本发明属于医药领域，涉及一种神经病理性疼痛治疗用药物组合物及其用途，具体涉及一种含有银杏内酯B和瑞替加滨的药物组合物及其用途。
背景技术：
神经病理性疼痛是慢性疼痛的两种主要类型之一。产生慢性伤害感受性/炎症性疼痛时，机体组织受到损伤，并通过传导伤害感受性刺激的神经通路形成疼痛信号的慢性传递。而神经病理性疼痛通常没有组织损伤，或是在外周神经损伤后发生，疼痛传导通路功能紊乱，导致疼痛信号的异常慢性传递。某些情况下(如癌症)，可同时具有这两种疼痛类型。
形成神经病理性疼痛时，可以有明显的神经损伤，也可以没有。未累及运动神经纤维的神经损伤通常难以诊断。损伤可能发生在周围或者中枢伤害感受性神经通路的任何水平，但由于分布位置的缘故，周围神经的损伤更为常见。目前神经病理性疼痛的产生机制并未完全明确，但该方面的研究非常活跃。在许多患者中可能有多种机制的参与这种情况下，这种情况与其它一些复杂的慢性疾病非常类似，如哮喘或慢性心衰，因此可能需要针对各种机制的不同药物来治疗。
瑞替加滨是一种新型抗癫痫药物，由葛兰素史克和Valeant公司合作开发，是同时作为钾离子通道的开启者和γ-氨基丁酸(GABA)的增强剂。瑞替加滨的双重作用机制，可以从不同机制上控制癫痫的发作，缓解病情。为神经元钾通道开放剂。神经元钾通道开放剂瑞替加滨(retigabine)治疗顽固性癫痫患者的癫痫部分发作有较好疗效。目前国际市场上抗癫痫药物的发展热点主要集中在高效、低风险和低副作用上。瑞替加滨的出现，是间断发作性癫痫治疗的一项潜在的重大进步，给间断发作性癫痫患者带来了新的希望。
银杏内酯B为在银杏内酯中银杏内酯B(BN52021)的活性生理活性最强，是迄今发现的最强的血小板活化因子拮抗剂，可在临床上用于治疗血栓、急性胰腺炎和心血管疾病，还可用于转移性癌症的治疗，对损伤神经元也有保护作用，同时具有抗氧化，延缓衰老的作用。银杏内酯b注射液成分单一明确，疗效显著，安全性好，市场接受度高，为近年来不可多得的新型中药静脉注射剂型。银杏内酯b注射液功能主治化痰祛瘀，通脉舒络。用于治疗缺血性脑中风的痰瘀阻络证。现有的治疗神经病理性疼痛的药物中，尚无以瑞替加滨和银杏内酯B为活性成分的药物组合物。
技术实现要素：
为了克服现有神经性疼痛治疗药物治疗效果不理想，副作用大的缺陷，本发明提供一种新的神经性疼痛治疗用药物组合物，该药物组合物的优点是组分明确，效果确切，治疗效果显著，毒副作用低。
本发明药物组合物含有药物活性成分银杏内酯B和瑞替加滨，本发明人通过大量药理实验发现该药物组合物在治疗神经性疼痛时表现出显著的治疗作用。本发明实施例7证明银杏内酯B瑞替加滨药物组合物对各种神经病理性疼痛的治疗效果显著优于各单药组对神经病理性疼痛的治疗效果，两种药物对神经病理性疼痛的治疗体现出明显的协同作用。本发明实施例8表明银杏内酯B和瑞替加滨组成复方后，不论与银杏内酯B单药组相比，还是与瑞替加滨单药组相比，其对糖尿病神经病理性疼痛大鼠模型均表现出显著的治疗作用，且该治疗效果随着治疗时间的延长而显著增强。银杏内酯B和瑞替加滨在治疗糖尿病引发的神经病理性疼痛方面表现出显著的协同作用。
本发明中银杏内酯B和瑞替加滨联合应用组成复方后，药物成分明确、性质稳定、相互影响较小，便于药物制剂质量控制的建立，有利于生产制备时质量的控制，非常适合工业化大生产。
本发明所述的药物组合物包含两种药物活性成分：
1)银杏内酯B；
2)瑞替加滨。
如上所述的药物组合物中，银杏内酯B和瑞替加滨的重量比为1：0.01-500，优选地，银杏内酯B和瑞替加滨的重量比为1：0.2-300；进一步优选地，银杏内酯B和瑞替加滨的重量比为1：1.5-24。
