一种白茶提取物及其制备方法与应用与流程

本发明涉及一种白茶提取物及其制备方法，以及所述的白茶提取物在制备天然功能化妆水中的应用。

(二)

背景技术：

随着科技和社会的发展，人们对美容护肤品要求的提高，促进了化妆品行业的快速发展。各种功能、剂型的化妆品相继问世，化妆品市场琳琅满目，多姿多彩。在众多的化妆品种类之中化妆水以其独有的清爽滋润、自然透气等特点占有越来越重要的地位，其产品产量及销售额正逐年上升且发展前景可观。化妆水是一种以水为主要原料的液体类化妆品，目前市场上主要有透明型和乳液型两大类。它能使皮肤洁静润湿，适度保护皮肤和促进皮肤的生理作用。对众多消费人群共同需要的通常是用于给皮肤的角质补充水分及保湿成分或供给皮肤滋养成分，使皮肤柔软、丰润、符合皮肤生理状态、保持皮肤健康且使用时有清爽感。

目前化妆水的产品种类很多，如按功能可将其分为：清洁性化妆水、收敛性化妆水、柔软性化妆水、保湿化妆水、美白化妆水以及特殊功能化妆水等。其中保湿、营养、活肤、美白化妆水占大半以上。常见的保湿(补水)精华液侧重补水保湿，养颜露侧重营养，柔肤水侧重使表皮柔软，活肤水侧重激活细胞，美白水侧重美白功能。

但现有技术中的化妆水中，除少数植物提取物外，基质原料普遍含有来自矿物石油的烃类，醇类等，配合原料为化工产品防腐剂、着色剂和赋香剂。如保湿剂中的甘油、丙二醇、山梨醇等多元醇；美白剂中的水杨酸、对苯二酚、荧光物质；防腐剂中的尼泊金酯、苯氧基乙醇、对羟基本甲酸酯、乙醇(同时具有收敛作用)；祛痘剂中的间苯二酚、过氧化苯酰硫磺、尿囊素等；这些成分长期使用时会通过皮肤渗入人体，被其不同程度的吸收，对人的皮肤粘膜产生不良影响，或对皮肤有一定的刺激作用。

因此在当前化妆品生产中，原料天然化倍受关注，人们普遍认为天然的原料比合成化学成分更加健康。护肤产品越来越趋向天然化，天然活性物质的开发利用已成为化妆水产品开发的重要方向。

另外目前关于化妆水的专利虽然已有200多种，但普遍采用复配模式，而且大多含有各种人工合成化学成分。如“一种化妆水及其制备方法”，申请号201010299313.3，授权公告号CN 101966135 B，该发明化妆水包含：表面活性剂、多元醇、润肤剂、保湿剂、防腐剂和其它添加剂。“女性用化妆水”，申请号200410018024.6，授权公告号CN 1248678C，发明虽然采用物薰衣草精油、安息香精油、玫瑰水等天然芳香植有效成分，但配方中含有无水酒精。另外功能性化妆水中，保湿类化妆水，如“一种保湿化妆水”(申请号201510489660.5)，配方中包含甘油、二丙二醇、酒精、透明质酸钠、玻尿酸钠、琥珀酸二钠、甲基葡糖醚、琥珀酸、辛二醇等多种成分；美白祛斑类化妆水，如“一种祛斑美白化妆水及其制备方法”(申请号201410621660.1)，原料组分含正离子水、硫辛酸、山梨酸钾、聚山梨醇酯、香精、丹参提取物、丙二醇多种成分；抗衰老保湿水，如“一种具有抗衰祛皱和保湿补水功效的化妆水及其制备方法”，所述的化妆水由醇相、水相和添加剂等多种组分复配而成；祛痘类化妆水，如“一种祛痘化妆水及其制备方法”，所述化妆水由紫苏叶、辣椒叶、南瓜藤、扫帚菜、枸杞叶、芦荟肉、龙胆草、紫花地丁、蒲公英等提取物和木瓜蛋白酶、维生素E、维生素B₆份、蒸馏水等多种组分复配而成。

已有专利或化妆水产品中普遍含有的人工合成化学成分，对消费者健康和容颜存在潜在危害；此外多种成分复配，不仅需要较多的采购成本，而且在生产时需要多次精确定量和溶解混合操作，总体生产成本较高。

