肉萎缩和/或减少肌肉纤维化。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对已经患有外周神经损伤的主体给药一种包括有效量的神经调节蛋白的组合物来治疗感觉和/或运动机能缺陷和/或过度敏感。可以被这里所公开的方法治疗的感觉缺陷和/或过度敏感的非限制性实施例包括，糖尿病性神经病、外伤性神经病和/或化疗性神经病(例如，在给药顺铂或者紫杉醇之后)。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在一个实施方案中，本发明的公开提供了一种方法，该方法通过对已经患有外周神经损伤的主体给药一种包括有效量的神经调节蛋白的组合物来治疗自主神经系统功能障碍。在该实施方案的一个方面，自主神经系统功能障碍包括交感神经系统和/或副交感神经系统的功能障碍。可以被本发明公开的方法治疗的自主功能障碍的非限制性实施例包括，区域血流量功能障碍(例如，由于勃起功能障碍导致的海绵状神经损伤)、肠道动力分泌物功能障碍、呼吸系统改变功能障碍、膀胱改变功能障碍和视觉改变功能障碍。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

在本发明公开的组合物和方法的一个实施方案中，主体由于外科手术而患上外周神经损伤。示例性的外科手术过程包括但是不局限于组织解剖或者肿瘤切除术。作为选择或者另外，示例性的外科手术过程包括，但是不局限于，骨盆手术、腹腔手术或者结肠直肠手术。在该实施方案的一个方面，在手术过程中解剖或者除去的组织或者肿瘤可以是恶性的或者良性的。恶性组织或者肿瘤可以是癌症的一种或者更多种。示例性的癌症类型包括，但是不局限于，实体肿瘤、前列腺癌和乳腺癌。在该实施方案的一个方面，示例性的外周神经损伤类型包括，但是不局限于神经切断，神经损伤和神经脱髓鞘作用。在该实施方案的一个方面，所述外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，所述外周神经可以是海绵体神经。在该实施方案的一个方面，所述外周神经损伤可能会导致勃起功能障碍。

在本发明公开的组合物和方法的一个实施方案中，主体由于婴儿的分娩而患上外周神经损伤。在该实施方案的一个方面，分娩可能涉及医学治疗或者手术过程。示例性的医学治疗包括但是不局限于，给药药物治疗、发力引导或者对主体胎儿的物理操作。示例性的手术过程包括但是不局限于，在主体身上开一个切口并进行剖腹产。在改实施方案的一个方面，示例性的外周神经损伤类型包括但是不局限于神经切断，神经损伤和神经脱髓鞘作用。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，所述外周神经可以是海绵体神经。

在本发明公开的组合物和方法的一个实施方案中，主体由于外伤事故而患上外周神经损伤。示例性的外伤事故包括但是不局限于摩托车意外、刀和放射性伤口以及四肢位置或者四肢挤压之后进行医学或者手术过程造成的次生损伤。在该实施方案的一个方面，外周神经损伤的示例性类型包括但是不局限于神经切断，神经损伤和神经脱髓鞘作用。在该实施方案的一个方面，外周神经可以是坐骨神经。作为选择或者另外，所述外周神经可以是海绵体神经。

在这里所公开的组合物和方法的一个实施方案中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤之前给药。在该实施方案的方面中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤之前而不是之后给药。神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物可以一直非连续的给药方案给药。优选的，所述非连续的给药方案包括以指定的时间间隔给药。示例性的指定的时间间隔可以包括，但是不局限于，每隔24小时给药、每隔48小时给药和每隔72小时给药。作为选择，指定的时间间隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小时给药、每隔至少48小时给药和每隔至少72小时给药。在该实施方案的一个方面，所述非连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1周，大约2周，大约3周，大约4周，大约5周，大约6周，大约7周，大约8周，大约9周，大约10周，大约11周，和大约12周所组成的组中。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定的时间间隔可以是至少每周一次。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定的时间间隔可以是至少每周一次，并且不连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1个月、大约2个月和大约3个月所组成的组中。

在这里所公开的组合物和方法的一个实施方案中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤的过程中给药。在该实施方案的方面中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤的过程中但不是之后给药。神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物可以一直非连续的给药方案给药。优选的，所述非连续的给药方案包括以指定的时间间隔给药。示例性的指定的时间间隔可以包括，但是不局限于，每隔24小时给药、每隔48小时给药和每隔72小时给药。作为选择，指定的时间间隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小时给药、每隔至少48小时给药和每隔至少72小时给药。在该实施方案的一个方面，所述非连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1周，大约2周，大约3周，大约4周，大约5周，大约6周，大约7周，大约8周，大约9周，大约10周，大约11周，和大约12周所组成的组中。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定的时间间隔可以是至少每周一次。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定的时间间隔可以是至少每周一次，并且不连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1个月、大约2个月和大约3个月所组成的组中。

在这里所公开的组合物和方法的一个实施方案中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤之前或者在造成外周神经损伤过程中给药。在该实施方案的方面中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤之前、在造成外周神经损伤的过程中但不是之后给药。神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物可以一直非连续的给药方案给药。优选的，所述非连续的给药方案包括以指定的时间间隔给药。示例性的指定时间间隔可以包括，但是不局限于，每隔24小时给药、每隔48小时给药和每隔72小时给药。作为选择，指定时间间隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小时给药、每隔至少48小时给药和每隔至少72小时给药。在该实施方案的一个方面，所述非连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1周，大约2周，大约3周，大约4周，大约5周，大约6周，大约7周，大约8周，大约9周，大约10周，大约11周，和大约12周所组成的组中。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定时间间隔可以是至少每周一次。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定时间间隔可以是至少每周一次，并且不连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1个月、大约2个月和大约3个月所组成的组中。

在这里所公开的组合物，方法的一个实施方案中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤之前或者在造成外周神经损伤过程中和之后给药。神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物可以一直非连续的给药方案给药。优选的，所述非连续的给药方案包括以指定的时间间隔给药。示例性的指定时间间隔可以包括，但是不局限于，每隔24小时给药、每隔48小时给药和每隔72小时给药。作为选择，指定时间间隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小时给药、每隔至少48小时给药和每隔至少72小时给药。在该实施方案的一个方面，所述非连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1周，大约2周，大约3周，大约4周，大约5周，大约6周，大约7周，大约8周，大约9周，大约10周，大约11周，和大约12周所组成的组中。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定时间间隔可以是至少每周一次。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定时间间隔可以是至少每周一次，并且不连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1个月、大约2个月和大约3个月所组成的组中。

在这里所公开的组合物和方法的一个实施方案中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物适用于在造成外周神经损伤之后给药。神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物可以一直非连续的给药方案给药。优选的，所述非连续的给药方案包括以指定的时间间隔给药。示例性的指定时间间隔可以包括，但是不局限于，每隔24小时给药、每隔48小时给药和每隔72小时给药。作为选择，指定时间间隔可能包括，但是不局限于，每隔至少24小时给药、每隔至少48小时给药和每隔至少72小时给药。在该实施方案的一个方面，所述非连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1周，大约2周，大约3周，大约4周，大约5周，大约6周，大约7周，大约8周，大约9周，大约10周，大约11周，和大约12周所组成的组中。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定时间间隔可以是至少每周一次。在该实施方案的一个方面，所述给药的指定时间间隔可以是至少每周一次，并且不连续的给药方案可以持续一段时间，所述时间选自由大约1个月、大约2个月和大约3个月所组成的组中。

在这里所公开的组合物和方法的一个实施方案中，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约5毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约2.5毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约1.5毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约0.7毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约0.5毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约0.3毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约0.1毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约0.05毫克/千克体重之间。在该实施方案的一个方面，神经调节蛋白或者包括神经调节蛋白的组合物的有效剂量可以在大约0.001毫克/千克体重到大约0.02毫克/千克体重之间。

对主体给药的本发明组合物的实际剂量可以通过物理和生理因素来确定，所述物理和生理因素例如体重、情况的严重程度、被处理的疾病类型、之前的或者并行的治疗介入、病人的自发性疾病和给药途径。无论如何，负责给药的医生可以确定组合物中活性成分的浓度以及用于个别主体的适当剂量。

这里公开的方法的某些方面包括，根据使用的具体神经调节蛋白活性、给药途径、给药方法和医学情况给药大约1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1-10,1-20,10-20,1-30,1-40,1-50,10-20,10-30,10,15,20,25,30,35,40,50,15-25,15-40,15-35,15-50,20-50,20-40,20-40,25-35,30-50,30-60,50-75,50-100,100,1-100,100-150,150-200,200,1-200微克或者毫克的神经调节蛋白多肽或者肽。某些方面包括在损伤之前和/或之后给药神经调节蛋白。神经调节蛋白可以在受伤之前12、24、48或者72小时给药、在受损伤期间给药和/或在受伤之后指定的或者相等的时间间隔给药。在某些环境下，神经调节蛋白可以在受损伤前24小时或者48小时给药，并且在受损伤后每天(例如，24小时)或者每星期给药一次。在损伤之前给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤期间给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤之后给药可以是全身性的和/或局部的。

这里所公开的方法的某些方面包括根据所使用的神经调节蛋白活性、给药途径、给药方法和医学环境给药大约0.005微克或者毫克、0.1微克或者毫克、0.2微克或者毫克、0.3微克或者毫克、0.4微克或者毫克、0.5微克或者毫克、0.6微克或者毫克、0.7微克或者毫克、0.8微克或者毫克、0.9微克或者毫克、1微克或者毫克、2微克或者毫克、3微克或者毫克、4微克或者毫克、5微克或者毫克、6微克或者毫克、7微克或者毫克、8微克或者毫克、9微克或者毫克、10微克或者毫克、11微克或者毫克、12微克或者毫克、13微克或者毫克、14微克或者毫克或者15微克或者毫克、或者任何中间值的神经调节蛋白多肽或者肽。例如，神经调节蛋白或者NRG-1同型体包括但不限于，GGF2以0.5、2.5、5、7.5、10、12.5或者15微克/千克或者毫克/千克的剂量给药。可以使用任何适当的给药途径，包括但不限于，肠胃外给药，皮下给药，肌肉内给药，神经周给药，颅内给药，眶内给药，眼部给药，心室内给药，囊内给药，脊柱内给药，脑池内给药，腹膜内给药，产期内给药，烟雾剂给药，口服给药，或者透皮给药的或者局部给药(例如，通过应用一种装置或者粘性贴片传递能够穿过真皮进入血液的制剂)。

