用于淋巴排液的组合物的制作方法

本发明涉及由西洋蒲公英(taraxacumofficinalis)、荞麦(fagopyrumesculentum)、假叶树(ruscusaculeatus)、毛果一枝黄花(solidagovirgaurea)和猫须草(orthosiphonstamineus)组成的、或来自所述植物的提取物或者来自所述植物及其提取物的活性成分的混合物，包含所述混合物的组合物，和二者用途。本发明的混合物和组合物促进机体中的净化生理过程(depurativephysiologicalprocess)，并且特别指出用于治疗肥胖患者中的水潴留的病理生理学，特别是为了恢复淋巴内皮的生理通透性。本发明还涉及本发明组合物的用途以及通过施用本发明组合物来治疗肥胖患者中水潴留的病理生理学。
背景技术：
：淋巴系统除了保持组织中流体的稳态外，在免疫防御和维持代谢中也具有关键作用。因此，它是生物体与周围环境之间的界面，形成免疫系统的物理基础，免疫系统通过其通道和淋巴结进行抗原呈递和识别以及免疫应答激活的过程。因此，通过组织中流体的稳态，通过肠中脂肪的吸收，并且还通过从大部分组织中的间隙中除去脂肪，淋巴系统对于免疫功能是重要的。淋巴系统能够吸收来自饮食的脂肪，促进摄入的脂质的同化(吸收和积累)和代谢，同时表现为一种“垃圾场”，在这种“垃圾场”组织堆积死细胞、细菌、蛋白质、基质片段、脂质和其它大分子，这些将被分配到旨在去除其的器官，例如肝、肾、皮肤、肺和大肠。淋巴系统具有以下功能：维持和调节免疫系统；吸收和再循环细胞外流体，以维持体液的稳态；运输大分子。在人体内，水和溶质(并且特别是存在于血液循环中的蛋白质)通过毛细血管过滤到间隙空间，并且为了平衡这种流动，间隙体液和其中存在的蛋白质再次进入血液。每天约50％的血浆蛋白质从毛细血管中过滤，并且不被小静脉重新吸收，而是仅通过淋巴系统移动，淋巴系统具有将其返回到体循环的作用。血浆蛋白质的血管外积聚导致水从血管流到间隙，产生水肿。如果存在于胸导管内的淋巴液被转移到合适的受器中而不是进入体循环，则所有血液将在短时间内转化成淋巴液。这是威胁生命的，并且表明淋巴系统在使从毛细血管丢失的蛋白质和体液返回到血液中的重要性。在健康个体中，间隙体液占体重的约20％，并受多种临时机制调节，包括结构变化，通过血管作用的力(例如渗透压、肿瘤和静水压)和淋巴流量的调节。在大多数组织中，淋巴管收集离开毛细血管的血浆和蛋白质。除体液和蛋白质之外，肠系膜淋巴结中的淋巴液含有从肠腔输送并由位于肠绒毛中的中央毛细淋巴管(初始毛细淋巴管)收集的脂肪。肠淋巴液中脂质的浓度为约1-2％，并且高度依赖于营养结构。进食后，肠淋巴液的流量明显增加。这种作用可以解释为对脂质负荷增加的调整，并且有助于引导其通过淋巴管以便分布在整个机体中。最近的研究表明，在存在氧化的低密度脂蛋白(ox-ldl)的情况下，肠系膜淋巴管的收缩性升高，表明脂质对淋巴收缩性的直接影响。因此，肠系膜淋巴管对于去除由肠道吸收的脂质和维持消化系统的稳态是至关重要的。间隙空间中体液的增加导致皮肤和皮下组织的结构的变化，通常是显著的变化。由于淋巴液淤滞变成慢性并且由于所产生的水肿，所以存在在水肿中具有越来越多的成纤维细胞、脂肪细胞和角质形成细胞的倾向。组织组成的这种变化导致皮肤的增厚和皮下组织的纤维化，然而这些事件尚未被很好地理解。在淋巴水肿的情况下，即逐步纤维化的阶段，除了淋巴液淤滞和组织结构的紊乱之外还有炎症。文献中记录的测试数据已表明，组织中淋巴液的损失具有脂肪形成和炎性作用。淋巴水肿是淋巴液在间隙组织中的积聚，其造成严重肿胀，特别是四肢，例如胳膊和腿，并且在罕见的情况下也在机体的其它部位。淋巴水肿可以是原发性的，也就是说是由淋巴系统本身的变化引起的，或者可以继发于外科手术干预后的淋巴结移除，例如乳房切除术，其中除了移除乳腺组织外，也切除了卫星淋巴结。在淋巴系统严重恶化的情况下，存在淋巴液的强烈积累，其超过淋巴系统本身的排液能力，从而引起随后的富含蛋白质的流体的召回，如果未经治疗，则会降低组织氧化，干扰瘢痕形成过程，并且可以提供细菌生长的区域，使淋巴管炎的临床表现复杂化。淋巴水肿不同于在静脉功能不全的情况下发生的水肿，但是在这种情况下，如果未正确治疗，也可能发展成特征为静脉系统和淋巴系统的组合变化的疾病。淋巴水肿是一种病理状态，其以所有上述脂肪在下肢的积聚为特征，并且一般向下显露，也就是说，从肢体的上部，即从臀部向下建立，产生典型的“骑马裤”外观。随着水肿-成纤维硬化脂膜炎直到形成皮下淋巴结的发展，淋巴水肿可能变得更加严重。在某些情况下，可以在膝盖关节看到中间脂肪沉积物。具有淋巴水肿的受试者经常报告组织疼痛，并且在小创伤后容易发生瘀伤。周围微血管病在淋巴水肿组织中发展，并且诱导血管通透性的上升，以及具有高蛋白质含量的体液在细胞外基质中的积累。体液的积累引起了前淋巴通道的扩张，减少了其外流。也经历毛细淋巴管的形态和功能变化，例如微动脉瘤的形成。除此之外，还观察到了淋巴管(其代表淋巴收集器的解剖功能单元，或设置在一个阀机构和另一个阀机构之间的段)的活动度的紊乱。皮肤倾向于失去色调，并且对于管和组织的作用较少，并且为了增加间隙压力，需要更大量的间隙体液。