白茶是我国的六大茶类之一，也是福建省的特有茶类，不同于安吉白茶(属于绿茶)。主产于福建的福鼎、政和、松溪和建阳等地。与绿茶相比，白茶的传统制法比较独特，不需要炒制揉捻和杀青，仅需自然萎凋和干燥，属轻微发酵茶。成茶品质特征为外表满披白毫，色泽银白灰绿，故称“白茶”，成茶芽毫完整、叶底嫩匀、毫香清鲜，汤色黄绿清澈、滋味清淡回甘。其主要花色品种有白毫银针、白牡丹、贡眉、寿眉。自古以来，白茶素有“一年茶、三年药、七年宝”的美誉，近年来引起越来越多消费者的青睐。.

白茶由于其自然的制作工艺，保留了丰富的活性酶类、多酚类、儿茶素类、黄酮类、多糖类、茶氨酸类、咖啡碱类、维生素类、叶绿素等益于人体健康的生物活性物质，其中主要(以干重计)是包含茶多酚类(15％-35％左右，是绿茶的3倍之多)、儿茶素类(10％-20％左右)、黄酮类(1％左右)在内的酚类物质和氨基酸(5％-10％左右)，具有出色的药理和保健作用。研究表明白茶具有调节血脂、预防心脑血管疾病、抗氧化、抗衰老、抗突变、降血糖、抗肿瘤、调节免疫功能、抗辐射、保护护肝、抑菌、消炎解毒等多方面均具有显著的效果。白茶是我国传统的外销茶类中，被广泛认为最具有保健功效的茶叶之一，在国际市场上占有相当重要的地位。此外，白茶中还含有可溶性糖(3％左右)，蛋白质(20％左右)等营养成分，但绝大部分是水不溶性蛋白。

目前文献和专利对福建白茶的利用主要集中在食用方面，如“速溶太子参白茶及其制备工艺”(申请号201110458421.5，授权公告号CN 102488040 B)，“一种白茶饮料加工工艺”(申请号201310281684.2，授权公告号CN 103283878 B)，“一种白茶速溶粉及其制备方法”(申请号201610279715.4)，“一种含白茶提取物的有效部位组合物及其制备方法和应用”(申请号201610428974.9)，“一种从金花老白茶中提取抗氧化活性物质的方法”，“一种含白茶提取物的固态茶”(申请号201210552533.1)，“一种冷溶白茶粉的加工方法”(申请号200710140565.X，授权公告号CN 101366427 B)，就是突出美容养颜功能的“一种含白茶的美容养颜袋泡茶”(申请号201110268973.X，授权公告号CN 102349585 B)也是主打内服用途。以上专利有些还是白茶与其他复配而成，不是白茶单一原料。至今鲜见有用福建白茶为原料用于化妆品方面的文献报道，尤其是用白茶为单一原料制备天然功能化妆水。

皮肤的衰老、褶皱、暗淡是由内外多种因素引起的，但皮肤衰老的最主要原因是体内自由基破坏了正常的细胞行为，加速了细胞老化。如果能清除或抑制自由基就能阻止或缓解皮肤的衰老。在美容养颜护肤方面，白茶中的多酚类、儿茶素类、黄酮类等酚类物质，具有显著的抗氧化、抗衰老、抗紫外线、美白、抑菌、消炎等作用。

白茶中的酚类物质在高温、有氧、强光存在的环境下，非常容易氧化。传统的高温浸提可有效提高酚类的生产效率和提取率，但高温浸提易导致提取液色泽褐变和风味呈闷熟味劣化，常规的低温浸提虽然不易氧化，但是提取时间长，提取率低。

本发明采用闪式提取法低温快速有效提取白茶中的酚类物质。闪式提取(也称为闪提法)是近年来发展起来的一种新型提取方法，依据组织破碎提取的原理，闪式提取器通过组织破碎使充分暴露的被提取成分在负压、剪切、高速碰撞等各种外力作用下被溶剂分子包围、解离、溶解，瞬间达到溶剂浓度的平衡，从而达到快速提取的目的，减少了有效成分的降解或损耗。同时具有高速搅拌、超强振动、负压渗滤等功能来达到提取目的。由于一次提取一般在数秒至几分钟之内即可完成，其提取速度为传统方法的百倍以上，因此被称之为“闪式提取”，并可以在室温有效提取，不破坏热敏性成分。提取过程具有高效、快速、节能、低耗、环保等诸多特点。

