本发明涉及一种透明质酸钠的复方溶液及其纠正皮肤皱纹的应用，它是以透明质酸钠、L-肌肽、氨基酸和水溶性维生素为主要成分的复方溶液。该产品能给皮肤补充胞外基质，促进皮肤胶原蛋白的合成，起到纠正皱纹的作用。
背景技术：
：随着年龄衰老和光老化的影响，真皮中的透明质酸、硫酸软骨素、胶原等渐渐流失，皮肤失去弹性。在这个过程中，颈部衰老尤为严重，会产生一些水平方向上的皱纹。其原因在于：颈部皮肤的厚度只有脸部的2/3，是皮脂腺和汗腺最少的地方，而且胶原蛋白含量少，皮下脂肪层薄。皮肤的胞外基质中含有多种高分子多糖，如透明质酸、硫酸软骨素。透明质酸的结构单元为D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的双糖，具有极强的保水性能，存在于包括皮肤在内的大多数软结缔组织中，其中皮肤中含量约为2.5mg/mL。随着人们年龄的增长和环境因素因素的影响，人体合成透明质酸的能力逐渐下降，皮肤中透明质酸的含量会逐渐降低。硫酸软骨素是一种酸性粘多糖，通常以糖蛋白的形式存在于动物体内，其结构单元为N-乙酰氨基半乳糖和葡萄糖醛酸构成的双糖，根据硫酸基团的位置不同硫酸软骨素可分为A、B、C三种。硫酸软骨素是皮肤胞外基质中的一种重要成分，伴随皮肤的衰老而出现减少现象。透明质酸用于纠正皱纹的已有较长的历史，利用的主要是其交联形式，是鼻唇沟和额部皱纹填充的常见材料。颈部皮肤表皮较薄，注射交联透明酸钠后摁压按摩难度较大，容易形成凹凸不平的状况；另外，皮下即是颈阔肌，若不慎注射层次不当在肌肉层，也极易形成条索感。上述情况的出现都会严重影响美观，丧失治疗效果，因此交联透明质酸钠不适用于颈纹纠正。非交联透明质酸钠并不具有交联透质酸钠的上述副作用，但是非交联透明质酸钠在自由基和透明质酸酶作用下，在皮肤中的半衰期短，容易被降解。中国专利CN104189952A中的纠正皮肤褶皱注射液中所含L-肌肽具有抗氧化作用，能有效地抑制自由基对透明质酸钠的降解。另外通过加入氨基酸维生素等有助促进成纤维细胞的胶原分泌，补充皮肤衰老过程中丢失的胶原蛋白。技术实现要素：本发明的目的是提供一种透明质酸钠的复方溶液及其纠正皮肤皱纹的应用。该复方溶液主要是以高分子多糖透明质酸钠、氨基酸、水溶性维生素和L-肌肽为原料组合而成。本发明提供的复方溶液具有相较纯透明质酸钠溶液降解时间更长和纠正颈纹持久性更好的特点;特别地,本发明提供的复方溶液不会造成颈纹的结节的现象。本发明提供的透明质酸钠的复方溶液包括：透明质酸钠1.000~5.000mg/mLL-肌肽L1.000~2.000mg/mL氨基酸0.100~0.500mg/mL水溶性维生素B20.001-0.005mg/mLpH值7-7.2。上述复方溶液配制方法是按配方计量配制水溶液,混合均匀；配制时待各组分完全溶解后，然后调节pH值，再经0.2μm滤器过滤除菌即可。本发明提供的透明质酸钠的复方溶液应用纠正皮肤皱纹，包括皮肤皱缩、松弛等，特别是用于颈部、面部和手部等部位皱纹的纠正。本发明提供的透明质酸钠的复方溶液的使用方法：用于颈部纠正皮肤皱纹注射时，应绷紧颈纹处皮肤，选取多点，沿颈纹方向进针到真皮层，边退针边注射，少量推剂形成皮丘。本发明提供的透明质酸钠的复方溶液用于颈纹纠正效果的评价标准包括主要疗效指标和次要疗效指标。