本发明属于生物美容制品技术领域，具体涉及一种用于美容修复的组合物和制剂及其制备方法和应用，特别涉及一种将多种细胞生长因子与保护剂和透皮剂联用在美容修复化妆品中的应用。
背景技术：
随年龄增长、紫外线的照射、环境的影响、疾病或者其他因素作用，皮肤逐渐受损衰老，主要表现为:角质化异常，角质层增厚或者减少、结构松散；表皮细胞数量减少，表皮细胞层厚度与角质层厚度均减少，皮肤的屏障保护功能变弱，保水功能降低，皮脂代谢变弱、油脂分泌减少；皮肤基底层中IV型胶原蛋白降解，基底层结构破坏，残余黑素细胞可能发生功能代偿性肥大，活力增强，导致皮肤有深浅不一的色素沉着；真皮厚度变薄、真皮细胞活力降低，弹力纤维、I型胶原蛋白均减少。外在表现为:皮肤干燥粗糙、缺乏滋润，色素小斑点脱失或沉着、老年斑皮脂分泌异常(增多或减少)，皮肤弹性降低，皮肤松她、粗糙，皱纹增多变深。
现在对于衰老性皮肤的修复主要有以下方案，1、保湿和修复皮肤屏障，皮肤能够保湿是由包覆在皮肤表面的具有抑制水分蒸发功能的皮脂膜和存在于角质细胞内的天然保湿因子两种因素共同作用的结果,衰老的皮肤皮脂膜受损,表皮屏障功能减弱,保湿因子减少，最终导致皮肤的干燥，神经酰胺和透明质酸都是人皮肤细胞间质自有的保湿成分。2、补充皮肤中胶原蛋白和弹性蛋白，胶原蛋白和弹性蛋白是组成皮肤真皮层的两类重要蛋白,胶原蛋白能够给细胞外基质以强度和韧性，而弹性蛋白赋予皮肤以弹性，衰老的皮肤合成胶原蛋白和弹性蛋白能力下降、胶原纤维变粗,出现异常交链,导致皮肤弹性下降,皱纹增多。因此补充皮肤中的胶原蛋白和弹性蛋白是抗衰老的又一重要途径。3促进细胞的新陈代谢自然衰老的实质是细胞的增殖、分化和细胞的老化、凋亡之间的平衡失调,因此促进新生细胞的增殖老化细胞的凋亡就是是解决衰老问题的又一重要途径，细胞因子生长因子的使用已经成为促进细胞代谢的趋势。4根据衰老的自由基学说,过量的自由基对染色体、线粒体、细胞膜和结缔组织等生物组织的毒害会引起机体的衰老。因此清除过量的自由基成为抵抗衰老的又一重要手段。有抗氧化功能的活性原料主要以超氧化物歧化酶,维生素E，辅酶Q,为代表。4、防晒，由于长期的日光照射会导致皮肤衰老或加速衰老。因此采用含有紫外线散射剂和吸收剂的防晒化妆品是保护皮肤免受紫外线损害的有效手段。5减少神经末梢的过度反应，淡化皱纹，比如肉毒素的使用。
技术实现要素：
本发明所解决的技术问题是：现有的护肤品修复皮肤效果不明显，或者修复效果单一，不能对于皮肤进行全面改善。
为了解决上述技术问题，本发明使用了多种细胞生长因子联合应用对皮肤进行全面修复，复配了三种保护剂(谷胱甘肽、海藻糖、肝素)，保证细胞生长因子在溶液中的稳定性，使用透皮剂进行复配(丙二醇、水溶性氮酮和/或胡椒提取物)加强了生长因子对皮肤角质层的透过率。
具体而言，本发明提供了如下技术方案：
一方面，本发明提供了一种用于美容修复的组合物，所述组合物包括以下组分：
复合细胞生长因子、海藻糖、肝素、谷胱甘肽、吸水类保湿剂和仿生类保湿剂和透皮组分，所述透皮组分包括丙二醇、水溶性氮酮和/或胡椒提取物中的至少一种。
优选的，按重量份计，
所述复合细胞生长因子为0.0002-0.001份，优选为0.0003-0.0008份；
海藻糖1-5份，优选2-4份；
肝素0.1-0.5份，优选0.2-0.4份；
谷胱甘肽0.01-0.5份，优选0.05-0.3份；
吸水类保湿剂为2-10份，优选为4-8份；