在本公开的一个方面，GGF2剂量水平在从大约0.001毫克/千克到1.5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到2.5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到5.0毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到10毫克/千克、或者从大约0.001毫克/千克到15毫克/千克的范围内。在一种具体的实施方案中，GGF2剂量水平在从大约0.001毫克/千克到大约0.02毫克/千克、从大约0.02毫克/千克到0.06毫克/千克、从大约0.06毫克/千克到大约0.1毫克/千克、从大约0.1毫克/千克到大约0.3毫克/千克、从大约0.3毫克/千克到大约0.5毫克/千克、从大约0.5毫克/千克到大约0.7毫克/千克、从大约0.5毫克/千克到大约1.0毫克/千克、从大约0.7毫克/千克到大约1.0毫克/千克、从大约1.0毫克/千克到大约1.5毫克/千克、从大约1.5毫克/千克到大约2毫克/千克、从大约2毫克/千克到大约2.5毫克/千克、从大约2.5毫克/千克到大约3毫克/千克、从大约3毫克/千克到大约3.5毫克/千克、从大约3.5毫克/千克到大约4毫克/千克、从大约4毫克/千克到大约4.5毫克/千克、从大约4.5毫克/千克到大约5毫克/千克、从大约毫克/千克到大约1.5毫克/千克，或者从大约毫克/千克到大约5.0毫克/千克的范围内。在另一个具体的实施方案中，GGF2剂量水平为从大约1毫克/千克到大约15毫克/千克。

在本发明的一个方面，GGF2的剂量水平在大约0.001毫克/千克到1.5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到2.5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到5.0毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到10毫克/千克、或者从大约0.001毫克/千克到15毫克/千克范围内，大约每24小时给药一次(或者一天一次)、至少每24小时给药一次、每48小时给药一次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，进行大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，持续1个月、2个月或者3个月。在一种具体的实施方案中，GGF2剂量水平在从大约0.001毫克/千克到大约0.02毫克/千克、从大约0.02毫克/千克到0.06毫克/千克、从大约0.06毫克/千克到大约0.1毫克/千克、从大约0.1毫克/千克到大约0.3毫克/千克、从大约0.3毫克/千克到大约0.5毫克/千克、从大约0.5毫克/千克到大约0.7毫克/千克、从大约0.5毫克/千克到大约1.0毫克/千克、从大约0.7毫克/千克到大约1.0毫克/千克、从大约1.0毫克/千克到大约1.5毫克/千克、从大约1.5毫克/千克到大约2毫克/千克、从大约2毫克/千克到大约2.5毫克/千克、从大约2.5毫克/千克到大约3毫克/千克、从大约3毫克/千克到大约3.5毫克/千克、从大约3.5毫克/千克到大约4毫克/千克、从大约4毫克/千克到大约4.5毫克/千克、从大约4.5毫克/千克到大约5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到大约1.5毫克/千克，或者从大约0.001毫克/千克到大约5.0毫克/千克范围内，大约每24小时给药1次(或者每天一次)、至少24小时给药一次、每48小时给药1次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天给药一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，持续大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周，或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，持续1个月、2个月或者3个月。在另一个实施方案中，GGF2的剂量水平在大约0.001毫克/千克到15毫克/千克范围内，大约每24小时给药一次(或者一天一次)、至少每24小时给药一次、每48小时给药一次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，进行大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，持续1个月、2个月或者3个月。

在本公开的另一个方面，剂量范围在5毫克/千克到15毫克/千克之间，包括端点，神经调节蛋白或者NRG-1同型体被全身性或者局部对主体给药。例如，当NRG1多肽或者肽，包括但不限于GGF2，以5毫克/千克到15毫克/千克的剂量(包括端点)给药时，优选的给药途径是静脉内给药、皮下给药、透皮给药或者局部给药。

神经调节蛋白可以在受伤之前给药、在受损伤期间给药和/或在受伤之后指定的或者相等的时间间隔给药。在一种非限制性实施例中，神经调节蛋白可以大约每24小时给药一次(或者一天一次)、至少每24小时给药一次、每48小时给药一次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，在受伤之前进行大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，在受伤之前持续1个月、2个月或者3个月。作为选择，或者另外，神经调节蛋白可以在受伤之后每24小时给药一次或者每周给药一次。在损伤之前给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤期间给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤之后给药可以是全身性的和/或局部的。一些剂量的神经调节蛋白(例如剂量范围在5毫克/千克到15毫克/千克之间，包括端点)可以一种非全身性局部方法给药，包括但不局限于皮下注射或者植入或者透皮传递方法。

“局部”、“定位”或者“靶向”传递方法向损伤位点提供了治疗有效量的神经调节蛋白，从而改善外周神经的恢复状态或者功能，同时基本上不增加神经调节蛋白的血液水平或者基本上不穿过血脑屏障，因此增加了中枢神经系统的大脑脊髓液中神经调节蛋白的水平。

这里公开的组合物和方法中的神经调节蛋白可以是NRGl、2、3或者4基因编码的任意全长神经调节蛋白。在一种进一步的方面，神经调节蛋白可以是神经调节蛋白多肽的任一功能性片段。神经调节蛋白的功能性片段可以含有EGF-样区域。神经调节蛋白可以是任一NRGl、2、3或者4基因编码的肽，这种肽能够结合并活化erbB受体。作为选择，神经调节蛋白可以是任何一种由NRGl、2、3或者4基因编码的野生型肽修饰所得的肽，所述修饰所得的肽结合并活化ErbB受体。

神经调节蛋白和含有神经调节蛋白EGF-样区域的多肽可以与一种药学上可接受的稀释剂、载体、或者赋形剂一起，以单位剂量形式对主体给药。常用的药物习惯可以被利用从而提供适当的制剂或者组合物，并对病人或者试验动物给药这种组合物。

静脉内给药在某些情况下是优选的，尽管如此，也可以使用其他任何适当的给药途径，包括但是不局限于，非肠道给药、皮下给药、肌肉注射给药、颅内给药、眶内给药、眼药、心室内给药、中央囊内给药、脊柱内给药、脑池内给药、腹膜内给药、产期内给药、烟雾剂、口服给药或者透皮给药或者局部给药(例如，通过使用一种装置或者粘性贴片，其中携带能够穿过真皮进入血流的制剂)。治疗性制剂可以处于液体溶液或者悬浮液的形式；为了进行口服，制剂可以处于片剂或者胶囊剂的形式；并且对于经鼻给药制剂，可以处于粉末、滴鼻剂或者烟雾剂的形式。

“神经调节蛋白-1”、“NRG-1”、“heregulin”指的是一种多肽，这种多肽能够结合ErbB受体1、ErbB受体3或者ErbB受体4，并且通过受体配对作用(二聚作用)还结合ErbB受体2。在一个实施方案中，通过美国专利第5,530,109号、美国专利第5,716,930号、和美国专利第7,037,888号中提到的pl85erbB2配位体基因编码神经调节蛋白，这里提到的每个申请的全部内容通过引证在此全部并入本文。在一个实施方案中，所述神经调节蛋白是GGF2或者其任何一种子序列、或者任何一种分子，包括GGF2整个序列或者GGF2序列的活性部分。

这里所公开的组合物和方法的某些实施方案中，药物组合物可以包括，例如，至少大约0.1％的活性化合物。在其他实施方案中，活性化合物可以占单位重量的大约2％到大约75％，或者占大约25％到大约60％，例如，以及任何在其中可推导出的范围。在其他非限制性实施例中，每次给药的剂量还可以包括从大约1微克(微克)/千克/体重，大约5微克/千克/体重，大约10微克/千克体重，大约50微克/千克体重，大约100微克/千克体重，大约200微克/千克体重，大约350微克/千克体重，大约500微克/千克体重，大约1毫克/千克体重，大约5毫克/千克体重，大约10毫克/千克体重，大约50毫克/千克体重，大约100毫克/千克体重，大约200毫克/千克体重，大约350毫克/千克体重，大约500毫克/千克体重，到大约1000毫克/千克体重或更多，并且任何范围其中可推导出的范围。在这里所里出的数值范围内可推导出的范围的非限制性实施例包括，大约5毫克/千克体重到大约100毫克/千克体重，大约5微克/千克体重到大约500毫克/千克体重等等，可以根据上述所列出的数值给药其中可推导出的范围。

术语“治疗有效量”或者“有效量”指的是能够引起组织、系统、动物或者人类发生科研工作者、兽医、医生或者其他临床医师寻找的生物反应或者医药反应的神经调节蛋白的量。

治疗性改变是指在测量的生物化学特性或者生理特性方面向着减轻疾病(例如，外周神经损伤)或者解决问题的方向发生的改变。更为具体的，“有效量”是足够减少与医学条件或者虚弱有关的症状的量，从而使在疾病或者紊乱中导致某些身体功能损伤的身体功能正常化，或者从而改善疾病或者病况的一种或者一种以上的临床测量参数。这里所公开的神经调节蛋白的治疗有效量或者剂量可以是足以使功能测量值恢复至主体受伤前或者正常状态的量。作为选择或者另外，这里所公开的神经调节蛋白的治疗有效量或者剂量可以是足以保持、恢复或者诱导受损伤的或者有受损伤风险的坐骨神经存活、连接、信号传导、或者功能的量。这里所公开的神经调节蛋白的治疗有效量或者剂量可以是足以保持、恢复或者诱导目标细胞或者细胞群功能的量，所述目标细胞或者细胞群是由受损伤的或者有受损伤风险的坐骨神经传导、控制或者支配的。

除非明确表明其指的是其他选项，或者当选项是相互排斥的时，在权利要求书中使用术语“或者”指的是“和/或”。还可以预计的是，任意列出的使用术语“或”的地方还可以专门与所阐述的其他选项相独立。

在本申请上下文中使用的术语“大约”指的是所使用的装置或者方法产生的数值与确定的数值相比在85％、90％、95％>或者误差标准偏差范围内。

按照长期存在的专利法，在权利要求书或者说明书中使用的单词“一种(a)”和“一种(an)”表示一种或者一种以上，除非另有明确指出。

在某些实施方案中，根据本发明，预防性的使用神经调节蛋白从而预防或者减轻潜在的损伤。作为选择或者另外，预后应用神经调节蛋白，从而表明主体的未来状态。作为选择或者进一步的另外，诊断性的应用神经调节蛋白，从而确定一种情况或者状态的存在或者可能存在。治疗性的应用神经调节蛋白，从而以某些减少或者除去被治疗的病况或者疾病的症状或者病症的方式影响一种病况。

神经调节蛋白在成人的外周神经系统中起重要作用。例如，神经调节蛋白，具体地说神经胶质生长因子2(GGF2)能够影响雪旺氏细胞分化的多个方面，包括雪旺氏细胞前体的存活、雪旺氏细胞增殖、轴突入鞘和髓鞘形成。另外，神经调节蛋白还在调节肌肉神经接点处乙酰胆碱受体方面发挥作用。神经调节蛋白还能影响外周神经中的雪旺氏细胞功能，和骨骼肌中的肌源性作用和新陈代谢效应。因此，这里介绍的研究的目的是评价神经调节蛋白1同型体神经胶质生长因子2(GGF2)在骨骼肌和坐骨神经功能微观变化方面的作用和其在坐骨神经挤压伤之后恢复过程中的作用。