本发明对白茶中的水不溶性蛋白进行了适度酶解，不仅水溶解性好，而且护肤功能更强。小分子活性肽对皮肤的渗透性强，可透过角质层与皮肤上皮细胞结合，参与和改善皮肤细胞的代谢，增强血液循环，达到滋润皮肤的目的。同时经酶解后的多肽，分子中含有大量的亲水基暴露，具有更好的保持皮肤润泽和保湿功效，同时白茶中的氨基酸也有营养滋润皮肤作用，而白茶中多羟基的糖类成分具有保湿作用。

本发明对福建白茶采用闪式提取酚类物质，酶解提取白茶多肽，超滤、冷冻干燥等技术手段进行了白茶功能性提取物和白茶功能性化妆水制备，功能评价发现该提取物和化妆水具有较好的体外抗氧化、抑制酪氨酸酶等活性，并对人体皮肤具有良好的保湿作用。

(三)

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种白茶提取物及其制备方法与应用。

本发明以福建白茶为原料，采用闪式提取酚类物质，酶解提取白茶多肽，超滤、冷冻干燥等技术手段进行了白茶功能性提取物的制备。本发明制得的白茶功能性提取物可应用于制备适合人体皮肤使用的天然白茶功能性化妆水。该化妆水具有保湿、美白、滋润、抗衰老等多种功能，同时能适合成年人各种肤质使用。功能评价发现本发明白茶提取物和化妆水具有较好的体外抗氧化、抑制酪氨酸酶等活性，并对人体皮肤具有良好的保湿作用。

本发明采用如下技术方案：

一种白茶提取物，按如下方法制备得到：

(1)原料白茶粉碎过筛(至40～60目)，按料液质量比1：15～30与体积分数为60％～80％的乙醇水溶液混合，常温闪式提取2～4min，离心，收集上清液，滤饼闪式复提1～3次后收集滤渣备用，合并各次所得上清液即为闪式提取液；

(2)取步骤(1)收集的滤渣，按料液质量比1：10～30与水混合，再加入所述滤渣质量0.3％～0.6％的中性蛋白酶(所述中性蛋白酶的酶活为2～10万u/g)，于30～50℃酶解1～2h，之后沸水浴灭酶8～15min，冷却至室温，离心，收集上清液即为酶解提取液；

(3)将步骤(1)所得闪式提取液与步骤(2)所得酶解提取液合并，超滤(超滤膜截留分子量2～10KD)，取滤过液真空浓缩(浓缩温度20～45℃，通常浓缩至原体积的1/5)，真空冷冻干燥(通常48～72h)，得到所述的白茶提取物(黄绿色)。

本发明中，所述的原料白茶(Camellia sinensis cv.Fuding-dabaicha)为福建白茶的春季产一芽2～3叶经现有制法常规加工后的茶叶，可在市面上商购获得，优选当年生产的福鼎有机寿眉品种。

本发明步骤(1)中，所述体积分数为60％～80％的乙醇水溶液，由食用乙醇和纯净水调配而成。所述的常温闪式提取，温度低，时间短，可以有效防止白茶酚类物质的氧化。

步骤(2)中，所述中性蛋白酶酶解时的自然pH为5.5左右。

步骤(3)中，所述超滤可以有效去除不溶的酚类成分，未酶解的蛋白质组分和水不溶性多糖大分子物质，使样品水溶性更好。所述滤过液真空浓缩的蒸发温度控制在≤45℃，真空低温隔氧情况下，有利于保持活性物质。所述的真空冷冻干燥有利于白茶酚类、多肽等生物活性物质保质。

本发明中所用的水均为纯净水，无离子成分，避免所含金属离子与酚类物质反应变色。

本发明中所述的常温为20～30℃。

本发明制得的白茶提取物可应用于天然白茶功能性化妆水的制备，所述制备的方法为：

将所述的白茶提取物加纯净水溶解，配制成0.02wt％～0.1wt％的溶液(清亮透明黄绿色液体)，灌装后经巴氏灭菌(70～90℃，15～30min)，即得天然白茶功能性化妆水产品。

本发明的有益效果在于：根据白茶的抗氧化、抗衰老、抗突变、抗辐射、抑菌、消炎解毒等天然功效，对其中的多酚(茶包括多酚、儿茶素、黄酮类成分)、蛋白、多肽等有效成分进行分离提取，在不添加各种化学添加剂的情况下，制备成一种适合各种成年人肤质使用的天然白茶功能化妆水，且具有保湿、美白、滋润、抗衰老等多种功能。