本发明药物组合物种还可以含有制剂工艺上可接受的辅料赋形剂制备成合适的用药剂型。本发明的药物组合物剂型优选为口服药物剂型。口服药物剂型可以为片剂、缓控释片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂等。所述片剂含有一种或多种如下辅料：淀粉、糊精、低取代羟丙基纤维素、硬脂酸镁，微晶纤维素，羟丙基纤维素，淀粉浆乳糖、甘露醇、微粉硅胶、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮。所述胶囊剂或颗粒剂含有一种或多种如下辅料：可压性淀粉、乳糖、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素、微粉硅胶。所述缓释剂或控释剂含有一种或多种如下辅料：可压性淀粉、乳糖、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维 素、微粉硅胶、卡波姆，海藻酸钠、海藻酸钙，甲壳素。
按照本发明所提供的药物组合物制备成的药物剂型中，所述制剂中每一制剂单位含有瑞替加滨的有效量为10mg-500mg，含有银杏内酯B的有效量为10mg-250mg。
本发明的另一目的是公开药物组合物在制备治疗神经病理性疼痛药物中的用途。本发明药物组合物对神经病理性疼痛取得了良好的治疗效果，尤其在治疗糖尿病引发的神经病理性疼痛时取得了明显的协同作用，显著优于瑞替加滨和银杏内酯B单独用药时的治疗效果。本发明药物组合物治疗神经病理性疼痛，尤其是糖尿病引发的神经性病理性疼痛时，优选为口服给药。药物组合物中，瑞替加滨的给药剂量为5mg/kg.d-40mg/kg.d，优选为10mg/kg.d-40mg/kg.d；银杏内酯B的给药剂量为1mg/kg.d-3mg/kg.d，优选为1.5mg/kg.d-2.5mg/kg.d。
本药物组合物的优势体现在下列方面：
(1)本发明药物组合物中银杏内酯B和瑞替加滨在治疗神经病理性疼痛尤其是糖尿病引发的神经病理性疼痛时，显著优于各单药治疗组，体现出很强的协同作用。另外，本发明药物组合物在长期用药过程中体现出效果积累效应，因此可以预期长期用药可以显著改善神经病理性疼痛，并可能彻底达到治愈的目的。
(2)在治疗过程中，合并使用作用机制不同的药物可以增强对神经病理性疼痛的治疗效果，使多种危险因素或并存疾病得到最佳控制，有利于保护神经系统结构和功能，进一步减少毒副作用发生率。
(3)由于在组成固定复方时，各单药剂量均有所减少，使药物的副作用降低，而治疗费用却大大减少，因此固定复方给药使得治疗的效益/费用比明显提高，从而使患者的治疗依从性大大提高。
(4)本发明药物组合物尤其对糖尿病引发的神经病理性疼痛有效，有效地缓解该类病人的疼痛，且对糖尿病本身也起到一定和缓解作用，从而使患者的生活质量大大改善。
具体实施方式
现通过如下实施例进一步说明本发明的内容，其中实施例1～6为制剂实施方式，实施例7～8为药效学实施方式，但本发明的应用范围不仅仅限于下列实施例。
实施例1 瑞替加滨银杏内酯B复方片剂的制备
制备工艺：先将瑞替加滨和环糊精放入研钵中研磨混合均匀，依次加入羧甲基淀粉钠、可压性淀粉混合均匀，最后加入银杏内酯B混匀，用5％PVP的无水乙醇溶液作粘合剂制粒，40℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁混匀，压片，即得。
实施例2 瑞替加滨银杏内酯B复方片剂的制备
制备工艺：先将瑞替加滨和环糊精放入研钵中研磨混合均匀，依次加入羧甲基淀粉钠、可压性淀粉混合均匀，最后加入银杏内酯B混匀，用5％PVP的无水乙醇溶液作粘合剂制粒，40℃干燥，整粒，加入硬脂酸镁混匀，压片，即得。
