本发明属于中药发酵类药物领域，具体涉及一种提高畜禽免疫力的发酵型中草药制剂及其制备方法。
背景技术：
随着集约化、规模化养殖的发展，养殖动物疾病肆虐，造成严重的经济损失和社会危害。目前，尽管疫苗作为防控传染性疾病手段得到了政府、企业和养殖户的重视，在防控疫病方面做出了不可磨灭的贡献，但是其存在的缺陷也是众所周知的。中兽医学认为畜禽体与自然环境密切相关，“阴平阳秘、精神乃治”，重在平衡阴阳；“正气内存、邪不可干”，重在提高机体的非特异性免疫能力。通过中草药调节动物机体，增强免疫能力，可大大提高养殖动物的素质和整体防疫水平，降低发病率。
中草药微生态制剂是中草药物中加入有益微生物经发酵制成的生物制剂，用于提高畜、禽自身免疫能力的中药加活菌的微生态制剂。通过调整动物体内肠道微生态平衡和激发动物自身的非特异性免疫功能，起到有病治病、没病防病的作用，减少病毒性疾病的发生，避免了抗生素的滥用，以达到提高养殖效益，提高食品安全的目的。目前中草药微生态制剂己被广泛应用养殖领域中。特别近几年来，家禽家畜养殖业中中草药微生态制剂已经在逐步地取代传统的添加剂。尤其现在抗生素的使用越来越受限制，肠道保健越来越重要，中草药微生态制剂的使用必将越来越广泛。
技术实现要素：
为克服现有技术中存在的不足之处，本发明的目的旨在提供一种提高畜禽免疫力的发酵型中草药制剂及其制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种提高畜禽免疫力的发酵型中草药制剂的制备方法，步骤如下：
S1、中草药的加工处理：按重量份，称量配伍太子参20~30份、黄芪20~25份、党参10~15份、板蓝根15~20份、大青叶10~15份、金银花10~15份、陈皮10~15份、山楂15~20份、怀山药10~15份，然后粉碎、过筛；其中，称量配伍是指太子参、黄芪、党参、板蓝根、大青叶、金银花、陈皮、山楂、怀山药九味中草药按照配方量进行称量和称量后混合；粉碎是指混合后的配伍中草药投料至高效粉碎机内进行物料粉碎；过筛是指粉碎后的中草药进行过筛筛分，筛分后的中草药颗粒度达60~100目；
S2、益生菌发酵液的制备：
（a）干酪乳杆菌LCZ-1发酵种子液的制备：将干酪乳杆菌LCZ-1由斜面菌种分别进行一级活化、二级扩大制成发酵种子液；
（b）植物乳杆菌、酵母菌和干酪乳杆菌LCZ-1的共培养发酵：无菌条件下，先以g/L计，将植物乳杆菌、酵母菌的商品菌粉各按0.25~0.5%加入液体培养基一中，再以体积比计，将干酪乳杆菌LCZ-1发酵种子液按5~8%加入液体培养基一中进行共培养发酵，共培养发酵的温度为35~37℃，静置培养24~26h；其中，液体培养基一的组成为：红糖30~50 g、玉米浆20~30 g、低聚异麦芽糖0.1~0.3 g、吐温-80 0.05~0. 1 mL和水1000mL，pH值为6.5~6.8；植物乳杆菌的商品菌粉的活菌数≥1010 CFU/g、酵母菌的商品菌粉的活菌数≥109 CFU/g；
（c）枯草芽孢杆菌的培养发酵：无菌条件下，以g/L计，将枯草芽孢杆菌的商品菌粉按0.25~0.5%加入液体培养基二中进行发酵，发酵的温度为35~37℃，匀速搅拌发酵（转速为100~120rpm/min）20~24h；其中，液体培养基二的组成为：红糖30~50 g、玉米浆20~30 g和水1000mL，pH值为6.8~7.3；枯草芽孢杆菌的商品菌粉的活菌数≥1010 CFU/g；
S3、将S1获得的复方中草药粉与S2获得的益生菌发酵液进行拌料并后发酵：
（a）拌料：先向复方中草药粉中，添加辅料混合物，辅料混合物为麦麸、玉米淀粉和茶叶粉，麦麸：玉米淀粉：茶叶粉的质量比值为1：1：0.5 ~ 3：2：1，且辅料混合物投料量按质量比占复方中草药粉的15~20%；最后以L/kg计，按复方中草药粉量和辅料混合物量的总和的30~40%加入益生菌发酵液，搅拌（转速为90~100 rpm/min）混合20~30min；其中，益生菌发酵液为S2（b）所得发酵液和S2（c）所得发酵液的混合液，前后两者体积比例为1：1~3：2；
