一种治疗结直肠癌的中药组合物及其应用的制作方法

本发明涉及医药领域，具体为一种治疗结直肠癌的中药组合物及其应用。

背景技术：

结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)是常见的消化道肿瘤之一。2013年美国癌症预测数据显示，CRC新增病例和死亡人数分别为142820例和50830例，癌症新发和死亡病例均列各类癌症的第3名，约各占9％。近10年来，全球结直肠癌发病率和死亡率水平基本稳定，但占全球恶性肿瘤发病、死亡的比例有所增加。结直肠癌发病的地域分布差异较大，其中发达地区结直肠癌发病率较高。我国是结直肠癌的低发区，但发病率呈逐年上升趋势。截止2010年，我国结直肠癌新发病例数已超过27万，死亡病例13万以上。

CRC属于中医学伏梁、肠澼、肠覃范畴。中医药诊治CRC有着悠久的历史。《素问》曰“病名曰伏梁”，“肠澼下脓血”，“寒气客于肠外，与卫气相搏，气不得荣，因有所系，癖而内著，恶气乃起，息肉乃生”，说明本病与饮食不节、外邪入侵，营卫失调，伤及五脏有关。脾虚是肿瘤形成之本，张元素《活法机要》曰：“壮人无积，虚人则有之，脾胃虚弱，气血两衰，四时有感，皆能成积”，《景岳全书》曰：“脾肾不足及虚弱失调之人，多有积聚之病”；多位名老中医均提出肿瘤防治应以健脾为本。

因此，以传统中医药结合现代制剂技术，研究开发一种治疗CRC的中药复方制剂，具有重要的意义，同时也有巨大的市场开发潜力。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种治疗结直肠癌的中药组合物，其疗效显著。

本发明的另一个目的是将上述中药组合物应用于制备治疗结直肠癌的药物上。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种治疗结直肠癌的中药组合物，由以下重量比的中药材配制而成：硬毛火炭母:刺楸＝(15-25):(20-30)。

优选的，由以下重量比的中药材配制而成：硬毛火炭母:刺楸＝(17-22):(22-28)。

更优选的，由以下重量比的中药提取物及中药材配制而成：硬毛火炭母:刺楸＝19:25。

上述中药组合物在制备治疗结直肠癌的药物上的应用。

所述的药物的剂型为汤剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。

所述的药物，汤剂是以所述中药组合物配方中的中药材通过水煎得到。

所述的药物，片剂、胶囊剂、颗粒剂是以所述中药组合物配方中组分的提取物为有效成分，添加药用辅料制得的制剂。

所述的提取物为水提物。

本发明提供的中药组合物具有治疗CRC的功效，其治疗效果好，安全可靠，而且采用中药，原料易得。

附图说明

图1是本发明实验例中对小鼠体重的影响；

图2是本发明实验例中各组小鼠结肠肿瘤直观图，其中A图为离体肿瘤直观图，B图为在体肿瘤直观图；

图3是本发明实验例中小鼠结肠肿瘤大小及重量，其中A图为肿瘤大小图，B图为肿瘤重量图；

图4是WB检测本发明对凋亡相关蛋白表达的影响；

图5是IHC检测本发明对凋亡相关蛋白表达的影响；

图6是本发明实验例中各组小鼠的脾的MDSCs细胞比例；

以上附图中，C为对照组，L为低剂量组，M为中剂量组，H为高剂量组，S为顺铂组(即阳性药物对照组)。

具体实施方式

本发明为治疗CRC的中药组合物，由以下重量比的中药材配制而成：硬毛火炭母:刺楸＝(15-25):(20-30)。优选的，由以下重量比的中药材配制而成：硬毛火炭母:刺楸＝(17-22):(22-28)。更优选的，由以下重量比的中药材配制而成：硬毛火炭母:刺楸＝19:25。

本方以硬毛火炭母为君药，清热利湿，凉血解毒；以刺楸辅助君药凉血散瘀、祛风除湿。方简而效著，共奏消瘤之功。

本发明所使用的中药中：

硬毛火炭母为蓼科蓼属植物火炭母Polygonum chinense Linn.的变种。其根茎入药，味酸、甘，性寒。归肝、脾经。具有清热利湿，凉血解毒的作用。用于湿热泄泻、痢疾、黄疸、咽喉肿痛。硬毛火炭母含山奈酚、槲皮素、山奈酚-7葡萄糖苷、山奈酚-3-葡萄糖醛酸苷，β-谷甾醇、逆没食子酸、没食子酸、3-O-甲基并没食子酸。具有抑菌、收缩肠平滑肌作用。