(四)附图说明

图1：本发明天然白茶功能性化妆水的制备工艺流程图；

图2：实施例1中0.03％的白茶功能性化妆水的保湿效果图；

图3：实施例2中0.05％的白茶功能性化妆水的保湿效果图；

图4：实施例3中制备的白茶功能性提取物的DPPH清除率；

图5：实施例3中制备的白茶功能性提取物的羟基自由基清除率；

图6：实施例3中制备的白茶功能性提取物的酪氨酸酶抑制率；

图7：实施例3中白茶功能性化妆水的保湿效果图。

(五)具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不仅限于此。

实施例1：

(1)取原料白茶(生产商：福建鼎毫茶叶有限公司；品名：寿眉；质量等级：特级；净含量600g/包，铝箔包装，纸盒外包装)1kg，粉碎过筛至50目，按料液质量比1：20与20L体积分数为60％的乙醇水溶液混合，常温闪式(中试型闪提仪，JHBE-100A，河南金鼐科技发展有限公司)提取2min，转速5000r/min离心去渣(台式低速离心机，TD5A-WS，配851400水平转子，湘仪离心机仪器有限公司)，4000r/min(3040xg)，收集离心上清液，滤渣闪式复提1次后收集备用，合并各次所得上清液即为闪式提取液；

(2)取步骤(1)收集的滤渣，加入20L纯净水，在50L的不锈钢保温容器中混合，再加入3g中性蛋白酶(酶活为10万u/g，宁夏和氏璧生物技术有限公司)，自然pH5.5下，于40℃酶解1.5h，之后沸水浴灭酶10min，冷却至室温，转速5000r/min离心去渣，收集上清液即为酶解提取液；

(3)将步骤(1)所得闪式提取液与步骤(2)所得酶解提取液合并，超滤(Cogent M1半自动超滤系统，Pellicon 2，Biomax 5超滤膜膜包，截留分子量5KD，默克密理博公司)，取滤过液真空浓缩至原体积1/5(真空浓缩温度≤45℃，旋转蒸发仪，RE-5210A，上海亚荣生化仪器厂)，真空冷冻干燥72h(中试型真空冷冻干燥机Pilot7-12T，北京博医康实验仪器有限公司)，得到白茶功能性提取物(黄绿色)226.4g，得率为22.6％，之后进行分析检测、体外功能评价。

(4)将所得白茶功能性提取物9g加纯净水30L溶解，配制成0.03wt％的溶液(清亮透明黄绿色液体)，铝罐喷雾剂灌装(350ml)后，经巴氏灭菌(80℃，20min)，得到天然白茶功能性化妆水喷雾剂，之后进行感官和功能评价、保质期实验。

相关检测和评价结果如下：

表1本实施例制备条件下白茶功能性提取物的主要成分测定结果

本实施例制备条件下，白茶功能性提取物随着浓度的增加，DPPH和羟基自由基的清除均呈线性增加趋势，在60μg/ml时DPPH自由基的平均清除率达91.4％，在100μg/ml时羟基自由基的清除率可达86.7％。说明白茶功能性提取物及其溶解后的白茶功能性化妆水(0.03％，即0.3mg/ml)具有较好的抗氧化和抗衰老潜在功效。

白茶功能性提取物随着浓度的增加，酪氨酸酶抑制率呈显著增加趋势，在0.3mg/ml时，酪氨酸酶抑制率达65.3％。说明白茶功能性提取物及其溶解后的白茶功能性化妆水(0.03％)具有较好的美白潜在功效。

0.03％的白茶功能性化妆水与空白对照(纯净水)的保湿作用对比如图2所示，由图2可知0.03％的白茶功能性化妆水具有较好的保湿作用。

表2本实施例制备条件下白茶功能性化妆水的微生物检验结果

*上述含量除水分外，其他以干物质计。

由表2可知，本实施例制备条件下的白茶功能性化妆水的微生物检验结果符合相关国家产品卫生标准。经加速条件贮藏(37℃、40℃、45℃)和产品测定，确定天然白茶功能性化妆水喷雾剂产品的保质期为1年。

