丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂及其应用的制作方法

本发明属于医药技术领域，更具体地说涉及一种丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂、制备方法及其应用。

背景技术：

睡眠问题已成为影响公众身体健康的重大隐患，全球约有27％的人遭受睡眠病症的困扰。国外大多数流行病学调查结果显示，每年大约有33％的人出现过睡眠障碍，有17％的人为严重失眠。国内研究资料显示中国成年人失眠发生率为38.2％，严重失眠病症的发病率为9.38％。

失眠以睡眠时间不足，睡眠深度不够及不能消除疲劳、恢复体力与精力为主要症候特征。其中睡眠时间不足者可表现为入睡困难、夜寐易醒、醒后难以再睡，严重者甚至彻夜不寐。睡眠深度不够者常表现为夜间时醒时寐、寐则不甜或夜寐梦多。由于睡眠时间及深度质量的不够，致使醒后不能消除疲劳，表现为头晕、头痛、神疲乏力、心悸、健忘，甚至心神不宁等。

失眠会妨碍人们正常生活、工作、学习和健康，并能加重或诱发心悸、胸痹、眩晕、头痛、中风病等病症。顽固性的失眠，给病人带来长期的痛苦，甚至形成对安眠药物的依赖，而长期服用安眠药物又可引起医源性疾病。

目前，国内常用的安眠制剂有：

1)安眠药：见效迅速易产生依赖。从药理来看，安眠药是通过抑制中枢神经系统强制睡眠，所以起效快，普遍应用于失眠的治疗。但它并不解决造成失眠的根本原因，而且安眠药的副作用比较明显：一是有成瘾性，易形成长期依赖及耐药性；二是使人智力减退，记忆力下降；并易出现头痛头晕、易激动、烦躁易怒等神经症状，埋下老年痴呆症隐患；三是引起恶梦多、早醒等睡眠异常；四是加重肝、肾代谢负担，造成多脏器损害。

如现有的药物：长半衰期安眠药(氟安定、夸西泮)、中半衰期安眠药(替马西泮、舒乐安定)、短半衰期安眠药(苯二氮卓类药物)、左吡坦、巴比妥类、水合氯醛、抗组胺剂、抗抑郁类药等。

专利：申请号为200680034254.9的专利制备了长效安眠药和速效安眠药的组合物，其中速效安眠药选自GABA－A受体调节剂、苯二氮杂、吩噻嗪、美乐托宁衍生物、美乐托宁受体激动剂；长效安眠药选自GABA－A受体调节剂、苯二氮杂、5HT2A受体拮抗剂和钙离子调节剂，用于治疗睡眠紊乱。

申请号为200810049073.4的专利制备了安眠药物扎来普隆分散片。它是由下述重量百分比的原料组成：扎来普隆4－8％，微晶纤维素60－75％，羧甲淀粉钠3－15％，聚维酮2－5％，阿司帕坦8－15％，微粉硅胶0.5－1％，硬脂酸镁0.3－1％。

2)中成药：系统调理见效较慢。中医讲究辩证施治，根据病因把失眠划分为多种类型，不同类型需要不同药物治疗。中药的好处是讲究从本治起，全身调理，然而中药见效较为缓慢。特别是一些中成药，由于现代人饮食结构的改变，使现代人的体质发生了很大变化，如果没弄清楚自己失眠的具体原因，而盲目服用，则达不到预期的效果。

如专利：申请号为201510317942.7的专利制备了一种以红景天为主的睡眠改善药物。它是由下述重量百分比的原料组成：红景天200—250、秫米200—300、淮小麦200—300、百合200—300、玫瑰花40—60、菊花40—60、黄芪300—500、党参300—500、枸杞子80—150、山药100—150、砂仁3—6、红枣40—60，起舒眠安神的作用。

申请号为201510356145.X的专利制备了一种改善睡眠的中药复方口服液制剂，该制剂含有酸枣仁、人参、丹参、制远志、熟地黄、首乌藤、甘草、大枣、小麦、水溶性珍珠粉、蜂蜜、甜味剂、水。

申请号为201510611451.3的专利制备了一种具有改善睡眠功能的组合物，该组合物的有效成分由以下重量份的药材制备而成：五味子10-90份，人参2-15份，茯苓10-90份，菟丝子10-90份。

