本发明涉及兽药
技术领域：
，更具体地说，涉及一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂及其制备方法。
背景技术：
：近几年来，鱼类养殖进入了规模化和集约化养殖的新时代，养殖密度越来越大，养殖环境亦日益变差，鱼类疾病的发生和危害也不断增大，给养殖户带来了很大困扰的同时，也制约了我国水产养殖业的健康发展。其中，鱼类寄生虫病在鱼类疾病中占据了相当大的比例．寄生于鱼体上的原生动物种类很多，它们大多寄生在鱼体的表面及体内的各种器官上，导致鱼体生长缓慢、不育、抵抗力低下，甚至造成鱼体大量死亡。其中，孢子虫病由原生动物孢子虫纲的粘孢子虫寄生在鱼的鳃部或体表上所引起的寄生虫病。孢子虫病是由粘孢子虫寄生在鱼的鳃部和体表上，长出白色的粉刺状的孢囊，堆积成瘤状，一簇或者一排布满腮部或鱼体，孢囊寄生的部位会产生充血，呈紫红色或者溃烂。此类疾病发病后很难治疗，数天内可致病鱼大量死亡。目前尚无有效治疗单孢子虫病的方法，控制该病的关键在于预防．包括对池塘消毒，不购买携带病原的鱼苗，及时清除病鱼、死鱼等。由于传统消毒杀虫剂高频率的广泛使用使寄生虫产生抗药性，降低药物疗效，对水质造成不可逆转性的破坏，且对鱼类的毒副作用较大，残留期太长，使养殖的鱼类体内药物残留超标，直接影响水产品的品质，损害食用者身体健康。技术实现要素：本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的上述缺陷，提供一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂及其制备方法，该中药复方制剂对各种畜禽原虫病、寄生虫病均具有较好的治疗效果和预防效果，尤其适用于鱼类孢子虫病的治疗。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂，由如下重量份数的组分制备而成：川楝子2-6份、洋金花2-6份、苦参2-6份、芡实0.5-1.5份、怀山药0.5-1.5份、枯草芽胞杆菌0.4-7份、嗜酸乳杆菌0.4-7份、米曲霉0.4-7份；所述川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：（0.2-1）。本发明所述的治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂，其中，所述川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：0.8。本发明所述的治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂，其中，所述川楝子2.8-5份、洋金花3-4.5份、苦参2.3-4份、芡实0.5-1.2份、怀山药1-1.5份、枯草芽胞杆菌4.5-6.5份、嗜酸乳杆菌2.5-4份、米曲霉2.5-4份。本发明所述的治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂，其中，所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉的重量比为6.5：3.5：2。本发明所述的治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂，其中，所述川楝子4.8份、洋金花4.6份、苦参3份、芡实1.2份、怀山药1.4份、枯草芽胞杆菌6.5份、嗜酸乳杆菌3.5份、米曲霉2份。本发明还提供一种如上所述治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂的制备方法，包括如下步骤：（1）取配方量的川楝子、洋金花、苦参，粉碎至150目，加入8倍量蒸馏水，加热煮沸1-3小时，放冷，离心机750-900r/min离心5-8min，滤过，滤渣再次加热煮沸1小时，离心机750-900r/min离心3-6min，滤过，滤渣加入4-6倍量浓度为70-85%的乙醇，回流提取2-4小时，离心机450-700r/min离心5-8min，滤过，反复2-3次，合并以上所有滤液，减压回收乙醇，经薄膜蒸发浓缩至相对密度为0.75-0.98的液体，得到提取液，待用；（2）分别取配方量的芡实、怀山药，进行粉碎，得到粉体，备用；（3）取步骤（2）的粉体少量多次加入至步骤（1）得到的提取液，用搅拌桨缓慢匀速搅拌；在无菌条件下加入配方量的枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉，继续搅拌，搅拌混合后置沸腾制粒罐中，混合20min，制粒即得成品。本发明所述治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂的制备方法，其中，所述芡实、怀山药均粉碎成超细粉。本发明所述治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂的制备方法，其中，所述芡实、怀山药平均粒径均在300目以上。本发明所述治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂的制备方法，其中，，步骤（3）中还包括进行β—环糊精包合制粒的过程。