包含免疫原性蛋白质及组合佐剂并用以诱发抗原特异性T细胞反应的疫苗组合物的制作方法

本发明整体而言是关于疫苗制剂，更具体而言是关于具有组合佐剂的疫苗制剂。

背景技术：

许多疫苗均以佐剂为其关键成分。绝大多数现有疫苗均仅含有单一佐剂。由于其本身限制，任一种佐剂均无法诱发各种疫苗所需的全部保护免疫反应。因此需要探求在疫苗制剂中包含多种佐剂的技术。

技术实现要素：

一方面，本发明是关于一种疫苗组合物，其包含：

(a)治疗有效量的免疫原性蛋白质，其至少包含病原体的抗原；

(b)基于皂苷的佐剂(saponin-baseadjuvant)，其选自以下项目所构成群组：gpi-0100、quila及qs-21；以及

(c)toll样受体激动剂佐剂[toll-likereceptor(tlr)agonistadjuvant]，其选自以下项目所构成群组：单磷酰脂质a(monophosphoryllipida,mpl)及cpg1826。

在本发明另一实施方式中，该组合物进一步包含至少一种添加剂，该添加剂选自以下项目所构成群组：甘露醇(mannitol)、蔗糖(sucrose)、海藻糖(trehalose)、组氨酸(histindine)、甘氨酸(glycine)、精氨酸(arginine)、山梨糖醇(sorbitol)、聚山梨醇酯80(polysorbate80)、葡萄糖(glucose)、乳糖(lactose)、麦芽糖(maltose)、麦芽糊精(maltodextrins)、柠檬酸盐(citrate)、三羟甲基氨基甲烷(tris)及磷酸钠(sodiumphosphate)。

在本发明另一实施方式中，该免疫原性蛋白质是融合蛋白，其包含：

(a)抗原呈递细胞(apc)结合域[antigen-presentingcell(apc)-bindingdomain]或cd91受体结合域(cd91receptor-bindingdomain)，位于该融合蛋白的n端；

(b)蛋白质转导结构域(proteintransductiondomain)，位于该apc结合域或该cd91受体结合域的c端，该蛋白质转导结构域选自以下项目所构成群组：

(i)融合多肽包含：

(1)t细胞致敏信号转导肽(tcellsensitizingsignal-transducingpeptide)，在长度上具有28-53个氨基酸残基，包含seqidno:31的氨基酸序列，其中xaa⁸为i或l；xaa¹⁰为v、f或a，xaa¹¹为m或l，xaa¹⁷为l或i，位于该融合多肽的n端；

(2)转位肽(translocationpeptide)，在长度上具有34-112个氨基酸残基，包含与seqidno:3、20、4、或41具有至少90％同一性的氨基酸序列；以及

(3)连接子(linker)，包含seqidno:15，链接该t细胞致敏信号转导肽与该转位肽；

(ii)t细胞致敏信号转导肽，在长度上具有28-53个氨基酸残基，包含seqidno:31的氨基酸序列，其中xaa⁸为i或l；xaa¹⁰为v、f或a，xaa¹¹为m或l，xaa¹⁷为l或i；以及

(iii)转位肽，在长度上具有34-61个氨基酸残基，包含与seqidno:3、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列；以及

(c)病原体的抗原，位于该蛋白质转导结构域的c端；

其中如果该蛋白质转导结构域为(biii)的转位肽，则该apc结合域或该cd91受体结合域不含绿脓杆菌外毒素a(pseudomonasexotoxina,pe)结合域ia的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该蛋白质转导结构域包含seqidno:30的序列。

在本发明另一实施方式中，该apc结合域或该cd91受体结合域是多肽，其包含与选自以下项目所构成群组的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：seqidno:5、9、6、7及8。

在本发明另一实施方式中，该apc结合域或该cd91受体结合域包含与选自以下项目所构成群组的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列：seqidno:5、9、6、7及8。

在本发明另一实施方式中，该apc结合域或该cd91受体结合域是多肽，其包含选自以下项目所构成群组的序列的氨基酸序列：seqidno:5、9、6、7及8。

可选地，该apc结合域选自以下项目所构成群组：受体相关蛋白质-1(receptor-associatedprotein-1,rap1)结构域iii、α-2-巨球蛋白受体相关蛋白质(alpha-2-macroglobulinreceptor-associatedprotein,a2m)、hiv-tat，及热休克蛋白(heatshockproteins,hsps)，以及绿脓杆菌外毒素a(pe)结合域ia。