实施例3 瑞替加滨银杏内酯B复方片剂的制备
制备工艺：先将瑞替加滨和β-环糊精放入研钵中研磨混合均匀，依次加入羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、微粉硅胶混合均匀，最后加入银杏内酯B混匀，粉末直接压片，即得。
实施例4 瑞替加滨银杏内酯B胶囊剂的制备
制备工艺：先将瑞替加滨和β-环糊精放入研钵中研磨混合均匀，依次加入微晶纤维素、微粉硅胶混合均匀，最后加入银杏内酯B混匀，装填胶囊壳，即得。
实施例5 瑞替加滨银杏内酯B颗粒剂的制备
制备工艺：先将瑞替加滨与β-环糊精混合均匀，然后加入银杏内酯B、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、十二烷基硫酸钠过16目筛后混合，后再与甜橙香精、阿斯巴甜混合均匀。混合物用5％聚维酮乙醇液制粒，干燥，整粒，分装，即得。
实施例6 瑞替加滨银杏内酯B缓释片剂的制备
制备工艺：称取处方量的瑞替加滨，银杏内酯B，卡波姆，羟丙基纤维素，β-环糊精混合均匀。另取适宜量的8％淀粉浆溶液，加入混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥后完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。
实施例7 瑞替加滨银杏内酯B药物组合物对神经病理性疼痛的治疗作用
1.实验造模及给药
(1)瑞替加滨银杏内酯B药物组合物对大鼠甲醛致痛的影响
50只SD大鼠随机分成5组，每组10只，雌雄各半，造模前1h灌胃给予各组药物(10ml/kg)(如表1所示)，模型组灌胃给纯水。用l00L微量注射器在大鼠左足跖皮下注射2％的甲醛100μL，注射甲醛后，立即观察各组大鼠的行为学变化，每5min记录1次，持续lh，观察者不清楚实验的分组情况(双盲)。实验过程中避免强光，保持环境安静。
将大鼠疼痛分为4级：0级为两后脚掌平放在地面，活动无异常；l级为注射脚掌轻微接触地面，活动时有跛行；2级为注射脚掌抬起，不接触地面；3级为大鼠舔咬或摇动注射脚掌。
痛级(pain intensity scoring，PIS)的计算方法：PIS＝(Tl+2×T2+3×T3)/(5×60)，其中Tl，T2，T3分别是5min内出现l，2，3级的时间。
表1实验大鼠分组及给药剂量
(2)瑞替加滨银杏内酯B药物组合物对大鼠热板致痛的影响
雌性SD大鼠50只，随即分为5组，各组动物按表2灌胃给药(10ml/kg)，模型组灌纯水，每天两次，第三天下午给药后半小时进行测定，实验时控制室温18℃～21℃。将大鼠置于热板仪上(热板温度控制在55℃)，用秒表记录大鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间，作为该鼠的痛阈值。每只大鼠测量3次痛阈值，每只大鼠2次测量时间间隔40min。
表2实验大鼠分组及给药剂量
(3)瑞替加滨银杏内酯B对大鼠热水致痛的影响
50只SD大鼠随机分5组，每组10只，雌雄各半，灌胃给予各组药物(10ml/kg)后1h测定痛阈值(如表2)，模型组灌胃给予纯水。先将leica摊片机温度设定在48℃，测定前预先在所有大鼠的尾巴上用油性笔作一标记，此标记与大鼠尾巴尖部的距离约为5cm，然后将大鼠用鼠袋包上，露出尾巴，并将大鼠的尾巴放入摊片机水内，使得液面与大鼠尾巴上的标记重合，大鼠尾巴与热水接触时立刻用秒表记时，记录大鼠尾巴第一次从热水中缩起的时间，每只大鼠测量3次致痛时间(每只大鼠2次测量时间间隔为10min，否则容易将大鼠烫伤)，取3次致痛时间的均数为该大鼠的痛阈。