实施本发明的治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂及其制备方法，具有以下有益效果：本发明的中药复方制剂对鱼类孢子虫病具有较好的治疗效果和预防效果，解决了传统消毒杀虫剂高频率的广泛使用使寄生虫产生抗药性，降低药物疗效以及对水质造成不可逆转性的破坏。本发明的中药复方制剂是一种理想的天然、环保型绿色药物,具有高效、毒副作用小,安全性高,残留少等诸多优点,且来源广、成本低。在目前全面提倡健康养殖的新形势下,应用中草药防治鱼病具有广阔的前景。本制剂以川楝子、洋金花、苦参三药为君药，具有攻积杀虫之效，对肠肌有兴奋作用,能使虫体自发活动加强,出现间歇性剧烈收缩,造成能量供不应求,使虫体失去附着力而被驱除，加配以芡实、怀山药的健脾和胃药，孢子虫广泛存在于动物中,亦为以腹泻为主要临床特点的人兽共患性肠道原虫病，取芡实、怀山药具有增强脾胃功能，健胃生津，提高抗病能力的作用，能够消除患病鱼在感染孢子虫寄生虫后其产生的胃肠功能下降的症状。此外，本发明研究发现，配以调节鱼类微生态的菌剂有益于上述中药的吸收利用。（2）本研究发现，当川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：0.8。其中枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉用量比例为6.5：3.5：2其助吸收的效果显著。枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉进入消化道后，迅速由休眠状态复活，在短期内繁殖成高含菌量的优势种群，消耗掉肠道内大量氧气，并能产生过氧化氢、细菌素，建立微生态平衡，促进有益厌氧微生物的繁殖，抑制有害细菌（大肠杆菌、沙门氏杆菌）的生长，在快速繁殖过程中，产生大量多种维生素、有机酸、氨基酸、蛋白酶、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，能降解植物性中药中复杂的有机物，从而促进消化吸收，提高中药的利用率。（3）本发明的制备工艺简单，适用范围广。部分药材超微粉碎后最大限度破坏植物细胞壁，解决了传统药散剂粗纤维含量高、有效成分难以溶出的不足，更易于动物的吸收。（4）本发明还利用β—环糊精对药物进行包被，β—环糊精则可以作为保护性材料阻止内层药物有效成分降解，包合后的药物颗粒具有缓控释的特性，有效的延缓药物有效成分释放时间，提高了药物的稳定性，促进药物与生物膜的接触，增加药物的吸收。与传统给药方式相比，具有生物利用度高，毒副作用低的特点，孕畜及体弱者均可进行使用。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述：在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂，由如下重量份数的组分制备而成：川楝子2-6份、洋金花2-6份、苦参2-6份、芡实0.5-1.5份、怀山药0.5-1.5份、枯草芽胞杆菌0.4-7份、嗜酸乳杆菌0.4-7份、米曲霉0.4-7份；所述川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为（1：0.2-1）。优选地，所述川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：0.8。所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉的重量比为6.5：3.5：2。该治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂的制备方法，包括如下步骤：（1）取配方量的川楝子、洋金花、苦参，粉碎至150目，加入8倍量蒸馏水，加热煮沸1-3小时，放冷，离心机750-900r/min离心5-8min，滤过，滤渣再次加热煮沸1小时，离心机750-900r/min离心3-6min，滤过，滤渣加入4-6倍量浓度为70-85%的乙醇，回流提取2-4小时，离心机450-700r/min离心5-8min，滤过，反复2-3次，合并以上所有滤液，减压回收乙醇，经薄膜蒸发浓缩至相对密度为0.75-0.98的液体，得到提取液，待用；（2）分别取配方量的芡实、怀山药，进行粉碎，得到粉体，备用；所述芡实、怀山药均粉碎成超细粉，平均粒径均在300目以上。（3）取步骤（2）的粉体少量多次加入至步骤（1）得到的提取液，用搅拌桨缓慢匀速搅拌；在无菌条件下加入配方量的枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉，继续搅拌，搅拌混合后置沸腾制粒罐中，混合20min，另取称量好的β—环糊精制成糊精浆，开启制粒机，进行β—环糊精包合制粒，即为成品。组份中各原料的药理药效简介如下：川楝子，为楝科植物川楝MeLiatoosendanSieb.etZucc.的干燥成熟果实。性味性寒，味苦；有小毒。主治舒肝，行气止痛，驱虫。用于胸胁、脘腹胀痛、疝痛、虫积腹痛。川楝子的有效成分为川楝素，川楝素能使虫体三磷酸腺苷的分解代谢加快，造成能量的供不应求而导致收缩性痉挛而疲劳，最后使虫体不能附着肠壁而被驱出体外。