本发明涉及药物领域，特别涉及一种中药组合物及其应用。
背景技术：
流行性感冒(influenza)简称流感，是由流行性感冒病毒引起的急性呼吸道感染。每年的季节性流行感冒病毒与其高突变率密切相关，严重的是其中一些突变可以导致动物宿主的病原体侵染人类进而引起流感大流行，由此引起的严重并发症会导致在危重患者中有较高的病死率。
多糖不仅是机体的重要结构成分，而且也是一种重要的信息分子，参与细胞与细胞的识别，细胞粘附及细胞间的物质运输等。近年来，大量药理及临床研究表明，多糖类化合物是一种良好的免疫调节剂，它能多途径、多层面调节机体的免疫系统，它不仅能激活巨噬细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞，还能促进细胞因子生成、活化补体，从而在抗肿瘤、抗病毒以及抗衰老等方面具有独特的功效，目前普遍认为多糖是一种无细胞毒的免疫促进剂。在一般情况下，多糖对机体特异性免疫与非特异性免疫、细胞免疫与体液免疫均有影响。而本配方使用的香菇和茯苓提取物中主要含有的成分就是香菇多糖和茯苓多糖，已有研究表明这两种多糖具有一定的免疫调节作用，在抗病毒方面有良好的效果。
生姜为芳香性辛辣健胃药，有温暖、兴奋、发汗、止呕、解毒等作用，也常被用于治疗风寒感冒，已有研究表明，生姜具有较强的抗炎、抗病毒作用。陈皮，苦，能泻能燥，辛能散，温能和，可用于用于湿阻中焦、脘腹痞胀、便溏泄泻，以及痰多咳嗽等症。另外，陈皮还能燥湿而健脾开胃，适用于脾胃虚弱、饮食减少、消化不良、大便泄泻等症，常与人参、白朮、茯苓等配合应用。
但是，目前未见将香菇、茯苓、生姜、陈皮四种原料联合抗病毒的报道。因此，提供一种能够增强免疫功能、抗病毒的中药组合物具有重要的现实意义。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供一种中药组合物及其应用。本发明主要基于香菇、茯苓、生姜、陈皮这几种药物可以作为一种广谱的免疫促进剂的效应，利用小鼠作为模型，筛选可增强流感病毒疫苗免疫效果的中药组合物，从而增强流感疫苗免疫效果，帮助人类抵抗流感威胁。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种组合物，由香菇、茯苓、生姜和陈皮组成。
在本发明的一些具体实施方案中，以质量份计，所述组合物由如下组分组成：
香菇20～30份，茯苓20～30份，生姜5～20份，陈皮5～20份。
在本发明的另一些具体实施方案中，以质量份计，所述组合物由如下组分组成：
香菇20～30份，茯苓20～30份，生姜5～10份，陈皮5～10份。
在本发明的一些具体实施方案中，以质量份计，所述组合物包括如下组分：香菇30份，茯苓30份，生姜20份，陈皮20份。
在本发明的一些具体实施方案中，以质量份计，所述组合物包括如下组分：香菇20份，茯苓30份，生姜10份，陈皮10份。
在本发明的一些具体实施方案中，以质量份计，所述组合物包括如下组分：香菇30份，茯苓30份，生姜5份，陈皮5份。
在本发明的一些具体实施方案中，以质量份计，所述组合物包括如下组分：香菇30份，茯苓20份，生姜5份，陈皮20份。
在本发明的一些具体实施方案中，以质量份计，所述组合物包括如下组分：香菇20份，茯苓20份，生姜10份，陈皮5份。
在本发明的一些具体实施方案中，所述香菇为香菇原药，所述茯苓为茯苓原药，所述生姜为生姜原药，所述陈皮为陈皮原药。
在本发明的一些具体实施方案中，所述中药组合物的制备方法为：分别取香菇20～30份，茯苓20～30份，生姜5～20份，陈皮5～20份，加入20倍水或乙醇水溶液(50％或70％)，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水或乙醇水溶液(50％或70％)，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得中药组合物。
在本发明的一些具体实施方案中，单味药物的制备方法为：分别取香菇、茯苓、生姜或陈皮，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，再次煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得。
本发明还提供了所述组合物在制备缓解疫苗免疫后动物体重降低的药物中的应用。