实施例2：

(1)取原料白茶(生产商：福建鼎毫茶叶有限公司；品名：寿眉；质量等级：特级；净含量600g/包，铝箔包装，纸盒外包装)1kg，粉碎过筛至60目，按料液质量比1：30与30L体积分数为70％的乙醇水溶液混合，常温闪式(中试型闪提仪，JHBE-100A，河南金鼐科技发展有限公司)提取3min，转速5000r/min离心去渣(台式低速离心机，TD5A-WS，配851400水平转子，湘仪离心机仪器有限公司)，4000r/min(3040xg)，收集离心上清液，滤渣闪式复提1次后收集备用，合并各次所得上清液即为闪式提取液；

(2)取步骤(1)收集的滤渣，加入20L纯净水，在50L的不锈钢保温容器中混合，再加入4g中性蛋白酶(酶活为10万u/g，宁夏和氏璧生物技术有限公司)，自然pH5.5下，于40℃酶解2h，之后沸水浴灭酶15min，冷却至室温，转速5000r/min离心去渣，收集上清液即为酶解提取液；

(3)将步骤(1)所得闪式提取液与步骤(2)所得酶解提取液合并，超滤(Cogent M1半自动超滤系统，Pellicon 2，Biomax 5超滤膜膜包，截留分子量5KD，默克密理博公司)，取滤过液真空浓缩至原体积1/5(真空浓缩温度≤45℃，旋转蒸发仪，RE-5210A，上海亚荣生化仪器厂)，真空冷冻干燥72h(中试型真空冷冻干燥机Pilot7-12T，北京博医康实验仪器有限公司)，得到白茶功能性提取物(黄绿色)273.2g，得率为27.3％，之后进行分析检测、体外功能评价。

(4)将所得白茶功能性提取物5g加纯净水10L溶解，配制成0.05wt％的溶液(清亮透明黄绿色液体)，铝罐喷雾剂灌装(350ml)后，经巴氏灭菌(80℃，30min)，得到天然白茶功能性化妆水喷雾剂，之后进行感官和功能评价、保质期实验。

相关检测和评价结果如下：

表3本实施例制备条件下白茶功能性提取物的主要成分测定结果

*上述含量除水分外，其他以干物质计。

本实施例制备条件下，白茶功能提取物随着浓度的增加，DPPH和羟基自由基的清除均呈线性增加趋势，在60μg/ml时DPPH自由基的平均清除率达97.1％，在100μg/ml时羟基自由基的清除率可达95.8％。说明白茶功能性提取物及其溶解后的白茶功能性化妆水(0.05％，即0.5mg/ml)具有较好的抗氧化和抗衰老潜在功效。

白茶功能提取物随着浓度的增加，酪氨酸酶抑制率呈显著增加趋势，在0.5mg/ml时，酪氨酸酶抑制率达79.5％。说明白茶功能提取物及其溶解后的白茶功能性化妆水(0.05％)具有较好的美白潜在功效。

0.05％的白茶功能性化妆水与空白对照(纯净水)的保湿作用对比如图3所示，由图3可知0.05％的白茶功能性化妆水具有较好的保湿作用。

表4本实施例制备条件下白茶功能性化妆水的微生物检验结果

由表4可知，本实施例制备条件下的白茶功能性化妆水的微生物检验结果符合相关国家产品卫生标准，经加速条件贮藏(37℃、40℃、45℃)和产品测定，确定天然白茶功能性化妆水喷雾剂产品的保质期为1年。

实施例3：

(1)取原料白茶(生产商：福建鼎毫茶叶有限公司；品名：寿眉；质量等级：特级；净含量600g/包，铝箔包装，纸盒外包装)1kg，粉碎过筛至60目，按料液质量比1：25与25L体积分数为70％的乙醇水溶液混合，常温闪式(中试型闪提仪，JHBE-100A，河南金鼐科技发展有限公司)提取3min，转速5000r/min离心去渣(台式低速离心机，TD5A-WS，配851400水平转子，湘仪离心机仪器有限公司)，4000r/min(3040xg)，收集离心上清液，滤渣闪式复提1次后收集备用，合并各次所得上清液即为闪式提取液；

(2)取步骤(1)收集的滤渣，加入20L纯净水，在50L的不锈钢保温容器中混合，再加入5g中性蛋白酶(酶活为10万u/g，宁夏和氏璧生物技术有限公司)，自然pH5.5下，于40℃酶解1.5h，之后沸水浴灭酶15min，冷却至室温，转速5000r/min离心去渣，收集上清液即为酶解提取液；