以这种方式，淋巴液的排液功能也降低，因此，具有对水肿发展的不显著的被动防御机制。历史数据和最近的研究已经证明，淋巴系统和脂肪组织在解剖和功能上是相关的。由解剖异常、病变、阻塞或感染引起的淋巴管功能不全导致疾病组织中间隙体液以及蛋白质和脂质的积累。在原发性和继发性淋巴水肿的情况下，如果没有解决慢性炎症，就会发生纤维化和脂肪组织的积累，甚至在19世纪，德国皮肤科医生确认了组织中流体的淤滞能够导致脂肪的积累。在最近的时代，已经对chy小鼠进行了研究，并且已经证明淋巴液是脂肪细胞分化的有效刺激物，并且当提到促进脂肪形成时，淋巴液与胰岛素具有协同作用。此外，淋巴淤滞增加了脂联素的表达，已知脂联素在脂肪积累期间增加并且在肥大和组织缺氧期间减少。淋巴管生成的升高也与炎性疾病如银屑病和气道慢性炎症有关：1-慢性炎症可以促进脂肪组织块的出现，以满足在信号事件期间由免疫细胞的活化引起的基本能量需求，以及2-慢性炎症可以通过刺激淋巴管生成来促进更严重的脂肪形成，恶化了患病脂肪组织中淋巴液的释放。图10所示的图解总结了与肥胖个体的水潴留相关的问题。从图解可以看出，肥胖受试者倾向于积聚使病症恶化的流体，导致淋巴排液的减少并且淋巴管和血管的通透性升高，和随后细胞外基质的恶化和随后的炎症和从肾排泄的na+减少，还通过存在于肥胖个体中的肾素-血管紧张素-醛固酮系统的恶化。虽然有许多产品用于治疗肥胖个体的水潴留和水肿，但是考虑到与肥胖相关的复杂的病理生理表现的新组合物是期望的。技术实现要素：本发明提供了一种组合物，其i)作用于肥胖个体的血管和淋巴管的通透性(其因此这些表现出这些组织的炎症)，减少来自淋巴系统和循环系统的流体的渗漏(即与生理排放相比过度排放)，因此使淋巴内皮返回到生理状态；ii)恢复淋巴系统中的正确通道，允许正确地重新吸收流体和其中的炎性分子，从而也减少与淋巴脂肪生成相关的恶性循环；iii)具有利尿作用。本发明的组合物包含植物提取物，所述植物提取物单独发挥一些有益效果和一些不利效果，并且适当地混合时能够发挥满足上述需求的一般效果。本发明的作者对内皮的通透性进行了测试，以便评估许多植物提取物对淋巴细胞和血管细胞的健康细胞培养物的通透性的影响，以及用炎性因子如il-1β预处理的淋巴细胞和血管细胞的细胞培养物的影响，从而以模拟肥胖个体的淋巴管和静脉血管(其中因此存在这些组织的慢性炎症)的状况。获得的数据显示，具有期望的利尿剂作用或刺激淋巴管浓度的作用的植物在恢复用il-1β预处理的淋巴细胞或血管的正确通透性(即与用安慰剂处理的这种类型的细胞所观察到的生理通透性相比，管的通透性增加)上没有活性，意味着个别考虑时，使用这样的植物并不满足上述需求。为了提供满足上述要求的组合物，本发明的作者鉴定了一组植物，其混合的提取物满足上述要求，尽管单个植物的提取物不符合上述要求，例如用炎性因子如il-1β预处理的细胞中血管和/或淋巴管的通透性的升高。在本发明的活性成分的混合物中，本发明的作者能够通过适当地混合来使用一些植物以实现一些期望效果，并限制不符合上述要求的副作用，从而提供能够使由炎性因子损伤的淋巴内皮返回到生理通透性状态的混合物。因此，本发明涉及由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草组成的混合物，由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物，和由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草以及西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物。本发明还涉及一种组合物，其包含作为唯一活性成分的由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草组成的混合物和至少一种载体或辅料。本发明还涉及一种组合物，其包含作为唯一活性成分的由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物和至少一种载体或辅料。本发明还涉及一种组合物，其包含作为唯一活性成分的由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草以及西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物。因此，本发明涉及在上文中定义并且在下文更详细地定义的和在权利要求中的混合物或组合物在治疗与淋巴通透性过高相关的病变中的用途。特别地，获得的和报告的数据证实了本发明的混合物或组合物用于与淋巴通透性过高相关的病变(其表现出淋巴内皮完整性的失调)的适用性。然而，本发明还涉及本文所述和要求保护的混合物或组合物用于在与淋巴管通透性过高相关的病变中使用，其中所述病变选自特别是与肥胖相关的慢性炎症、淋巴水肿、脂肪水肿和水潴留病变。换句话说，本发明还涉及所述混合物或所述组合物用于治疗经受炎性因子作用的淋巴内皮，而且以便使淋巴内皮返回至其生理通透性。