3)退黑素：体外补充难治根本。有专家认为，睡眠与大脑分泌的褪黑素有关，补充褪黑素就可促进睡眠。因此褪黑素产品给失眠患者带来了希望。然而多年来的研究事实却再次让人们失望，褪黑素并不是睡眠的决定因素，其促进睡眠的效果十分有限；同时，如果不能恢复大脑褪黑素分泌功能，仅靠从体外补充，会抑制并减退大脑正常的褪黑素分泌功能，加重失眠。

如：申请号为201510590018.6的专利制备了一种改善睡眠的褪黑素保健胶囊，其按主要原料的重量百分数之和为100％计，含有褪黑素0.9-1.0％，乳酸镁0.05-0.15％，乳酸钙0.05-0.15％，柠檬酸锌0.05-0.10％，余量为玉米淀粉。

申请号为CN03114084.X的专利制备了一种复合褪黑素保健食品，同时具有睡眠和胃肠功能调节作用。该组合物由褪黑素、低聚糖类和填充剂组成，制成固体剂型包括片剂、颗粒剂和胶囊剂，以及液体剂型。二种功能因子和填充剂的重量百分比为褪黑素0.01－2.0，低聚糖类10－99.8，填充剂10－90。

申请号为200710066262.8的专利制备了一种褪黑素口腔崩解片，选择褪黑素、崩解剂、泡腾剂、填充剂、矫味剂和润滑剂经粉碎、烘干、混合、压片后制成。该药物无需用水就能在口腔中迅速崩解，尤其适合吞咽困难或特殊环境下的患者，例如，老人、儿童、昏迷的病人等。

申请号为200910018845.2的专利制备了一种褪黑素软胶囊，采用褪黑素、色拉油、水为原料制备而成，它可以用下述方法制得：混合、搅拌，最后灌装制成胶囊剂，其特征是原料组成以重量百分比计为：褪黑素5～8、色拉油35～46、水48～58。

综上所述，目前国内常用的安眠制剂主要以化学药物为主，有较多的不良反应、药物依赖性、耐药性等问题，不利于失眠患者的服用；以中药制剂为辅，但是起效慢，口服顺应性差。因此，提供一种安全、副作用少、患者易接受的安眠制剂是目前急需解决的问题。

授权号为CN 202263172 U的专利制备了一种睡眠贴，它是一种贴于前额和印堂穴的睡眠贴，所含有效成分为安神精油及磁粉。此睡眠贴所含的有效成分对睡眠只能起辅助治疗作用，所以本贴剂对一些严重失眠患者疗效不显著。

申请号为201510762505.6的专利公开了一种促进睡眠和改善便秘的中药足贴，包括以下百分比的原料：水凝胶80％和中草药20％；其中，含中草药包括：木醋粉1％、竹醋粉1％、伸筋草1％、透骨草1％、通草1％、紫草1％、海风藤1％、钩藤1％、红藤1％、夜交藤0.5％、鸡血藤1％、桂枝1％、桑枝1％、秦皮1％、红花1％、合欢花1％、洋金花1％、五味子1％、磁石0.5％、地龙0.5％、延胡索1％和樟脑0.5％。此足贴将药物导入足部三阴经和三阳经，足部受药后通过三阴三阳传入相应脏腑，进而达到加强新陈代谢，促进睡眠的作用，但是此足贴的作用效果并不理想。

为了避免口服药物带来的胃肠道刺激、依赖性及其他不良反应，同时增强治疗失眠的效果，本发明人研制出一种丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂。此透皮贴剂可以持续、稳定地改善失眠患者的睡眠状况；还可以增加患者的依从性，作用效果与进食及胃排空无关，患者更容易接受，使用更安全、更方便。

柔性纳米脂质体是指在脂质体的双分子层中加入柔软剂而使脂质体具有优越的柔性，与普通脂质体比较包封率更高、透皮性能好、稳定性好，易于穿过皮肤与粘膜，能显著促进药物的透皮吸收，优于传统透皮给药制剂如橡胶膏、黑膏药等。

丙泊酚(Propofol)，又称为双丙泊酚、异丙酚、2，6-二异丙基苯酚，分子式：C₁₂H₁₈O，分子量：178.3，其化学结构式见图1。

丙泊酚是一种低分子的苯酚衍生物，是可注射的麻醉剂，可诱导和维持全身麻醉，也可用于镇静催眠，具有起效快、消除迅速、安全性高等优点，近年来广泛用于门诊小手术、胃肠镜查、人工流产等无痛治疗，也可结合神经安定类药物实施睡眠平衡治疗。