(4)瑞替加滨银杏内酯B对冰醋酸致小鼠扭体试验的影响
小鼠腹腔注射醋酸，引起腹腔深部大面积而较持久的疼痛刺激，致使小鼠产生扭体反应，给药后1h，i.p 0.6％醋酸生理盐水溶液0.1ml/10g，记录自注射醋酸致痛后每只小鼠在20min内出现的扭体反应的时间和次数。
表3实验大鼠分组及给药剂量
2统计学分析
所有数据均输入SPSS l1.5进行t检验，各组计量数据均采用士s表示。
3实验结果
3.1瑞替加滨银杏内酯B对大鼠甲醛致痛的影响
实验组大鼠单侧足底注入2％甲醛0.1mL后，注射部逐渐红肿，给药完毕后动物立即出现缩足和舔足等行为，在1h内表现出明显的双相反应，实验结果表明各组药物均不能减轻大鼠第一相评分，复方低剂量组在第二时相第15-20分钟时段、第25-30分钟时段和第40-50分钟时段评分与模型组相比减轻(P＜0.05或P＜0.01)，复方高剂量组20-60分钟评分均低于模型组(P＜0.05或P＜0.01)，瑞替加滨组在第25-35分钟和40-50分钟段评分显著低于模型组(P＜0.01)，银杏内酯B组在第25-30分和40-50分钟时间段评分显著减轻(P＜0.05)。结果表明复方组呈现剂量依赖效应，高剂量组评分低于低剂量组，其中在5-10分钟、30-35分钟和50-60分钟差异具有显著性意义。瑞替加滨组评分高于复方高剂量组，在55-60时间段差异有统计学意义。银杏内酯B组评分也高于复方高剂量组，在第25-40分钟段差异具有统计学意义，而且给药各组评分的峰值出现的时间均比模型组推后。
3.2瑞替加滨银杏内酯B对大鼠热板致痛的影响
实验结果(如表4)表明：复方低剂量组和复方高剂量组在给药后与模型组相比痛阈值明显升高(P＜0.01)，与瑞替加滨单药高量组以及银杏内酯B单药高量组相比痛阈值也有升高(P＜0.05)，表明瑞替加滨和银杏内酯B在升高痛阈值方面存在着明显的协同作用。其中复方组给药后30min，70min和110min后，痛阈值持续升高表明复方组在治疗方面表现出持续得效果积累效应。复方低组在升高痛阈值方面优于瑞替加滨单药高量组和银杏内酯B单药高组，表现出显著的协同作用。
表4瑞替加滨银杏内酯B对大鼠热板致痛作用的影响
与模型组相比*P＜0.05，**P＜0.01；与瑞替加滨组比#P＜0.05，##P＜0.01
与银杏内酯B组相比，&P＜0.05，&&P＜0.01；
3.3瑞替加滨银杏内酯B对大鼠热水致痛的影响
实验结果(如表5)表明：给药后1h测大鼠甩尾时间作为疼痛阈值，复方低剂量组、复方高剂量组、瑞替加滨组甩尾时间与对照组比较均明显缩短(P＜0.01，P＜0.001，P＜0.01)。
表5瑞替加滨银杏内酯B对大鼠热水致痛疼痛阈值的影响
与模型组相比，*P〈0.05，**P〈0.01；
实施例8 瑞替加滨银杏内酯B药物组合物对糖尿病引发神经病理性疼痛的治疗
1.1实验动物及实验用品
健康雄性SD大鼠120只，体重180～220g，SPF级，山东新时代药业新药安评中心提供。室温20～25℃，室内通风良好，氨浓度小于20×10-6mL/m3，相对湿度为40％～70％，照明周期12h，大鼠饲养于不锈钢鼠笼中，每笼4只，自由摄食、饮水。
链脲佐菌素(STZ，sigma公司生产，美国)；ZH LUO/B型鼠尾光热测痛仪、YLS 3E型电子压痛仪均购自安徽淮北正华生物仪器设备有限公司。
1.2造模及筛选
120只大鼠随机留取10只作为正常对照组，其余110只大鼠禁食12h后按75mg·kg-1 一次性腹腔注射STZ溶液(STZ溶液配制：将STZ溶于pH 4.2、0.1m mol/L柠檬酸缓冲液中，溶液现用现配，浓度为3.75％(W/V)即0.5mL/100g)。