本发明还涉及用于治疗特别是与肥胖相关的水潴留病变的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草组成的混合物或其提取物组成的混合物或者由所述植物及其提取物组成的混合物，或者治疗有效量的组合物，所述组合物包含作为唯一活性成分的由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草组成的混合物，或者由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物，或者由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草以及西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物，和至少一种药学上可接受的载体和/或辅料。附图说明图1示意性地示出了本发明作者使用的模型，以进行通透性测试和多种测试提取物对肥胖个体(和血管和淋巴管受炎性因子作用的个体)中血管或淋巴内皮的影响的研究。在图1的框a中，示出了模型，其中在半透膜上的培养物中测量淋巴或血管内皮细胞，其中所述膜上方和下方存在培养基，以允许在细胞彼此未完全连接时培养基中存在的组分通过，并且fitch-葡聚糖分子插入在细胞上方的培养基中。通过fitc-葡聚糖复合物的荧光进行定量提供了对内皮通透性的测量。为了检查成分的活性，一旦细胞达到融合度，就移除培养基，加入样品(粉末，混合物之一的提取物)并保持接触18小时。不改变细胞培养基，加入il1β(10ng/ml，1h)。一旦刺激时间过去，移除培养基，加入3μm的fitch-葡聚糖。在图1的方框b中可以看出，内皮细胞暴露于炎性因子如il-1β诱导细胞之间的间隙，随后内皮通透性升高。在本发明的模型中，使用可从promocell,“humandermallymphaticendothelialcells(hdlec)adultdonor”目录号c-12217购得的细胞。图2示出了在用荞麦提取物预处理然后用il1β处理的淋巴内皮细胞上进行的通透性测试的结果。图表明il-1β处理的内皮细胞的通透性如何从100％(归因于健康细胞的常规值)升高至约160％，以及单独提取物如何仅在较高测试浓度下能够将通透性恢复到接近基础值的值，证明了本发明混合物的较弱的保护作用。图3示出了在用猫须草提取物预处理然后用il1β处理的淋巴内皮细胞上进行的通透性测试的结果。图表明这种提取物是唯一能够用较低浓度来恢复与健康细胞相同的通透性的提取物，但是利用较高浓度，其将细胞通透性降低到低于正常情况(常规定义为100％)，停留在80％左右。图4示出了在用毛果一枝黄花提取物预处理然后用il1β处理的淋巴内皮细胞上进行的通透性测试的结果。图表明提取物如何不能恢复与健康细胞相等的通透性，并且对内皮通透性基本上没有任何影响。图5示出了在用毛果一枝黄花和猫须草的共提取物(共提取前3:1)预处理然后用il1β处理的淋巴内皮细胞上进行的通透性测试的结果。图表明提取物如何不能恢复与健康细胞相等的通透性，并且在较高浓度下这种共提取物甚至对最初发炎的内皮的通透性具有不利影响。图6示出了在用西洋蒲公英提取物预处理然后用il1β处理的淋巴内皮细胞上进行的通透性测试的结果。图表明提取物如何不能恢复与健康细胞相等的通透性。图7示出了在用假叶树提取物预处理然后用il1β处理的淋巴内皮细胞上进行的通透性测试的结果。图表明提取物如何不能恢复与健康细胞相等的通透性，以及提取物在两种浓度下如何最低限度地影响il1β的效果。图8示出了在用根据本发明的提取物混合物预处理然后用il1β处理的淋巴内皮细胞上进行的通透性测试的结果。图表明混合物如何令人惊奇地能够恢复与健康细胞相等的通透性。图9示出了通过一式三份测试获得的数据，并且证实了在大多数情况下在之前的图中已经显示的结果，还显示了在图8中报告的结果在所有测试浓度如何对暴露于il-1β造成的损伤是显著的，以及提取物的混合物如何不会显著改变健康细胞的通透性(降低或升高)。在这些实验中，除了关于用il-1β和待测产品处理的细胞的数据之外，还分析了关于不用il-1beta处理仅用待测产品(本发明的提取物或混合物)处理细胞的数据。特别地，在图9a中报道了用或不用il-1β和荞麦提取物处理的hdlec细胞获得的数据。从图9a可以看出，提取物如何能够仅在最高测试浓度下将通透性恢复到接近基础值的值，证明与本发明的混合物相比较弱的保护作用。然而，还似乎明显的是，相同浓度具有降低未用il-1β处理的细胞的基础通透性的效果，这是不期望的效果。图9b示出了用西洋蒲公英获得的数据(其与图6中的数据相匹配)，并且还显示了重要的数据，即在1微克/ml观察到基础通透性的显著降低，这是不期望的效果。图9c示出了用假叶树获得的数据，证明了这些提取物对细胞通透性的影响的合理变异性，并且在任何情况下都表明这些提取物不能以统计学显著的方式恢复例如未经处理的样品的通透性，所述数据还显示增加未用il-1β处理的淋巴内皮的通透性的趋势。图9d示出了用毛果一枝黄花和猫须草获得的数据，与图5中报道的数据一致；该图还显示这样的提取物显著增加未用il-1β处理的淋巴内皮的通透性，从而产生不期望的效果。图9e示出了用本发明混合物获得的数据，其具有在任何测试浓度下使暴露于白细胞介素的细胞的通透性的完全正常化的效果。