这里显示的数据说明GGF2对外周神经损伤之后(例如，坐骨神经损伤之后)外周神经髓鞘形成、目标肌肉功能和神经的感觉功能有好处。具体地说，如这里所述，腓肠肌的组织学评价说明，与假损伤相比，在损伤后第2、4、6周，挤压伤动物中的纤维化增加；然而GGF2疗法能够显著减少损伤诱导的纤维化，使其在损伤6周之后接近正常水平。而且，在损伤第2、4、6周之后可以发现肌纤维面积明显减少；然而GGF2治疗能在损伤4-6周后促进肌纤维面积向更大的面积变化(即，与假参照很像)。损伤之后，与假损伤动物参照相比可以观察到各种各样的具有不同严重程度的病变；然而GGF2与媒介物治疗的动物相比能够定性的减少病变坐骨神经中脱髓鞘作用程度。GGF2减轻挤压伤后机械超敏性和冷超敏性病症，因此在横切导致的坐骨神经传入神经阻滞之后增加机械和冷感觉功能。

通过下面的详细描述，本发明的其他目标、特点和优点会变得显而易见。然而，本领域普通技术人员应该理解，下面的详细说明和具体的实施例中尽管表明了本发明具体的实施方案，但只是以起到示意的作用而给出，本领域普通技术人员通过这里的详细说明可以理解，在本发明的精神和范围内，各种各样的改变和变化会变得显而易见。

附图说明

下面的附图形成了本发明说明书的一部分，并且被包括用于说明本发明所公开的某些非限制性方面。通过这些附图中的一个与这里所描述的具体实施方案的详细说明，本发明可以被更好的理解。

图1是一种示意图，显示了坐骨神经分叉处附近8-10毫米处的坐骨神经挤压伤。

图2是一种图，显示了在假损伤、挤压伤后使用媒介物治疗或者挤压伤后使用GGF2治疗的情况下，在腓肠肌后部作为时间(2、4或者6周)函数观察到的纤维化改变百分比。

图3是一系列显微照片(Trichrome 100X)，显示了损伤后2和6周假[A]、媒介物治疗的[B]和GGF-2治疗的动物[C]代表性的肌肉切片。

图4A、4B和4C是一系列图，显示了在假损伤、挤压伤后使用媒介物治疗或者挤压伤后使用GGF2治疗的情况下，作为时间(2、4或者6周)函数观察到的纤维化百分比。

图5是一种图，显示了在假损伤、挤压伤后使用媒介物治疗或者挤压伤后使用GGF2治疗的情况下，在第2、4和6周，进行的坐骨神经蛋白脂质蛋白斑(PLP)中的髓鞘蛋白评估。

图6是一种图，显示了作为实验条件函数的平均海绵体内压(ICP)从基线的变化。“低剂量”GGF2＝0.5毫克/千克，“高剂量”0.54GGF2＝5毫克/千克“高剂量”。32只3个月大的雄性Sprague-Dawley大鼠被分成4个实验条件：组1-假手术、组2-挤压伤+没有GGF2、组3-挤压伤+低剂量GGF2(0.5毫克/千克)、组4:-挤压伤+高剂量GGF2(5毫克/千克)。在挤压伤前24小时给药GGF2、挤压后24小时给药GGF2和手术后每7天给药1次GGF2直至研究结束。手术在下正中切口使前列腺，海绵体神经和主要盆腔神经节(MPG)暴露出来，并制造2分钟的挤压伤(针以90度角驱动和“一点”压力)。

图7是一种图，显示了作为实验条件函数的与平均主动脉压(MAP)均一化的平均海绵体内压(ICP)。ICP/MAP是0.81(正常)、0.15(损伤未治疗)和0.4(当GGF2为0.5毫克/千克(“低剂量”))和0.54(GGF2为5mg/kg(“高剂量”)(所有值的p<0.05)。32只3个月大的雄性Sprague-Dawley大鼠被分为4种实验条件：组1-假手术、组2-挤压伤+没有GGF2、组3-挤压伤+低剂量GGF2(0.5毫克/千克)、组4:-挤压伤+高剂量GGF2(5毫克/千克)。在挤压伤前24小时给药GGF2、挤压后24小时给药GGF2和手术后每7天给药1次GGF2直至研究结束。手术在下正中切口使前列腺，海绵体神经和主要盆腔神经节(MPG)暴露出来，并制造2分钟的挤压伤(针以90度角驱动和“一点”压力)。

图8A-C是一系列照片，代表性的显示了每个治疗组((组A)正常、(组B)挤压伤、(组C)挤压伤+GGF2)三个动物中主要盆腔神经节(MPG)的氟金标记。注射入阴茎组织的氟金被向后逆行运输通过整个神经到达MPG中的细胞体。组A：正常动物，显示了在没有神经损伤情况下观察到的逆行标记的量。组B：挤压伤动物，由于氟金标记不能被传递回MPG，显示了受伤后完整神经纤维的急剧减少。组C：挤压伤+GGF2动物，显示了增加量的氟-金标记的MPG细胞，说明在受伤后使用GGF2治疗能够保留更多的神经纤维。

图9是一种图，显示了MPG中的氟金标记的量。结果显示，正常动物在MPG中具有大量细胞体标记。在挤压伤之后，被标记的细胞数量急剧减少，这是神经纤维被破坏因此无法逆行运输标记回到MPG的结果。但是，GGF2治疗法能够提高完整的神经纤维数量，完整的神经纤维能够将氟金从阴茎逆行运输会MPG，从而产生大量标记的细胞体。

图10A-C是一系列照片，描述了代表性的nNos水平染色。海绵体nNOS是一种已知的海绵体神经保护标记物。该工作的结果包括正常组织染色(组A)。相比较可知，在海绵体神经受到挤压伤之后(组B)，nNOS染色具有明显的损失。保存在阴茎海绵体末端海绵体神经的nNOS染色说明在挤压伤后使用GGF2治疗(组C)能够增加海绵体神经的存活率。染色强度说明了使用GGF2治疗的nNOS染色保存量。

图11A-C是一系列照片，显示了代表性的酪氨酸氢化酶(TH)染色水平。组A显示了正常组织染色，组B显示在海绵体神经受到挤压伤之后TH染色显著损失。组C显示了在阴茎海绵体的海绵体神经末端保留的TH染色；这一发现与挤压伤后使用GGF2治疗所产生的阴茎神经支配的整体保存和重建相一致。因此，染色强度说明了使用GGF2治疗的TH染色保存量。

图12A-C是一系列照片，显示了代表性的囊状乙酰胆碱转运体(VaChT)染色。结果显示正常组织染色(组A)和在海绵体神经受到挤压伤后VaChT的显著损失(组B)。相反，组C中显示的在阴茎海绵体海绵状神经末端保留的VaChT染色说明在挤压伤之后使用GGF2治疗能够获得增加的海绵状神经的存活率(C)。染色强度显示使用GGF2治疗具有保留VaChT染色的趋势。

图13是一种图，显示了研究主体的体重作为增加的GGF2的量或者媒介物的量的函数变化(参见实施例6)。

图14A是一种图，显示了随着不同水平的海绵体神经电刺激作用产生的海绵体内压力变化(与平均动脉压(MAP)均一化的最大ICP)(参见实施例6)。ICP反应在组C和组B中明显更高。组A：假+媒介物。组B：假+GGF2。组C：BCI+GGF2(5毫克/千克，sc)。组D：BCI+GGF2(15毫克/千克，sc)。组E:BCI+媒介物。

图14B是一种图，显示了显示了随着不同水平的海绵体神经电刺激作用产生的海绵体内压力变化(ICPare/MAP)(参见实施例6)。ICP反应在组C和组B中明显更高。组A：假+媒介物。组B：假+GGF2。组C：BCI+GGF2(5毫克/千克，sc)。组D：BCI+GGF2(15毫克/千克，sc)。组E:BCI+媒介物。

图15是一种图，显示了治疗组A、E和C中，每海绵体神经的雪旺氏细胞中位数作为无髓化的纤维数的函数(参见实施例6)。

图16A-B是一对图，显示了在假损伤、挤压伤(组A)或者割伤(组B)后使用GGF2媒介物治疗的情况下，von Frey机械(触觉)域在6周内的时间过程。

图17A-B是一对图，显示了在假损伤、挤压伤(组A)或者割伤(组B)后使用GGF2媒介物治疗的情况下，在六周内对丙酮蒸汽冷却的行为反应时间过程。

具体实施方式

外周神经创伤是许多不同情况、挤压、挫伤、相互碰撞、压扁或者抻伤的常见结果，例如，由外伤、事故或者外科手术产生的。尽管外部因素导致的神经创伤是变化的，但是在神经水平上的表现具有共同的特症(参见，例如，Lee and Wolfe,J Am Acad Orthop Surg,8(4),p.243,2008)。在各个病理学中，外伤性损伤常常造成髓鞘形成损伤、神经外膜损伤、神经束膜损伤、神经内膜损伤及轴损伤。在最温和的病例中，损伤主要是针对髓鞘质和神经外膜，然后在几天或者几周之后自然完全恢复。

然而，许多神经创伤会导致神经内膜破环和轴破环，并因此导致不能完全恢复或者需要持续很长一段时间才能恢复的机能破环。

此外，在包括轴突损伤的外周神经损伤中，在损伤后几个小时时间内，轴突发生局部退化。在随后几天的时间内，最接近的神经元细胞体和轴突经历一种过程，这种过程叫做华勒氏变性。在轴突退化之后，髓鞘质产生的雪旺氏(Schwann)细胞死亡，留下碎片并发炎。雪旺氏(Schwann)细胞的细胞死亡和相关发炎加重神经损伤。

与中枢神经系统不同，在外周神经中可以发生显著数量的再生。轴突沿着神经束膜管生长并重新刺激末梢的靶分子，并且雪旺氏(Schwann)细胞修复轴突。虽然外周神经可以再生，但是，身体调节的自然再生过程不能提供全面的复原，而且许多经历了退化的神经元不在重新生成或者不能识别它们原有的靶分子并造成永久的机能失调的结果。这些机能失调可以包括运动机能损失、感觉功能损失、瘫痪、反应能力损失、僵硬、挛缩或者关节活动范围减少。

疼痛通常与感觉神经损伤或者破坏有关，并且会导致受影响部位的戒备和固定。因此，伤害感受(神经元信号屈服于痛觉)伴随着促进快速愈合的机制，即使会引起使人不愉快的感觉和情绪。然而，在许多病态情况中，伤害感受的输入可以导致对有机体非常有害的功能性变化。

神经损伤会使初级传入神经元的许多性质发生改变，并改变他们在脊髓中的中枢性关系，导致异常性疼痛(通常无害的刺激所造成的疼痛感觉)、痛觉过敏(对任何给定疼痛刺激的过度反应)和感受域(即当使用刺激时感到“疼痛”的区域)扩大。大多数慢性疼痛情况来自于中枢性神经组织或者外周神经组织的破坏。

大量文献显示，神经调节蛋白能够增加神经元通过人造管再生的能力，并且可以增加其作为细胞治疗剂(例如雪旺氏(Schwann)细胞移植物)的附属治疗法的作用。在本发明之前，人们并不知道神经调节蛋白可以单独被使用，例如，用于保护和/或修复外周神经创伤功能。