血糖测定：造模7d后测尾静脉血糖，血糖≥16m mol/L则为糖尿病大鼠，实验中有47只大鼠成功建成DM模型(模型组)。STZ注射前和注射后第7、21、35、49d检测血糖，血糖低于16m mol/L则弃用。
机械痛阈测定：于STZ注射前(基础状态)、注射后21、35、49d测定机械痛阈。将大鼠置于装有音频放大器的透明有机玻璃固定筒内，鼠尾露筒外，在距尾尖5cm处标记。大鼠适应环境15min，待大鼠梳理和探究活动消失后，将鼠尾标记处置于电子压痛仪压头处，向鼠尾施压(每秒增加10g)，当大鼠出现疼痛反应如嘶鸣、挣扎则停止施压，记录施压数据(g)，连续测定5次，每次间隔10min，取平均值作为机械痛阈值。若压力值超过500g则剔除。
热痛阈测定：测定时间点、准备方法同机械痛阈。ZH LUO/B型鼠尾测痛仪的加热温度设定为49℃，达到设定值后将辐射光源对准距尾尖4cm处，记录从光照开始到鼠尾翘起的时间(s)。若光照时间超过15s鼠尾仍未翘起则剔除，测定5次，每次间隔10min，取均值作为热痛阈值。
造模结果：注射链脲佐菌素的大鼠经血糖测定筛选、机械痛阈和热痛阈筛选后剩余大鼠即为造模成功的糖尿病神经病理性疼痛大鼠，大鼠造模成功96只，造模成功率为87.2％。
1.3动物分组及给药
选取成功造模的糖尿病神经病理性大鼠60只，随机分成六组，每组十只，分别给予下列药物，另增加正常对照组。
正常组：灌胃给予等体积的蒸馏水
模型组：灌胃给予等体积的蒸馏水
瑞替加滨高组：灌胃给予300mg/kg的瑞替加滨
瑞替加滨低组：灌胃给予10mg/kg的瑞替加滨
己酮高组：灌胃给予50mg/kg的银杏内酯B
己酮低组：灌胃给予1mg/kg的银杏内酯B
复方一组：灌胃给予10mg/kg的瑞替加滨和50mg/kg的银杏内酯B的药物组合物
复方二组：灌胃给予10mg/kg的瑞替加滨和1mg/kg银杏内酯B的药物组合物
复方三组：灌胃给予300mg/kg的瑞替加滨和1mg/kg银杏内酯B药物组合物
复方四组：灌胃给予300mg/kg的瑞替加滨和50mg/kg银杏内酯B药物组合物
各给药组药物用适量蒸馏水溶解，灌胃给药，每天给药一次。给药7d、14d、21d后，测 定各给药组大鼠的机械痛阈值和热痛阈值。各给药组测定结果如表所示。
表6复方对糖尿病神经病理性大鼠的治疗作用
与正常组相比，**P〈0.01；与模型组相比，#P〈0.05，##P〈0.01；
与瑞替加滨高组相比，￥P〈0.05，￥￥P〈0.01；与瑞替加滨低组相比，&P〈0.05，&&P〈0.01；
与银杏内酯B高组相比，＠P〈0.05，＠＠P〈0.01；与银杏内酯B低组相比，％P〈0.05，％％P〈0.01；
由上表可以看出，模型组与正常组相比，机械痛阈和热痛阈下降显著(P〈0.01)，表明采用注射链脲佐菌素所得糖尿病神经病理性疼痛大鼠模型理想，符合实验需要。瑞替加滨仅在高剂量组时对糖尿病神经病理性疼痛大鼠机械痛阈和热痛阈有一定的升高作用，且其治疗效果并不随治疗时间延长而增强。银杏内酯B的高剂量组和低剂量组均不引起糖尿病神经病理性疼痛大鼠的机械痛阈和热痛阈的改变。但银杏内酯B与瑞替加滨组成复方时，则对糖尿病引发的神经病理性疼痛表现出显著的治疗作用，且随着用药时间的延长，糖尿病神经病理性疼痛大鼠的机械痛阈和热痛阈逐渐接近正常大鼠组。复方组(复方一、二、三、四组)无论与银杏内酯B单药组相比，还是与瑞替加滨单药组相比在对糖尿病引发的神经病理性疼痛方面均表显著显著的治疗作用，即银杏内酯B和瑞替加滨在治疗糖尿病引 发的神经病理性疼痛方面存在显著的协同作用。