用于治疗或预防心力衰竭的神经调节蛋白或其亚序列的治疗性施剂的制作方法
【专利说明】用于治疗或预防心力衰竭的神经调节蛋白或其亚序列的治 疗性施剂
[0001] 本申请是2009年7月17日提交的200980136079. 8号同名发明专利申请的分案 申请。 【技术领域】
[0002] 发明领域涉及治疗心力衰竭。更特别是，本发明针对改善的剂量方案，其维持和/ 或增强施用神经调节蛋白（例如神经胶质生长因子2(GGF2)或其片段）的治疗性益处，而 最小化任何潜在副作用。 【【背景技术】】
[0003]与给有需要的患者施用药疗相关的根本性的挑战是耐受性与功效之间的关系。治 疗指数是可施用于患者的物质的有效的剂量与检测到对患者的不期望的副作用的剂量之 间的范围。一般而言，有效的剂量与副作用起始的剂量之间的差异越大，物质越是良性，及 越可能被患者耐受。
[0004] 心力衰竭（特别是充血性心力衰竭（CHF))是工业化国家中死亡的主导原因之一。 成为充血性心力衰竭的基础的因素包括：高血压，缺血性心脏病，暴露于心脏毒性化合物 (例如蒽环类抗生素），辐射暴露，物理创伤及与增加的心力衰竭风险相关的遗传缺陷。由 此，CHF常由由于高血压，来自慢性缺血，心肌梗塞，病毒疾病，化学毒性，辐射的对心肌的损 伤及其他疾病（例如硬皮病）的对心脏的增加的工作负荷所致。这些病情导致心脏的抽泵 能力的进行性降低。起初，由高血压或收缩性组织的损失所致的增加的工作负荷诱导补偿 性心肌细胞肥大及左心室壁加厚，由此增强收缩性及维持心脏功能。经时，但是，左心室膨 胀，心脏收缩泵功能恶化，心肌细胞经历凋亡性细胞死亡，及心肌功能进行性恶化。
[0005] 神经调节蛋白（NRGs)及NRG受体包括涉及神经，肌肉，上皮，及其他组织中器官 发生及细胞发育的细胞间信号转导的生长因子-受体酪氨酸激酶系统（Lemke，Mol.Cell. Neurosci. 7:247-262, 1996andBurdenetal.,Neuron18:847-855,1997)。NRG家族由编 码含表皮生长因子（EGF)-样，免疫球蛋白（Ig)，及其他可识别结构域的多种配体的4种基 因构成。多种分泌的及附接膜的异构体在此信号转导系统中发挥配体的作用。人中NRG配 体的受体是EGF受体（EGFR)家族的全部成员，及分别包括EGFR(或ErbBl)，ErbB2，ErbB3， 及ErbB4,也被称为HERl~HER4(Meyeretal.,Development124:3575-3586, 1997 ; Orr-UrtregeretaI. ,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:1867-71, 1993；Marchionni etal.，Nature362:312-8，1993;Chenetal.，J.Comp.Neurol. 349:389-400, 1994 ; Corfasetal.,Neuron14:103-115, 1995；Meyeretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:1064-1068, 1994；andPinkas-Kramarskietal. ,Oncogene15:2803-2815, 1997) 〇
[0006] 4种NRG基因，NRG-1，NRG-2,NRG-3,及NRG-4,定位于不同染色体座位 (Pinkas-Kramarskietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:9387-91, 1994；Carraway etal.,Nature387:512-516,1997；Changetal.,Nature387:509-511,1997；and Zhangetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:9562-9567, 1997)，及共同编码NRG蛋白 的种种阵列。NRG-I的基因产物，例如，包括一组大致15种不同的结构上-相关的异 构体（Lemke，Mol.Cell.Neurosci.7:247-262，1996andPelesandYarden，BioEssays 15:815-824, 1993)。首先鉴定的NRG-I的亚型包括Neu分化因子（NDF;Pelesetal.,Cell 69,205-216，1992andWenetal.，Cell69, 559-572, 1992)，神经生长因子（HRG;Holmes etal.，Science256:1205-1210, 1992)，诱导活性的乙酰胆碱受体（ARIA;Fallset al.，Cell72:801-815, 1993)，及神经胶质生长因子GGF1，GGF2,及GGF3(Marchionniet al.Nature362:312-8, 1993)〇