仿生类保湿剂为0.01-2份，优选为0.8-1.5份；
透皮组分为1-5份，优选为2-4份。
优选的，所述透皮组分包括丙二醇0.5-2份，水溶性氮酮0.5-2份，和胡椒提取物0.01-0.1份。
优选的，所述组合物还包括霍霍巴蜡、泊洛沙姆、羟丙基-β-环糊精、水溶性维生素E、甘草酸二钾、EDTA-2Na和防腐剂。
优选的，以复合细胞生长因子的重量份为0.0002-0.001份计，所述组合物包含：
霍霍巴蜡0.1-1份，优选0.3-0.8份；
泊洛沙姆0.5-5份，优选2-4份；
羟丙基-β-环糊精0.2-2份，优选1-1.5份；
水溶性维生素E 0.1-0.5份，优选0.25-0.4份；
甘草酸二钾0.1-1份，优选0.3-0.8份；
EDTA-2Na 0.1-0.5份，优选0.2-0.4份；
和防腐剂0.2-1份，优选为0.5-0.9份。
优选的，所述复合细胞生长因子包含表皮生长因子EGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF、酸性成纤维细胞生长因子aFGF、角质细胞生长因子-2KGF-2和胰岛素样生长因子-1IGF-1。
优选的，EGF：bFGF：aFGF：KGF-2：IGF-1的重量比为(1～5):(1～5):(0.2～1):(0.2～1):(0.2～1)。
优选的，所述吸水类保湿剂包含甘油、丁二醇、1,2-戊二醇、聚乙二醇和/或乳酸中的两种或者两种以上。
优选的，所述吸水类保湿剂包含甘油和丁二醇。
优选的，所述仿生类保湿剂包含透明质酸、神经酰胺、尿囊素和/或氨基葡萄糖中的两种或者两种以上。
优选的，所述仿生类保湿剂包含透明质酸和神经酰胺。
优选的，所述防腐剂包含pe9010、DMDM乙内酰脲、苯甲醇、苯甲酸、甲基异噻唑啉酮、羟苯丙酯和/或羟苯甲酯中的至少一种，优选包括pe9010。
优选的，所述组合物的剂型为膏剂、粉剂、溶液剂、贴剂或凝胶剂。
第二方面，本发明提供了一种利用以上任一项所述的组合物制得的用于美容修复的制剂。
第三方面，本发明提供了一种用于美容修复的溶液剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)在水中加入A相组分，搅拌溶解；
(2)然后加入B相组分，搅拌溶解；
(3)加入C相组分，搅拌溶解；
(4)加入过滤除菌后的D相组分，搅拌至均匀。
其中A相为泊洛沙姆、丙二醇、水溶性氮酮、吸水类保湿剂和EDTA-2Na；
B相为海藻糖、霍霍巴蜡、丙基-β-环糊精、肝素和水溶性维生素E；
C相为胡椒提取物、仿生类保湿剂、甘草酸二钾和防腐剂；
D相为谷胱甘肽和复合细胞生长因子。
优选的，步骤(1)中将A相组分在90-100℃条件下搅拌溶解；
步骤(3)中，加入C相组分之前，将溶液降温至70-80℃；
步骤(4)中，加入D相组分之前，将溶液降至室温。
第四方面，本发明提供了以上任一项所述的组合物以及所述的制剂在制备美容修复的化妆品和/或药品领域中的应用