在本发明另一实施方式中，该融合蛋白不含绿脓杆菌外毒素a(pe)结合域ia的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该融合蛋白进一步包含内质网滞留序列，位于该融合蛋白的c端。

在本发明另一实施方式中，该内质网(er)滞留序列包含lys-asp-glu-leu(seqidno:14)的氨基酸序列。er滞留序列可包含选自以下项目所构成群组的序列：seqidno:14、16-19。可选地，该er滞留序列可包含选自以下项目所构成群组的序列：seqidno:16-19。

在本发明另一实施方式中，如果该抗原包含10个或更多表位(epitopes)，则该融合蛋白的c端不具有内质网滞留序列。

在本发明另一实施方式中，该蛋白质转导结构域为(bi)的融合多肽。

在本发明另一实施方式中，该蛋白质转导结构域为(bii)的t细胞致敏信号转导肽。

在本发明另一实施方式中，该融合蛋白进一步包含额外连接子，其位于该蛋白质转导结构域与该抗原之间，该额外连接子包含seqidno:15。

在本发明另一实施方式中，该蛋白质转导结构域为(biii)的转位肽。

在本发明另一实施方式中，该融合蛋白进一步包含额外连接子，其位于该apc结合域或该cd91受体结合域与该转位肽之间，该额外连接子包含seqidno:15。

在本发明另一实施方式中，该蛋白质转导结构域包含seqidno:30的序列。

在本发明另一实施方式中，该t细胞致敏信号转导肽包含与seqidno:1或2具有至少90％同一性的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该t细胞致敏信号转导肽包含选自以下项目所构成群组的氨基酸序列：seqidno:1及2。

在本发明另一实施方式中，该转位肽包含选自以下项目所构成群组的氨基酸序列：seqidno:3、20、4及41。

在本发明另一实施方式中，该转位肽在长度上具有34-61个氨基酸残基。

在本发明另一实施方式中，上述融合蛋白的蛋白质转导结构域具有以下特性：(i)该t细胞致敏信号转导肽包含seqidno:1或2的氨基酸序列；以及(ii)该转位肽包含与seqidno:3具有至少95％同一性的氨基酸序列。

该t细胞致敏信号转导肽展现诱发抗体的特征，该抗体可识别并结合t细胞上cd28受体的氨基酸序列k¹x²e³x⁴x⁵y⁶p⁷p⁸p⁹y¹⁰(seqidno:32)，其中x²为i或l；x⁴为v、f或a，且x⁵为m或l。

抗原呈递细胞(apc)可选自以下项目所构成群组：树突细胞、巨噬细胞、b细胞及单核血球。

在本发明一个实施方式中，apc的细胞膜包含cd91受体。

在本发明另一实施方式中，该病原体为至少一种选自以下项目所构成群组：人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,hpv)、猪生殖与呼吸综合症病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,prrsv)、人类免疫缺陷病毒(humanimmuno-deficientvirus,hiv-1)、流感病毒(influenzavirus)、登革热病毒(denguevirus)、丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus,hcv)、乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus,hbv)及猪圆环病毒2(porcinecircovirus2,pcv2)。

在本发明一个实施方式中，该病原体抗原选自以下项目所构成群组：人乳头瘤病毒(hpv)e7蛋白质、乙型肝炎病毒(hbv)hbx蛋白质、丙型肝炎病毒(hcv)核心抗原、流感病毒m2抗原以及肿瘤相关抗原。

在本发明一个实施方式中，该hpve7蛋白质包含与seqidno:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该肿瘤相关抗原选自以下项目所构成群组：ssx2、mage-a3、ny-eso-1、ilrp、wt12-281、rnf43(2-116+696-783)及cea-ne3。

在本发明另一实施方式中，该抗原为hpve7抗原，包含与选自以下项目所构成群组的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：seqidno:21及22。在本发明一个优选实施方式中，该抗原为hpve7抗原，其包含seqidno:21的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该融合蛋白进一步包含内质网滞留序列，其位于该融合蛋白的c端。

