本发明属于医药领域，涉及已知天然产物的新用途，具体涉及常春藤皂苷元及其糖苷在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。
背景技术：
：常春藤皂苷元(hederagenin)为一种五环三萜类化合物，化学名称为(3β,4α)-3,23-二羟基齐墩果-12-烯-28-酸，分子式为c30h48o4。常春藤皂苷为常春藤皂苷元的糖苷化产物。常春藤皂苷元及常春藤皂苷在自然界中资源较为丰富，广泛分布于川续断科、忍冬科、毛茛科、五加科及败酱科等多种植物中，具有较好的开发优势。申请人对常春藤皂苷元及常春藤皂苷进行了系统的研究，发现常春藤皂苷元及常春藤皂苷具有多种药理作用，对多种疾病具有防治价值，具有广阔的临床开发应用前景。骨质疏松是以骨量减少和骨组织显微结构退行性改变为特征，致使骨脆性增加，易发生骨折的一种全身代谢性骨病。目前全世界约2亿人患有骨质疏松，其发病率跃居常见病、多发病的第7位。中国是世界上拥有骨质疏松症患者最多的国家，约有患者9000万，占总人口的7％。骨质疏松症严重地危害妇女及老年人的健康，已成为世界关注的严重社会问题之一。目前尚未见常春藤皂苷元及其糖苷用于治疗骨质疏松的报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供常春藤皂苷元及其糖苷在制备治疗骨质疏松的药物中的应用。本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：如下化学结构所示的常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种形成的组合物在制备治疗骨质疏松的药物中的应用，其中，r1和r2代表的糖单元及其连接方式如下所示：一种用于治疗骨质疏松的药物制剂，含有上述常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种形成的组合物，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。优选地，所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。优选地，所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。一种提取物在制备治疗骨质疏松的药物中的应用，该提取物以新鲜或干燥的植物的整体或局部为原料提取制备得到，或以中药材、中药饮片为原料提取制备得到，所述提取物中含有上述常春藤皂苷元及其糖苷中的一种或多种，所述常春藤皂苷元及其糖苷的含量占所述提取物的质量百分含量不低于50％。一种用于治疗骨质疏松的药物制剂，含有上述提取物，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。优选地，所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料。优选地，所述药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂。骨矿密度bmd是评价骨质疏松症形成及药物防治疗效的可靠指标之一。上述实验结果表明，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷可以显著抑制去卵巢大鼠的骨矿密度降低。骨生物力学是研究骨组织在外力作用下的力学特征和骨在受力后的生物学效应，是对骨质量进行评定的一种可靠方法。有学者认为，骨量减少可以影响骨的生物力学性能，使骨生物力学强度降低，因此骨生物力学性能的变化是评价骨质疏松的一个重要而特殊的指标。上述实验结果表明，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷可以改善去卵巢大鼠股骨的内在特性。这些结果证明，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷可以显著改善骨质疏松模型大鼠的骨特性，可以开发成防治骨质疏松的药物。具体实施方式下面结合实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本发明涉及到的常春藤皂苷元及其糖苷的化学名称、化学结构及相关参考文献如下，这些常春藤皂苷元及其糖苷通过购买或者由申请人自制，纯度不低于95％。参考文献信息：[1]kawaih,kuroyanagim,ku,etal.studiesonthesaponinsoflonicerajaponicathunb.[j].chempharmbull,1988,36(12):4769-4775.[2]娄红祥(louhx)等.金银花中三萜皂甙的分离与结构确定[j].中国药物化学杂志(chinjmedchem),1995,5(3):208-210.[3]娄红祥(louhx),郎伟君(langwj),吕木坚(lvmj).金银花中水溶性化合物的分离与结构确定[j].中草药(chintraditherbdrugs),1996,27(4):195-199.