本发明涉及化合物orientin的新用途，尤其涉及orientin在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
背景技术：
心脑血管疾病是当代危害人体健康和生命的最严重病症，是中、老年人的常见病和多发病，在许多国家和地区的发病率和死亡率皆位于重病之首。动脉粥样硬化(atherosclerosis，as)是心脑血管疾病的主要病理基础，迄今为止其病因和发病机理尚未完全阐明，故目前没有简明有效地防治措施和治疗药物。
本发明涉及的化合物orientin是一个2013年发表(ebenezerdemellocruz，etal.,leishmanicidalactivityofcecropiapachystachyaflavonoids:arginaseinhibitionandalteredmitochondrialdnaarrangement.phytochemistry,89(2013)71–77.)的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型(ebenezerdemellocruz，etal.,leishmanicidalactivityofcecropiapachystachyaflavonoids:arginaseinhibitionandalteredmitochondrialdnaarrangement.phytochemistry,89(2013)71–77.)，对于本发明涉及的orientin在制备治疗动脉粥样硬化药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于动脉粥样硬化的抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于动脉粥样硬化的防治显然具有显著的进步。
技术实现要素：
本发明就是针对上述问题提供orientin在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，用orientin制备的抗动脉粥样硬化的药物，具有较好的疗效。
本发明提供的技术方案是：orientin在制备抗动脉粥样硬化药物中的作用。
本发明可用作抗人或动物的动脉粥样硬化。本发明所述药物可通过口服或静脉注射给予。本领域技术人员可根据实际情况容易地确定给药剂量。
所述化合物orientin,结构如式(ⅰ)所示：
所述orientin在治疗动脉粥样硬化药物中的应用，orientin降低高脂致动脉粥样硬化大鼠血清中mda的含量。
一种治疗动脉粥样硬化药物，由orientin为活性成分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物orientin,加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
一种治疗动脉粥样硬化药物，由orientin为活性成分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物orientin，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
对于本发明涉及的orientin在制备治疗动脉粥样硬化药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于动脉粥样硬化细胞的抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于动脉粥样硬化的防治显然具有显著的进步。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
具体实施方式
本发明所涉及化合物orientin的制备方法参见文献(ebenezerdemellocruz，etal.,leishmanicidalactivityofcecropiapachystachyaflavonoids:arginaseinhibitionandalteredmitochondrialdnaarrangement.phytochemistry,89(2013)71–77.)
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
实施例1：本发明所涉及化合物orientin片剂的制备：
取5克化合物orientin,加入糊精195克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例2：本发明所涉及化合物orientin胶囊剂的制备：
取5克化合物orientin，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
本发明通过细胞水平的研究及建立动脉粥样硬化模型等技术揭示了orientin对动脉粥样硬化的作用。
本发明经口及静脉注射给予orientin，可使动脉粥样硬化大鼠斑块面积/内膜面积(％)、内膜厚度(um)/中膜厚度(％)显著降低；使血中甘油三酯、总胆固醇及低密度脂蛋白含量下降，表明orientin可治疗动脉粥样硬化。
材料与方法
1.实验材料：
1.1动物和饲料
实验动物：健康大鼠，雌雄各半，体重(200.0±20)g。
饲料：基础饲料由江苏省实验动物中心提供；高脂饲料由2％的胆固醇、10％的猪油
和88％的基础饲料组成，由江苏省实验动物中心加工完成。
1.2药品及试剂
胆固醇试剂盒：南京建成生物工程研究所；
甘油三酯试剂盒：南京建成生物工程研究所；
高密度脂蛋白试剂盒：南京建成生物工程研究所；
低密度脂蛋白试剂盒：南京建成生物工程研究所；
考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；
mda测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；
sod测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；
1.3器材
美国雅培aeroset全自动生化分析仪；
jy601电子天平：上海海康电子仪器厂；
tn-100b型托盘扭力天平：上海上平仪器公司；
olympus倒置型系统显微镜；
wf10x-18mm光学显微镜：重庆光学仪器厂；
tgl-16g离心机：上海安亭科技仪器厂