在本发明一个实施方式中，该免疫原性蛋白质为融合蛋白，其包含seqidno:54的序列。例如，该免疫原性蛋白质可为融合蛋白pe407-e7-k3(seqidno:54)。

在本发明另一实施方式中，该免疫原性蛋白质为融合蛋白，其包含seqidno:55的序列。例如，该免疫原性蛋白质可为融合蛋白rap1-cd28convpet-e7-k3(seqidno:55)。

在本发明另一实施方式中，该免疫原性蛋白质为融合蛋白，其包含：

(a)抗原呈递细胞(apc)结合域或cd91受体结合域，位于该融合蛋白的n端；

(b)转位肽，在长度上具有34-112个氨基酸残基，包含与seqidno:3、4、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列，位于该apc结合域或该cd91受体结合域的c端；

(c)病原体的抗原；

(d)核输出信号(nuclearexportsignal,nes)，包含seqidno:44的氨基酸序列；以及

(e)内质网滞留序列，位于该融合蛋白的c端；

其中该核输出信号位于该抗原与该内质网滞留序列之间，或该转位肽与该抗原之间。

在本发明另一实施方式中，该免疫原性蛋白质为融合蛋白，其包含：

(a)抗原呈递细胞(apc)结合域或cd91受体结合域，位于该融合蛋白的n端；

(b)转位肽，在长度上具有34-61个氨基酸残基，包含与seqidno:3、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列，位于该apc结合域或该cd91受体结合域的c端；

(c)病原体的抗原；

(d)核输出信号，包含seqidno:44的氨基酸序列；以及

(e)内质网滞留序列，位于该融合蛋白的c端；

其中该核输出信号位于该抗原与该内质网滞留序列之间，或该转位肽与该抗原之间。

在本发明另一实施方式中，该seqidno:44的c端氨基酸为丙氨酸(alanine)。

在本发明另一实施方式中，该核输出信号包含seqidno:45的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该内质网滞留序列包含seqidno:14的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该核输出信号及该er滞留序列形成融合肽，其为包含与seqidno:43具有至少90％同一性的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该转位肽在长度上具有34-61个氨基酸残基。

在本发明另一实施方式中，该转位肽在长度上具有34-46个氨基酸残基。

在本发明另一实施方式中，该apc结合域或该cd91受体结合域不含绿脓杆菌外毒素a(pe)结合域ia的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该apc结合域或该cd91受体结合域包含seqidno:5的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该apc结合域或该cd91受体结合域的氨基酸序列为seqidno:9。

在本发明另一实施方式中，该抗原是来自病原体的两个或多个抗原肽的融合抗原。

在本发明另一实施方式中，该er滞留序列的长度超过4个氨基酸残基。

在本发明另一实施方式中，该转位肽包含与seqidno:3、4、20或41具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在本发明另一实施方式中，该apc结合域或该cd91受体结合域展现能够识别并结合抗原呈递细胞(apc)上受体的特性，该抗原呈递细胞(apc)选自以下项目所构成群组：树突细胞、单核血球、b细胞及淋巴细胞。

在本发明另一实施方式中，该病原体选自以下项目所构成群组：猪生殖与呼吸综合症病毒(prrsv)、猪圆环病毒2(pcv2)、口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,fmdv)、猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,csfv)、新城鸡瘟病毒(newcastlediseasevirus,ndv)、传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritisvirus,tgev)、猪流行性下痢病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,pedv)、流行性感冒病毒、假性狂犬病病毒(pseudorabiesvirus)、微小病毒(parvovirus)、猪水疱病病毒(swinevesiculardiseasevirus,svdv)、痘病毒(poxvirus)、轮状病毒(rotavirus)、肺炎霉浆菌(mycoplasmapneumonia)、疱疹病毒(herpesvirus)、传染性支气管炎病毒(infectiousbronchitisvirus)及传染性华氏囊病病毒(infectiousbursaldiseasevirus)。

该疫苗组合物可采肠胃外给药剂型，例如皮下或肌内注射。

另一方面，本发明关于上述组合物在制造一种药剂中的用途，所述药剂用以在有此需要的患者中诱发病原体抗原特异性t细胞介导免疫反应。

可选地，另一方面，本发明关于上述组合物在有此需要的患者中诱发病原体抗原特异性t细胞介导免疫反应的用途。

进一步可选地，本发明关于一种在有此需要的患者中诱发经强化的抗原特异性t细胞介导免疫反应的方法，其包括对有此需要的患者中施用治疗有效量的上述组合物，由此在有此需要的患者中诱发经强化的抗原特异性t细胞介导免疫反应。