本发明将治疗睡眠障碍的有效药物丙泊酚与柔性纳米脂质体相结合，制备成丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂。本发明丙泊酚柔性纳米脂质体的主要成分为丙泊酚、磷脂和柔性剂，其粒径为数十纳米，外观为胶体溶液，具有以下优点：①高度变形性：此柔性脂质体的形变能力比普通脂质体大5个数量级，能穿过直径为其1/5的小孔，而脂质体粒径在穿透前后几乎不变；②高度亲水性：本制剂可受向内的水化压力与自发脱水压力差的驱动，穿透皮肤，用于经皮给药系统；而普通脂质体药物经皮给药后，药物多数在角质层储存，进入真皮的药量极少；③高效渗透性：本制剂具有高度的变形性，在受到足够大的应力时，可发生高效渗透，自如地穿过比其自身小数倍的孔道；④高度稳定性：本制剂在透过角质层及血液时，不仅未发生破裂而且粒径也未改变，因此在透皮和进入体内的过程中可保持完整性，具有高度的稳定性。

综上所述，本发明制备的一种丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂，能促进睡眠、治疗睡眠障碍，具有疗效好、安全性高、顺应性好、制剂稳定性高、便于运输和储存等优点。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种具有促进睡眠作用的丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂。

本发明所述的贴剂由丙泊酚柔性纳米脂质体溶液和基质层组成，含水量10％～90％；

其中，丙泊酚柔性纳米脂质体溶液，由以下组分组成：

其中，基质层由下列组分构成：藻酸钠、西黄芪胶、明胶、桃胶、阿拉伯胶、槐豆胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素及钠盐、羟丙基纤维素、聚乙烯酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、卡波姆、羟丙甲基纤维素、丙烯酸的直链共聚物、丙烯酸纳、聚乙二醇、甘羟铝、甘氨酸钠、聚丙烯酸钠、甘油、卡波姆、聚乙烯酸钠、三乙胺、酒石酸、丙烯酸纳、丙烯酸的直键共聚物ViscomateNP-700、聚维酮K-90、氮酮、有机酸等中的一种或几种；

其中，所述磷脂选自：天然磷脂大豆磷脂、蛋黄卵磷脂；人工合成的磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)和聚乙二醇衍生化磷脂(如：二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000；二软脂酰胆磷脂-聚乙二醇2000等)二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、人工合成鞘磷脂、磷脂酰酰丝氨酸或磷脂酰甘油中的一种或几种。

其中，所述柔性剂选自：聚山梨酯80、胆酸、胆酸钠、脱氧胆酸钠、脂肪酸山梨坦80、聚氧乙烯(2)鲸蜡醇醚、丙二醇或无水乙醇中的一种或多种。

其中，所述透血脑屏吸收促进剂是：冰皮、薄荷脑中的一种或几种。

其中，所述有机溶剂是：氯仿、无水乙醇、异丙醇、DMSO、叔丁醇、甲醇、二氯甲烷、丙酮、乙醚中的一种或几种。

优选的，本发明所述的丙泊酚柔性纳米脂质体溶液，由以下组分组成：

最优选的，本发明所述的丙泊酚柔性纳米脂质体溶液，由以下组分组成：

本发明所述贴剂，所含丙泊酚的含量为0.1-60mg/cm²；丙泊酚柔性纳米脂质体的粒度为0.01～200μm；制剂的含水量为10～90％；基质层的面积为5～100cm²。

本发明所述的贴剂，在丙泊酚柔性纳米脂质体溶液中加入温敏因子，可以制备成丙泊酚柔性纳米脂质体温敏凝胶贴剂(此贴剂常温下为液体，涂抹于皮肤上后，在体温的作用下，变成半固体状态，有利于维持恒定的药物浓度)，直接涂抹使用，也可按照上述方法制备成透皮贴剂使用。

本发明所述的贴剂，所述的温敏因子是：P188、P407、Pluronic F127中的一种或几种。温敏因子在丙泊酚柔性纳米脂质体溶液中所占重量比为0.1～60％。