洋金花，为茄科植物白花曼陀罗DaturametelL.的干燥花。性味辛温;有毒。具有止咳平喘，止痛镇静的功效。用于哮喘咳嗽，脘腹冷痛，风湿痹痛，小儿慢惊;外科麻醉。苦参，为豆科植物苦参的干燥根。性味苦，寒。具有清热燥湿，杀虫，利尿之功。用于热痢，便血，黄疸尿闭，赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风，外治滴虫性阴道炎。芡实，为睡莲科植物芡的干燥成熟种仁。：味甘，涩，性平。具有益肾固精，补脾止泻，祛湿止带的功能。生品性平，涩而不滞，补脾肾而兼能祛湿。常用于白浊，带下，遗精，小便不禁，兼湿浊者尤宜。怀山药，为薯蓣科植物薯蓣的干燥根茎。味甘，性平。具有补脾养胃，生津益肺，补肾涩精的功效。用于脾虚食少，久泻不止，肺虚喘咳，肾虚遗精，带下，尿频，虚热消渴。枯草芽胞杆菌，属芽孢杆菌属的一种。枯草芽孢杆菌以孢子状态进入消化道后，迅速由休眠状态复活，在短期内繁殖成高含菌量的优势种群，消耗掉肠道内大量氧气，并能产生过氧化氢、细菌素，建立微生态平衡，促进有益厌氧微生物的繁殖，抑制有害细菌（大肠杆菌、沙门氏杆菌）的生长。嗜酸乳杆菌，嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在小肠中，释放乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，但是抑菌作用比较弱。具有调整肠道菌群平衡，抑制肠道不良微生物的增殖。米曲霉，属真菌中的一个常见种。米曲霉在淀粉酶的作用下，将原料中的直链、支链淀粉降解为糊精及各种低分子糖类，如麦芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸，而且可以使辅料中粗纤维、植酸等难吸收的物质降解，提高营养价值、保健功效和消化率，广泛应用于食品、饲料、生产曲酸、酿酒等发酵工业。实施例1一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂其由如下重量份数的组分制备而成：川楝子4.8份、洋金花4.6份、苦参3份、芡实1.2份、怀山药1.4份、枯草芽胞杆菌6.5份、嗜酸乳杆菌3.5份、米曲霉2份。川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：0.8。所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉的重量比为6.5：3.5：2。制备方法，包括如下步骤：（1）取配方量的川楝子、洋金花、苦参，粉碎至150目，加入8倍量蒸馏水，加热煮沸1-3小时，放冷，离心机750-900r/min离心5-8min，滤过，滤渣再次加热煮沸1小时，离心机750-900r/min离心3-6min，滤过，滤渣加入4-6倍量浓度为70-85%的乙醇，回流提取2-4小时，离心机450-700r/min离心5-8min，滤过，反复2-3次，合并以上所有滤液，减压回收乙醇，经薄膜蒸发浓缩至相对密度为0.75-0.98的液体，得到提取液，待用；（2）分别取配方量的芡实、怀山药，进行粉碎，得到粉体，备用；所述芡实、怀山药均粉碎成超细粉，平均粒径均在300目以上。（3）取步骤（2）的粉体少量多次加入至步骤（1）得到的提取液，用搅拌桨缓慢匀速搅拌；在无菌条件下加入配方量的枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉，继续搅拌，搅拌混合后置沸腾制粒罐中，混合20min，另取称量好的β—环糊精制成糊精浆，开启制粒机，进行β—环糊精包合制粒，即为成品。实施例2一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂分别按下述的配比秤取原料，按照实施例1中的步骤进行制备，不同之处在于所添加的原料配比不同，制备产品：实施例2的原料配比：川楝子2份、洋金花2份、苦参2份、芡实0.5份、怀山药0.5份、枯草芽胞杆菌0.4份、嗜酸乳杆菌0.4份、米曲霉0.6份；所述川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：0.2。实施例3一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂，分别按下述的配比秤取原料，按照实施例1中的步骤进行制备，不同之处在于所添加的原料配比不同，制备产品：实施例3的原料配比：川楝子6份、洋金花6份、苦参6份、芡实1.5份、怀山药1.5份、枯草芽胞杆菌7份、嗜酸乳杆菌7份、米曲霉7份；所述川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：1。对比实施例1临床治疗孢子虫病的常用药，鱼用溴氰菊醋溶液，全池泼洒使池水呈0.02×0.000001浓度，每d1次，连续3次。对比实施例2一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂（缺少枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉，其他组分与实施例1的配方相同，制备方法与实施例1相同）其由如下重量份数的组分制备而成：川楝子4.8份、洋金花4.6份、苦参3份、芡实1.2份、怀山药1.4份。