神经调节蛋白组合物

神经调节蛋白可以被预防性使用，从而预防或者最小化潜在的损伤。作为选择，或者另外，神经调节蛋白可能用来治疗损伤。术语“治疗”可能包括，但是不局限于，预防进一步的损伤、抑制进一步或者不间断的损伤、改善损伤病症或者症状、和/或在损伤后改善/修复功能。

可以对有风险患有外周神经损伤或者已经患有外周神经损伤的主体给药神经调节蛋白，从而改善肌肉功能，例如，举例来说，而不是限制性的，骨骼肌功能。改善的肌肉功能的实施例包括，但是不局限于，增加肌肉块(例如，增加肌纤维大小)、增加肌肉力量、减少肌肉萎缩和/或减少肌肉纤维化。在这里所公开的组合物和方法的一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

可以对有风险患有外周神经损伤或者已经患有外周神经损伤的主体给药神经调节蛋白，从而治疗感觉和/或动力缺陷和/或高敏感性。还可以被这里公开的方法治疗的感觉缺陷和/或高敏感性的非限制性实施例包括，糖尿病性神经病变、外伤神经病和/或化学治疗神经病(例如，在给药顺式铂氨或者紫杉醇之后)。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

可以对有风险患有外周神经损伤或者已经患有外周神经损伤的主体给药神经调节蛋白，从而治疗已经患有外周神经损伤的主体中的自主神经系统功能障碍。示范性的自主神经系统功能障碍包括交感神经系统和/或副交感神经系统功能障碍。可以被本发明公开的方法治疗的自主功能障碍的非限制性实施例包括，区域血流量功能障碍(例如，由于勃起功能障碍导致的海绵状神经损伤)、肠道动力分泌物功能障碍、呼吸系统改变功能障碍、膀胱改变功能障碍和视觉改变功能障碍。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

示范性的组合物包括，但是不局限于，一种神经调节蛋白、NRG-1或者GGF2核酸或者肽分子。被这里公开的方法治疗的示范性的外周神经包括但是不局限于，坐骨神经和/或海绵状神经。

对主体给药的本发明组合物的实际剂量可以通过物理和生理因素来确定，所述物理和生理因素例如体重、情况的严重程度、被处理的疾病类型、之前的或者并行的治疗介入、病人的自发性疾病和给药途径。无论如何，负责给药的一生可以确定组合物中活性成分的浓度以及用于个别主体的适当剂量。

这里公开的方法的某些方面包括，根据使用的具体神经调节蛋白活性、给药途径、给药方法和医学情况给药大约1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,1-10,1-20,10-20,1-30,1-40,1-50,10-20,10-30,10,15,20,25,30,35,40,50,15-25,15-40,15-35,15-50,20-50,20-40,20-40,25-35,30-50,30-60,50-75,50-100,100,1-100,100-150,150-200,200,1-200微克或者毫克的神经调节蛋白多肽或者肽。某些方面包括在损伤之前和/或之后给药神经调节蛋白。

神经调节蛋白可以在受伤之前给药、在受损伤期间给药和/或在受伤之后指定的或者相等的时间间隔给药。在一种非限制性实施例中，神经调节蛋白可以大约每24小时给药一次(或者一天一次)、至少每24小时给药一次、每48小时给药一次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，在受伤之前进行大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，在受伤之前持续1个月、2个月或者3个月。作为选择，或者另外，神经调节蛋白可以在受伤之后每24小时给药一次或者每周给药一次。在损伤之前给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤期间给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤之后给药可以是全身性的和/或局部的。

这里所公开的方法的某些方面包括根据所使用的神经调节蛋白活性、给药途径、给药方法和医学环境给药大约0.005微克或者毫克、0.1微克或者毫克、0.2微克或者毫克、0.3微克或者毫克、0.4微克或者毫克、0.5微克或者毫克、0.6微克或者毫克、0.7微克或者毫克、0.8微克或者毫克、0.9微克或者毫克、1微克或者毫克、2微克或者毫克、3微克或者毫克、4微克或者毫克、5微克或者毫克、6微克或者毫克、7微克或者毫克、8微克或者毫克、9微克或者毫克、10微克或者毫克、11微克或者毫克、12微克或者毫克、13微克或者毫克、14微克或者毫克或者15微克或者毫克、或者任何中间值的神经调节蛋白多肽或者肽。例如，神经调节蛋白或者NRG-1同型体包括但不限于，GGF2以0.5、2.5、5、7.5、10、12.5或者15微克/千克或者毫克/千克的剂量给药。可以使用任何适当的给药途径，包括但不限于，肠胃外给药，皮下给药，肌肉内给药，神经周给药，颅内给药，眶内给药，眼部给药，心室内给药，囊内给药，脊柱内给药，脑池内给药，腹膜内给药，产期内给药，烟雾剂给药，口服给药，或者透皮给药的或者局部给药(例如，通过应用一种装置或者粘性贴片传递能够穿过真皮进入血液的制剂)。

在本发明的一个方面，GGF2的剂量水平在大约0.001毫克/千克到1.5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到2.5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到5.0毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到10毫克/千克、或者从大约0.001毫克/千克到15毫克/千克范围内，大约每24小时给药一次(或者一天一次)、至少每24小时给药一次、每48小时给药一次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，进行大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，持续1个月、2个月或者3个月。在一种具体的实施方案中，GGF2剂量水平在从大约0.001毫克/千克到大约0.02毫克/千克、从大约0.02毫克/千克到0.06毫克/千克、从大约0.06毫克/千克到大约0.1毫克/千克、从大约0.1毫克/千克到大约0.3毫克/千克、从大约0.3毫克/千克到大约0.5毫克/千克、从大约0.5毫克/千克到大约0.7毫克/千克、从大约0.5毫克/千克到大约1.0毫克/千克、从大约0.7毫克/千克到大约1.0毫克/千克、从大约1.0毫克/千克到大约1.5毫克/千克、从大约1.5毫克/千克到大约2毫克/千克、从大约2毫克/千克到大约2.5毫克/千克、从大约2.5毫克/千克到大约3毫克/千克、从大约3毫克/千克到大约3.5毫克/千克、从大约3.5毫克/千克到大约4毫克/千克、从大约4毫克/千克到大约4.5毫克/千克、从大约4.5毫克/千克到大约5毫克/千克、从大约0.001毫克/千克到大约1.5毫克/千克，或者从大约0.001毫克/千克到大约5.0毫克/千克范围内，大约每24小时给药1次(或者每天一次)、至少24小时给药一次、每48小时给药1次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天给药一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，持续大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周，或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，持续1个月、2个月或者3个月。在另一个实施方案中，GGF2的剂量水平在大约0.001毫克/千克到15毫克/千克范围内，大约每24小时给药一次(或者一天一次)、至少每24小时给药一次、每48小时给药一次、至少每48小时给药1次、至少每隔一天一次、每72小时给药一次、至少每72小时给药一次，进行大约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、或者12周。在另一个实施方案中，GGF2至少每周给药1次，持续1个月、2个月或者3个月。

在本公开的另一个方面，剂量范围在5毫克/千克到15毫克/千克之间，包括端点，神经调节蛋白或者NRG-1同型体被全身性或者局部对主体给药。例如，当NRG1多肽或者肽，包括但不限于GGF2，以5毫克/千克到15毫克/千克的剂量(包括端点)给药时，优选的给药途径是静脉内给药、皮下给药、透皮给药或者局部给药。神经调节蛋白可以在受伤之前给药、在受损伤期间给药和/或在受伤之后指定的或者相等的时间间隔给药。在一个实施例中，神经调节蛋白可以在受损伤前24小时或者48小时给药，并且在受损伤后每天(例如，24小时)或者每星期给药一次。在损伤之前给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤期间给药可以是全身性的和/或局部的。在损伤之后给药可以是全身性的和/或局部的。一些剂量的神经调节蛋白(例如剂量范围在5毫克/千克到15毫克/千克之间，包括端点)可以一种非全身性局部方法给药，包括但不局限于皮下注射或者植入或者透皮传递方法。

这里所公开的组合物和方法的某些实施方案中，药物组合物可以包括，例如，至少大约0.1％的活性化合物。在其他实施方案中，活性化合物可以占单位重量的大约2％到大约75％，或者占大约25％到大约60％，例如，以及任何在其中可推导出的范围。在其他非限制性实施例中，每次给药的剂量还可以包括从大约1微克(微克)/千克/体重，大约5微克/千克/体重，大约10微克/千克体重，大约50微克/千克体重，大约100微克/千克体重，大约200微克/千克体重，大约350微克/千克体重，大约500微克/千克体重，大约1毫克/千克体重，大约5毫克/千克体重，大约10毫克/千克体重，大约50毫克/千克体重，大约100毫克/千克体重，大约200毫克/千克体重，大约350毫克/千克体重，大约500毫克/千克体重，到大约1000毫克/千克毫克/千克或更多，并且任何范围其中可推导出的范围。在这里所里出的数值范围内可推导出的范围的非限制性实施例包括大约5毫克/千克体重到大约100毫克/千克体重，大约5微克/千克体重到大约500毫克/千克体重等等，可以根据上述所列出的数值给药其中可推导出的范围。

在本申请上下文中使用的术语“大约”指的是所使用的装置或者方法产生的数值与确定的数值相比在85％、90％、95％>或者误差标准偏差范围内。

神经调节蛋白和含有神经调节蛋白EGF-样区域的多肽可以与一种药学上可接受的稀释剂、载体、或者赋形剂一起，以单位剂量形式对主体给药。常用的药物习惯可以被利用从而提供适当的制剂或者组合物，并对病人或者试验动物给药这种组合物。静脉内给药在某些情况下是优选的，尽管如此，也可以使用其他任何适当的给药途径，包括但是不局限于，非肠道给药、皮下给药、肌肉注射给药、颅内给药、眶内给药、眼药、心室内给药、中央囊内给药、脊柱内给药、脑池内给药、腹膜内给药、产期内给药、烟雾剂、口服给药或者透皮给药或者局部给药(例如，通过使用一种装置或者粘性贴片，其中携带能够穿过真皮进入血流的制剂)。治疗剂可以是液体溶液或者悬浮液。用于口服给药，制剂可以以片剂或者胶囊剂的性质存在。作为经鼻制剂，所述制剂可以以粉末、滴鼻剂或者烟雾剂的形式存在。

“神经调节蛋白-1”、“NRG-1”、“heregulin”指的是一种多肽，这种多肽能够结合ErbB受体1、ErbB受体3或者ErbB受体4，并且通过受体配对作用(二聚作用)还结合ErbB受体2。所述神经调节蛋白是GGF2或者其任何一种子序列、或者任何一种分子，包括GGF2整个序列或者GGF2序列的活性部分。GGF2可以是一种野生型序列、一种子序列或者包括GGF2序列所有或者任意活性部分的变体。所述GGF2序列可以是人类序列的子序列或者包括该GGF2序列所有或者任意活性部分的变体。