(3)将步骤(1)所得闪式提取液与步骤(2)所得酶解提取液合并，超滤(Cogent M1半自动超滤系统，Pellicon 2，Biomax 5超滤膜膜包，截留分子量5KD，默克密理博公司)，取滤过液真空浓缩至原体积1/5(真空浓缩温度≤45℃，旋转蒸发仪，RE-5210A，上海亚荣生化仪器厂)，真空冷冻干燥72h(中试型真空冷冻干燥机Pilot7-12T，北京博医康实验仪器有限公司)，得到白茶功能性提取物(黄绿色)262.8g，得率为26.3％，之后进行分析检测、体外功能评价。

(4)将所得白茶功能性提取物5g加纯净水10L溶解，配制成0.05wt％的溶液(清亮透明黄绿色液体)，铝罐喷雾剂灌装(350ml)后，经巴氏灭菌(80℃，30min)，得到天然白茶功能性化妆水喷雾剂，之后进行感官和功能评价、保质期实验。

并进行了所得白茶功能性提取物的主要成分、体外功能评价和天然白茶功能化妆水的微生物检验、皮肤保湿功能测定，具体结果如下：

(一)白茶功能性提取物主要成分测定结果如表5所示：

表5本实施例制备条件下白茶功能性提取物的主要成分测定结果

*上述含量除水分外，其他以干物质计。

(二)抗氧化能力

由图4、图5可知，白茶功能性提取物随着浓度的增加，DPPH和羟基自由基的清除率均呈线性增加趋势，在60μg/ml时DPPH自由基的平均清除率可达95.6％，在100μg/ml时羟基自由基的清除率可达92.3％。

说明白茶功能性提取物及其溶解后的白茶功能性化妆水(0.02％～0.1％，即0.2～1mg/ml)具有较好的抗氧化和抗衰老潜在功效。

(三)酪蛋白酶活抑制效果

由图6可知，白茶功能性提取物随着浓度的增加，酪氨酸酶抑制率呈显著增加趋势，在0.8mg/ml时，酪氨酸酶抑制率达78.7％。说明白茶功能提取物及其溶解后的白茶功能性化妆水(0.02％～0.1％，即0.2～1mg/ml)具有较好的美白潜在功效。

(四)功能性化妆水保湿效果

由图7可知，0.02％～0.1％白茶功能性化妆水相对空白对照，具有良好的保湿作用，而且随化妆水浓度的增加，保湿效果增加。

(五)功能性化妆水微生物学检验

表6本实施例制备条件下白茶功能性化妆水的微生物检验结果

上述实验结果表明，白茶功能性化妆水的微生物检验结果符合相关国家产品卫生标准。

(六)化妆水保质期

经加速条件贮藏(37℃、40℃、45℃)和产品测定，确定白茶功能水喷雾罐产品的保质期为1年。

本发明中的分析检测以及体外功能评价的方法为：

(一)分析检测：冻干后的功能性提取物，感官上具有明显的白茶原有清香味；首先对提取得率进行了计算，然后对提取物的水分、灰分、总酚、总黄酮、总蛋白质、总游离氨基酸、多肽、总糖主要成分进行了检测；

①提取物得率计算：(冻干后提取物重量/白茶原料重量)×100％

②水分测定：采用GB 50093-2010食品安全国家标准食品中水分的测定，直接干燥法测定。

③灰分测定：采用GB 5009.4-2010食品安全国家标准食品中灰分的测定，食品中灰分的测定。

④总酚测定：采用福林酚法。取适量提取物用80％甲醇溶解，提取液加入200μl 0.1N的福林酚试剂和2000μl超纯水，振荡后放置3min，再加入1000μl碳酸钠(20％，w/v)溶液，振荡后室温避光放置1h，765nm下测定吸光值，设蒸馏水为空白对照。结果表达为每克白茶原料干重所含没食子酸的相当量(mg GAE/g干重)。

⑤总黄酮测定：采用硝酸铝-比色法测定。取适量提取物用用超纯水溶解，加入0.3ml5％NaNO₂溶液，震荡摇匀后放置6min，再加入0.6ml 10％AlCl₃·6H₂O，震荡摇匀后放置5min，再加2ml 1N NaOH水溶液，加超纯水至总体积10ml，510nm下测定吸光值，设蒸馏水为空白对照。结果表达为每克白茶原料干重所含芦丁的相当量(mg RE/g干重)。