该图还表明混合物如何几乎不诱导用单独的混合物处理的淋巴内皮的通透性的任何变化。图9示出了用芦丁(5微克/毫升)作为阳性对照处理细胞获得的数据，图9g示出了用本发明混合物处理hdbec细胞获得的数据，证明了混合物的正常化作用，甚至在血管内皮细胞上。符号*表示基础显著性，符号#表示0+il1β显著性。图10是概括了与肥胖个体的水潴留相关的问题的图解。图11报告了用以下刺激处理的融合hdlec(a)和hdbec(b)细胞中闭合蛋白(上框)和蛋白质zo-1(下框)的免疫荧光分析数据：无刺激，单独il-1β(10ng/ml，1小时)，单独本发明的混合物(10微克/ml，18小时)；本发明混合物(18小时)+il-1β(1小时)。用60倍放大获得共焦图像，比例尺＝10微米。闭合蛋白和zo-1作为代表紧密内皮连接的标记物进行评估。融合细胞表达这些标记物，然而其在用il-1β处理后减少。与本发明的混合物的预孵育表明，该处理使得即使在用il-1β处理后也可以保持细胞间接触完整。图12示出了用nos抑制剂l-nmma处理hdlec细胞获得的数据。图12a示出了在具有和不具有本发明混合物(10微克/毫升，18小时)的情况下用il-1β(10ng/ml，1小时)，用l-nmma100μm，以及用il-1β+l-nmma处理后对hdlec细胞的通透性的影响。图12b显示了暴露于本发明混合物(10微克/ml18小时)后，hdlec细胞中enos产生的western印迹的分析数据。该图表报道了与肌动蛋白相比目标蛋白质根据a.d.u.的定量。图13示出了在暴露于本发明混合物之后的hdlec细胞中与inos和cox-2(分别为框a和b)的产生有关的数据。a.d.u.仍为10微克/毫升18小时。图14在框a、b和c中分别报告了关于暴露于10微克/ml的本发明混合物18小时后hdlec细胞中sod-1、过氧化氢酶和p22phox的产生的数据。**p<0.01，与基础相比。与肌动蛋白相比进行定量，数据以a.d.u.为单位报告。框d，在具有和不具有本发明混合物(10微克/ml18小时)的情况下用il-1β(10ng/ml1小时)刺激的细胞中的ros产生。数据表示为相对荧光单位(rfu)/细胞数(n＝3)，*p<0.05和***p<0.001，与基础相比。###p<0.001，与il-1beta相比。(对于图12b、13和14中的所有实验，数据以a.d.u.为单位，n＝3)。如图2至9和11-14所示，结果是对于每种测试化合物一式三份进行的实验的结果。在图中和本文中使用的缩写fbs胎牛血清，cox-2环氧合酶2，enos内皮一氧化氮合酶，hdlec人皮肤淋巴内皮细胞，hdbec人皮肤血管内皮细胞，inos诱导型一氧化氮合酶，il-1β白介素β，l-nmmal-ng-单甲基精氨酸，ros活性氧，sod-1超氧化物歧化酶1，tnfα肿瘤坏死因子α，zo-1紧密连接蛋白1。具体实施方式本发明的作者已经使用暴露于炎性因子(例如肥胖个体中存在的由炎性脂肪细胞产生的那些)的淋巴管和血管的细胞模型来评估具有期望活性的多种植物提取物，例如，利尿活性，如西洋蒲公英、荞麦，或诱导淋巴管(lymphangion)的基本单位收缩的活性，如假叶树，对淋巴管和血管的通透性的影响。事实上，已知的是在肥胖个体中观察到这种管的通透性升高，随后液体从这些管非生理性排出，并且其不能重新吸收和正确地引导从血管和淋巴管渗透出的流体和炎性分子，随后是从淋巴管排出的流体的脂肪形成作用，以及因此建立与肥胖相关的水潴留的生理病理学有关的恶性循环。因此，本发明的作者将注意力集中在由植物提取物引起的对淋巴管和血管的通透性的影响上，所述植物提取物从刺激淋巴管收缩(淋巴管收缩和可能改善淋巴液的通道)或利尿的观点是潜在有益的。因此，作者使用了图1示意性示出的模型来研究多种植物提取物对血管或淋巴管内皮的影响。如图1所示，内皮细胞暴露于细胞因子(如在肥胖个体中存在的炎症条件下)改变血管内皮的完整性，血管内皮对流体的通过变得更加可渗透。已经通过测量穿过内皮屏障的荧光探针的量的实验确定了通透性的程度，所述内皮屏障分隔分别代表管内腔(半透膜上方)和间隙(半透膜下方)的两个隔室。将增加量的各种植物的提取物引入半透膜上的培养基中，并检查其对内皮通透性的影响。用本发明的混合物进行相同的实验。将与不暴露于细胞因子的健康细胞中观察的相等的值设定为等于100％的渗透性值，可以看到，仅猫须草在10μg/ml的浓度下成功地将淋巴内皮的通透性降低至少至100％(图3)，而在较高剂量下，这种通透性甚至降低得太多，而当与毛果一枝黄花共提取时，其对淋巴内皮的通透性具有非阳性的作用(图5)，而无其它单个提取物能够将渗透率恢复到100％(图2、4、6和7)。然而，本发明作者获得的数据令人惊奇地显示出，本发明的混合物(其中猫须草和毛果一枝黄花也作为共提取物存在)如何能够在任何测试浓度下将淋巴内皮通透性恢复到100％(图8和图9e)。换句话说，本发明的作者已经证明，本发明的混合物能够在任何测试浓度下以优于单独测试的任何组分的方式降低淋巴内皮的过高通透性，表明所选择的组合最佳地并且以恒定的方式保护了淋巴内皮的正确通透性。