上述及其他方面将通过以下优选实施例的描述参照以下附图描述，根据其所作的变化及修改均应属于本发明新颖概念的精神及范畴。

附图阐明本发明的一种或多种实施例，并配合书面叙述共同说明本发明的原理。各附图中以相同的附图标记指代实施例中相同或相似的组件。

附图说明

图1为构建体示意图。

图2的表格显示各种疫苗组合物诱发的细胞介导免疫原性。

图3的表格显示各种疫苗组合物诱发的体液免疫原性。

图4显示免疫接种程序。

图5a的图表显示基于皂苷的佐剂gpi-0100与tlr激动剂佐剂对刺激免疫原性蛋白质pe407-e7-k3所诱发t细胞介导免疫反应上的相互作用。

图5b为将图5a的数据以gpi-0100(50微克/剂)为基准进行标准化后的图表。

图6的图表显示图5a动物组的抗体效价。

图7a的图表显示基于皂苷的佐剂qs-21与tlr激动剂佐剂对刺激免疫原性蛋白质pe407-e7-k3所诱发t细胞介导免疫反应的相互作用。

图7b为将图7a的数据以qs-21(10微克/剂)为基准进行标准化后的图表。

图7c为将图7a的数据以gpi-0100(100微克/剂)为基准进行标准化后的图表。

图8的图表显示图7a动物组的抗体效价。

图9的图表显示各种疫苗制剂诱发的t细胞介导免疫反应。

图10a的表格显示多种包含免疫原性蛋白质及一种或两种佐剂的疫苗制剂。

图10b为肿瘤小鼠模型的免疫接种程序。

图11的图表显示经pe407-e7-k3结合各种佐剂(n＝4)接种的动物组肿瘤大小曲线。安慰剂组施用pbs(亦即无佐剂及pe407-e7-k3)。

具体实施方式

本发明将于以下实例详细描述，此处所举实例仅为说明之用，本领域的技术人员应可由此想到多种修改与变化。在此详述本发明的各种实施例。在附图中，类似的组件标以类似的编号。在本说明书及所附的权利要求书中，除非前后文另有指明，否则“一”、“一种”及“该”的意义包括复数。同样，本说明书及所附的权利要求书中，除非前后文另有指明，否则“在…内”的意义包括“在…内”及“在…上”。此外，说明书中所用的标题或副标题仅为方便读者参照，不应影响本发明的范围。此说明书中所用的其他术语将于下文明确体定义。

定义

本说明书中所用术语普遍具有其在此技术中针对本发明相关用途及各术语所用上下文所应理解的通常意义。以下就某些用于描述本发明的术语进行说明，以利于读者了解本发明的描述。为求便利，某些术语可能带有强调性标示，例如使用斜体字和/或引号。强调性标示的使用并不影响术语的范围及意义；术语的范围及意义在相同的上下文中不论有无强调性标示均为相同。应理解相同的事物可通过多种方式表述。因此，在此所讨论的一个或多个术语可能使用替代性用语及同义词，术语在此阐述或讨论与否并非表示该术语有无特殊重要性。在此提供特定术语的同义词。对于一种或多种同义词的使用并非排除其他同义词的使用。本说明书中各处使用的实例，包括在此所述的术语范例，均仅属说明用途，不应对本发明或任何例示的术语的范围及含义构成限制。同理，本发明并不受限于本说明书中所提出的各种实施例。

除非另有定义，否则在此使用的所有技术及科学术语均具有本发明所属技术领域人员通常理解的含义。若有抵触，应以本文件及其所提供的定义为准。

美国专利申请公开案第20140154285a1号及第20140154280a1号中所述将例如融合蛋白等免疫原性蛋白质使用作为免疫原性增强剂，用以诱发抗原特异性t细胞反应，各案整体在此通过引用并入本文。

toll样受体(tlr)4配体，特别是激动剂(agonist)，例如脂质a衍生物，具体而言是单磷酰脂质a(monophosphoryllipida)，或更具体而言是3脱酰单磷酰脂质a(3deacylatedmonophoshoryllipida,3d-mpl)。glaxosmithklinebiologicalsn.a.所销售的3d-mpl以mpl为名，而在本说明书中将其称为mpl或3d-mpl。