⑥总蛋白质含量测定：凯氏定氮法。

⑦总游离氨基酸测定：采用GBT 8314-2013茶游离氨基酸总量的测定方法。

⑧多肽含量测定：取2.5ml提取物样品溶液，加入2.5ml 10％(W/V)的三氯乙酸(TCA)水溶液，于漩涡混合仪上混合均匀，静置10min，然后在4000r/min下离心15min，将上清液全部转移到50ml容量瓶中，并用5％的TCA定容至刻度，摇匀。然后取6.0ml上述溶液置另一试管中，加入双缩脲试剂4.0ml(样液：双缩脲试剂＝3:2，V/V)，于漩涡混合仪上混合均匀，静置10min，2000r/min离心10min，取上清液于540nm下测定OD值，对照标准曲线(Gly-Gly-Tyr-Arg四肽标准品)求得样品溶液中的多肽浓度C(mg/ml)，进而可求得样品中多肽含量。

⑨总糖测定：采用苯酚-硫酸法测定，以葡萄糖为对照品。

(二)体外功能评价：抗氧化评价(DPPH，羟基自由基清除功能)，美白(酪氨酸酶抑制功能)

I、抗氧化评价：

①清除DPPH自由基：配制0.2mM的DPPH试剂，取0.1ml稀释过的提取液与3.9ml DPPH试剂混合，在暗处反应1h，在515nm下测定吸光值。以0.1ml的80％甲醇溶液作为参照，水作为空白对照。DPPH自由基清除率按下式计算。

清除率(％)＝[1-(A_j-A_i)/Ac]×100％

其中测定组为A_i，参照组为A_j，空白对照为A_c，

②清除羟自由基：通过水杨酸Fenton反应测定。

在10ml试管中加入一定浓度的待测液，然后加入0.3ml 6mmol/LFeSO₄，1.5ml 6mmol/L水杨酸用纯净水补齐4.8ml摇匀，最后加入0.3ml 6.0mmol/L H₂O₂启动反应，静置10min后于510nm处测定吸光度。考虑到提取液本身的吸光值，做试样空白，测出扣除试样空白的吸光度，同时测定空白对照液的吸光度。

清除率(％)＝(A₀–A₁+A₂)/A₀×100％

其中：A₀为未加提取液时溶液的吸光度；A₁为加提取液后溶液的吸光度；A₂为提取液的吸光度。

II、美白(酪氨酸酶抑制活性)

酪氨酸酶是黑色素形成过程中主要的限速酶，该酶的活性大小决定着黑色素形成的数量。黑色素细胞以酪氨酸为原料，主要在限速酶酪氨酸酶的氧化作用下生成黑色素。皮肤内胶原中的酪氨酸被酪氨酸酶作用后形成黑色素，是皮肤变黑、色斑产生的主要原因。酪氨酸酶抑制剂可具有潜在的治疗异常色素紊乱，在化妆品行业可应用于皮肤美白添加剂。

取上述提取物加适量纯净水配制样品液100μL，加pH 6.8的磷酸盐缓冲液56μL与2.0mmol/L的酪氨酸溶液94μL，待混合均匀后在冰浴中迅速加入酪氨酸酶溶液50μL(50U)，混匀，37℃温育10min，于490nm处测定吸光度。

酪氨酸酶抑制率计算公式为：I％＝[(A-B)-(C-D)]/[A-B]×100％

A：未加样品的加酶混合液所测的吸光度；

B：未加样品亦未加酶的混合液所测的吸光度；

C：加样品和酶的混合液所测的吸光度；

D：加样品而未加酶的混合液所测的吸光度。

(三)功能性化妆水保湿效果评价

根据轻工业行业标准QB/T 4256-2011《化妆品保湿功效评价指南》的方法进行实验室自检。测定使用一定时间后的皮肤水分含量值(Moisture Measurement Value,MMV)，MMV为0～150的数值。设纯净水为空白对照。

(五)感官实验

根据轻工业行业标准QB/T 2660-20《化妆水》的感官评价方法。

(四)天然白茶功能化妆水微生物检验

根据国家食药监管总局的《化妆品安全技术规范(2015年版)》第五章微生物检验方法，对天然白茶功能化妆水产品进行了菌落总数、耐热大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌的实验室自检。