主要疗效指标：采用皱纹严重程度分级（WAS）评价注射治疗前与治疗后12周皱纹的评分变化有效率来反映治疗的效果。改善率计算方法：以基线WAS评分减去治疗后第12周WAS评分，如差值大于等于1则为有效，有效例数除以总例数得到改善率。次要疗效指标：治疗第1周及第4周研究者评估的WAS的评分变化值及改善率；治疗第1周、第4周及第12周受试者评估的WAS评分变化值及改善率；治疗第1周、第4周及第12周研究者评估的GAIS评分；治疗第1周、第4周及第12周受试者评估的GAIS评分；治疗第12周第三方评估的WAS评分变化值及改善率。本发明提供的透明质酸钠的复方溶液用于皱纹的纠正。其中，高分子多糖能发挥填充作用，起到纠正颈纹的作用；具有抗氧化作用的L-肌肽能抑制自由基对透明质酸钠的降解，增加其降解时间；氨基酸和维生素组分有助促进自身胶原蛋白的合成，恢复皮肤衰老过程中丢失的胶原蛋白。本发明具有相较纯透明质酸钠溶液降解时间更长和纠正颈纹持久性更好的特点;特别地,本发明提供的复方溶液不会造成颈纹的结节的现象。经临床试验，表明其可用于纠正皱纹，且安全性高、无明显并发症。附图说明图1注射复方溶液前后效果图。图2注射纯透明质酸钠溶液前后效果图。具体实施方式实施例1：复方溶液相较于纯透明质酸钠溶液能够有效地对抗自由基的降解。样品配制复方溶液：配制5.000mg/mL透明质酸钠、2.000mg/mL的L-肌肽，0.100mg/mL甘氨酸，0.200mg/mL脯氨酸、0.100mg/mL丙氨酸和0.005mg/mL维生素B2溶液；配制时待各组分完全溶解后，调节pH值至7.2。纯透明质酸钠溶液：配制5.000mg/mL透明质酸钠；配制时待其完全溶解后，调节pH值至7.2。实验材料：五水硫酸铜，30%双氧水，透明质酸钠，L-肌肽，甘氨酸，丙氨酸，脯氨酸，维生素B2，1M盐酸，牛血清，醋酸钾，冰醋酸，氯化钠，纯化水。实验方法：取1.0mL透明质酸钠溶液、1.0mL透明质酸钠溶液和1.0mL复方溶液，编号为A、B和C三组；向A组加入0.2mL纯化水，向B组和C组加入0.1mL的100mM的硫酸铜和0.1的100mM的双氧水。将A、B和C三组置于37℃水浴锅反应1h，分别取样稀释20倍待测。测量方法：醋酸-醋酸钾缓冲液配制：取醋酸钾14g，冰醋酸20.5mL，再加水稀释至1000mL。血清溶液：取新鲜牛血清1份，加醋酸-醋酸钾缓冲液9份稀释，再以4mol/L盐酸溶液调节pH值至3.1，放置18〜24小时后，用醋酸-醋酸钾溶液稀释3倍。取前述待测液加入4mL血清溶液，同时取1mL纯化水加入4mL作为空白对照，摇匀，在室温放置30分钟，摇匀，在640mn的波长处测定吸光度，根据吸光度计算各组的降解率。实验结果：表1各组透明质酸钠的降解率（平均值，n=5）A组B组C组100.0%21.2%87.6%实施例2：复方溶液相较于纯透明质酸钠溶液具有更长的降解周期样品配制：复方溶液：配制5.000mg/mL透明质酸钠、2.000mg/mL的L-肌肽，0.100mg/mL甘氨酸，0.200mg/mL脯氨酸、0.100mg/mL丙氨酸和0.005mg/mL维生素B2溶液；配制时待各组分完全溶解后，调节pH值至7.2，经0.2μm滤器过滤除菌后用于动物实验。