[0007]NRG-2 基因通过同源性克隆（Changetal.,Nature387:509-512, 1997;Carrawayetal. ,Nature387:512-516, 1997;andHigashiyamaetal. ,J. Biochem. 122:675-680, 1997)及通过基因组方法（Busfieldetal.,Mol.Cell. Biol. 17:4007-4014, 1997)鉴定。NRG-2cDNA也已知为神经-及胸腺-来源的ErbB激酶活 化子（NTAK;Genbank登录号No.AB005060)，神经调节蛋白趋异剂（Don-I)，及小脑-来源 的生长因子（CDGF;PCT申请WO97/09425)。实验证据显示，表达ErbB4或ErbB2/ErbB4组 合的细胞可能显示针对NRG-2的特别稳健的应答（?；[111^8-1(四1]^181^6七31.，]\1〇1.〇611. Biol. 18:6090-6101，1998)。NRG-3 基因产物（Zhang等人，supra)也已知结合及活化ErbB4 受体（Hijazietal.，Int.J.Oncol. 13:1061-1067, 1998) 〇
[0008] EGF-样结构域存在于全部形式的NRG的核心，及需要结合及活化ErbB受体。3种 基因中编码的EGF-样结构域的推断的氨基酸序列大致是30~40%相同（比对）。而且，NRG-I及NRG-2中似乎有至少2种亚型的EGF-样结构域，其可赋予不同生物活性及组织-特 异性潜力。
[0009] 对NRG的细胞应答通过表皮生长因子受体家族的NRG受体酪氨酸激酶EGFR， ErbB2,ErbB3,及ErbB4介导。全部NRG的高-亲和力结合主要经或者ErbB3或ErbB4介 导。NRG配体的结合导致与其他ErbB亚基的二聚化及通过对特异性酪氨酸残基的磷酸化反 式激活。在某些实验环境中，ErbB受体的几乎全部组合似乎能响应NRG-I异构体的结合形 成二聚体。但是，看起来ErbB2是可在稳定配体-受体复合物中起重要的作用的优选的二 聚化偶体。ErbB2不结合其自身上的配体，但必需与其他受体亚型之一异源配对。ErbB3确 实具有酪氨酸激酶活性，但是其他受体的磷酸化的靶。NRG-1，ErbB2,及ErbB4的表达已知 必要于小鼠发育期间心室心肌的小梁形成。
[0010] 神经调节蛋白刺激补偿性肥大性生长及抑制经历生理应激的心肌细胞的凋亡。 根据这些观察，神经调节蛋白的施用对于防止，最小化，或翻转由作为基础的因素（例如 高血压，缺血性心脏病，及心脏毒性）所致的充血性心脏病有用。见，例如，美国专利号 (USPN) 6, 635, 249,将其整体并入本文。
[0011] 从一般人群中心力衰竭的高发病率来看，仍有未满足的对阻止或最小化此疾病进 展（例如通过抑制心脏功能损失或通过改良心脏功能）的需求。
[0012] 【发明概述】
[0013] 本发明包括治疗或预防哺乳动物的心力衰竭的方法。方法基于惊人的发现，包括 表皮生长因子-样（EGF-样）结构域的肽的治疗性益处可通过不维持稳定-状态的神经调 节蛋白施用（例如通过用以或超过48,72,96或更多小时的施用间隔给哺乳动物施用治疗 有效量的肽）的剂量方案实现。因此，本方法要求给哺乳动物含EGF-样结构域的肽的间歇 的或不连续的施用（每48~96小时，或甚至更长间隔），其中所述EGF-样结构域由神经调 节蛋白基因编码，及其中肽的施用是以对于治疗或预防哺乳动物的心力衰竭有效的量。不 维持稳定-状态浓度的神经调节蛋白施用的剂量方案与更频繁的剂量方案同样有效，然而 无可产生自更频繁的施用的不便，成本或副作用。本文所用的术语，间歇的或不连续的施用 包括以至少48小时，72小时，96小时，1天，2天，3天，4天，5天，6天，7天，8天，9天，10天， 11天，12天，13天，14天、1周，2周，4周，1个月，2个月，3个月，4个月，或其任何组合或增 量的间隔的施剂方案，只要间隔/方案至少为48小时，72小时，96小时，1天，2天，3天，4 天，5天，6天，7天，8天，9天，10天，11天，12天，13天，14天、1周，2周，4周，1个月，2个月， 3个月，4个月。本文所用的术语间歇的或不连续的施用包括以不小于48小时，72小时，96 小时，1天，2天，3天，4天，5天，6天，7天，8天，9天，10天，11天，12天，13天，14天、1周， 2周，4周，1个月，2个月，3个月，4个月，或其任何组合或增量的间隔的施剂方案，只要间隔 /方案不小于48小时，72小时，96小时，1天，2天，3天，4天，5天