本发明所述的贴剂，在丙泊酚柔性纳米脂质体溶液中加入局部麻醉药物(如：罗哌卡因、布比卡因、左布比卡因、利比卡因等)，制备丙泊酚/罗哌卡因复方柔性纳米脂质体贴剂，以增强催眠效果。局部麻醉药物在丙泊酚柔性纳米脂质体溶液中所占重量比为0.1～80％。

本发明所述的贴剂，在丙泊酚柔性纳米脂质体溶液中加入具有舒缓安神作用的精油，如：白芷油、五味子油、薰衣草油、玳玳花油、白玉兰油、槐花油、桂花油、香茅油等中的一种或几种，以增强助眠效果。精油在丙泊酚柔性纳米脂质体溶液中所占重量比为0.1～90％。

本发明的另一个目的在于提供丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的制备方法。

本发明所述的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：将处方量的丙泊酚、磷脂、胆固醇和透血脑屏吸收促进剂溶于有机溶剂中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液加热减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将处方量柔性剂加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加至步骤1所得的脂质体薄膜中，在5000～50000r/min条件下高速分散5～30min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至6.0～9.0，再进行过膜挤压或在压力为400～1500Bar条件下均质1～16次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体溶液。

步骤3：将丙泊酚柔性纳米脂质体溶液加入到基质层中，混合均匀，涂布在支撑层材料上；于药物表面覆盖保护膜，即得。

优选的，本发明所述的制备方法见实施例。

本发明所述的贴剂，还可通过搅拌、炼合、涂布、切割、放置交联、包装等制成巴布贴剂。

本发明利用丙泊酚治疗失眠起效快、效果好的特点，将丙泊酚制备成柔性纳米贴剂，在透皮和进入体内的过程中可保持高度完整性，具有高效的透皮吸收能力和高度的稳定性。本发明制备的丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂，避免了口服催眠药物带来的胃肠道刺激、依赖性及其他不良反应，提高了使用安全性、生物利用度及治疗效果。同时，本制剂制备方法简单，适合于工业化大生产。

本发明相对于现有药品，其有益效果还在于以下几个方面，本发明为了避免口服催眠药物带来的胃肠道刺激、依赖性及其他不良反应，同时帮助失眠患者快速进入睡眠状态，本发明人研制出一种丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂。

对比现有的治疗睡眠药物及相关专利，本发明具有以下优点：

1)本贴剂避免了口服药所发生的肝脏首过效应及肠胃灭活，也避免了口服药物带来的胃肠道刺激、依赖性及其他不良反应，提高了使用安全性、生物利用度及治疗效果；

2)本贴剂为柔性纳米脂质体贴剂，具有高效的渗透性，易于维持恒定的血药浓度，平稳释放，增强疗效；

3)本贴剂能延长作用时间，减少用药次数，增加患者用药的顺应性；

4)患者可以自主用药，相对减少患者个体间差异。

5)高度变形性：此柔性脂质体的形变能力比普通脂质体大5个数量级，能穿过直径为其1/5的小孔，而脂质体粒径在穿透前后几乎不变；

6)高度亲水性：本制剂可受向内的水化压力与自发脱水压力差的驱动，穿透皮肤，用于经皮给药系统；而普通脂质体药物经皮给药后，药物多数在角质层储存，进入真皮的药量极少；

7)高效渗透性：本制剂具有高度的变形性，在受到足够大的应力时，可发生高效渗透，自如地穿过比其自身小数倍的孔道；

8)高度稳定性：本制剂在透过角质层及血液时，不仅未发生破裂而且粒径也未改变，因此在透皮和进入体内的过程中可保持完整性，具有高度的稳定性。

附图说明

图1是丙泊酚的化学结构

图2是实施例2.2的粒径及分布图

图3是实施例2.4的粒径及分布图

图4是实施例2.6的粒径及分布图

图5是实施例2.4的Zeta电位检测结果图

图6是丙泊酚柔性纳米脂质体的洗脱曲线

图7是实施例2.2、2.4、2.6的透皮效果考察图

具体实施方式

通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明，但不作为限制。

实施例1、丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的制备实施例

本发明对无丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的制剂配方中各种辅料的用量范围及制备工艺进行了筛选和验证。下面结合实施例对本发明作详细说明，但不仅限于下列实例。

一、丙泊酚柔性纳米脂质体的制备实施例

(1)不同配比磷脂制备的丙泊酚柔性纳米脂质体

例1.1处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、21g二棕榈酰磷脂酰胆碱、7g二棕榈酰磷脂酰甘油和5g胆固醇溶于无水乙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加至步骤1所得的脂质体薄膜中，在10000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体溶液。