作者还证明，与大多数单个提取物相反，本发明的混合物在不存在细胞因子炎性因子的情况下不会对淋巴内皮通透性产生任何改变，因此表明这样的混合物如何不具有对健康内皮不期望的副作用。本发明的作者还发现，与通过简单添加两种植物的单个提取物相比，猫须草和毛果一枝黄花的共提取提供了具有更好的利尿活性的共提取物。此外，本发明的作者已经证明，如本文所述和要求保护的，由他们选择的混合物通过促进紧密连接的完整性来提供其对细胞通透性的影响，并且所述混合物还降低了炎性成分如诱导型一氧化氮合酶(inos)和环氧合酶2(cox-2)的表达，而不改变内皮nos(enos)，因此证明了混合物如何也可用于改善改良的淋巴循环状况和支持淋巴内皮的生理功能。因此，由本发明的作者进行的提取物的选择提供了因此满足下面列出的所有要求的混合物，即，i)作用于肥胖个体的血管和淋巴管的通透性(其这些个体因此表现出这些组织的炎症)，减少来自淋巴系统和循环系统的流体的渗漏(即与生理排放相比过度排放)，因此使淋巴内皮返回到生理状态；ii)恢复淋巴系统中的正确通道，允许正确地重新吸收流体和其中的炎症分子，从而也减少与淋巴脂肪生成相关的恶性循环；iii)具有利尿作用。并且同时不具有与形成本发明的混合物的植物的单个提取物相关的不期望的副作用，特别是关于淋巴内皮的通透性。因此，本发明涉及由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草组成的混合物，由所述植物的提取物组成的混合物，或者由所述植物和所述植物的提取物组成的混合物。对于本发明的目的，术语西洋蒲公英是指所述植物的根，或者术语西洋蒲公英的提取物是指西洋蒲公英的根的水醇提取物(例如乙醇/水40-70％，例如60％)。为了本发明的目的，术语荞麦是指所述植物的叶，或者术语荞麦的提取物是指荞麦的叶的水醇提取物(例如乙醇/水40-80％，例如70％)。为了本发明的目的，术语毛果一枝黄花是指所述植物的顶部，或者术语毛果一枝黄花的提取物是指毛果一枝黄花的顶部的提取物(例如乙醇/水30-60％，例如40％)。为了本发明的目的，术语猫须草是指所述植物的叶，或者术语猫须草的提取物是指猫须草的叶的提取物(例如乙醇/水40-70％，例如50％)。为了本发明的目的，术语假叶树是指所述植物的根茎和/或根，或者术语假叶树的提取物是指假叶树的根茎或根的提取物(例如乙醇/水40-80％，例如70％)。植物的部分可以是新鲜的或干燥的。为了本发明的目的，毛果一枝黄花和猫须草的共提取物是指毛果一枝黄花的顶部和猫须草的叶的提取物，其通过将每种植物的合适的部位，例如毛果一枝黄花的叶和猫须草的叶以1:1或2:1或3:1的比例放在同一溶剂中，并且根据标准方法进行提取，以获得水醇提取物(如乙醇/水40-70％，例如50％)来产生。上述每种提取物可以是冻干形式。在一个优选的实施方案中，本发明涉及由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物，在另一个实施方案中，本发明涉及由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草组成的混合物，在另一个实施方案中，本发明涉及由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草和西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物，其中所有三种混合物用于在治疗与淋巴通透性过高相关的病变中使用。特别地，获得和报道的数据表明本发明混合物用于在与淋巴管通透性过高相关的病变中使用的适用性，特别是对于呈现淋巴内皮完整性失调的病变，并且可以选自例如慢性炎症、淋巴水肿、脂肪水肿和水潴留生理病变，特别是在所述病理生理学与循环停滞、淋巴水肿和/或组织的炎症相关的情况下，例如在肥胖个体中。在本发明的一个实施方案中，混合物旨在用于在治疗经受炎性因子作用的淋巴内皮中使用，以便使所述内皮恢复到与健康(生理)淋巴内皮的通透性相似或相等的渗透状态。根据本发明，当提及某些组分占本发明的混合物的x％至y％的事实时，这意味着所述组分占本发明的混合物的按重量计x％至y％，优选干重。在一个实施方案中，西洋蒲公英占本发明混合物的12％至33％，假叶树占本发明的混合物的6％至25％，并且毛果一枝黄花和猫须草整体占本发明混合物的35％至55％。毛果一枝黄花和猫须草优选为1:1、2:1或3:1或4:1的比例，更优选为3:1的比例。在本发明的一个实施方案中，所述西洋蒲公英的提取物占本发明混合物的23％至33％，所述荞麦的提取物占本发明混合物的12至25％，所述假叶树的提取物占本发明混合物的6％至12％，并且所述毛果一枝黄花和猫须草的提取物整体占本发明混合物的35％至55％。在本发明的一个优选实施方案中，通过将每种植物的合适的部位，例如毛果一枝黄花的叶和猫须草的叶以1:1或2:1或3:1的比例放在同一溶剂中，并且根据上述标准方法进行提取，来提供毛果一枝黄花和猫须草的提取物。在这种情况下，在本发明中，所述提取物在本文中也定义为毛果一枝黄花和猫须草的共提取物。