这里公开的GGF2氨基酸序列非限制性的实施例(具有包括其EGF-样结构域，带下划线)是：

MRWRRAPRRSGRPGPRAQRPGSAARSSPPLPLLPLLLLLGTAALAPGAAAGNEAAPAGASVCYSSPPSVGSVQELAQRAAVVIEGKVHPQRRQQGALDRKAAAAAGEAGAWGGDREPPAAGPRALGPPAEEPLLAANGTVPSWPTAPVPSAGEPGEEAPYLVKVHQVWAVKAGGLKKDSLLTVRLGTWGHPAFPSCGRLKEDSRYIFFMEPDANSTSRAPAAFRASFPPLETGRNLKKEVSRVLCKRCALPPQLKEMKSQESAAGSKLVLRCETSSEYSSLRFKWFKNGNELNRKNKPQNIKIQKKPGKSELRINKASLADSGEYMCKVISKLGNDSASANITIVESNATSTSTTGTSHLVKCAEKEKTFCVNGGECFMVKDLSNPSRYLCKCPNEFTGDRCQNYVMASFYSTSTPFLSLPE(SEQ ID NO:1)(GenBank编目号AAB59622，通过引证在此并入本文)。

神经调节蛋白多肽或其片段可能与GGF2的氨基酸序列具有75，80，85，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或者100％的一致性或者同源性。神经调节蛋白-样多肽可能与GGF2的EGF-样结构域的氨基酸序列具有75，80，85，86，97，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或者100％的一致性或者同源性。

术语“蛋白质”或者“多肽”指的是包括至少十个氨基酸残基的分子。所述蛋白质可以包括GGF2多肽的全部或者部分。还可以使用野生版的蛋白质或者多肽。作为选择，或者另外，可以使用修饰的蛋白质或者多肽治疗外周神经损伤。术语“肽”、“蛋白质”或者“多肽”可以互换使用。术语“肽”用于指任意长度的氨基酸序列。

"修饰的肽"指的是一种化学结构，尤其是其氨基酸序列相对于相应的野生型肽被改变的肽。在一些实施方案中，修饰的肽至少具有一个修饰的氨基酸。在一些实施方案中，修饰的肽至少具有一个D氨基酸。在一些实施方案中，修饰的肽至少具有一个非天然存在的氨基酸。

修饰的肽可以包括取代变体、插入变体或者删除变体。删除变体通常缺少一个或者更多个天然或者野生型分子的残基。可以删除单独的残基，或者可以删除一些连续的氨基酸。可以向编码的核酸序列中引入终止密码子(通过取代作用或者插入作用)从而产生截断蛋白质。插入的突变通常包括在肽的非末端加入材料。可以包括插入一个或者更多的残基。也可以在末端加入，这通常叫做融合蛋白质或者融合肽。取代的变体一般包括在肽的一个或者更多个位点上一个氨基酸与另一个氨基酸的交换，并且可以被设计从而调节肽的一个或者多个性质，并且损失或者不损失其他功能或者性质，例如神经调节蛋白受体的结合和活化。取代作用可以是保守的，即，一个氨基酸被一个相似形状和电荷的氨基酸所取代。作为选择，取代作用可以是非保守的，从而影响肽的功能或者活性。.非保守性改变通常涉及使用一个化学结构不同的残基取代，例如，用一种非极性的或者不带电荷的氨基酸取代一种极性的或者带电荷的氨基酸，反之亦然。

保存性取代可以包括，但是不局限于，例如如下变化：丙氨酸变化为丝氨酸；精氨酸变化为赖氨酸；天门冬酰胺变化为谷氨酸或者组氨酸；天冬氨酸变化为谷氨酸；胞嘧啶变化为丝氨酸；谷氨酰胺变化为精氨酸；谷氨酸变化为天冬氨酸；甘氨酸变化为脯氨酸；组氨酸变化为天门冬酰胺或者谷氨酰胺；异亮氨酸变化为亮氨酸或者缬氨酸；白氨酸变为缬氨酸或者异亮氨酸；赖氨酸变化为精氨酸；甲硫氨酸变化为白氨酸或者异亮氨酸；苯基丙氨酸变化为酪氨酸或者白氨酸或者甲硫氨酸；丝氨酸变化为苏氨酸；苏氨酸变化为丝氨酸；色氨酸变化为酪氨酸；酪氨酸变化为色氨酸或者苯基丙氨酸；和缬氨酸变化为异亮氨酸或者白氨酸。

氨基酸和核酸序列可以包括其他的残基，例如，额外的N-或者C-末端氨基酸，或者5'或者3'序列，只要所得序列能够满足这里所描述的功能性标准，例如，维持生物活性。加入末端序列尤其适用于核酸序列，所述核酸序列可以，例如，包括各种非编码序列侧基，所述侧基可以在编码区的5'或者3'部分。

术语“治疗有效量”或者“有效量”指的是能够引发组织、系统、动物或者人产生生物反应或者医学反应的神经调节蛋白的量，所述量可以由研究员、兽医、内科医生或者其他临床医生来确定。

治疗性变化可以是测量的生物化学或者生理特症向着缓解待解决的疾病或者病况的方面变化，所述待解决的疾病或者病况例如外周神经损伤、肌肉萎缩(增加肌肉量、改善肌肉力量、减少肌肉萎缩)、减少神经性疼痛、增加感觉恢复、增加外周神经髓鞘再生。更具体的，“有效量”是足够减少与医学病况或者虚弱有关的症状、使人身体患有能够导致某些身体功能损伤的疾病或者失调时保持功能正常化、或者改善疾病或者病况一种或者更多种临床测量参数的量。

药物制剂

这里公开的药物制剂包括溶解或者分散在药学上可接受的载体中的有效量的肽。术语“药物可接受的”或者“药理学可接受的”指的是对主体(例如，人)酌情给药时通常不会产生副作用、过敏作用或者其他不良反应的组合物。根据这里的公开，这种药物组合物的制备方法对本领域技术人员人员是已知的，如Mack出版公司1990年出版的雷明顿药物科学第18版中所例证的，该文献通过引证在此全部并入本文。而且，为了实现对人类给药的目的，本领域技术人员可以理解所述制剂应该满足无菌、无热源、普遍安全的并且满足例如美国食品药物管理局生物标准所规定的纯度标准。

而且，如这里所使用的“药学上可接受的载体”包括如下材料，例如，溶剂、分散介质、包覆层、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟试剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、增味剂、染料等等类似的材料及其结合，如本领域技术人员根据这里公开的内容已知的。除非与活性成分不相容的常用载体，其在治疗剂或者药物组合物中的应用是可以预计的。

根据这里公开的药物是否需要以固体、液体或者烟雾剂的形式给药，并且根据所述药物是否需要是无菌的从而作为注射剂给药，所述药物可以包括不同类型的载体。这里公开的神经调节蛋白多肽或者肽可以被静脉给药、皮内给药、动脉内给药、腹腔内给药、病灶内给药、颅内给药、关节内给药、前列腺内给药、腹腔内给药、气管内给药、经鼻给药、直肠给药、阴道给药、结肠内给药、肿瘤内给药、肌肉内给药、神经内给药、皮下给药、结膜下给药、囊内给药、粘膜给药、心包内给药、脐带内给药、眼内给药、口服给药、局部给药、定点给药、吸入给药(例如，烟雾剂)。而且，这里公开的神经调节蛋白多肽或者肽可以被注射给药、输注、连续输注、定点输液直接进入、通过导管、通过灌洗法或者本领域普通技术人员已知的其他方法或者任何前述方法的结合进入恒温的目标细胞。

对主体给药的本发明组合物的实际剂量可以通过物理和生理因素来确定，所述物理和生理因素例如体重、情况的严重程度、被处理的疾病类型、之前的或者并行的治疗介入、病人的自发性疾病和给药途径。负责给药的医生可以确定组合物中活性成分的浓度以及用于个别主体的适当剂量。

这里所公开的组合物和方法的某些实施方案中，药物组合物可以包括，例如，至少大约0.1％的活性化合物。在其他实施方案中，活性化合物可以占单位重量的大约2％到大约75％，或者占大约25％到大约60％，例如，以及任何在其中可推导出的范围。在其他非限制性实施例中，每次给药的剂量还可以包括从大约1微克(微克)/千克/体重，大约5微克/千克/体重，大约10微克/千克体重，大约50微克/千克体重，大约100微克/千克体重，大约200微克/千克体重，大约350微克/千克体重，大约500微克/千克体重，大约1毫克/千克体重，大约5毫克/千克体重，大约10毫克/千克体重，大约50毫克/千克体重，大约100毫克/千克体重，大约200毫克/千克体重，大约350毫克/千克体重，大约500毫克/千克体重，到大约1000毫克/千克毫克/千克或更多，并且任何范围其中可推导出的范围。在这里所里出的数值范围内可推导出的范围的非限制性实施例包括大约5毫克/千克体重到大约100毫克/千克体重，大约5微克/千克体重到大约500毫克/千克体重等等，可以根据上述所列出的数值给药其中可推导出的范围。

在任何情况下，所述组合物可以包括各种抗氧化剂从而减缓一种或者更多成分的氧化。另外，通过加入防腐剂可以产生对微生物的预防作用，所述防腐剂例如抗细菌剂和抗真菌剂，包括但是不局限于对羟苯甲酸(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞或者其结合。

所述药物可以游离碱性、中性或者盐的形式被配制如一种组合物中。药学上可接受的盐包括，酸加成盐，例如，与肽组合物的游离氨基形成的盐、或者与无机酸形成的盐，例如，与盐酸或者磷酸形成的盐，或者与有机酸(例如醋酸、草酸、酒石酸或者扁桃酸)形成的盐。与游离羧基形成的盐还可来源于无机碱(例如，比方说钠、钾、铵、钙或者氢氧化铁)；或者有机碱(例如异丙胺、三甲胺组氨酸或者普鲁卡因)。

在所述组合物处于液体状态的实施方案中，所述载体可以是一种溶剂或者分散介质，包括但是不限于，水、乙醇、多元醇(例如，甘油，丙二醇和液态的聚乙二醇等等)、脂类(例如三酸甘油酯、植物油、脂质体)及其结合。通过例如使用包覆层(例如卵磷脂)；通过维持在载体分散体系(例如，液态多元醇或者脂类)中要求的颗粒尺寸；通过利用表面活性剂(例如，羟丙甲纤维素)或者这些方法的结合来维持适当的流动性。在许多情况下，优选的包括等渗剂，例如，比方说，糖、氯化钠或其结合。