例1.2处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、32g蛋黄卵磷脂和5g胆固醇溶于氯仿中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在10000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

例1.3处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、18g大豆卵磷脂、6g二肉豆蔻酰磷脂酰甘油和5g胆固醇溶于无水乙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在10000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体溶液。

(2)不同配比柔性剂制备的丙泊酚柔性纳米脂质体

例1.4处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、25g蛋黄卵磷脂、8g胆固醇溶于异丙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g聚山梨酯80加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在8000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

例1.5处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、20g二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、5g二肉豆蔻酰磷脂酰甘油和5g胆固醇溶于氯仿中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将10g脱氧胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在12000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

例1.6处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、18g氢化大豆卵磷脂和8g胆固醇溶于无水乙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将18g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在10000r/min条件下高速分散8min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质5次，得到均匀的丙泊酚柔性脂质体。

(3)不同配比透血脑屏吸收促进剂制备的丙泊酚柔性纳米脂质体

例1.7处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、30g二棕榈酰磷脂酰胆碱、8g二棕榈酰磷脂酰甘油、10g胆固醇和2g冰片溶于异丙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将23g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在8000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

例1.8处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、20g二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、5g二肉豆蔻酰磷脂酰甘油和5g胆固醇溶于氯仿中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g脱氧胆酸钠和10g聚山梨酯80加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在12000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

例1.9处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、18g大豆卵磷脂、8g胆固醇和5g薄荷脑溶于无水乙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将15g脱氧胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在10000r/min条件下高速分散8min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质5次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

实施例2、丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的制备实施例

(1)丙泊酚柔性纳米脂质体温敏凝胶贴剂

例2.1处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、21g二棕榈酰磷脂酰胆碱、7g二棕榈酰磷脂酰甘油和5g胆固醇溶于无水乙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加至步骤1所得的脂质体薄膜中，在10000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体溶液。

步骤3：将步骤2所得的丙泊酚柔性纳米脂质体溶液中加入3.6g P407和36g P188，溶解完全，即得丙泊酚柔性纳米脂质体温敏凝胶。

此贴剂常温下为液体，涂抹于皮肤上后，在体温的作用下，变成半固体状态，有利于维持恒定的药物浓度。

(2)丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂

例2.2处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、25g蛋黄卵磷脂、8g胆固醇溶于异丙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g聚山梨酯80加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在8000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

步骤3：取辅料卡波姆1.5g、加水适量溶胀、聚乙烯酸钠2.5g、甲基纤维素1g、阿拉伯胶2g、甘油8g、三乙胺0.2g、酒石酸0.1g、加水至38.3g(含水量为60％)，在室温下，搅拌均匀后，加丙泊酚柔性纳米脂质体100mL，继续搅拌混合均匀。将混合物涂布在400cm²纸衬膜上，覆膜、固化成型、分割，得贴剂。

例2.3处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、0.2g罗哌卡因、20g氢化大豆卵磷脂、10g胆固醇溶于异丙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在8000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

步骤3：取辅料丙烯酸纳和丙烯酸的直键共聚物ViscomateNP-700 2g、甘油10g、聚维酮K-90 1.0g、氢氧化铝0.2g、加水适量溶胀，氮酮0.3g、酒石酸0.15g加水至34.6g(含水量为60％)，在室温下，搅拌均匀后，加丙泊酚柔性纳米脂质体100mL，继续搅拌混合均匀。将混合物涂布在400cm²纸衬膜上，覆膜、固化成型、分割，得贴剂。

例2.4处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、0.5g白芷油、30g蛋黄卵磷脂、8g胆固醇溶于异丙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将20g聚山梨酯80加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在8000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

步骤3：取辅料聚乙烯醇0.5g、聚丙烯酸钠2.5g、藻酸钠0.5g、西黄芪胶0.5g、羧甲基纤维素1.5g加水适量溶胀，加甘油10g，在室温下，搅拌均匀后，加丙泊酚柔性纳米脂质体80mL，继续搅拌混合均匀。将混合物涂布在400cm²纸衬膜上，覆膜、固化成型、分割，得贴剂。