然而，在本发明的一个实施方案中，所述西洋蒲公英的提取物占本发明混合物的23％至33％，所述荞麦的提取物占本发明混合物的12至25％，所述假叶树的提取物占本发明混合物的6％至12％，并且所述毛果一枝黄花和猫须草的提取物为共提取物的形式，其占本发明混合物的35％至55％。在另一个实施方案中，活性成分可以包含如上所述的植物混合物和如上所述的提取物的混合物。根据本说明书，以百分比范围表示的值精确地包括从范围的一端到另一端的所有整数和所有小数，包括极值。因此，当在本发明的本说明书中提及“23％至33％”时，这意味着在说明书的任何点以及在混合物或包含混合物的组合物的任何实施方案中：23％；23.5％；24％；24.5％；25％；25.5％；26％；26.5％；27％；27.5％；28％；28.5％；29％；29.5％；30％；30.5％；31％；31.5％；32％；32.5％；33％；以及其间包括的其它小数。类似地，当在本发明的本说明书中提及“12％至25％”时，这意味着在说明书的任何点以及在混合物或包含混合物的组合物的任何实施方案中：12％；12.5％；13％；13.5％；14％；14.5％；15％；15.5％；16％；16.5％；17％；17.5％；18％；18.5％；19％；19.5％；20％；20.5％；21％；21.5％；22％；22.5％；23％；23.5％；24％；24.5％；25％，以及其间包括的其它小数。当在本发明的本说明书中提及“6％至12％”时，这意味着在说明书的任何点以及在混合物或包含混合物的组合物的任何实施方案中：6％；6.5％；7％；7.5％；8％；8.5％；9％；9.5％；10％；10.5％；11％；11.5％；12％；以及其间包括的其它小数。最后，当在本发明的本说明书中提及“35％至55％”时，这意味着在说明书的任何点以及在混合物或包含混合物的组合物的任何实施方案中：35％；35.5％；36％；36.5％；37％；37.5％；38％；38.5％；39％；39.5％；40％；40.5％；41％；41.5％；42％；42.5％；43％；43.5％；44％；44.5％；45％；45.5％；46％；46.5％；47％；47.5％；48％；48.5％；49％；39.5％；50％；50.5％；51％；51.5％；52％；52.5％；53％；53.5％；54％；54.5％；55，以及其间包括的其它小数。如已经提及的，本发明还涉及组合物，其包含作为唯一活性成分的根据上述任一实施方案的混合物，所述混合物由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成，和至少一种载体或辅料，在一个可替换的实施方案中，本发明还涉及由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草组成的混合物和至少一种载体或辅料，在另一个实施方案中，本发明涉及由西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草以及西洋蒲公英、荞麦、假叶树、毛果一枝黄花和猫须草的提取物组成的混合物。因此，这样的组合物包含作为唯一的活性成分的形成本发明混合物的植物或提取物，并且在本发明的组合物中，猫须草和毛果一枝黄花的提取物可以是共提取物的形式。如上对于混合物所述，本发明的组合物适用于在治疗与淋巴管通透性过高相关的病变。特别地，获得和报道的数据表明本发明混合物用于在与淋巴管通透性过高相关的病变中使用的适用性，特别是对于呈现淋巴内皮完整性失调的病变，并且可以选自例如慢性炎症、淋巴水肿、脂肪水肿和水潴留生理病变，特别是在所述病理生理学与循环停滞、淋巴水肿和/或组织的炎症相关的情况下，例如在肥胖个体中。因此，在本发明的一个实施方案中，所述和要求保护的组合物适用于在治疗与肥胖相关的水潴留病变中使用。类似于本发明的混合物，本发明的组合物特别针对超重/肥胖个体，其希望通过重新平衡组织排液过程，并且特别是参与肥胖相关的水潴留的病理生理学的淋巴系统的正确功能来辅助体重减轻的生理过程，所述参与肥胖相关的水潴留病理生理学也由淋巴内皮的炎症造成和炎性因素造成的其裂隙形成(通透性过高)引起的通透性增加导致。根据本发明的组合物可以是例如植物药物组合物，用于特定医疗目的的食物或膳食补充剂。因此，根据本发明，本发明的组合物可以是这样的组合物，其中所述西洋蒲公英的提取物占混合物活性成分的23％至33％，所述荞麦的提取物占混合物活性成分的12至25％，所述假叶树的提取物占混合物活性成分的6％至12％，并且所述毛果一枝黄花和猫须草的提取物作为整体占混合物活性成分的35％至55％。如上所述，所述毛果一枝黄花和猫须草的所述提取物为共提取物的形式，其占本发明混合物的35％至55％。仍然根据本发明，组合物可以是这样的组合物，其中所述西洋蒲公英占述混合物的12％至33％，所述荞麦占所述混合物的12至25％，所述假叶树占所述混合物的6％至25％，并且所述毛果一枝黄花和猫须草作为整体占所述混合物的35％至55％。在一个优选的实施方案中，所述组合物适合于口服施用，并且是流体、草药茶、汤剂、浸离材料、悬浮剂、溶液剂、颗粒剂、散剂、片剂、盖剂(operculum)、固体明胶、软明胶的形式。