纯透明质酸钠溶液：配制7.400mg/mL透明质酸钠溶液；配制时待组分溶解后，调节pH值至7.2，经0.2μm滤器过滤除菌后用于动物实验。实验动物：7~8月龄的BALB/c小鼠。实验方法：将48只小鼠随机分为4组，每组12只，分别为注射后7天检测组，注射后30天检测组，注射后90天检测组。小鼠背部脊柱左右两侧褪毛，75%酒精消毒后，左侧注射样品复方溶液，右侧注射样品纯透明质酸溶液。在检测点，处死实验动物，剖开注射部位，观察样品残留情况。实验结果：时间纯透明质酸钠溶液复方溶液7天无残留有残留30天无残留有残留90天无残留无残留实施案例三：复方溶液相较于纯透明质酸钠溶液具有更好的颈纹填充效果为评价复方溶液的有效性，我们在颈纹患者中进行试验，以评价临床功率和安全性。临床方法：注射方法：使用30G×1/2针头，注射时应绷紧颈纹处皮肤，选取多点，将样品沿颈纹方向进针到真皮层，边退针边注射，少量推注形成皮丘。试验方法：注射前、注射后、注射12周时拍摄颈部正位照片。注射后留观半小时，1周、4周和12周访视，其中筛选期及注射后12周时进行实验室检查。试验过程患者分为实验组和对照组，实验组复方溶液，对照组注射纯透明质酸钠溶液。有效性评价标准：主要疗效指标：采用皱纹严重程度分级（WAS）评价注射治疗前与治疗后12周皱纹的评分变化有效率来反映治疗的效果。改善率计算方法：以基线WAS评分减去治疗后第12周WAS评分，如差值大于等于1则为有效，有效例数除以总例数得到改善率。次要疗效指标：治疗第1周及第4周研究者评估的WAS的评分变化值及改善率；治疗第1周、第4周及第12周受试者评估的WAS评分变化值及改善率；治疗第1周、、第4周及第12周研究者评估的GAIS评分；治疗第1周、、第4周及第12周受试者评估的GAIS评分；治疗第12周第三方评估的WAS评分变化值及改善率。颈纹评价标准（WAS）级分程度描述1级分无无可见的皱纹，只见连续的皮肤纹线2级分轻度皱褶浅，但可见，呈轻微的凹痕。3级分中度比较深的皱褶，颈部折纹清晰；在一般情况下折纹可见，但当伸展时折纹消失。4级分严重非常长且深的皱折，折纹显著5级分非常严重极深且长的皱纹，且有垂坠状褶皱全局美容效果级分（GAIS）分级描述1级分改善非常明显2级分改善明显3级分有一定程度改善4级分没有变化5级分比以前更糟安全性观测指标注射前、注射后3个月血常规、血生化是否正常；注射前检查尿妊娠是否为阴性；短期刺激（正常注射都可能出现的能自然消褪的局部反应，评价包括可触肿块、针痕、红肿、红斑、疼痛及并发症）；与器械有因果关系的不良事件。临床研究结果：有效性评价注射操作简单，疼痛小，治疗周期短。研究者评价的试验组各有访视时间点颈部皱纹严重程度评分（WAS）显示，注射后1周、4周和12周WAS等级评分变化较注射前降低一个分级及以上者分别达到97.5%、82.5%和62.5%，疗效确切。研究者评价的对照组各访视时间点颈部皱纹严重评分（WAS），注射后周、4周和12周WAS等级评分变化较注射前降低一个分级及以上者分别达到95.0%、42.5%和25.0%。部分疗效结果见附图1和图2。安全性评价通过临床观察，注射复方透明质酸钠溶液短期局部反应轻微，安全性较高。当前第1页1 2 3