本发明还提供了所述组合物在制备提高疫苗免疫后动物的特异性抗体水平的药物中的应用。
本发明还提供了所述组合物在制备提高疫苗免疫后动物的抗病毒能力的药物中的应用。在本发明的一些具体实施方案中，抗病毒能力为降低H1N1病毒感染小鼠肺部病毒含量以及改善肺部细胞因子IL-2水平。作为优选，所述病毒为流感病毒。更优选的，所述病毒为H1N1。
本发明还提供了所述组合物在制备提高疫苗免疫后动物的IL-2含量的药物中的应用。
本发明还提供了所述组合物在制备疫苗免疫增强剂的药物中的应用。
本发明还提供了一种疫苗免疫增强剂，包括所述组合物及药学上可接受的辅料。
本发明提供的含有香菇、茯苓、生姜、陈皮提取物的中药组合物的抗H1N1病毒作用具体可以体现在其能够显著提高H1N1病毒感染小鼠的存活率和生存质量，改善H1N1病毒感染小鼠的肺炎性病变程度，并可显著改善H1N1病毒感染小鼠血清中特异性抗体水平，显著降低H1N1病毒感染小鼠肺部病毒含量以及改善肺部细胞因子IL-2水平。
考虑到中药生姜和陈皮抗感冒药效相对比较强，且味道较重，在制作这种配方时，我们将配方中的生姜和陈皮的剂量减少。本配方有效利用扶正祛邪的方式来提高机体抗病毒能力，增强免疫功能。配方中的香菇、茯苓具有扶正之功，生姜、陈皮具有驱邪之功，扶正和祛邪功效相辅相成，增强免疫功能和抗病毒作用。
具体实施方式
本发明公开了一种中药组合物及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的中药组合物中所用原料药或辅料均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：中药组合物的制备方法
按照重量份分别为30份、30份、20份、20份称取香菇、茯苓、生姜和陈皮，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得中药组合物。
实施例2：中药组合物的制备方法
按照重量份分别为20份、30份、10份、10份称取香菇、茯苓、生姜和陈皮，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得中药组合物。
实施例3：中药组合物的制备方法
按照重量份分别为30份、30份、5份、5份称取香菇、茯苓、生姜和陈皮，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得中药组合物。
实施例4：中药组合物的制备方法
按照重量份分别为30份、20份、5份、20份称取香菇、茯苓、生姜和陈皮，加入20倍50％乙醇水溶液，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍50％乙醇水溶液，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得中药组合物。
实施例5：中药组合物的制备方法
按照重量份分别为20份、20份、10份、5份称取香菇、茯苓、生姜和陈皮，加入20倍70％乙醇水溶液，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍70％乙醇水溶液，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得中药组合物。
实施例6：香菇提取物的制备方法
称取适量的香菇，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得香菇提取物。
实施例7：茯苓提取物的制备方法
称取适量的茯苓，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得茯苓提取物。
实施例8：生姜提取物的制备方法
称取适量的生姜，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得生姜提取物。
实施例9：陈皮提取物的制备方法
称取适量的陈皮，加入20倍水，煎煮2h，过滤，收集滤液，滤渣加入20倍水，煎煮1h，过滤，合并2次滤液；浓缩滤液至每100mL含有100g生药量，冷冻干燥或者70℃烘干，粉碎即得陈皮提取物。
实施例10：中药组合物对H1N1病毒感染小鼠的干预研究
1材料和方法
1.1材料
1.1.1实验动物