将组合物中加入了一定比例的生长因子，按照质量比，EGF:bFGF:aFGF:KGF-2:IGF-1,比例为1-5:1-5:0.2-1:0.2-1:0.2-1，此比例是结合了皮肤修复试验效果和经济因素确定的比例。EGF可促进表皮细胞、成纤维细胞等增殖分化和迁移，促进新生肉芽组织形成和创面的再上皮化；促进透明质酸、纤维连接蛋白、糖蛋蛋白和羟脯氨酸等细胞外基质的合成；aFGF、bFGF促进血管内皮细胞和成纤维细胞分裂增殖，加速肉芽组织形成；促进成纤维细胞释放胶原酶，纤溶激酶。KGF刺激上皮细胞的增殖、迁移和分化，促进角质细胞增殖增厚，促进皮脂腺汗腺生长和毛孔正常形成；IGF-1属于作用广泛的生长因子，能促进成纤维细胞的生长和胶原纤维的分泌，维持毛囊细胞的正常发育。五种生长因子协同作用，促进真皮和表皮细胞的代谢和修复，促进细胞间质的形成，增加皮肤弹性，减少因胶原蛋白断裂和缺少引起的细皱纹，促进角质层新陈代谢和毛孔毛囊正常发育，使皮肤角质层含水量增加，减少皮肤粗糙度，从而达到修复嫩肤除皱的作用。
组合物中特别优选了生长因子保护剂，包括海藻糖，肝素和谷胱甘肽。海藻糖是一种天然糖类，其由两个葡萄糖分子以1，1-糖苷键构成的非还原性糖，对多种生物活性物质具有非特异性保护作用。他可通过氢键与酶蛋白表面分子相联结,也能通过氢键有效地与外部水分子相联结,使酶蛋白分子稳定。同时海藻糖的分子较小，易于以分子的形式填充到蛋白质分子的空隙中，有效限制蛋白质分子内部的结构发生变化。从而能避免变性失活。
肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，成纤维细胞生长因子家族的蛋白都有与肝素特异结合的区域，结合后能更好的稳定蛋白的空间结构，而且低浓度的肝素能促进细胞因子结合受体的能力。
谷胱甘肽(glutathioneGSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合，含有巯基的的三肽，具有抗氧化作用和整合解毒作用。aFGF bFGF KGF氨基酸序列中均含有游离的巯基，谷胱甘肽能起到保护巯基的作用，也避免了生长因子行程分子间二硫键而发生聚集。
组合物中还包含透皮组分，即透皮剂，泛指任何可以提高产品在人体皮肤表面的吸收和渗透的速度的物质。其促进吸收的机理可为溶解皮肤脂质或是蛋白质变性，从而促进产品在角质层的扩散性，增加产品在皮肤表面的溶解度，使得产品的透皮吸收率增加。组合物还优选了透皮剂包括丙二醇、水溶性氮酮和胡椒提取物，优选为黑胡椒提取物，三者联合使用，加强了皮肤的通透性。水溶性氮酮经改性成为高效水溶性产品，对亲油、亲水性药物和活性成分均有明显的透皮助渗作用，使皮肤角质层与脂质相互作用，降低了有效物质向角质层间隙中脂质的相转移温度，增加了流动性，使药物或活性添加剂在角质层中的扩散阻力减少，故起到很强的促渗作用。黑胡椒提取物中主要成分为四氢胡椒碱，是从黑胡椒果实中提取出来的具有强效促渗透作用的安全、高效天然的促渗成分，能增加脂质双层的流动性，促进药物分子和活性物分子扩散通过脂质双层的碳氢化合物部位；增加药物分子/营养物质和细胞膜的亲和能力。
组合物中包括了仿生类保湿剂和吸水类保湿剂，对皮肤起到保湿和补充细胞保湿间质的作用；其中泊洛沙姆起到增稠效果，丙基-β-环糊精起到乳化稳定作用、也有一定的抗氧化功能；霍霍巴拉除了作为很好的增溶剂也起到皮肤调理剂作用，增加皮肤的保湿性；水溶性维生素E起到抗氧化作用；甘草酸二钾作为皮肤调理剂，具有消炎抗敏作用；EDTA-2Na起到螯和二价金属离子的作用，既避免了金属类蛋白酶的酶切，又避免了电子传递引起的氧化反应。
本发明所取得的有益效果为：本发明采用含有复合生长因子、海藻糖、肝素、谷胱甘肽等的组合物，在此基础上和透皮剂联用，制备得到的护肤品，可以显著改善皮肤的含水率，修复皮肤衰老，使皮肤角质层的含水量增加，达到嫩肤除皱的目的。