根据另一个实施方案，本发明的组合物适合于局部使用，因此可以是流体、可蒸发溶液剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂或乳剂的形式。根据本发明，一种或多种以下成分可用作辅料和/或载体：天然树胶，例如阿拉伯树胶、瓜尔胶、黄原胶；天然和人造甜味剂(蜂蜜、红糖和精制糖)；多糖(纤维素、大米淀粉、马铃薯淀粉、玉米淀粉)；天然蜡，包括巴西棕榈蜡、蜂蜡，天然油，如甜杏仁油、向日葵油，天然来源的乳液(蔗糖酯，硬脂酸酯)以及可由本领域技术人员在不需要创造性劳动的情况下从现有技术中选择的任何其它辅料。此外，根据所描述的实施方案中的任一个，本发明的组合物还可以包含至少一种天然调味剂和/或天然防腐剂。所述天然调味剂和/或所述天然防腐剂可以是本领域技术人员已知的适于提供用于口服使用组合物的任何天然调味剂和/或防腐剂，并且可以选自例如但不限于天然橙调味剂、天然黑莓调味剂、甘草提取物、橙皮、橙汁、橘汁、果汁、葡萄汁、黑莓汁、接骨木汁、蓝莓汁、菠萝汁、葡萄柚汁、醋栗汁、覆盆子汁、苹果汁、柠檬汁。因此，到目前为止对于本发明混合物明确描述的那些适用于(加上必要的变更)本发明的组合物。实施例和方法本文将提供本发明组合物和用于其施用的合适剂量的组合物的实施方案的非限制性实例。1.组合物实施例1流体，单剂量约10-20克组分％天然调味剂/防腐剂93,2-96,3％毛果一枝黄花猫须草共提取物1.5-2.5％荞麦冻干叶提取物1-1.5％假叶树冻干根提取物0,2-0,8％西洋蒲公英冻干根提取物1-2％总计100上述组合物中的天然调味剂和/或防腐剂可以是例如橙汁、葡萄汁、苹果汁、柠檬汁中的一种或多种(任选地一种或多种所述果汁可以是浓缩的)，橙粉、黑莓粉、柠檬粉、橘粉、柑橘粉、菠萝粉、草莓粉、樱桃粉、黑莓、混合浆果粉形式的天然调味剂。这种产品的日剂量等于10-20克。可替换地，上述组合物可以包含比例为约3:1的毛果一枝黄花的提取物和猫须草的提取物的混合物。2.组合物实施例2通过浸泡所使用的植物的粗略斩碎部分制备，单剂量为1.5-2.5g。组分％荞麦粗略斩碎叶7-17毛果一枝黄花粗略斩碎顶部7-17猫须草粗略斩碎叶15-30西洋蒲公英粗略斩碎根5-25假叶树粗略斩碎根3-20辅料和天然调味剂/防腐剂1-50总计100组合物2可以任选地包含约2％至8％的根据本说明书的提取物混合物。上述组合物中的天然调味剂和/或防腐剂可以是例如橙皮、甘草根、柠檬皮中的一种或多种。这种产品的日剂量等于1.5-2.5克。3.组合物实施例3口服固体(粉末、颗粒、胶囊、片剂)的形式，单剂量为80-100mg。上述组合物中的天然调味剂和/或防腐剂可以是例如橙粉、黑莓粉、柠檬粉形式的一种或多种天然调味剂。这种产品的日剂量等于1.0-1.4克实验获得的数据报道在下面并且示出在图中，其表明除了保持正确的通透性之外，用本发明的混合物处理淋巴内皮能够正向调节提供内皮保护的所有特征，而涉及细胞损伤和激活炎性表型的关键酶由混合物进行亚调节，从而使淋巴内皮与炎性发作反应。4.血管通透性测试材料和方法细节细胞培养使用从商业来源获得(可从promocell,germany“humandermallymphaticendothelialcells(hdlec)”和“humandermalbloodendothelialcells(hdbec)”获得)的淋巴内皮细胞(真皮)和血管。在37℃、co25％下利用含有fbs10％完全内皮细胞基础培养基mv2(promocell,heidelberg,germany)根据供应商推荐对细胞进行培养并将其保持在培养中，每周以1:3传代两次，直到第10次。处理在未用和用il1β(10ng/ml)处理的细胞培养物上，对2-3个浓度的样品相对于单独采用载体进行评估，以了解其本身对未损伤细胞是否具有任何影响，以及待测试物质是否能够逆转由il1β引起的通透性升高。因此，对于每种细胞培养物和每种提取物，待评估的点如下：未处理的对照、用载体处理的对照、提取物剂量a、提取物剂量b、il1β、il1β+剂量a、il1β+剂量b，各重复3次。内皮通透性(每次筛选)将保持在具有完全培养基(10％血清)的板中的内皮细胞用胰蛋白酶/edta分离，并以8×104细胞/transwell的密度在适合于12孔多孔板的具有直径为0.4微米的孔的pet中在transwell板上布板。使细胞生长72小时，以形成可在倒置显微镜下评估的完整单层。一旦达到融合，移除培养基，并加入提取物18h。在不改变细胞培养基的情况下，如方案指示的加入il1β(10ng/ml，1h)。一旦刺激时间过去，移除培养基，并将500μlfitch-葡聚糖(3kda，在pbs中稀释的10μm)加入到transwell中，同时将1.5mlpbs引入下面的多板的孔中。每15分钟，从多板的孔取样100μl×3(一式三份)，并取得荧光分光光度法读数(485nm激发，535nm发射)。这使得可以测量已经通过由内皮细胞形成的屏障的fitc-葡聚糖。结果表示为测量的荧光的相对值。对于形成本发明混合物的每种植物，使用每种植物的提取物以及比例为3:1的毛果一枝黄花和猫须草的共提取物进行如上所述的测试。还用根据本发明的提取物的混合物进行测试。