美国专利第5,057,540号、kensil,c.r.发表的“皂苷作为疫苗佐剂(saponinsasvaccineadjuvants)”(critrevtherdrugcarriersyst,1996,12(1-2):1-55)以及ep0362279b1，均对quila[取自南美皂树(quillajasaponariamolina)的树皮]及其分离部分有所描述。

qs-21为取自南美皂树树皮的天然皂苷。qs-21为quila的hplc纯化无毒分离部分，在美国专利第5,057,540号中有所描述。

术语“抗原呈递细胞(apc)或辅助细胞(accessorycell)”意指能够展现与其表面上主要组织相容性复合体(mhc)复合的外来抗原的细胞。t细胞可利用其细胞受体(tcr)识别该复合体。该细胞处理抗原并将其呈递给t细胞。专门的抗原呈递细胞的主要种类包括：树突细胞(dc)、巨噬细胞、单核血球及特定b细胞。

术语“抗原呈递细胞(apc)结合域”意指可结合至抗原呈递细胞(apc)的结构域。apc结合域可为一种多肽，其包含与选自以下项目所构成群组的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：seqidno:5、6、7、8及9。apc结合域为能够识别并结合apc上受体的配体。

分化簇91(clusterofdifferentiation91,cd91)为可形成细胞膜中的受体，并参与受体介导的内吞作用(receptor-mediatedendocytosis)的蛋白质。

术语“蛋白质转导结构域”意指多肽或融合多肽，其可致敏t细胞，并从而强化抗原特异性t细胞反应，和/或将抗原导引或指向(亦即靶向)抗原呈递的第一型主要组织相容性复合体(mhc-i)路径(亦即胞毒性t细胞路径)。

术语“致敏t细胞”普遍是指cd8+及cd4+t细胞受到致敏作用影响，且因此cd8+(ctl)及cd4+t细胞对于抗原激发的反应受到强化。抗原特异性细胞介导免疫反应的测量方式将对抗原反应时所产生的抗原特异性诱导的γ-干扰素(γ-interferon)量化。例如，如果没有致敏信号(亦即无蛋白质转导结构域)，抗原独自作用可能仅产生微弱或甚至完全无法产生细胞介导免疫反应，亦即，cd8+及cd4+t细胞仅产生少量或甚至完全不产生抗原特异性的γ-干扰素，而如果配合致敏信号(蛋白质转导结构域)，抗原便可产生经强化的细胞介导免疫反应。因此，致敏信号(蛋白质转导结构域)的功能在于提升cd4+及cd8+t细胞在宿主体内的敏感度，而使宿主在其后受抗原刺激时，因cd4+及cd8+t细胞事先已经致敏化，故而该抗原可诱导经强化的抗原特异性t细胞介导免疫反应。

蛋白质转导结构域可为“融合多肽”，其中融合多肽包含t细胞致敏信号转导肽、连接子以及转位肽。例如，该融合多肽可为“cd28convpet”多肽。

术语“cd28conv”意指cd28保留区域，其为“t细胞致敏信号转导肽”。此为诱发cd28激动剂抗体(cd28agonistantibody)的表位。

术语“pet”或“petcore”意指长度上包含34个氨基酸残基的pe转位结构域核心。

“cd28conv”与“pet”之间有连接子。融合多肽“cd28convpet”的方向或排列十分重要，因为“cd28conv”(或t细胞致敏信号转导肽)必须位于pet(或转位肽)的上游，亦即，pet必须位于“cd28conv”的c端才能强化t细胞反应。特别地，“cd28convpet”对cd28conv产生的igg效价(称为cd28特定激动剂抗体)远高于反向融合肽petcd28conv。cd28特定激动剂抗体对cd4+及cd8+t细胞均能产生致敏作用。正确定向的融合多肽cd28convpet在cd28conv与pet区域之间有一个连接子(r¹x²r³x⁴k⁵r⁶)。此连接子包含抗原呈递细胞(apc)特定蛋白酶(组织蛋白酶l)切位点lys-arg(kr)。因此，融合蛋白rap1-cd28convpet-抗原-k3可被消化为两个片段：rap1-cd28conv及pet-抗原-k3。rap1-cd28conv片段可进一步在溶酶体中消化，且cd28conv的表位经由mhcii路径呈递至apc细胞表面，进而诱发产生cd28激动剂抗体的体液免疫反应。因此，cd28激动剂抗体是由b细胞产生。该cd28激动剂抗体可结合至t细胞表面的cd28，并预先活化t细胞(cd4+及cd8+t细胞)。