刺楸为五加科植物刺楸的根或根皮Root of Septemlobate Kalopanax。味苦，性凉，无毒。归脾、胃经。具有凉血、散瘀、祛风、除湿作用。用治肠风痔血、跌打损伤、风湿骨痛。其根含多糖，水解后得半乳糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、木糖。水溶性多糖有葡聚糖和果胶质。具有抗肿瘤、提高免疫力作用。

上述中药组合物在制备治疗结直肠癌的药物上的应用。药物的剂型可以为汤剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂等口服剂型。汤剂是以所述中药组合物配方中的中药材通过水煎得到。片剂、胶囊剂、颗粒剂是以所述中药组合物配方中组分的提取物为有效成分，添加药用辅料制得的制剂，优选的，所述的提取物为水提物，按常规水提工艺即可。

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明并不限于此特定例子。

实施例1

取硬毛火炭母19g、刺楸25g，放入药锅中，加入凉的饮用水，浸泡20-30分钟，再加水没过药物，将药锅放在炉火上用中火煎煮。第一次煎煮后，把药液倒出(约150～200毫升)，再加温水适量(若药渣放凉再煎煮时应放凉水)，进行第二次煎煮，把药液倒出(约150～200毫升)，把两次药液混匀分2次服用。

实施例2

取硬毛火炭母190g、刺楸250g，加10倍量水，浸泡45min，提取2次，每次90min，滤过，合并滤液，浓缩至膏(1.05～1.10,70℃)，带式干燥，再过14目筛进行整粒，然后加入适量的硬脂酸镁，混匀，压制成66片，即得片剂。每片重0.45g。

实施例3

取硬毛火炭母190g、刺楸250g，加10倍量水，浸泡45min，提取2次，每次90min，滤过，合并滤液，浓缩至膏(1.05～1.10,70℃)，带式干燥，粉碎，加入2％硬脂酸镁，装入胶囊，制成66粒，即得硬胶囊。每粒含内容物0.45g。

实施例4

取硬毛火炭母190g、刺楸250g，加10倍量水，浸泡45min，提取2次，每次90min，滤过，合并滤液，浓缩至膏(1.05～1.10,70℃)，带式干燥，研成细粉，加入适量的糊精和乳糖，混匀，制粒，65℃干燥，过14目筛进行整粒，分装，制得66包，即得颗粒剂。每包重5g。

实施例5

取硬毛火炭母185g、刺楸255g，按实施例2制备方法制得片剂。

实施例6

取硬毛火炭母175g、刺楸265g，按实施例2制备方法制得片剂。

实施例7

取硬毛火炭母184g、刺楸256g，按实施例2制备方法制得片剂。

实施例8

取硬毛火炭母173g、刺楸267g，按实施例2制备方法制得片剂。

实施例9

取硬毛火炭母187g、刺楸253g，按实施例2制备方法制得片剂。

实验例(对CRC的治疗作用研究)

1.材料

1.1动物：无胸腺裸鼠(Nude Mouse，简称裸鼠)自中山大学动物中心购买，并在南方医科大学实验楼九楼SPF动物房饲养。实验开始前记录小鼠体重及编号。

1.2试药：按实施例1，取硬毛火炭母19g、刺楸25g，全部购自南方医科大学附属南方医院。采用传统水煎方法，煎煮两次。把药物放入药锅中，加入凉饮用水，浸泡20-30分钟，加水没过药物，将药锅放在电炉上煎煮。第一次煎煮后，把药液倒出(约150～200毫升)，再加温水适量(若药渣放凉再煎煮时应放凉水)，进行第二次煎煮，把药液倒出(约150～200毫升)，把两次药液混匀，分装-20℃保存备用。

2.方法

2.1分组与给药：实验动物分为5组，对照组9只，高剂量组(1.1g/ml)9只，中剂量组(0.55g/ml)9只，低剂量组(0.275g/ml)9只，顺铂组(1mg/ml)9只，各组裸鼠按照0.2ml/d标准以灌胃方式给予配好备用的药液。