在某些实施方案中，制备所述组合物用于例如口服吸收给药。在这些实施方案中，所述固体组合物可以包括，例如，溶液、悬浮液、乳化液、片剂、药丸、胶囊剂(例如，硬壳胶囊或者软壳胶囊)、持续释放制剂、口腔组合物、锭剂、酏剂、悬浮液、糖浆、压片或其结合。口服组合物可以直接被整合入饮食的食物中。优选的用于口服给药的载体包括惰性稀释剂，可吸收的可食载体或者其结合。所述口服组合物可以被制成糖浆或者酏剂。糖浆或者酏剂可以包括，例如，至少一个活化剂、甜味剂、防腐剂、增味剂、着色剂、防腐剂或者其结合。

在某些优选的实施方案中，口服组合物可以包括一种或者一种以上粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、增味剂，及其结合。在某些实施方案中，组合物可以包括以下一种或者更多种：粘合剂(例如，比方说，黄芪胶、阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶或者其结合)；赋形剂(例如，比方说，磷酸二钙盐、甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁或者其结合)；崩解剂(例如，比方说，玉米淀粉、马铃薯淀粉藻朊酸或者其结合)；润滑剂(例如，比方说，硬脂酸镁)；甜味剂(例如，比方说，蔗糖、乳糖、糖精或者其结合)；增味剂(例如，比方说，胡椒薄荷、冬青油、樱桃香料、橙香料，等等)；或者前述的结合。当所述剂量单位形式是胶囊剂时，除了上述类型的材料之外还包括其他载体，例如液态载体。还可以存在各种其他材料，作为包覆层或者用于修饰剂量单位的外观形态。例如，片剂、药丸或者胶囊剂可以被虫胶、糖或者二者涂布。

通过将需要量的所述活性化合物整合入适当的溶剂中，根据需要可以选择性的包括上面列举的其他成分，随后过滤灭菌可以制备无菌可注射溶液。通常，通过将各种无菌的活性成分整合到包括碱性分散媒介物或其另一种其他成分的无菌媒介物中制备分散液。对于用于制备无菌可注射溶液、悬浮液或者乳化液的无菌粉末来讲，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这会产生活性成分与其他来自无菌过滤溶液的需要的组分的粉末。所述液体介质应该是根据需要适当缓冲的，并且所述液体稀释剂在用足够的盐水或者葡萄糖注射前首先赋与等渗性。本发明还包括制备用于直接注射的高浓度组合物，其中，通过使用二甲亚砜作为溶剂产生极快的渗透性，将高浓度活性试剂传递到小面积中去。

优选的，这里公开的组合物在其制备和储存在标准大气条件下是稳定的，并且防止微生物(例如，细菌和真菌)的污染作用。可以理解，内毒素污染应该被维持在最低限度，作为安全水平，例如，少于0.5纳克/毫克蛋白质。

在具体的实施方案中，这里公开的组合物可以包括延迟吸收试剂，从而实现可注射组合物的延迟吸收，所述延迟吸收试剂例如，举例来说，单硬脂酸铝、明胶或者其结合。

外周神经：坐骨神经

关于坐骨神经，本发明的组合物能够增加肌肉量、改善肌肉强度并减少肌肉萎缩。尤其是，给药GGF2能够增加外周神经包裹组织中的肌纤维大小并且减少纤维化。举例来说，给药GGF2能够增加骨骼肌的肌纤维大小并且减少纤维化。本发明还提供了用于预防脱髓鞘作用和/或诱导受损伤的外周神经髓鞘再生的组合物和方法。在这里公开的组合物和方法的某些实施方案中，所述组合物和方法用于预防脱髓鞘作用和/或诱导受损伤坐骨神经的髓鞘再生，包括肌肉中受损伤的坐骨神经。这里公开的方法中的一种示例性的肌肉包括但不局限于骨骼肌。

在一个实施方案中，这里公开的内容提供了一种组合物，所述组合物包括有效量的神经调节蛋白，能够改善有风险患有外周神经损伤或者已经患有外周神经损伤的主体中的肌肉功能。改善的肌肉功能包括，举例来说，但不局限于骨骼肌功能。改善的肌肉功能的实施例包括，但是不局限于，增加肌肉块(例如，增加肌纤维大小)、增加肌肉力量、减少肌肉萎缩和/或减少肌肉纤维化。在一个优选的方面，所述神经调节蛋白是GGF2。

外周神经：海绵状神经

大鼠勃起功能障碍模型是一种标准的、被接受的并广泛公开的外周神经损伤模型。在这种具体的方法中，通过钳子按压使海绵状神经受伤。.在任意其他的外周神经中可以使用相同的按压或者挤压伤作为模型。在海绵状神经损伤模型中，功能性缺陷是勃起功能障碍。由外伤神经损伤的常见和持续的病理生理特征可见，这种海绵状神经损伤是前列腺切除术导致损伤的杰出模型，并且是外伤性外周神经损伤的一般模式。

外周神经损伤会诱导位于脊神经后根神经节(DRG)上的感觉神经元细胞群发生变化；这些变化能够促进存活率和轴突再生。在适宜条件下，例如，在挤压伤之后，最多量神经纤维被成功再生。然而，在许多临床相关的环境中，外伤或者疾病诱导的神经损伤会产生较差的后果，只能实现有限的功能恢复，并且可以想到该恢复常常延迟。在此情况下，神经性疼痛或者慢性疼痛状态会扩大。

疼痛通常与感觉神经损伤或者破坏有关，并且会导致受影响部位的戒备和固定。因此，伤害感受(神经元信号屈服于痛觉)伴随着促进快速愈合的机制，即使会引起使人不愉快的感觉和情绪。然而，在许多病态情况中，伤害感受的输入可以导致对有机体非常有害的功能性变化。

神经损伤会使初级传入神经元的许多性质发生改变，并改变他们在脊髓中的中枢性关系，导致异常性疼痛(通常无害的刺激所造成的疼痛感觉)、痛觉过敏(对任何给定疼痛刺激的过度反应)和感受域(即当使用刺激时感到"疼痛"的区域)扩大。大多数慢性疼痛情况来自于中枢性神经组织或者外周神经组织的破坏。

阳痿或者还被叫做勃起功能障碍(ED)是一种常见的问题，单单在美国就影响了两千万人。阴茎勃起是一种神经血管现象，取决于神经完整性和功能性血管。在性刺激的作用下，神经传导子(尤其是一氧化氮)从海绵状神经末端和内皮细胞中释放。作为结果，动脉和小动脉平滑肌松弛，增加了动脉流动。封闭在阴茎海绵主体中的血液使阴茎处于勃起状态。

在本国内，由于根治性骨盆手术(例如，前列腺、膀胱或者直肠癌)而造成的海绵状神经损伤是医源性勃起功能失调(ED)最常见的原因。在根治性前列腺切除术之后，ED是主要病状。例如，尽管引入了神经保留手术技术，对于在器官限制的前列腺癌后经过双边海绵体神经恢复过程的男性来说，手术后效率在30％到80％范围内(Wang,J Sex Med,4:1085-97,2007)。

到目前为止已经调查了多种神经调节策略；然而没有任何一种疗法能够在海绵状神经受伤之前、受伤时、受伤后均起到神经保护作用并诱导神经再生(Michl et al.,J Urol 176:227-31,2006；Burnett and Lue,J Urol 176:882-7,2006).尽管对骨盆恶性肿瘤外科手术和放射性治疗后同时进行神经修复手术，但是仍然需要一种新的在治疗后保持并修复勃起功能的方法。

可以观察到从末梢到损伤位点的明确定义的细胞变化模型，从轴突和髓鞘退化开始、巨噬细胞入侵、吞噬作用到雪旺式细胞分化，形成宾格内氏带。这些变化改善受伤的神经环境极其轴突再生能力。当轴突从“传达”模式转变成生长模式时，表达蛋白质(GAP-43、微管蛋白、肌动蛋白)、新的神经肽和细胞因子时，营养因子可以促进神经存活率。由于末梢神经残干支持和再生神经容量是不确定的，因此需要新的增加生长能力的方法(Fu and Gordon,Mol Neurobiol.14:67-116,1997).

实施例

实施例1：在外周神经损伤后使用GGF2治疗肌肉萎缩

这里描述的研究的整体设计如下表1所述。

表1.研究设计

在此研究中使用8-10周大的雄性Spraque Dawley(CD)大鼠。动物根据其体重被随机分配在不同的手术组中，并随后在坐骨神经分叉附近8-10毫米经受坐骨神经挤压伤(图1)或者在右后肢接收假手术。在受伤之后二十四小时，用单一剂量的GGF2(2.6毫克/千克，静脉给药)或者媒介物治疗受到坐骨神经挤压伤的动物，然后每周给药2次，持续整个研究时间。受伤后，代表所有治疗组的动物在第2、4、6周被安乐死。使用开他敏/甲苯噻嗪深度麻醉动物，并通过穿心灌注磷酸质缓冲盐水随后输入4％多聚甲醛至安乐死。收集侧面腓肠肌和末梢坐骨神经，装入并在受伤的侧面切片。用苏木精和曙红色染料(H&E)、麦森三色染色、和甲苯胺蓝对侧面腓肠肌肌肉切片(3-5微米)染色，用于评价肌肉纤维化和肌纤维在横切面的分布(图2)。与假损伤动物相比，在挤压伤后可以观察到显著增加的纤维化。在损伤后4周和6周，与媒介物治疗的动物相比，使用GGF2-治疗的动物中能够观察到纤维化的显著减少。在第6周，与媒介物治疗相比，GGF2将损伤导致的纤维化减少至接近正常水平。

进一步的，所述末梢坐骨神经被装入塑料中并切片。用H&E、luxol速蓝和甲苯胺蓝染色分离的切片，评价挤压伤后的脱髓鞘程度。具体的说，图3是一系列显微照片(Trichrome 100X)，显示了损伤后2和6周假损伤动物[A]、媒介物治疗的动物[B]和GGF-2治疗的动物[C]代表性的肌肉切片。在假损伤动物中，所述肌纤维在损伤后2和6周处于正常限制内。挤压伤后，纤维化增加并且肌纤维大小减少。在损伤后第4和6周，GGF2疗法能够显著的减少肌肉纤维化。另外，与媒介物治疗的动物相比，GGF2治疗的动物体内的肌纤维大小也有改善。

在神经挤压伤之后，目标肌肉纤维化随着时间增加。进一步的，与假损伤参照相比，在挤压伤的动物体内，目标肌肉内的肌纤维大小分布向着较小横截面区域倾斜。在损伤之后第4和6周，GGF2疗法能够显著的减少肌肉纤维化。

除了其对纤维化的作用之外，GGF2疗法能够在损伤后第4周和第6周促进肌纤维面积向着增加的大小变化(即，更像假损伤参照)(图4A-4C)。具体地说、图4显示了在损伤后第2、4或者6周观察到的侧面腓肠肌肉肌纤维面积分布。在损伤后第2周，两个挤压伤小组的分布(中位数＝1501-2000平方微米)明显不同于假损伤组(中位数＝3001-3500平方微米)。在第4周和第6周，假损伤组显示向右移动，直到切片面积超过5000平方微米。媒介物治疗组的中位数持续移向更小面积(2001-2500平方微米)。GGF2疗法显著改善肌纤维大小，在第4周(2501-3000平方微米)和第6周(3001-3500平方微米)。