“t细胞致敏信号转导肽”在长度上具有28-53个氨基酸残基且包含与seqidno:31具有至少90％同一性的氨基酸序列，其中x⁸为i或l；x¹⁰为v、f或a，x¹¹为m或l，x¹⁷为l或i。

t细胞致敏信号转导肽包含主要区k¹x²e³x⁴x⁵y⁶p⁷p⁸p⁹y¹⁰(seqidno:32)，其中x²为i或l；x⁴为v、f或a，x⁵为m或l。

美国专利第20140154285a1号提及特定用于小鼠的t细胞致敏信号转导肽(tdiyfckiefmypppyldneksngtiih；seqidno:31，其中x⁸为i，x¹⁰为f，x¹¹为m，x¹⁷为l)。

pe转位肽可包含与seqidno:3、4、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列。例如，pe转位肽的氨基酸序列可为全长pe(seqidno:10)的a.a.280-a.a.313(seqidno:3)、a.a.268-a.a.313(seqidno:20)、a.a.253-a.a.313(seqidno:41)或a.a.253-a.a.364(seqidno:4)。亦即，pe转位肽的氨基酸序列可包含pe结构域ii(a.a.253至a.a.364；seqidno:4)的任何部位，只要其包含a.a.280-a.a.313(seqidno:3)必要片段即可。

抗原可为致病蛋白、多肽或肽，其可引起因病原体造成的疾病，或能够在受病原体或肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen,taa)感染的宿主体内诱发免疫反应，所述肿瘤相关抗原(taa)为明确表达于肿瘤细胞中的多肽。抗原可选自病原体或癌细胞，包括但不限于，人乳头瘤病毒(hpv)、猪生殖与呼吸综合症病毒(prrsv)、人类免疫缺陷病毒-1(hiv-1)、流感病毒、登革热病毒、丙型肝炎病毒(hcv)、乙型肝炎病毒(hbv)、猪圆环病毒2(pcv2)、猪瘟病毒(csfv)、口蹄疫病毒(fmdv)、新城鸡瘟病毒(ndv)、传染性胃肠炎病毒(tgev)、猪流行性下痢病毒(pedv)、流行性感冒病毒、假性狂犬病病毒、微小病毒、猪水疱病病毒(svdv)、痘病毒、轮状病毒、肺炎霉浆菌、疱疹病毒、传染性支气管炎病毒、传染性华氏囊病病毒、非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer)、乳腺癌(breastcarcinoma)、黑色素瘤(melanoma)、淋巴瘤(lymphomas)、大肠癌(coloncarcinoma)、肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma)及其任何组合。例如，hpve7蛋白质(e7)、hcv核心蛋白(hcv核心)、hbvx蛋白质(hbx)为疫苗开发所选用的抗原。抗原可为两种或更多种选自一种或多种致病蛋白的抗原所融合而成的融合抗原。例如，prrsvorf6与orf5片段的融合抗原，或prrsv与pcv2病原体的抗原蛋白融合。

内质网滞留序列的作用在于协助抗原自胞吞区室(endocytoticcompartment)转位进入er，并使其保留在内腔中。其包含序列lysaspgluleu(kdel)或rdel。er滞留序列可包含kkdlrdelkdel(seqidno:16)、kkdelrdelkdel(seqidno:17)、kkdelrvelkdel(seqidno:18)或kdelkdelkdel(seqidno:19)的序列，或是主要由上述序列所构成，或是由上述序列所构成。