(3)丙泊酚柔性纳米脂质体巴布贴

例2.5处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、30g二棕榈酰磷脂酰胆碱、8g二棕榈酰磷脂酰甘油、10g胆固醇和2g冰片溶于异丙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：将23g胆酸钠加入水中充分溶解，溶解完全后，在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在8000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚柔性纳米脂质体。

步骤3：将12.5g部分中和聚丙烯酸钠和5g的甘油混合均匀，得到溶液1；将8g卡波姆、5g明胶、10g桃胶以及0.2gEDTA-2Na分散于剩余甘油中，并加30g水溶胀，搅拌均匀，得到溶液II；将0.2g氢氧化钠用剩余的水溶解，搅拌均匀，得到溶液III；混合溶液II和溶液III，加热至40℃，搅拌均匀，再加入溶液I，并搅拌均匀，得到巴布剂基质。

步骤4：将80g丙泊酚柔性纳米脂质体加入到巴布剂基质中，加20g水，调节温度至50℃，充分混合均匀后，涂布、覆盖防粘层、切片，即可。

(3)丙泊酚普通脂质体巴布贴

例2.6处方：

制备方法：

步骤1：将1g丙泊酚、30g二棕榈酰磷脂酰胆碱、8g二棕榈酰磷脂酰甘油和10g胆固醇溶于异丙醇中，搅拌使其溶解，然后将形成的溶液60℃水浴减压去除有机溶剂，制备成含有丙泊酚的均匀脂质体薄膜；

步骤2：在氮气保护下缓慢滴加注射用水至步骤1所得的脂质体薄膜中，在8000r/min条件下高速分散5min，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，然后用0.1mol/L NaOH或HCL调节pH至7.0，再进行过膜挤压或在压力为800Bar条件下均质6次，得到均匀的丙泊酚脂质体。

步骤3：将12.5g部分中和聚丙烯酸钠和5g的甘油混合均匀，得到溶液1；将8g卡波姆、5g明胶、10g桃胶以及0.2gEDTA-2Na分散于剩余甘油中，并加30g水溶胀，搅拌均匀，得到溶液II；将0.2g氢氧化钠用剩余的水溶解，搅拌均匀，得到溶液III；混合溶液II和溶液III，加热至40℃，搅拌均匀，再加入溶液I，并搅拌均匀，得到巴布剂基质。

步骤4：将80g丙泊酚脂质体加入到巴布剂基质中，加20g水，调节温度至50℃，充分混合均匀后，涂布、覆盖防粘层、切片，即可。

实施例3、丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的质量研究

(1)丙泊酚柔性纳米脂质体的粒径及电位检测

采用动态光闪射粒径/电位仪检测以上3个实施例制备出的丙泊酚柔性纳米脂质体的粒径及电位，结果见表1。

表1丙泊酚柔性纳米脂质体的粒径

*PdI:Polydispersion index多分散指数(用于衡量粒径分布范围)

由表1可知：以上3个处方和制备工艺得到的粒径均符合要求，其粒径分布图分别见图2、3、4。

本发明继续检测了实施例2.4的电位。测试结果见附图5所示，其Zeta电位平均值为-33.5mV，见图5，复合要求。

(2)丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的包封率检测

2.1洗脱曲线的建立

采用葡聚糖凝胶柱层析法分离载药纳米脂质载体，HPLC法测定游离药物的含量。称取葡聚糖凝胶(G50)2.5g，加纯化水水浴加热煮沸溶胀2h，静置溶胀12h。装柱平衡，精密吸取丙泊酚柔性纳米脂质体溶液1mL上样，用纯化水洗脱，流速1.5mL·min^-1，每管1mL，收集洗脱液40管后，改用50％的甲醇洗脱，收集洗脱液40管。洗脱下来的溶液每毫升加无水甲醇2mL，加流动相2mL，涡旋15s，用0.22μm的有机膜过滤后，HPLC法测定，结果在前40mL无游离药物被洗脱出来。洗脱曲线见图6，结果表明，游离药物与包封药物能有效分离。

2.2回收率试验

精密吸取丙泊酚柔性纳米脂质体溶液1mL，按上述方法过柱分离，取全部80mL洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，甲醇清洗旋蒸瓶并定容至10mL，超声5min后，HPLC法检测。另取丙泊酚柔性纳米脂质体溶液1mL，甲醇定容至10mL，超声5min后，同法测定，计算柱回收率。结果丙泊酚平均柱回收率为99.62％(n＝3)。