[4]tengrw,wangdz,chencx.twotriterpenoidsaponinsfromlonicerajaponica[j].chinchemlett,2000,11(4):337-340.[5]茅青(maoq),贾宪生(jiaxs).黄褐毛忍冬化学成分的研究[j].药学学报(actapharmsin),1989,24(4):269-274.[6]茅青(maoq),曹东(caod),贾宪生(jiaxs).灰毡毛忍冬化学成分的研究[j].药学学报(actapharmsin),1993,28(4):273-281.[7]柴兴云(chaixy),李萍(lip),窦静(douj),等.山银花中皂苷类成分研究[j].中国天然药物(chinjnatmed),2004,2(2):83-87.[8]贾宪生(jiaxs).吊子银花的品质研究[j].贵阳中医学院学报(jguizhoucolltraditchinmed),1997,19(4):58.[9]domonb,hostettmannk.saponinswithmolluscicidalpropertiesfromloniceranigral.[j].helvchimacta,1983,66(2):422-428.[10]陈昌祥(chencx),等.金银花花蕾中的新三萜皂甙[j].云南植物研究(actabotyunan),2000,22(2):201-208.[11]汤丹(tangd等.黄褐毛忍冬中主皂苷成分的结构解析[j].高等学校化学学报(chemjchinuniv),2008,29(3):551-553.[12]陈君(chenj等.灰毡毛忍冬花蕾的化学成分[j].中国天然药物(chinjnatmed),2006,4(5):347-351.[13]钱正明(qianzm等.红花忍冬的三萜类成分研究[j].林产化学与工业(chemindforestprod),2006,26(4):24-25.[14]贾晓东(jiaxd等.灰毡毛忍冬中皂苷类成分的研究[j].中草药(chintraditherbdrugs),2007,38(10):1452-1455.[15]李洪娟(lihj),罗应刚(luoyg),何志恒(hezh),等.袋花忍冬的化学成分研究[j].应用与环境生物学报(chinjapplenvironbiol),2007,13(2):188-191.[16]王玉莉(wangyl),杨立(yangl),罗国安(luoga),等.金银忍冬果实非环烯醚萜苷类化学成分研究[j].天然产物研究与开发(natprodresdev),2007,19:51-54.实施例1：常春藤皂苷元及其糖苷的药理作用一、实验方法将3月龄未经产sd雌性大鼠适应性喂养3天后，随机将其分为两大组，假手术组和去卵巢手术组。假手术组只去除卵巢周围少量脂肪组织。去卵巢手术组行卵巢切除术，术后注射3天40万iu/kg青霉素预防感染。手术完成待大鼠苏醒之后，将去卵巢手术组随机分为16个组：模型组和序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷给药组，每组10只，分笼喂养。每天适时添加饲料、换水，观察生存状态，给药前各组大鼠体重无统计学差异。大鼠术后一周基本恢复，进行药物治疗。给药组大鼠分别灌胃给予50mg/kg/d的常春藤皂苷元或皂苷，假手术组和模型组灌胃给予等体积溶媒0.5％cmc-na，连续灌胃12周，于末次灌胃后1h后处死。骨矿密度检测：动物处死前3天，将大鼠麻醉，以俯卧位整齐排列于测试台上，用lunarprodigyadvancedexa骨密度测定仪，通过小动物模式对大鼠进行全身扫描，获得图像后用ge公司配套软件对大鼠的骨矿密度(bmd)进行分析。胫骨生物力学性能检测：取大鼠右侧胫骨，剔净附着的软组织和软骨，保存于-20℃的冰箱中，使用时从冰箱取出复温，用5943单立柱台式材料试验机做胫骨的三点弯曲实验。跨距：12.1mm，压力加载速度：1mm/min，检测过程由计算机自动描记胫骨的位移-载荷曲线、最大载荷、弹性模量和断裂能。二、实验结果1、对大鼠骨矿密度(bmd)的影响双能x线骨密度仪扫描结果显示，去卵巢12周后，与假手术组相比，模型组大鼠股骨bmd显著降低(p<0.05)；与模型组相比，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷给药组大鼠股骨bmd显著升高(p<0.05)。各组bmd如下表所示：2、对大鼠胫骨生物力学性能的影响胫骨生物力学性能检测结果显示，去卵巢12周后，与假手术组相比，模型组大鼠胫骨最大载荷、弹性模量、断裂能均显著降低(p<0.05)；与模型组相比，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷给药组大鼠胫骨最大载荷、弹性模量、断裂能均显著升高(p<0.05)。各组大鼠胫骨最大载荷如下表所示：组别最大载荷(n)序号7给药组82.1±6.3假手术组104.8±6.2序号8给药组86.3±6.0模型组57.4±5.6序号9给药组89.5±5.9序号1给药组79.5±6.4序号10给药组78.9±6.5序号2给药组83.4±6.8序号11给药组80.2±7.1序号3给药组96.8±7.6序号12给药组75.5±6.4序号4给药组94.2±6.8序号13给药组79.3±6.1序号5给药组74.6±5.9序号14给药组88.0±5.9序号6给药组73.8±6.1序号15给药组85.7±6.6骨矿密度bmd是评价骨质疏松症形成及药物防治疗效的可靠指标之一。