1.实验方法：
2.1内皮细胞培养及orientin作用研究
2.1.1建立高脂血清损伤的内皮细胞模型
取健康日本大耳白兔6只，每日饲喂高脂饲料(2％胆固醇，10％猪油，88％基础饲料)，4周后无菌条件下心脏取血5ml，分离血清，合并，56℃水浴30min灭活处理，再以0.45及0.22双层微孔滤膜过滤后，-30冷冻保存备用。
2.1.2细胞培养和传代
将传代培养的人脐静脉内皮细胞株ecv304培养于含20％小牛血清、2mmol/ll-谷氨酰胺、100u/ml青霉素和100g/l链霉素的dmem培养基中。用0,25％胰蛋白酶液与0.02％edta(1:1)消化传代。接种于100ml培养瓶中，送入5％co2培养箱中培养。以备实验用。orientin，临用前用无血清培养基稀释。
2.1.3分组
取对数生长期的细胞用于实验。细胞加处理因素前24h更换无血清培养基，使细胞同步化至g1期，然后随机分5组：对照组、高脂血清组、aphanamixoida组0.4μg/ml组、aphanamixoida组2μg/ml组、aphanamixoida组10μg/ml组。其中对照组：加无血清dmem培养基；高脂血清组：加含5％高脂血清dmem培养基。
2.1.4mtt法检测细胞存活率
将生长良好的evc304细胞制备成5×107个·l-1的细胞悬液，按每孔0.1ml接种于96孔板，37℃，5％co2温育24h，无血清同步化处理及分组同上。各组细胞作用24h后，每孔加入20ulmtt(5.0g·l-1)，37℃孵育4h，弃去上清液，每孔加入二甲基亚砜100ul，充分细胞存活率(％)＝处理组a570/对照组a570×100％
2.1.5mda和sod含量测定
细胞分组及处理同上。作用24h后弃去上清液，用pbs洗3次后每孔加入0.5ml细胞裂解液(150mmol/lnacl，150mmol/ltris-hcl，1mmol/ledta，1％tritonx-100)，待细胞充分裂解后，参照mda和sod检测试剂盒说明书测定细胞mda含量。
2.2orientin对高脂动物的影响
2.2.1动物以基础饲料喂养1w，作为适应期。随机等分为6组：正常组、模型组、orientin低剂量组(400μg/kg)、orientin中剂量组(2000μg/kg)、orientin高剂量组(10000μg/kg)和多烯康对照组。正常组喂以基础饲料100g·只-1·d-1；模型组及其他给药组喂以高脂饲料20g·100g-1·d-1，给药组每天经口或注射给予相应剂量的orientin药物，连续给药20d。
2.2.2指标的测定
2.2.2.1血脂的测定
于给药后20d，将动物禁食不禁水12h，心脏采血，3000rpm·min-1离心10min，取上层血清0.5ml，测定。利用美国雅培aeroset全自动生化分析仪，分别以氧化酶法测定tg、tc含量，直接测定法测定hdlc、ldlc的含量。
2.2.2.2主动脉斑块的病变分级
动物处死后，立即摘取主动脉(自心脏至髂动脉分叉处)，将其上的脂肪组织剔除，于背侧面纵行切开，用10％的甲醛溶液固定，苏丹iv染色，使斑块呈红色，铺平，照像。图像分析仪测定斑块面积及血管内膜总面积，并计算斑块/血管内膜面积比。
按以下规定进行分级：
0级：无病变
1级：病变占1％-25％；
2级：病变占26％-50％；
3级：病变占51％-75％；
4级：病变占76％-100％。
2.2.2.3血清mda及sod的测定
动物心脏采血，3000rpm·min-1离心10min，取上清，用生理盐水稀释5倍，混匀待测。采用mda试剂盒测定mda含量及sod活性。
实验结果
(1)orientin对高脂血清损伤的内皮细胞细胞存活率的影响
高脂血清能显著降低内皮细胞的细胞存活率(p<0.01)，orientin0.004mg/ml、orientin0.02mg/ml、orientin0.1mg/ml三个浓度能不同程度抑制高脂血清引起的细胞存活率的降低(p<0.05，p<0.01，p<0.01)。
表1orientin对高脂血清损伤的内皮细胞细胞存活率的影响(x±s，n＝6)
与正常组相比*p<0.05，**p<0.01；与模型组相比▲p<0.05，▲▲p<0.01
(2)orientin对高脂血清损伤的内皮细胞mda和sod含量的影响
高脂血清能显著升高内皮细胞中mda的含量(p<0.01)，sod含量变化不明显。orientin能不同程度抑制高脂血清引起的mda含量的升高，提高血清sod酶活性。
表2orientin对高脂血清损伤的内皮细胞mda和sod的影响(x±s，n＝4)
与正常组相比*p<0.05，**p<0.01；与模型组相比▲p<0.05，▲▲p<0.01
(3)orientin对高脂饮食大鼠血脂的影响
与正常组相比，模型组甘油三酯(tg)、胆固醇(tc)、低密度脂蛋白ldlc的含量均显著升高(p<0.01)，高密度脂蛋白(hdlc)无明显影响；与模型组相比，orientin组和多烯康对照组tc、ldlc的含量均显著降低(p<0.01)，对hdlc无明显影响。
表3orientin对高脂饮食大鼠血脂的影响(x±s，n＝4)
与正常组相比*p<0.05，**p<0.01；与模型组相比▲p<0.05，▲▲p<0.01
(4)orientin对高脂致动脉粥样硬化大鼠主动脉斑块的病变分级的影响
与模型组相比，orientin中剂量组斑块面积/内膜面积(％)、内膜厚度(um)、内膜厚度/中膜厚度(％)均显著降低(p<0.05)，orientin高剂量组合多烯康对照组斑块面积/内膜面积(％)、内膜厚度(um)、内膜厚度/中膜厚度(％)均显著降低(p<0.01)。
表4orientin对高脂致动脉粥样硬化大鼠主动脉斑块面积/内膜面积(％)、内膜厚度/中膜厚度(％)的影响(x±s，n＝4)
与模型组相比▲p<0.05，▲▲p<0.01
(5)orientin对高脂致动脉粥样硬化大鼠血清mda、sod的影响
与正常组相比，模型组血清中mda的含量显著升高(p<0.01)，sod活性显著下降；与模型组相比，本发明中、高剂量组血清中mda的含量均显著降低(p<0.05，p<0.05)，sod的含量显著升高(p<0.05)。
表5orientin对高脂致动脉粥样硬化大鼠血清中mda、sod的影响(x±s，n＝4)
与正常组相比**p<0.01；与模型组相比▲p<0.05，▲▲p<0.01
结论：orientin能够显著抑制动脉粥样硬化，可以用来制备抗动脉粥样硬化药物。