2.3包封率的测定

取丙泊酚柔性纳米脂质体溶液1mL，加无水甲醇2mL，加流动相2mL，涡旋15s用0.22μm的有机膜过滤，HPLC法检测，计算含量，得到丙泊酚脂质体溶液中药物总量＝C总，按上述方法，用纯化水洗脱，收集洗脱液前40mL，旋转蒸发浓缩至干，甲醇清洗旋蒸瓶并定容至10mL，超声5min后，HPLC法检测，计算含量，得到丙泊酚脂质体包封药物的质量浓度C包。丙泊酚脂质体包封率＝C包/C总×100％。结果：上述实施例2.2、2.4、2.6产品的包封率分别为94.23％，97.65％，95.41％。此结果说明：脂质材料的组合选用对丙泊酚脂质体的包封率具有重要影响。并且，当使用本发明优选的成分以外的成分时，或当成分用量不在本发明限定的范围内时，所得的丙泊酚脂质体的包封率均低于本发明，将无法避免因丙泊酚泄露所引起的刺激现象。

(3)丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的透皮吸收能力考察

3.1试药与动物

试药：丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂(实施例2.2、2.4、2.6)

动物：大鼠皮

3.2方法

分别取大鼠皮(去毛)备用，将按实施例2.2、2.4、2.6制备的贴剂分别贴于已除去毛及脂肪的大鼠皮上，置Franz小池上，加水或pH7.4的磷酸缓冲液为收集液7mL，使收集液接触皮肤，32℃～35℃恒温，分别于2、5、10、15、20、30、60、180、300分钟取样7mL，补同体积收集液，用HPLC法测定药物含量，计算累计皮肤透过率。

3.3结果

结果见图7(横坐标为取样时间，纵坐标为含量(％))。结果表明：丙泊酚柔性脂质体比丙泊酚普通脂质体具有更好的皮肤渗透效果及释放性能；但是，由于丙泊酚起效快、代谢也较快，在维持催眠效果的时间上有所欠缺，在处方中添加白芷油后，白芷油起效慢，作用持久，可与丙泊酚实现增效互补的作用(见图7中曲线——实例2.4)。

(4)丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的药效学考察

本发明利用筛选镇静催眠药物常用的动物模型和方法，包括：①一般行为观察；②自主活动试验；③延长戊巴比妥钠的睡眠时间试验；④戊巴比妥钠阈下剂量试验，首次发现并证明了本发明的丙泊酚及其复方具有明显的中枢抑制作用尤其是镇静、催眠生物活性。

4.1试验动物：昆明种小鼠，雌性体重18.9～22.2g，雄性体重20.2～23.0g。

4.2试验药品：实施例2.4、2.6为自制，阳性对照药艾司唑仑片。

4.3动物分组：试验共用240只动物，其中80只动物分性别区段随机分为8组，即：对照组，实施例2.4、2.6各低、中、高剂量组(均为0.5、1和2mg/kg)及阳性药艾司唑仑(1.5mg/kg)组，每组10只，均雌雄各半，用于行为观察、自主活动测试。另外160只动物分别区段随机分为8组(分组同前)，每组20只，均雌雄各半。其中每组10只用于戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验，每组另10只用于戊巴比妥钠阈剂量催眠试验。

4.4试验仪器及试剂：ZIL-2小鼠自主活动仪，戊巴比妥钠

4.5试验方法

4.5.1一般行为观察小鼠单次灌胃给药或贴剂给药，于药后60min内直接观察给药后动物一般行为表现、姿势、步态、流涏、肌颤、安静、嗜睡及睡眠等变化。

4.5.2对正常小鼠自主活动的影响观察：一般行为表现后，于药后1h、2h及24h分别放入ZIL-2小鼠自动活动仪，测试10min内各组小鼠自主活动数，比较组间结果。

4.5.3对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响：小鼠单次灌胃给药或贴剂给药，每一轮次给予每组2只动物，两轮给药间隔时间40min(±5min)，按给药轮次将每轮动物均于药后60min(±5min)，分别腹腔注射0.3％戊巴比妥钠25mg/Kg，观察30Min内动物睡眠情况(以翻正反射消失大于1Min为睡眠判断标准)，动物出现翻正反射消失后，记录出现动物数，计算睡眠百分率。