制备方法，包括如下步骤：（1）取配方量的土荆皮、苦参、银杏外种皮、川芎、丹参，粉碎至150目，加入8倍量蒸馏水，加热煮沸1-3小时，放冷，离心机750-900r/min离心5-8min，滤过，滤渣再次加热煮沸1小时，离心机750-900r/min离心3-6min，滤过，滤渣加入4-6倍量浓度为70-85%的乙醇，回流提取2-4小时，离心机450-700r/min离心5-8min，滤过，反复2-3次，合并以上所有滤液，减压回收乙醇，经薄膜蒸发浓缩至相对密度为0.75-0.98的液体，得到提取液，待用；（2）分别取配方量的芡实、怀山药，进行粉碎，得到粉体，备用；所述芡实、怀山药均粉碎成超细粉，平均粒径均在300目以上。（3）（3）取步骤（2）的粉体少量多次加入至步骤（1）得到的提取液，用搅拌桨缓慢匀速搅拌，搅拌混合后置沸腾制粒罐中，混合20min，另取称量好的β—环糊精制成糊精浆，开启制粒机，进行β—环糊精包合制粒，即为成品。对比实施例3一种治疗鱼孢子虫病的中药复方制剂由如下重量份数的组分制备而成：川楝子7份、洋金花7.8份、苦参8.5份、芡实3份、怀山药3.6份、枯草芽胞杆菌10.3份、嗜酸乳杆菌9.5份、米曲霉8.8份。制备方法：与实施例1相同。急性毒性试验：应用NIH小鼠120只，SPF级，雌雄各半，体重18-22g，进行急性毒性实验。小鼠随机分为三组，即对照组、给药组1（本发明实施例1的中药复方制剂，浓度为3.25g中药制剂/ml，最高浓度）、给药组2（本发明实施例2的中药复方制剂，浓度为2.76g中药制剂/ml，最高浓度）、给药组3（本发明实施例3的中药复方制剂，浓度为4.35g中药制剂/ml，最高浓度），实验前禁食12小时。给药组1-3分别将本发明实施例1-3制备的中药复方制剂溶解在蒸馏水中对小鼠灌胃，灌胃容积为5ml/kg，对照组给等量的生理盐水，1天给药2次，给药间隔6小时，给药后连续观察14天，并记录小鼠的毒性反应及死亡数。实验结果表明：与对照组相比，给药后小鼠未见明显差异，试验连续观察14天，小鼠全身状况、摄食、饮水、体重增长均正常。因此本发明的中药制剂急性毒性低，临床用药安全。本发明的中药复方制剂无毒性，使用方便，可添加到饲料中使用，下面，取实施例1-3以及对比实施例1-3的复方制剂，进行效果检测，结果见表。取六个相同大小的鱼池，每个鱼池放入50条患有孢子虫病的鲤鱼（诊断鲤鱼患有孢子虫病的方法：取出锦鲤鳃上或体表胞囊内含物放在载玻片上，加少量水在显微镜下观察，可发现大量充满视野的粘孢子虫的孢体，形态呈卵形或椭圆形、扁平，前端有2个极囊，等大或不等大，可作出诊断）。服用方法为将本发明的中药制剂按鲤鱼每公斤体重0.4g中药制剂直接喷洒至鱼池内喂养，连续服用10天，10天后，取鲤鱼皮肤及鳃在显微镜下观察是否发现粘孢子虫的孢体。鲤鱼放入鱼池生长前，分别称取实施例1-3以及对比实施例2-3的制剂池泼洒至鱼池内。对比实施例1泼洒鱼用溴氰菊醋溶液，全池泼洒使池水呈0.02×0.000001浓度，每d1次，连续3次。治愈率%=试验后患有孢子虫病的鲤鱼条数/试验前患有孢子虫病的鲤鱼条数*100%表实施例1-3及对比实施例1-3的治疗结果试验前患有孢子虫病的鲤鱼条数试验后患有孢子虫病的鲤鱼条数治愈率%实施例150394%实施例2501080%实施例350884%对比实施例1501374%对比实施例2501668%对比实施例3502462%由上表中数据可以看出，患有孢子虫病的鲤鱼服用本发明实施例1-3制备的中药复方制剂后，体内孢子虫消失明显，治愈率达到80%以上，与对比实施例1的常规杀虫法74%的治愈率还要高，说明本发明的中药复方制剂的治疗效果明显，值得注意的是，本发明实施例1的配方比例的治疗效果尤为显著，可达94%，该治疗效果得益于本发明的组方比例，尤其在川楝子、洋金花、苦参、芡实、怀山药五药的用量与所述枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三菌种的用量其质量比为1：0.8；枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉的重量比为6.5：3.5：2时，其组方效果最优。另外，对比实施例2与实施例1的配方差异在于缺少微生物调节剂枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉三种菌种，其治愈效果大打折扣，甚至比对比实施例1常规治疗方法的治愈率还差。对比实施例3与实施例1的配方差异在于各组分用量超过本发明设计的最大用量（川楝子2-6份、洋金花2-6份、苦参2-6份、芡实0.5-1.5份、怀山药0.5-1.5份、枯草芽胞杆菌0.4-7份、嗜酸乳杆菌0.4-7份、米曲霉0.4-7份），且枯草芽胞杆菌、嗜酸乳杆菌、米曲霉的用量并没有按照重量比为6.5：3.5：2进行配置，其治愈效果大打折扣，甚至比对比实施例1常规治疗方法的治愈率还差。可见，本发明的组分用量并非越高效果越好的，反而配方比例用量恰到好处即可，如实施例1的配方用量。对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页1 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