（b）后发酵：先将拌料结束后的混合物分装至发酵袋中，发酵袋分装采用顶部设置有气体单向阀的透明塑料袋，规格可根据产品要求设计，然后称重和热力封口；将分装结束的发酵袋直接运输至发酵车间内，发酵车间要求30~37℃恒温和避光，发酵15~20d。
具体地，S2（a）的过程为：
①一级活化：无菌条件下，将干酪乳杆菌LCZ-1试管斜面菌种利用3~5mL生理盐水进行冲洗，制成活菌数≥1010 CFU/g的混悬液；将此混悬液全部注入已灭菌且冷却为室温的25~35mL液体MRS培养基中，然后恒温厌氧震荡培养10~12h，培养温度35~37℃，震荡培养转速120~150rpm/min；
②二级扩大：以体积比计，将一级活化发酵液按8~10%的添加量注入已灭菌且冷却为室温的400~600mL液体MRS培养基中，然后恒温厌氧震荡培养12~15h，培养条件同一级活化，最终制成发酵种子液。
较好地，液体培养基一和液体培养基二在接种前进行灭菌，待灭菌后温度达到室温后进行接种，灭菌温度115~121℃，时间15~30min。
较好地，麦麸、玉米淀粉和茶叶粉的颗粒度均为60~80目，所述茶叶粉优选绿茶的茶叶粉。
一种利用上述制备方法制备的提高畜禽免疫力的发酵型中草药制剂。
本发明中，植物乳杆菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌均可通过市购获得；干酪乳杆菌LCZ-1可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得，本申请人已于2015年8月20日将其在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，保藏编号为：CGMCC NO.11256，提交保藏的样品状态：试管斜面菌种；且在申请号201510603648.2的专利中已公开使用。
在本发明中，太子参、黄芪、党参主用于益气固表、匡扶正气、增强免疫力功能；板蓝根、大青叶、金银花主用于清热解毒、凉血利咽；陈皮、山楂、怀山药主用于益脾健胃、增强食欲和消化等功能；各味中草药协同配合，起到增强畜禽免疫力之功效。本发明中发酵益生菌使用了植物乳杆菌、干酪乳杆菌LCZ-1、酵母菌和枯草芽孢杆菌，复方中草药经复合益生菌发酵后，有效成分释放量增加、毒性降低，提高利用率，促进大分子物质降解为可利用的小分子利于机体直接吸收。
有益效果：本发明制备的微生态制剂具有补气益起、巩固根本、清热解毒和增强食欲的功效，可增强养殖动物机体免疫力，提高养殖动物抗病能力。同时复方中草药经复合益生菌发酵后，有效成分释放量增加、毒性降低，提高利用率，促进大分子物质降解为可利用的小分子利于机体直接吸收。本发明制备的微生态制剂还具有无残留和绿色健康的功能，能有效提高畜禽的免疫力，改善畜禽的亚健康状况，从而提高畜禽养殖效益和养殖质量。
具体实施方式
实施例1
一种提高畜禽免疫力的发酵型中草药制剂的制备方法，步骤如下：
S1、中草药的加工处理：按重量份，称量配伍太子参25份、黄芪22份、党参13份、板蓝根18份、大青叶13份、金银花13份、陈皮13份、山楂18份、怀山药13份，然后粉碎、过筛；其中，称量配伍是指太子参、黄芪、党参、板蓝根、大青叶、金银花、陈皮、山楂、怀山药九味中草药按照配方量进行称量和称量后混合；粉碎是指混合后的配伍中草药投料至高效粉碎机内进行物料粉碎；过筛是指粉碎后的中草药进行过筛筛分，筛分后的中草药颗粒度达80目；
S2、益生菌发酵液的制备：
（a）干酪乳杆菌LCZ-1发酵种子液的制备：
①一级活化：无菌条件下，将干酪乳杆菌LCZ-1试管斜面菌种（可直接从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得；如果从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得的不是试管斜面菌种而是干酪乳杆菌LCZ-1，则可在MRS琼脂培养基中，37℃培养2d获得）利用5mL生理盐水进行冲洗，制成活菌数≥1010 CFU/g的混悬液；于无菌厌氧箱中操作，利用注射器将此全部混悬液注入已灭菌且冷却为室温的内装30mL液体MRS培养基的100mL厌氧培养瓶内，然后取出厌氧培养瓶，置于恒温培养箱内，震荡培养10h，培养温度36℃，震荡培养转速130rpm/min；