4.5.4对小鼠戊巴比妥钠阈剂量催眠作用的影响：小鼠单次灌胃给药或贴剂给药，每一轮次给予每组2只动物，两轮给药间隔时间40min(±5min)，按给药轮次将每轮动物均于药后60min(±5min)，分别腹腔注射0.3％戊巴比妥钠50mg/Kg，以翻正反射消失大于1Min为睡眠判断标准，记录动物的入睡时间(睡眠潜伏期)及睡眠持续时间。

4.5.5数据统计处理方法自主活动数采用leneve Test进行方差齐性检验。如果方差齐(P＞0.05)，用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析，如果ANOVA有统计学意义(P≦0.05)，进行Dunnett’s test多重比较分析。小鼠入睡动物数应用单因素方差分析，入睡动物发生率应用X²检验。睡眠潜伏期和睡眠持续时间以min记录，按组统计平均数和标准差表示，用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析。

4.6试验结果

4.6.1对小鼠一般行为的影响

对照组动物行为活动自如，未见异常姿势、步态，无流涏、肌颤等现象发生；实施例2.4、2.6低剂量组动物于药后30min开始出现不同程度的活动减少，未见嗜睡症状，中剂量组动物于药后约20min开始出现安静、活动减少，药后25～30min大部分动物出现嗜睡症状，未进入睡眠，高剂量组动物于药后约20Min开始出现安静、活动减少，药后25～30min大部分动物出现嗜睡症状，部分动物进入睡眠状态。

4.6.2对小鼠自主活动的影响与对照组比较，实施例2.4、2.6各给药组动物药后1h及2h的自主活动数均明显减少(P＜0.05～P＜0.001)，并且呈剂量相关性，各给药组动物药后24h的自主活动数均无明显差异(P＞0/05)，见表2。

表2黄酮对小鼠自主活动的影响(X±S,n＝10)

与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

4.6.3对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响

与对照组比较，实施例2.4、2.6给药组均不同程度的增加小鼠睡眠发生率(P＜0.05～P＜0.001)，提示能协同阈下剂量戊巴比妥钠的催眠作用，见表3。

表3黄酮对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠的影响(X±S,n＝10)

与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

4.6.4对小鼠戊巴比妥钠阈剂量催眠作用的影响

与对照组比较，实施例2.4、2.6给药组均不同程度的缩短小鼠入睡时间(睡眠潜伏期)，实施例2.4可延长睡眠持续时间(P＜0.05～P＜0.001)，提示能协同阈剂量戊巴比妥钠的催眠作用，见表4。

表4黄酮对小鼠戊巴比妥钠阈剂量催眠的影响(X±S,n＝10)

与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001

4.7结论

实施例2.4、2.6贴剂给予小鼠，在1和2mg/kg剂量范围内对小鼠中枢神经系统均具有明显的抑制作用，而且具有显著的镇静催眠作用，且呈剂量相关性。上述结果提示：丙泊酚可单独用于制备治疗焦虑症、癫痫症、惊厥症、躁狂症药物尤其是镇静催眠药物，也可以与其它中药、天然药物或化学药组成复方药物用于治疗焦虑症、癫痫症、惊厥症、躁狂症尤其是失眠症。

(5)丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂的稳定性检测

通过影响因素试验和加速试验(40±2℃，RH75％；6个月，铝塑袋包装)定时取样、测定。考察该制剂稳定性、外观、有关物质、含量等指标的变化，结果见表5。

表5丙泊酚纳米脂质体贴剂的加速试验(高温40℃、相对湿度75％±5％)

结论：经影响因素、加速6月和长期试验后，本发明制得的产品质量符合标准要求，而且各项质量指标无明显变化，均符合质量标准，说明了本发明的产品质量稳定性很好。

综合上述结果，使用本发明制备的丙泊酚柔性纳米脂质体贴剂可避免口服药所发生的肝脏首过效应及肠胃灭活，也避免了口服药物带来的胃肠道刺激、依赖性及其他不良反应，提高了使用安全性、生物利用度及治疗效果；同时，具有高效的渗透性，易于维持恒定的血药浓度，平稳释放，增强疗效；除此之外，本制备方法简单，适合于工业化大生产。

由于受到篇幅限制，上述实验中本发明仅例举部分实验，然而实际上，本发明的其他实施例和技术方案也能达到相同或者相近的有益效果。