具体实施方式
针对以上目的，本发明提供了一种美容修复的组合物，包括复合细胞生长因子、海藻糖、小分子量肝素钠、谷胱甘肽、胡椒提取物、丙二醇、水溶性氮酮、霍霍巴蜡、泊洛沙姆、羟丙基-β-环糊精、水溶性维生素E、甘草酸二钾、EDTA-2Na、吸水类保湿剂，仿生类保湿剂和防腐剂。
其中，所述吸水类保湿剂是指在皮肤上停留，可以吸收空气中的水分，同时也可以阻止水分挥发，用在皮肤上有种凉凉的感觉，包括但是不限于：甘油、丁二醇、1,2-戊二醇，木糖醇、丙二醇、乳酸钠溶液、山梨醇、聚乙二醇以及乳酸等。优选为甘油和丁二醇，甘油和1,2-戊二醇，甘油和聚乙二醇，甘油和乳酸等。
其中，所述仿生类保湿剂指的是一类通过模仿角质细胞内天然的保湿因子(NMF)来补充细胞间质中的NMF的不足的物质，包括但不限于：透明质酸、神经酰胺、尿囊素、海藻糖、α-甘露聚糖、羟乙基碳酰胺、乳酸、DL-吡咯烷酮羧酸钠溶液、氨基葡萄糖等。优选为透明质酸和神经酰胺，透明质酸和尿囊素，透明质酸和氨基葡萄糖等。
利用本发明提供的原料，可以采用本领域技术人员常用的方法或者辅料等，将其制备成面膜、膏剂、乳液、贴剂、溶液剂等其他用于皮肤改善的剂型。其在使用时可以作为水、乳液、精华、面霜等等，来修复皮肤，延缓衰老，对皮肤达到美容的效果。
其中，在本发明的一种优选实施方式，本发明提供了一种用于美容修复的溶液剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)在水中加入A相组分，搅拌溶解；
(2)然后加入B相组分，搅拌溶解；
(3)加入C相组分，搅拌溶解；
(4)加入过滤除菌后的D相组分，搅拌至均匀。
其中A相为泊洛沙姆、丙二醇、水溶性氮酮、吸水类保湿剂和EDTA-2Na；
B相为海藻糖、霍霍巴蜡、丙基-β-环糊精、肝素和水溶性维生素E；
C相为胡椒提取物、仿生类保湿剂、甘草酸二钾和防腐剂
D相为谷胱甘肽和复合细胞生长因子。
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。但是这些实施例仅为本发明的代表举例而已，不应理解为本发明实施的限定范围。此外，凡是对本发明配方、生产工艺步骤的简单替换或变化，均属于本发明的保护范围。本发明组合物中所用的原料均为本领域技术人员常用的原料。
表1本发明实施例和对比例所用的试剂及原料信息
表2不同实验组和对照组的组合物的重量配比
实施例一
用于美容修复的组合物的制备
表2中列出了不同实验组和对照组的原料的重量配比，以实验组1为例，分别称取复合细胞生长因子0.05g，海藻糖200g等，称取各个原料。然后按照表2中不同实验组和对照组的不同的配方，分别称取不同重量的各个原料，备用。按照如下的生产工艺流程最终制备得到10L护肤液。
1.生产工艺流程：
1.1原料分类
A相为泊洛沙姆、丙二醇、水溶性氮酮、吸水类保湿剂和EDTA-2Na的混合物；
B相为海藻糖、霍霍巴蜡、丙基-β-环糊精、肝素和水溶性维生素E的混合物；
C相为胡椒提取物、仿生类保湿剂、甘草酸二钾和防腐剂的混合物；
D相为谷胱甘肽和复合细胞生长因子的混合物。
1.2工艺描述
(1)将检验合格的原料运至车间，复称后分类放置。
(2)清洗和消毒乳化釜及用具后，按配方规定的量，放入检验合格的去离子水8.9L于乳化釜中，升温到95℃，加入A相组份，搅拌溶解。再加入B相组份，继续搅拌至完全溶解。