SPF小鼠，雌性，小鼠用标准全价饲料进行饲胃，购买小鼠当天要根据小鼠体重对所有小鼠进行分笼及编号，每只鼠笼5只小鼠。本次实验所需小鼠均从华中农业大学实验动物中心订购且均由本校实验动物中心进行饲养及管理。
1.1.2供试品
本次研究配方药物对流感疫苗免疫效力影响实验所用的药物由公司提供，需在4摄氏度避光保存。
1.1.3主要试剂及仪器
流感病毒毒株：WSN(H1N1)、PR8(H1N1)；
0.5％牛蛋白血清(BSA)：购自Biosharp公司；
小鼠IgG-HRP：购自Southern Biotech公司；
小鼠细胞因子IL-2ELISA试剂盒，美国R&D Systems公司；
小鼠细胞因子IL-5ELISA试剂盒，美国R&D Systems公司；
禽流感病毒ELISA检测试剂盒，武汉科前动物生物制品有限责任公司；
小鼠IgG抗体ELISA检测试剂盒，武汉科前动物生物制品有限责任公司；
电子天平BSA124S，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；
台式高速离心机TG16-Ⅱ，长沙平凡仪器仪表有限公司；
酶标仪318C，美国Perkin Elmer公司；
1.1.4实验器材
灌胃针，1ml注射器，1.5mlEP管,移液枪，离心机，小剪刀镊子等。
1.2方法
1.2.1动物分组及处理
采用Excel软件的随机数字功能，对SPF级小鼠进行随机分组，分为空白对照组、疫苗对照组、维他命C对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、实施例6组(香菇提取物组)、实施例7组(茯苓提取物组)、实施例8组(生姜提取物组)、实施例9组(陈皮提取物组)，每组15只。分别按照下列方法操作：
疫苗对照组：生理盐水灌胃30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
空白对照组：生理盐水灌胃30天。
维他命C(VC)对照组：VC灌胃(0.5g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。(参照文献《Red ginseng and vitamin C increase immune cell activity and decrease lung inflammation induced by influenza A virus/H1N1infection》、《大剂量维生素C辅助治疗流行性感冒的临床观察》，维生素C用于抗病毒的成人每日服用量为3g左右，按照等效剂量折算为小鼠给药剂量为0.5g/kg体重)
实施例1组：实施例1组合物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例2组：实施例2组合物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例3组：实施例3组合物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例4组：实施例4组合物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例5组：实施例5组合物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例6组(香菇提取物组)：实施例6香菇提取物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例7组(茯苓提取物组)：实施例7茯苓提取物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例8组(生姜提取物组)：实施例8生姜提取物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
实施例9组(陈皮提取物组)：实施例9陈皮提取物灌胃(2g生药/kg)30天，第15、23天，分别肌肉注射流感病毒疫苗。
第31天，每组取5只小鼠，取血、肺脏。
第32天(第0天)，所有组小鼠分别用50μl H1N1流感病毒滴鼻感染。
第35天(感染后第3天)，每组取3只小鼠，取血、肺脏。
第38天(感染后的第6天)，每组取3只小鼠，取血、肺脏。
第33天到第46天(感染后的2周内)，记录体重；观察小鼠精神状态和临床发病情况并进行临床打分。
第46天(感染后的第14天)，称重后处死小鼠，取血、肺脏。