实施例2:在受伤后GGF2改善坐骨神经的髓鞘再生

对受伤的末梢神经残端进行初步分析表明，在受伤后第2、4、6周挤压伤产生轴突的脱髓鞘作用。另外，在受伤之后轴突间还发生轴索肿胀、沃勒变性、轻度炎症和纤维化。可以注意到，轴索损伤超过横截面神经束的一半。在受伤的远端坐骨神经处，与媒介物治疗的参照相比，GGF2在第4周和第6周改善髓鞘再生。

具体的说，图5显示了在坐骨神经脂质蛋白染色(PLP)中进行髓鞘半定量评估。在第2、4、6周，假损伤动物的坐骨神经横截面处于正常限制范围内。在媒介物和GGF2治疗组中则存在各种各样的严重程度不同的病变；然而，与媒介物治疗的动物相比，GGF2定性减少脱髓鞘程度。

实施例3:海绵状神经损伤的鼠模型

海绵状神经损伤的老鼠模型通常使用以下方法。用异氟醚麻醉老鼠。将动物放置在加热垫上维持体温在37℃。腹部剃光并用防腐剂Clinidin溶液(聚维酮碘)擦洗。从下腹部中线打开腹腔，露出海绵状神经和主要盆腔神经节(MPG)。通过用止血钳挤压海绵状神经两侧2分钟来造成海绵状神经损伤。在涉及神经调节蛋白的研究中，在受伤之前，两个神经调节蛋白组已经进行过48小时的治疗。

大鼠挤压模型能提供简单的、可复制的且非常可靠的勃起功能减少。这一技术被广泛应用并且已经有许多使用该技术的研究被报道。在挤压伤之后不需要检测勃起功能，其勃起功能的减少是可预计的，并且通常在挤压伤后大约5周进行功能性检测。

在损伤海绵状神经之后，通过2-3次间断缝合法将腹腔的腹部肌肉和筋膜层双层闭合(使用可吸收缝合线)。使用无芯(PDS或者涂布的Vicryl)缝线材料进行皮下(包埋的)连续缝合闭合皮肤。抢先给药丁丙诺菲阵痛剂(手术结束前10分钟)并且在手术后每6-12小时给药一次进行48小时，控制疼痛。

手术后大约5周，用氯胺酮(100毫克/千克，IP)和甲苯噻嗪(5毫克/千克)麻醉大鼠。从同一切口处暴露海绵体下部，然后用23G针插入左下部并连接专门设计来测定海绵体内压力的软件，从而进行功能性研究。在测量之前，用1.5毫安的电极刺激海绵状神经。测量时间大约为15分钟。在麻醉恢复前，心包内注射euthanyl致死大鼠，收集组织(海绵状神经、MPG、阴茎、前列腺)进行光显微镜检查和分子和组织学评价。

如图6所显示的海绵体内压力(ICP)数据所示，受伤后五周对海绵状神经进行电刺激显示，两个神经调节蛋白治疗组的神经保存和末端器官功能有显著提高，并且当神经调节蛋白剂量更高时，这一提高更为显著。首先用非重复测量ANOVA分析和Bonferroni t检验分析数据，在p<0.05下考虑显著性。所有的结果都表示为平均值±SEM。如图7所示，当与主动脉压均一化时，改变也被显著改善了。

从组织学角度看，根据MPG中的氟金逆行运输的标记数据显示NRG治疗增加了完整的神经纤维数量，并且改善了神经元一氧化氮聚合酶和VaChT在阴茎神经和平滑及组织中的保存量。这说明这里存在行为的神经保护机制和/或神经再生性机制。同时，与没有受到神经调节蛋白治疗的挤压伤动物相比，还减少了平滑肌凋亡。

实施例4:氟金组织学方法

为了进行该方法，肋内注射4％的氟金，并且在一周后收集主要盆腔神经节(MPG)并固定在4％的多聚甲醛、0.1M磷酸盐缓冲液中，固定整夜，然后放入20％的蔗糖。低温切片成厚度为20pm的薄片。使用超位数显微镜和成像系统照相，随后进行闪矿类研究，对氟金增加的细胞计数。此后，随机选择MPG样品载玻片(每个动物选择10个)进行细胞计数确定完整神经的数目。(参见，例如，Dail,W.G.,Trujillo,D.,de la Rosa,D.and Walton,G.:Autonomic innervation of reproductive organs:analysis of the neurons whose axons project in the main penile nerve in the pelvic plexus of the rat.Anat Rec,224:94,1989；Laurikainen A,Hiltunen J 0,Vanhatalo S,Klinge E,Saarma M:Glial cell line-derived neurotrophic factor is expressed in penis of adult rat and retrogradely transported in penile parasympathetic and sensory nerves.(Cell Tissue Res 2000,302:321-9.)因此，使用氟金存在一种逆行性示踪方案。该方法结果提供的信息显示神经调节蛋白治疗方法协助这些海绵状神经再生并重新映射其目标(阴茎的海绵主体)和/或协助海绵状神经的神经保护作用。

因此，氟金被注入目标器官，在此情况下目标器官是阴茎的主体。此后，从末端器官神经末梢吸收。该吸收显示神经纤维被保存和/或重新生长进入被注射的面积。一旦氟金被吸收，氟金以一种逆行方式在神经轴突中运输并且标记物聚集在MPG的初级神经(主要盆腔神经节)中。

图8显示了代表性的显示了每个治疗组((组A)正常、(组B)挤压伤、(组C)挤压伤+GGF2)三个动物中主要盆腔神经节(MPG)的氟金标记。正常动物(组A)显示了在不存在神经损伤的情况下的退行性标记物量。挤压伤动物(组B)显示了由于氟金标记不能被传递回MPG，受伤后完整神经纤维的急剧减少。挤压伤+GGF2动物(组C)：显示了增加量的氟-金标记的MPG细胞，说明在受伤后使用GGF2治疗能够保留更多的神经纤维。

图9提供了MPG中的氟金标记的量。结果显示，正常动物在MPG中具有大量细胞体标记。在挤压伤之后，被标记的细胞数量急剧减少，这是神经纤维被破坏因此无法逆行运输标记回到MPG的结果。但是，GGF2治疗法能够提高完整的神经纤维数量，完整的神经纤维能够将氟金从阴茎逆行运输会MPG，从而产生大量标记的细胞体。.

实施例5：免疫组织化学

用nNos、VaChT染色主体邻近部分的纵向低温切片。用包含1％Triton-X的三羟甲基氨基甲烷缓冲液洗涤。用5％的正常山羊血清封闭组织，然后在4℃下培养整夜：

nNOs(Sigma公司；1/1000)或者

VaChT(Abcam公司；1/150)或者

TH(Millipore公司；1/5000)。

在冲洗几次之后，在山羊-抗-兔HRP和驴-抗-山羊(1/1000)中培养切片1小时，然后在包含0.2％硫酸铵镍和0.03％过氧化氢的DAB溶液中培养10分钟。在最后一次洗涤之后，使薄片脱水，在Permount(Fisher Scientific公司)的二甲苯和盖玻片中变澄清。

nNos染色：

海绵体本体内的海绵状神经轴突末端释放一氧化氮(NO)，该NO与内皮NO一起造成平滑肌松弛，引发阴茎勃起的血液动力学改变并有效维持胀满。按照目前的理解，损伤之后海绵状神经功能的恢复取决于，至少部分的取决于剩余神经组织的轴突再生和末端神经成功的功能性神经再分布(允许神经NO活化)。在海绵状神经损害后，阴茎动物模型研究中可以观察到明确定义的病理生理变化。这些病理生理变化可以是神经失动症乃至致命的轴突损伤，并且还包括平滑肌的凋亡、内皮凋亡、减少一氧化氮聚合酶(NOS)神经密度、上调节纤维增殖性细胞因子，例如转化生长因子-β(TGF-β)、平滑肌纤维化或者损失、或者病理生理信号传导反应，例如，改变的声音刺猬蛋白。

另外，在延长的恢复阶段，长时间不能勃起、次级神经至海绵状神经失动症被认为能够激发海绵状平滑肌结构进一步破坏，这是由于海绵体不能在柔软和勃起状态正常循环的结果(Bella A J,Lin G,Fandel T M,Hickling D R,Morash C,Lue T F.Nerve growth factor modulation of the cavernous nerve response to injury.J Sex Med 6Suppl 3:347-352,2009)。

海绵状nNOS是一种公认的海绵状神经保存量标记物(参见，例如onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1464-410X.2010.09364.x/full).该方案的结果显示根据实施例3的方法造成的大鼠双边海绵状神经损伤之后的神经保护性和/或神经再生作用。

染色结果强度(代表性的邻近主体薄片、5个随机选择的载玻片观察闪烁，每组5个动物)说明了使用神经调节蛋白治疗的主体中nNOS染色保存量。

图10显示了代表性的nNos染色水平。染色强度显示存在nNOS。该工作的结果包括正常组织染色(组A)。比较而言，在海绵体神经受到挤压伤之后nNos染色显著损失(组B)。在挤压伤后使用GGF2治疗(组C)可以观察到阴茎本体的海绵体神经末端保留的nNOS染色，说明海绵状神经的存活率和/或再生的比例增加。染色强度说明了使用GGF2治疗的nNOS染色保存量。

囊状乙酰胆碱转运体(VaChT)染色：

支配阴茎的盆腔神经节神经元能够表达nNOS和胆碱能标记物，而通过交感神经干，阴茎交感神经去甲肾上腺素激活的神经分布大量上升并且不通过阴茎神经或者盆腔神经节。该方法结果提供的信息显示，根据囊状乙酰胆碱转运体(VaChT)的肋内染色，神经调节蛋白治疗方法协助这些海绵状神经再生并重新映射其目标(阴茎的海绵主体)和/或协助海绵状神经的神经保护作用。虽然手术后ED的初级病因是神经原的，但对啮齿动物的研究表明在阴茎神经损伤之后还发生形态学和功能变化(参见，例如，Keast J R.Plasticity of pelvic autonomic ganglia and urogenital innervation.Int Rev Cytol 2006；248:141-208；Andersson K E,Hedlund P,Alm P.Sympathetic pathways and adrenergic innervation of the penis.Int J Impot Res 2000；12:55-12；Mulhall J M,Bella A J,Briganti A,McCullough A,Brock G.Erectile Function Rehabilitation in the Radical Prostatectomy Patient.J Sex Med 7(4),1687-1698,2010)。

染色结果强度(代表性的邻近主体薄片、5个随机选择的载玻片观察闪烁，每组5个动物)说明了使用GGF2治疗的大鼠中VaChT染色保存量。

图12显示了代表性的囊状乙酰胆碱转运体(VaChT)免疫组织化学染色水平。染色强度显示存在VaChT.该工作的结果包括正常组织染色(组A)和在海绵体神经受到挤压伤之后VaChT染色显著损失(组B)。相反，组C中可以观察到阴茎本体的海绵体神经末端保留的VaChT染色，说明在挤压伤后使用GGF2治疗能够增加海绵状神经的存活率和/或再生的比例(组C)。染色强度说明了使用GGF2治疗的VaChT染色保存量。