(3)边搅拌边降温至80℃，加入C相组份，搅拌至完全溶解。
(4)继续降温至室温，缓慢搅拌下，加入D相组份，搅拌均匀，最终得到10L的护肤液。
(5)检验合格后出料。
实施例二
分别对实施例一制备得到的不同的实验组和对照组的护肤液测试其安全性和效果。测定过程及结果如下：
1.护肤液的制造结果和安全性
经上述工艺制造出来的护肤液，外观呈澄清透明的溶液，产品经微生物方法检测(按照《化妆品卫生规范》2007版记载的方法进行测定)，菌落总数、霉菌和酵母菌总数、粪大肠菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌总数符合《化妆品卫生规范》(2007年版)要求；产品的卫生化学指标-汞、砷和铅含量均符合化妆品卫生规范》(2007年版)要求；产品的多次皮肤刺激性试验结果为无刺激性。
2.美容效果试验
检测不同实验组和对照组的不同成分配比效果，选取志愿者200人，选取标准为有一定的面部/眼部皮肤松弛或面部/眼部有细小皱纹现象，皮肤粗糙表现，年龄在35～55岁，男女不限，200人随机分成8组，每组25人分别在早上和晚上清洁皮肤后使用上述实施案例中的护肤液，期间都不再使用其他护肤液并注意防晒，连续8个周，整个过程为盲测。
分别采用主观评测和客观评测方法。
(1)主观评测
主观评测采取调查问卷的方式进行，分别记录志愿者各自的使用前后皮肤变化状况，其计分标准如下：
共分为六项，其一为：光泽度改善(满分20分，若使用前后对比，光泽度明显改善，皮肤光亮，则效果显著，分值为14-20分；若效果一般8-13分、不明显为0-7分)；
其二为：皮肤弹性改善(满分10分，若使用前后对比，皮肤紧致有弹性，则效果显著，分值为8-10分；若一般则为4-7分、不明显为0-3分)；
其三为：油脂分泌均衡与否(满分10分，若使用前后对比，面部油脂分泌均衡，油脂区域化分泌改善，则效果显著，分值为8-10分；若一般则为4-7分、不明显为0-3分)；
其四为：面部细小皱纹的减少与否(满分25分，若使用前后对比，面部细纹明显减少，则效果显著，分值为15-25分；若一般为8-14分、不明显为0-7分)；
其五为：毛孔粗大改善(满分15分，若使用前后对比，毛孔变细小，毛孔无粗大现象，则效果显著，分值为9-15分；若一般为4-8分、不明显为0-3分)；
其六为：斑点淡化与否(满分20分，若使用前后对比，斑点变淡，明显弱化，则效果显著，分值为14-20分；若一般8-13分、不明显为0-7分)。
将以上六项的得分情况加和，其中得分0-20分的为效果不明显，得分20-60分的为效果一般，得分大于60分的为效果显著，然后统计各实验组和对比组中效果显著、一般以及效果不明显的人数，统计在表3中。
表3各实验组和对照组美容效果主观评测
分析表3中的结果，采用实验组1制得的护肤液，其修复效果理想，相比较其他实验组和对照组的护肤液，为优选的组合液；实验组2相比较于实验组1，是减少了复合细胞生长因子的用量，实验组3相比较于实验组1，则是改变了仿生类和吸水类保湿剂，两组也都有良好的修复效果；而实验组4因为缺少了透皮成分黑胡椒提取物，修复效果相比较于实验组1、实验组2和实验组3，其修复效果明显要差，但是仍有多于一般的志愿者在使用实验组4的护肤液后取得显著的修复效果。而对照组1、2、3由于分别缺少了复合细胞生长因子、细胞因子保护剂或者促渗透剂(透皮成分)，修复效果都明显差于实验组4，更差于实验组1、实验组2和实验组3的护肤液，对照组4由于组合液成分只含有吸水类保湿剂，修复效果最差。