2.2取样：

实验裸鼠原位移植肠癌肿瘤后正常饲养3天适应环境，给予自由进食及饮水，第4天开始给药。实验期间每隔3天监测小鼠体重及进食量变化，观察小鼠一般状态如毛发、活动及便血、脱肚等症状，并记录小鼠死亡情况。

给药3周后结束实验，称量体重并记录，采用眼球取血，血液静置2h后，3000r/min离心15min，取上清，分装于EP管中-80℃保存用于后续细胞因子的检测。然后采用颈椎脱臼法处死小鼠，将小鼠固定于冰上，剪开其腹腔及胸腔，取肝、肺、脾、肿瘤等组织，用预冷的生理盐水清洗取出物。用干净的滤纸吸干各组织上残留的生理盐水，将各组织分别均等分成几等份，其中用于病理研究的组织立即投入4％中性福尔马林溶液中固定，其余组织分装于冻存管中-80℃保存，用于后续的实验研究。

2.3统计学处理：所有数据以均数±标准差表示，统计学处理采用spss22.0软件进行分析，当P<0.05时有统计学差异。

3结果

3.1对CRC小鼠体重的影响：

各组小鼠按照给药方案处理3周后，对照组余9只，高剂量组余7只，中剂量组9只，低剂量组7只，阳性药物对照组7只。高、中、低剂量组与对照组无显著差异，与阳性药物对照组有明显差异，结果见图1。

3.2对CRC小鼠肿瘤的影响：

实验结束时，取出各组肿瘤，称重并拍照。高剂量组肿瘤减少较其他各组明显，见图2。肿瘤重量，相比各组，高剂量组明显低。肿瘤大小，相比各组，高剂量组明显小。见图3。由此，本发明能显著抑制结肠肿瘤发展。

3.3促进CRC小鼠的凋亡相关蛋白的表达

PARP、Bax、Caspase9均为检测肿瘤细胞凋亡的相关蛋白。蛋白质印迹法(WB)结果显示：高剂量组、中剂量组的小鼠肿瘤组织中的PARP、Bax、Caspase9表达相对对照组显著增加(P<0.01)，而低剂量组的小鼠肿瘤组织中的PARP、Bax、Caspase9表达与对照组相似(P<0.01)，结果见图4。免疫组织化学(IHC)结果与蛋白质印迹法(WB)结果类似，结果见图5。因此，本发明能促进CRC小鼠的凋亡相关蛋白的表达。

3.4通过免疫调节发挥抗癌作用

骨髓来源的抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)是骨髓来源的一群异质性细胞，是树突状细胞(dendritic cells，DCs)、巨噬细胞和(或)粒细胞的前体，具有显著抑制免疫细胞应答的能力。小鼠MDSCs的表型为CD11b+Gr-1-，分两个亚型:粒细胞样的MDSCs(CD11b+Ly6C-Ly6G+)和单核细胞样的MDSCs(CD11b+Ly6C+Ly6G-)。在人类MDSCs定义为Lin-HLA-DR-CD33+或CD11b+CD14-CD33+。MDSCs主要通过产生Arg-1、iNOS(NOS2)和ROS发挥免疫抑制功能。在正常生理状态下，CD11b+Gr-1+细胞在正常小鼠骨髓中占20％～30％，只有少量(2％～4％)存在于脾脏中，但不分布在淋巴结中，也不具备免疫抑制能力。当病理状态下，特别是肿瘤发生时，大量的非成熟状态的细胞聚集于多种器官中，通过细胞与细胞直接接触或分泌因子等途径，抑制机体的T细胞发挥正常免疫功能。

检测小鼠脾脏的MDSCs发现，相比正常组小鼠，高剂量组小鼠脾脏中的MDSCs细胞比例显著增加(P<0.01)，而相比于其余各组，高剂量组小鼠脾脏中的MDSCs细胞比例显著降低(P<0.01)，结果见图6。证明本发明通过影响免疫调节，从而发挥抗癌作用。

4.结论

本发明可通过促进CRC小鼠的凋亡相关蛋白的表达，影响免疫调节，从而发挥抗癌作用。