TH染色：

TH是一种肾上腺素神经纤维的标记物，用于在阴茎本体保持神经。阴茎邻近部分被纵向低温切片并用一元抗体染色，所述一元抗体是抗儿茶酚胺合成标记物，酪氨酸羟化酶产生的(Impaired Cavernous Reinnervation after Penile Nerve Injury in Rats with Features of the Metabolic Syndrome Matthew R.Nangle,BSc,PhD,Joseph Proietto,MBBS,PhD,and Janet R.Keast,BSc,PhD J Sex Med 2009；6:3032-3044)。

染色强度结果显示TH的存在。实际实现的染色结果强度(代表性的邻近主体薄片、5个随机选择的载玻片观察闪烁，每组5个动物)说明了使用GGF2治疗的主体中TH染色保存量。图11提供了代表性的酪氨酸氢化酶(TH)水平染色。该工作的结果包括正常组织染色(组A)，以及在海绵体神经受到挤压伤之后TH染色显著损失(组B)。组C显示在挤压伤后使用GGF2治疗(组C)可以观察到阴茎本体的海绵体神经末端保留的TH染色，相当于阴茎神经分布的保存量普遍增加。染色强度显示使用GGF2治疗后TH染色的保存量具有增加的趋势。

实施例6：GGF2在海绵状神经损伤导致的勃起功能障碍大鼠模型中起到神经保护作用

勃起功能障碍(ED)是一种根治性前列腺切除术之后常见的并发症。普遍成人这是由于阴茎神经病，然而，没有有效的疗法。神经胶质生长因子2(GGF2)是生长因子神经调节蛋白族的成员，据显示能够保护神经元不受损伤，并在大范围神经疾病的动物模型中刺激生长。我们之前的数据说明皮下传递(SC)的GGF2是治疗海绵状神经(CN)损伤的可行的疗法。在该研究中，分析能够恢复勃起功能(EF)的GGF2的有效剂量并检验其在CN残存方面的作用。

经历过双边海绵状神经(CN)挤压伤(BCI)或者假外科(参照)手术的成年雄性大鼠(平均体重大约为325-350克)被分成如下的组(n＝10-12/组，双盲药物疗法)：参照+媒介物(组A)；参照+GGF2(15毫克/千克)(组B)；BCI+媒介物(组E)；BCI+GGF2(5毫克/千克)(组C)；BCI+GGF2(15毫克/千克)(组D)。在手术前24小时皮下给药(sc)GGF2(第一剂量)、手术后24小时皮下给药(sc)GGF2(第二剂量)并每周给药一次知道研究结束，BCI或者假外科手术后5周(第3剂量到第7剂量)。在该疗法结束的时候，通过检测海绵体内压力(ICP)对0.3、1和4伏特CN电刺激的反应来监视勃起功能(EF)。对CN进行电子显微镜分析并定量无髓神经纤维。

图13显示了各个实验组从GGF2或者媒介物第一剂量到最末次剂量所增加的体重。

与参照+媒介物相比，在0.3和1伏特时，BCI+媒介物和BCI+GGF2(15毫克/千克)组中EF显著下降，在BCI+GGF2组(5毫克/千克)中则没有(p>0.05)(图14A和B)。在4伏特时，与BCI+媒介物相比，BCI+GGF2(5和15毫克/千克)组中EF显著增加(p>0.05)，并且与参照+媒介物相同(p>0.05)(图14A和B)。在BCI+GGF2(5毫克/千克)组中，与BCI+媒介物组相比，切除神经但保持髓鞘纤维的雪旺式细胞数目显著降低(p<0.05)，无髓神经纤维直方图显示向右转移，说明每个雪旺式细胞无髓轴突数目的增加(图15)。

CN挤压伤之后，用5毫克/千克的GGF2皮下给药治疗可以有效的保存大鼠中的EF，并增加幸存的无髓神经纤维的数目。这些结果显示GGF2是一种有效的阴茎神经分布的神经保护剂，能够提供前列腺手术后一种新的治疗或者预防ED的治疗方法。

实施例7：作为替换的实施方案

外周神经损伤几乎存在于所有的外科手术中。神经损伤的可能性与外科手术中组织解剖的位置和程度有关。举例来说，由于外周神经损伤，乳房切除术能引起频繁的并发症，包括腋下和手臂麻木(例如损伤肋间臂神经)、翼状肩胛麻木(贝尔氏神经损伤)、背阔肌麻痹(胸背神经损伤)。(See Watt-Boolsen et al.,1988；Aitken and Minton,1983).

因此，在乳房切除术之前、之后或者之前和之后都使用神经调节蛋白，能够限制神经损伤和/或增加外周神经功能的恢复。在手术前24小时用适当剂量的神经调节蛋白治疗计划进行乳房切除术的病人。选择性地，还可以在手术后一段时间知道大约6周或者更长的时间治疗病人来增加神经恢复。在作为替换的实施方案中，只在手术前或者只在手术后治疗。如这里所示，神经调节蛋白用于预防肿瘤切除手术(前列腺切除术、乳房切除术、甲状腺切除术，等等)后的神经损伤。人们注意到神经调节蛋白可以用作肿瘤细胞形成和生长的启动子和抑制子(Atlas et al.,2003；Chua et al.,2009)。神经调节蛋白疗法可以或者不可以与患有某些肿瘤的病人有禁忌。只有足够安全研究证实神经调节蛋白不增加这种肿瘤的生长时，神经调节蛋白才可以用于患有erbB阳性肿瘤的病人。

而且，被治疗的神经损伤来自外科手术，所述外科手术不局限于乳房切除术和前列腺切除术。在任何包括明显解刨和/或切除术的外科手术中通常会存在神经损伤。这些外科手术可能包括但是不局限于上肢手术、手部手术、膝盖手术/置换、臀部手术/置换、肘手术/置换、颈部动脉和静脉解剖手术、甲状腺手术、扁桃体切除术、手部和脚部手术。外周神经损伤常见于骨盆、腹部手术和直肠结肠手术。在口部和脸部手术中还可能发生神经损伤。

在手术中除了通过解剖和切除直接损伤神经之外，神经损伤还由手术期间病人位置的压缩或者伸展、在连接位点处的压缩，或者被单、阻尼器、夹子、带子或者其他可能压到组织的材料处获得。这是手术或者不适当的技术不可避免的结果。无论外周神经损伤的产生或者病因学是什么，据发现，神经调节蛋白均可以预防和/或治疗这种损伤。

在人体内，对使用神经调节蛋白治疗的病人和使用安慰剂参照的病人受到影响的神经区域进行感觉和/或动力评价，所得临床试验数据说明了NRG对于预防或者治疗外周神经损伤的效力。例如，可以通过感觉功能标准神经学方法检验腋下麻木，包括检验异常性疼痛、痛觉过敏、感觉阈值或者敏锐度(二点辨别觉)。在本领域内这些方法是标准方法。手术后，跟踪病人几个月并统计使用神经调节蛋白治疗的病人和使用参照治疗的病人组之间的比较结果。按照这些迹象，在手术之前或者之后进行的NRG疗法被发现能够预防和/或治疗外周神经损伤。

类似于之前所述的实验还可以以相似的方式评价动力强度、关节活动范围和协调性。根据这些实验，可以发现在手术之前和/或之后进行NRG治疗能够预防和/或治疗导致动力强度、关节活动范围或者协调性中一种或者更多种失调的外周神经损伤。

实施例8:外周神经损伤后使用GGF2减少神经性疼痛和/或改善感觉机能

这里描述的研究的整体设计在下面表2中进行了说明。

表2.研究设计

在此研究中使用8-10周大的雄性Spraque Dawley(CD)大鼠。动物根据其体重被随机分配在不同的手术组中，并随后在坐骨神经分叉附近8-10毫米经受坐骨神经挤压伤(图1)或者在左后肢接收假手术。在受伤之后二十四小时，用单一剂量的GGF2(2.6毫克/千克，静脉给药)或者媒介物治疗受到坐骨神经挤压伤的动物，然后每周给药2次，持续整个研究时间。在手术前评价所有治疗组代表动物群的初始勃起行为反应，然后每周两次，直到在受伤后第2周或者第6周致安乐死。使用von Frey丝状体评价同侧(神经损害的)爪的机械灵敏度，其中，将丝状体校准为在指定的力下弯曲，然后使用此丝状体对爪子底部施加一系列等级的触觉刺激。通过记录能够影响爪子突然回缩的力来测量触觉(机械)反应阈值。获得各个组在受伤后第2、4、6周获得的机械阈值的平均值然后进行比较。

在神经损伤或者假手术之前或者手术之后每周两次评价同侧爪子的冷敏感性。为了选择性的冷却，大鼠单个反肢被分别放置在不同的空间中升高的有空地板表面，将丙酮(100微升)用在后爪上。对这种蒸发冷却敏感的主体会表现出快速的抬后爪或者舔后爪的动作。五次连续应用丙酮(每次之间间隔至少10分钟)得到阳性反应的百分比作为冷敏感性的测量值。获得各个组在受伤后第2、4、6周获得的冷敏感性值的平均值然后进行比较。

受到部分坐骨神经损伤的大鼠(例如，坐骨神经挤压)通常会发展出神经性疼痛的症状。这一现象已经在本研究中被例证，即，在挤压病变的大鼠中观察到机械阈值的急剧减少(图16A)。据显示，经历假手术的大鼠的机械阈值维持在15克或者更高，而媒介物治疗的挤压伤大鼠的机械敏感性被认为处于异常疼痛的范围。可以观察到，用GGF2治疗的挤压伤大鼠稍微减轻了机械异常性疼痛的严重程度。在挤压伤后对冷敏感性进行评价时可以观察到相似的方式，其中，与媒介物治疗相比，GGF2-治疗的大鼠对丙酮蒸发冷却显示出减少的反应百分比(图17A)。

受到完全坐骨神经损伤的大鼠(例如，横切)显示出传入神经阻滞症状，例如完全没有机械敏感性和冷敏感性。另外，针对切除神经的极端行为，缺少传入感觉常常伴随有外观上的感觉迟钝，偶尔会发生自残行为(自割或者自吞噬)。在坐骨神经被横切的大鼠中，GGF2疗法与媒介物疗法相比更容易促进机械感觉的再生，不产生异常性疼痛(图16B)。在坐骨神经横切之后，使用GGF2疗法与媒介物疗法相比同样能够增加爪子的冷敏感性(图17B)。最后，在GGF2治疗6周后，只有少数大鼠显示出横切诱导的传入神经阻滞自割(6只鼠中只有1只出现此症状)，与媒介物治疗6周后(6只鼠中有2只出现此症状)相比更少。

其他实施方案

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