如图2至9所示，获得的数据显示暴露于细胞因子的淋巴管的通透性如何保持大于健康内皮的通透性(因此是负面影响)，然而，除了最低测试浓度的猫须草(图3)以外的所有单个提取物在较高浓度下将通透性水平降低到低于基础值，并且荞麦(图9a)仅在最高测试浓度下使通透性恢复至接近基础水平的值，表明与本发明的混合物相比较弱的保护性效果。相反，通过本发明的混合物，淋巴管的通透性被保持在与健康内皮相等的水平。此外，数据显示本发明的混合物对未暴露于测试炎性因子的内皮不具有任何不良影响。特别地，提供了包含毛果一枝黄花和猫须草的共提取物的混合物的图8和9显示本发明混合物的组分的选择如何使得可以获得保持与健康淋巴内皮相似的血管通透性水平的最佳协同效果。5.利尿活性检验将动物饲养在代谢笼(三只小鼠/笼)中，并允许自由进食和饮水(商业化的低矿质水(oligomineralwater))。为了获得类似的水合生理状态，在实验前2小时向所有动物组灌胃给予2.5％体重的低矿质水。然后根据以下处理方案将动物随机分组(9只小鼠/组)：1.untr：未处理组2.h2o：在t＝0时通过胃探针以100微升/小鼠给予低矿质水(阴性对照)3.呋塞米：在t＝0时通过胃探针施以100微升/小鼠给予10mg/kg的溶解在低矿质水中的呋塞米(阳性对照)4-金麒麟草(goldenrod)：在t＝0时通过胃探针以100微升/小鼠给予金麒麟草(200mg/kg体重在低矿质水中)。5-猫须草(orthosiphon)：在t＝0时以100微升/小鼠施用猫须草提取物(200mg/kg体重在低矿质水中)。6-金麒麟草:猫须草(3:1)：在t＝0时通过胃探针以100微升/小鼠施用金麒麟草+猫须草的共提取物(200mg/kg体重在低矿质水中)。为了评估化合物的利尿活性，将尿液样品收集在刻度筒中，并以2h的间隔记录体积，直到共计8小时。尿排泄量与动物重量无关，计算为总尿液除以施用的总液体的体积。尿排泄量＝总尿液的体积(ml/100gbw)/消耗的总液体。获得的数据显示，8小时后的尿液排泄量为200mg/kg金麒麟草等于2ml，200mg/kg猫须草等于2.25ml，200mg/kg的3:1比例共提取的金麒麟草+猫须草等于3ml。未经处理的小鼠中的尿排泄量为约1.9ml，仅用低矿质水处理的小鼠为约2.25ml，用10mg/kg呋塞米处理的小鼠中为约3.9ml。6.ros分析如下进行ros分析，在无酚红的培养基中将hdlec细胞以1.5×103置于96孔板中，在所述细胞贴壁后，用10μg/ml的本发明混合物预处理18小时，然后用il-1β(10ng/ml，1小时)。以10μm的量加入dcfh2-da(2.7-二氯二氢荧光素二乙酸酯invitrogen,米兰,意大利)30分钟，并使用微板读数器(激发/发射495/527，spectrafluor,tecan)光度测定评估细胞内ros水平。将结果记录为对接触细胞数量校正的rfu(相对荧光单位)。7.免疫荧光分析使用共焦分析使细胞表面表达的咬合紧密连接和紧密连接蛋白1(zo-1)的蛋白质可视化。将细胞以5×104在1cm圆形玻璃载片上布板。24小时后，洗涤细胞并用所述的刺激剂处理。如monti等人pharmacolres2013；76:171-81的材料和方法中报道的进行免疫荧光分析。8.western印迹用或不用本发明的混合物(10μg/ml，18小时)处理90％融合度的细胞(3×105/板6cm)，。如terzuoli等人.2014.plosone9:e84358,monti等,2014jpharmacolexpther.；351(3):500-9的材料和方法所述，通过western印记评估炎性通路的标记物(inos、enos、cox-2)表达和抗氧化/促氧化酶促系统的标记物(sod-1、过氧化氢酶、p22phox)的表达。与用作对照的β-肌动蛋白相比，将数据记录为靶蛋白的任意密度测定单位(arbitrarydensitometryunit,a.d.u.)。材料和试剂用于细胞培养的试剂(即芦丁和l-nmma)购自sigmaaldrich(st.louis,mo,usa)。胎牛血清购自hyclone(euroclone,米兰,意大利)。3kdafitc-葡聚糖购自lifetechnologies(carlsbad,ca,usa)。抗zo-1和抗enos购自bdtransductionlaboratories,米兰,意大利。抗闭合蛋白购自zymed-lifetechnologies(carlsbad,ca,usa)。抗inos和抗p22phox购自santacruzbiotechnology,inc.(dallas,tx,usa)。抗cox-2购自caymanchemicalcompany(annarbor,mi,usa)。aanti-sod-1购自millipore(temecula,ca,usa)。抗过氧化氢酶和抗β肌动蛋白购自sigma-aldrich(st.louis,mo,usa)。数据分析和统计程序结果代表对于每种样品一式三份进行的三次独立实验或是其平均值。统计分析使用anova检验，随后适当时地进行bonferroni和studentt检验(graphpad)。p<0.05被认为是统计学显著的。当前第1页12