上述实验结果表明，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷可以显著抑制去卵巢大鼠的骨矿密度降低。骨生物力学是研究骨组织在外力作用下的力学特征和骨在受力后的生物学效应，是对骨质量进行评定的一种可靠方法。有学者认为，骨量减少可以影响骨的生物力学性能，使骨生物力学强度降低，因此骨生物力学性能的变化是评价骨质疏松的一个重要而特殊的指标。上述实验结果表明，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷可以改善去卵巢大鼠股骨的内在特性。这些结果证明，序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷以及这些皂苷元或皂苷的任意组合形成的组合物可以显著改善骨质疏松模型大鼠的骨特性，可以开发成防治骨质疏松的药物。实施例2：含有常春藤皂苷元或其糖苷的提取物的制备及药理作用第一部分：提取物的制备制备方法一：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物1)，加适量水混悬，过滤，上样于d101大孔树脂，从10％、30％、50％、70％、90％乙醇开始梯度洗脱，根据薄层板tlc显色法监控洗脱液中是否含有decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从树脂上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物1。制备方法二：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用90％乙醇浸泡24h，过滤，收集滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物2)，加适量水混悬，过滤，上样于ab-8大孔树脂，从10％、30％、50％、70％、90％乙醇开始梯度洗脱，根据薄层板tlc显色法监控洗脱液中是否含有decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从树脂上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物2。制备方法三：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，水煮6h，过滤，收集滤液，减压浓缩得到浸膏(取部分干燥得总提取物3)，过滤，上样于lx-38大孔树脂，从10％、30％、50％、70％、90％乙醇开始梯度洗脱，根据薄层板tlc显色法监控洗脱液中是否含有decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从树脂上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物3。制备方法四：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物4)，加适量水混悬，依次以石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。正丁醇部位浸膏进行正相硅胶柱层析(200-300目)，以氯仿-甲醇梯度洗脱(20:1、10:1、5:1、2:1)，根据薄层板tlc显色法监控洗脱液中是否含有decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从硅胶上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物4。制备方法五：干燥的黄褐毛忍冬药材5kg，用70％乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得到浸膏(取部分干燥得总提取物5)，加适量水混悬，依次以石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。正丁醇部位浸膏进行ods反相硅胶柱层析，依次用20％、30％、40％、50％甲醇水梯度洗脱，根据薄层板tlc显色法监控洗脱液中是否含有decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙或川续断皂苷乙，三者任一出现在洗脱液中开始收集至三者全部从ods上洗脱完停止收集，将这部分洗脱液浓缩干燥得黄褐毛忍冬提取物5。用上述hplc-elsd法分别测定上述5种不同制备方法制备的总提取物1-5以及富含decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的黄褐毛忍冬提取物1-5中的decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总质量百分含量，结果如下表。