1.2.2样品采集及处理
血清采集
小鼠经摘眼球取血，让血液自由滴入1.5ml离心管中，4℃静置2小时后3500rpm，10min，离心取血清，分装在EP管中，-20℃冻存备用。
小鼠经尾静脉采血时根据每次要采血的小鼠数量准备好1.5ml EP管，在每个管中加入40ulEDTA抗凝剂待用。
2结果
2.1中药组合物对病毒感染小鼠体重的影响
表1病毒感染后小鼠体重占初始体重百分比(n＝15)
注：与疫苗组比较，*P＜0.05；单味药与实施例3比较，#P＜0.05；
如表1所示，空白对照组小鼠体重有增长但未出现明显波动；疫苗对照组小鼠在感染病毒后第一天体重明显下降，第二天之后体重有了明显恢复而且波动不大，维持在原来体重的97％左右；维他命C对照组的小鼠在感染病毒后第一天体重明显下降，第二天之后体重有回升且波动不大，维持在原来体重的98％左右；各个实施例组小鼠在感染病毒后第一天体重明显下降，第二天之后体重开始明显回升且逐渐恢复到初始体重，其中实施例3组小鼠体重恢复较为显著，体重恢复到最大时达到初始体重的105％左右，证明实施例3的中药组合物对感染病毒的小鼠体重有明显的恢复效果，且实施例3组效果明显(P＜0.05)优于各单味药组。
2.2中药组合物对病毒感染小鼠血清中特异性抗体的影响
表2病毒感染前后小鼠血清中特异性抗体的变化
注：与疫苗组比较，*P＜0.05；单味药与实施例3和5比较，#P＜0.05；
The results represent means±SEM(n＝3)
如表2，在病毒感染前，空白对照组作为阴性对照，血清中不存在特异性抗体，各疫苗免疫组(单纯的疫苗组和各实施例组)血清中的特异性抗体水平没有明显差异。病毒感染第3天开始，各组的特异性抗体显著增加，各个实施例组小鼠的特异性抗体显著高于单纯的疫苗组，尤其是实施例3组和实施例5组的小鼠特异性抗体水平较高，而空白对照组的抗体始终处于较低水平。在感染后第6、14天，与疫苗组相比，各个实施例组小鼠的特异性抗体水平仍旧稳定处于较高的水平，显著(P＜0.05)高于单纯的疫苗组，尤其是实施例3组和5组的小鼠特异性抗体水平最高，且效果显著(P＜0.05)优于各单味药组。
2.3中药组合物对病毒感染小鼠肺匀浆中H1N1病毒含量的影响
表3病毒感染后小鼠肺部H1N1病毒含量的变化
注：与疫苗组比较，*P＜0.05；单味药与中药组合物3和5比较，#P＜0.05；
The results represent means±SEM(n＝3)
从表3中可以看到，病毒感染后第3天开始，疫苗对照组以及维他命C对照组小鼠肺部H1N1病毒含量稍微有所升高；感染后第6、14天，各实施例组肺部H1N1病毒含量均处于相对正常的水平，其中实施例3组和5组小鼠肺部H1N1病毒滴度相对较低，并且实施例3组和5组小鼠肺部H1N1病毒滴度显著(P＜0.05)低于各单味药组。
2.4中药组合物对小鼠肺匀浆中细胞因子IL-2的影响
表4病毒感染前后小鼠肺IL-2的变化
注：与疫苗组比较，*P＜0.05；单味药与中药组合物3比较，#P＜0.05；
The results represent means±SEM(n＝3)
注：与疫苗组比较，*P＜0.05；The results represent means±SEM(n＝3)
单味药与中药组合物比较，#P<0.05，
小鼠感染病毒后，肺匀浆细胞因子的水平发生了明显变化，IL-2随着病毒感染时间的延长逐渐升高。由表4可知，在改善肺匀浆IL-2的水平方面，各个实施例的对小鼠肺匀浆中细胞因子IL-2水平均有改善作用，尤其是实施例3组的小鼠肺匀浆中细胞因子IL-2水平最高，并且实施例3的效果显著(P＜0.05)优于各单味药组。
由以上结果可以看出，这种含有香菇、茯苓、生姜、陈皮提取物的中药组合物能够显著提高H1N1病毒感染小鼠机体的免疫功能，改善H1N1病毒感染小鼠的肺炎性病变程度；进一步检测发现，这种含有香菇、茯苓、生姜、陈皮提取物的中药组合物可以显著改善H1N1病毒感染小鼠血清中特异性抗体水平，并能显著降低H1N1病毒感染小鼠肺部病毒含量以及改善肺部细胞因子IL-2水平。因此，这种含有香菇、茯苓、生姜、陈皮提取物的中药组合物在一定程度上可以增强流感病毒疫苗的免疫效果，表明这种含有香菇、茯苓、生姜、陈皮提取物的中药组合物具有良好的抗病毒作用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。