②二级扩大：于无菌厌氧箱中操作，以体积比计，利用注射器将一级活化发酵液按9%的添加量注入已灭菌且冷却为室温的内装500mL液体MRS培养基的1L厌氧培养瓶内，然后取出厌氧培养瓶，置于恒温培养箱内，震荡培养13h，培养条件同一级活化，最终制成发酵种子液；
（b）植物乳杆菌、酵母菌和干酪乳杆菌LCZ-1的共培养发酵：无菌条件下，先以g/L计，将植物乳杆菌、酵母菌的商品菌粉各按0.4%加入至共培养发酵的发酵罐内，再以体积比计，将干酪乳杆菌LCZ-1发酵种子液按6%加入至共培养发酵的发酵罐内进行共培养发酵，共培养发酵的温度为36℃，静置培养25h；其中，共培养发酵的发酵罐内装有液体培养基一，其组成为：红糖40 g、玉米浆25 g、低聚异麦芽糖0.2 g、吐温-80 0.08 mL和水1000mL，pH值为6.5；液体培养基一在接种前进行灭菌，待灭菌后温度达到室温后进行接种，灭菌温度121℃，时间15min；植物乳杆菌的商品菌粉的活菌数≥1010 CFU/g、酵母菌的商品菌粉的活菌数≥109CFU/g；
（c）枯草芽孢杆菌的培养发酵：无菌条件下，以g/L计，将枯草芽孢杆菌的商品菌粉按0.4%加入液体培养基二中进行发酵，发酵的温度为36℃，匀速搅拌发酵（转速为110rpm/min）22h；其中，共培养发酵的发酵罐内装有液体培养基二，其组成为：红糖40g、玉米浆25 g和水1000mL，pH值为7.0；液体培养基二在接种前进行灭菌，待灭菌后温度达到室温后进行接种，灭菌温度115℃，时间30min；
S3、将S1获得的复方中草药粉与S2获得的益生菌发酵液进行拌料并后发酵：
（a）拌料：先将复方中草药粉投料至微生态制剂拌料设备（为申请人前期已授权的实用新型专利设备，专利号为201620053478.5）内腔中，再添加辅料混合物，辅料混合物为麦麸、玉米淀粉和绿茶茶叶粉，麦麸：玉米淀粉：绿茶茶叶粉的质量比值为3：2：1，且辅料混合物投料量按质量比占复方中草药粉的18%；最后以L/kg计，将益生菌发酵液按复方中草药粉量和辅料混合物量的总和的35%添加至拌料设备内腔中，搅拌（转速为100rpm/min）混合25min；其中，益生菌发酵液为S2（b）所得发酵液和S2（c）所得发酵液的混合液，前后两者体积比例为1：1；
（b）后发酵：先将拌料结束后的混合物分装至发酵袋中，发酵袋分装采用顶部设置有气体单向阀的透明塑料袋，规格可根据产品要求设计，然后称重和热力封口；将分装结束的发酵袋直接运输至发酵车间内，发酵车间要求35℃恒温和避光，发酵18d。
实施例1制成的成品颜色偏灰黄，气味酸香并带有醇香。
动物实验：
福建宁德柘荣县某养鸡场，2015年3月整个养殖场曾大面积感染鸡传染性法氏囊病，随后经药物治疗，大部分鸡只得到有效治疗，但仍有120只鸡表现出亚健康状：采食不佳，精神不太好、睑面和两脚无血色。随机分为两组，每组60只，其中对照组按正常日用饲料饲喂，实验组则给予实施例1微生态制剂，用量1g/鸡（只），拌在正常日用饲料中饲喂。所有试验鸡统一饲喂和卫生管理，让鸡自由采食及饮水，连续治疗观察5d。实验期间中，将所有试验鸡转入“饲养隔离栏”中饲养，所有试验人员和饲养员进行严格的消毒和防护措施(穿戴隔离服，一次性口罩和手套)。实验期间定期观察采食、精神、睑面和两脚血色情况，同时于实验开始前后对每组所有鸡只称重，计算每组平均增重。
疗效标准：
（1）亚健康改善率：采食、精神、睑面和两脚血色情况好转或转为正常状态的鸡只数占该组鸡只总数的百分数；
（2）增重率：（实验结束后每组鸡只的平均体重-实验开始前每组鸡只的平均体重）/实验开始前每组鸡只的平均体重×100%；
实验结果统计如下：
从上表可知：给予本发明的微生态制剂之后，畜禽的亚健康状况得到显著改善，采食增重明显，说明本发明的微生态制剂可显著提高畜禽的的免疫力。