3.客观评测
分别对以上测试者检测了皮肤弹性变化率、面部皱纹变化率和角质层含水量变化率。
(1)面部皮肤弹性变化率(A％)
使用德国CK公司皮肤弹性测试仪MPA580，对使用实验组和对照组的护肤液的志愿者，在使用前和使用后测定其皮肤弹性。其测试原理是基于吸力和拉伸原理，在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个特定图测试探头内，皮肤被吸进测试探头内的深度是通过一个非接触式的光学测试系统测得的。测试探头内包括光的发射器和接收器，光的比率(发射光和接收光之比)同被吸入皮肤的深度成正比，然后得到一条皮肤被拉伸的长度和时间的关系的曲线，通过MPA软件分析来确定皮肤的弹性性能。设定恒定负压值为450mbar，测试时间为0.1s，分析使用前后皮肤的Ue值，Ue值为恒定负压加到皮肤上后，0.1s时皮肤的拉伸量。
在使用前和使用8周后分别计算每组的测试者的平均值。弹性变化率计算＝(使用后弹性Ue值-使用前弹性Ue值)/使用前弹性Ue值×100％，结果见表4。
表4使用前后皮肤弹性变化率
从表4的计算结果不难看出，使用实验组1-4的护肤液的测试者，使用前后对比，皮肤弹性变化率明显大于使用对照组1-4的护肤液。而且使用实验组1-4的护肤液的测试者，在使用前后的弹性变化率甚至高达30％，说明使用本发明配方制得的护肤液可以明显提高皮肤的弹性，减缓衰老。
(2)面部细小皱纹率变化
在使用前和使用8周后分别进行面部成像，采用VISIA面部图像分析系统对受试者面部进行拍照(正面，左、右侧45°方向)。提取皱纹分值和纹理分值，取平均值，皱纹分值变化率(B％)＝(使用后皱纹分值-使用前皱纹分值)/使用前皱纹分值×100％，结果见表5。
表5使用前后皱纹变化率
从表5不难看出，采用实验组1-4的护肤液，相比较采用对照组1-4的护肤液，能够明显减少皱纹，祛皱效果明显。
(3)角质层含水量变化率
在使用前和使用8周后分别使用德国CK公司的皮肤水分测试仪Corneometer CM825，采用接触式单点测量，检测志愿者面颊处角质层含水量，取平均值，计算角质层含水量变化率。含水量变化率(C％)＝(使用后含水量-使用前含水量)/使用前含水量×100％，结果见表6
表6使用前后角质层含水量变化率
从表6不难看出，用实验组1-4的护肤液的测试者，使用前后对比，角质层含水量的变化率明显大于使用对照组1-4的护肤液。而且使用实验组1-4的护肤液的测试者，在使用前后的角质层含水量变化率甚至高达21％，说明使用本发明配方制得的护肤液可以锁住皮肤水分，减少水分流失，得到补水的效果。
从皮肤弹性、皱纹分值、角质层含水量变化率三组数据分析，采用实验组1-实验组4的美容修复护肤液，有明显的修复效果，与主观评测结果基本相符。
综上所述，采用本发明的组合物的配方制备得到的护肤液在使用之后，额可以提供皮肤弹性，减少皱纹，显著提高皮肤角质层的含水量。当组合物中缺少复合细胞生长因子、细胞因子保护剂或者促渗透剂时，所制得得护肤液的修复效果不好。
以上所述仅为本发明较佳实施例，并不用于局限本发明，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在发明的保护范围之内。