由此可见，制备方法一至五可以有效对decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙进行富集，得到富含decaisosidee、黄褐毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙这三种常春藤皂苷的黄褐毛忍冬提取物1-5。在下述药理作用中，为了便于黄褐毛忍冬提取物1-5药效强度的比较，给药剂量均以其中所含三种皂苷总和进行换算。第二部分：提取物的治疗骨质疏松作用一、实验方法将3月龄未经产sd雌性大鼠适应性喂养3天后，随机将其分为两大组，假手术组和去卵巢手术组。假手术组只去除卵巢周围少量脂肪组织。去卵巢手术组行卵巢切除术，术后注射3天40万iu/kg青霉素预防感染。手术完成待大鼠苏醒之后，将去卵巢手术组随机分为6个组：模型组和黄褐毛忍冬提取物1-5给药组，每组10只，分笼喂养。每天适时添加饲料、换水，观察生存状态，给药前各组大鼠体重无统计学差异。大鼠术后一周基本恢复，进行药物治疗。给药组大鼠灌胃给予含50mg/kg/d三种总皂苷的提取物量，假手术组和模型组灌胃给予等体积溶媒0.5％cmc-na，连续灌胃12周，于末次灌胃后1h后处死。骨矿密度检测：动物处死前3天，将大鼠麻醉，以俯卧位整齐排列于测试台上，用lunarprodigyadvancedexa骨密度测定仪，通过小动物模式对大鼠进行全身扫描，获得图像后用ge公司配套软件对大鼠的骨矿密度(bmd)进行分析。胫骨生物力学性能检测：取大鼠右侧胫骨，剔净附着的软组织和软骨，保存于-20℃的冰箱中，使用时从冰箱取出复温，用5943单立柱台式材料试验机做胫骨的三点弯曲实验。跨距：12.1mm，压力加载速度：1mm/min，检测过程由计算机自动描记胫骨的位移-载荷曲线、最大载荷、弹性模量和断裂能。二、实验结果1、对大鼠骨矿密度(bmd)的影响双能x线骨密度仪扫描结果显示，去卵巢12周后，与假手术组相比，模型组大鼠股骨bmd显著降低(p<0.05)，出现明显的骨质疏松；与模型组相比，黄褐毛忍冬提取物1-5给药组大鼠股骨bmd显著升高(p<0.05)，各给药组之间无显著性差异(p＞0.05)。各组bmd如下表所示：组别bmd(g/cm2)提取物2给药组210.4±22.1假手术组248.3±23.6提取物3给药组209.7±24.5模型组165.5±18.4提取物4给药组212.8±21.3提取物1给药组208.7±20.2提取物5给药组207.5±20.92、对大鼠胫骨生物力学性能的影响胫骨生物力学性能检测结果显示，去卵巢12周后，与假手术组相比，模型组大鼠胫骨最大载荷、弹性模量、断裂能均显著降低(p<0.05)；与模型组相比，黄褐毛忍冬提取物1-5给药组大鼠胫骨最大载荷、弹性模量、断裂能均显著升高(p<0.05)，各给药组之间无显著性差异(p＞0.05)。各组大鼠胫骨最大载荷如下表所示：组别最大载荷(n)提取物2给药组87.3±6.7假手术组104.8±6.2提取物3给药组88.4±5.9模型组57.4±5.6提取物4给药组86.3±5.8提取物1给药组86.5±6.0提取物5给药组88.5±6.7骨矿密度bmd是评价骨质疏松症形成及药物防治疗效的可靠指标之一。上述实验结果表明，黄褐毛忍冬提取物1-5可以显著抑制去卵巢大鼠的骨矿密度降低。骨生物力学是研究骨组织在外力作用下的力学特征和骨在受力后的生物学效应，是对骨质量进行评定的一种可靠方法。有学者认为，骨量减少可以影响骨的生物力学性能，使骨生物力学强度降低，因此骨生物力学性能的变化是评价骨质疏松的一个重要而特殊的指标。上述实验结果表明，黄褐毛忍冬提取物1-5可以改善去卵巢大鼠股骨的内在特性。这些结果证明，黄褐毛忍冬提取物1-5可以显著改善骨质疏松模型大鼠的骨特性，可以开发成防治骨质疏松的药物。实施例3：药物制剂1、片剂：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物5g，淀粉50g，硬脂酸镁3g。制备工艺：取序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，压片。2、胶囊：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物5g，淀粉50g，硬脂酸镁3g。制备工艺：取序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗粒，干燥，装胶囊。3、注射液：序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物1g，注射用氯化钠适量。制备工艺：取序号1-15的常春藤皂苷元或皂苷或黄褐毛忍冬提取物加注射用水溶解，加入注射用氯化钠至等渗，调节ph值至7-7.1，滤过，冷藏24小时，加注射用水至规定量，滤过，灌封，灭菌，即得。上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。当前第1页12