分子量39kda的受体相关蛋白质(rap1)为er常驻蛋白(erresidentprotein)及ldl受体相关蛋白质的分子伴侣(molecularchaperone)。其对于cd91(kd～3nm)的结合亲和力极高，且由三个具有类似功能的区域组成。

pe407(seqidno.40)在前案专利(us7,335,361b2)中称为pe(δiii)。

核输出信号(nes)意指蛋白质中4个疏水性残基的短氨基酸序列，将其标定以利用核运输从细胞核经核孔复合体输出至细胞质。输出蛋白(exprotins)识别并结合nes。最常见的疏水性残基间隔为l¹x²x³k⁴l⁵x⁶x⁷l⁸x⁹l¹⁰x¹¹(seqidno.44)，其中“l”为亮氨酸，“k”为赖氨酸，且“x^2,3,6,7,9,11”为任何自然产生的氨基酸。例如，人造nes可包含序列leuglnlyslysleuglugluleugluleuala(lqkkleelela；seqidno:45)。

术语“nesk”意指nes与er滞留信号的融合肽(亦即，nes融合至er滞留信号)。其为人工肽，负责处理核输出信号(nes)和er滞留序列功能。因此，其可从细胞核将抗原经核孔复合体输出至细胞质，并协助抗原从细胞质转位至er并将抗原保留于er的内腔内。例如，nesk的氨基酸序列可为lqkkleelelakdel(seqidno:43)。

术语“患者”意指人类或非人类动物。

术语“治疗”意指对于具有癌症或感染的患者，或有罹此疾病症状或倾向的人，施予有效量的融合蛋白，以期治愈、缓和、解除、医治、改善或预防该疾病、其症状或其倾向。该病患可由医疗专业人士依据任何适当诊断方法的结果而判定。

术语“有效量”意指在受治疗对象身上产生疗效所需活性化合物的用量。如本领域的技术人员所知，有效剂量依据给药路径、赋形剂使用及是否与其他治疗方式同时使用而异。

缩写：cd28，分化簇28。

实施例

以下依据本发明实施例提供示范性仪器、装置、方法及其相关结果，但不构成对于本发明范围的限制。应知晓实例中为便于阅读，可能加注标题或副标，其不应限制本发明的范围。此外，下文提出特定并公开特定理论，然而其不论对错，只要本发明的实施不受影响，不论任何特定理论或行动方案均不应限制本发明的范围。

免疫原性蛋白质制备：

免疫原性蛋白质在大肠杆菌表达系统中表达。其可能仅为抗原，或为抗原及er滞留信号(k3)融合到绿脓杆菌外毒素a结构域i及ii(亦即pe407)的c端，以产生pe407-(抗原)-k3融合蛋白，或为抗原及er滞留讯号融合到rap1-cd28convpet融合蛋白的c端，以产生rap1-cd28convpet-(抗原)-k3融合蛋白(图1)。在此所用抗原为e7抗原，且以下实验使用产生的两种融合蛋白pe407-e7-k3(seqidno:54)及rap1-cd28convpet-e7-k3(seqidno:55)。

不同免疫原性组合物的免疫原性分析：

e7免疫原性蛋白质(包括e7抗原、pe407-e7-k3融合蛋白或rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白)被搭配以不同的佐剂，如铝盐(alum)、gpi-0100或qs-21，并于小鼠身上测试其免疫原性。所有免疫原性蛋白质与铝盐、gpi-0100或qs-21结合时均可能诱发中度至强度e7抗原特定体液免疫反应。e7抗原或pe407-e7-k3融合蛋白结合gpi-0100或qs-21时，可诱发轻度至重度的e7抗原特定细胞介导免疫反应。另一方面，rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白如果结合铝盐、gpi-0100及qs-21时，可诱发中度至强度细胞介导免疫反应。上述结果显示gpi-0100及qs-21为较能刺激体液免疫反应及细胞介导免疫反应两者的佐剂。此外，pe407-e7-k3或rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白仅有在与基于皂苷的佐剂(如gpi-0100或qs-21)结合时，才能诱发比e7抗原更强的反应。

t细胞介导免疫反应的动物研究

从乐斯科生物科技股份有限公司购入5周龄雌性小鼠c57bl/6。每笼5只给予12小时昼/12小时夜照明周期。供其自由取用食物饮水，豢养一周并于实验前维持标准条件。用于实验的免疫原性蛋白质为生控基因疫苗股份有限公司所生产，经冻干的pe407-e7-k3(seqidno:54)，每瓶含0.6毫克蛋白质。佐剂如下：gpi-0100(hawaiibiotech)；mpl(cat.no.699800p，avanti)；polyi：c(cat.no.tlrl-pic-5，invivogen)；r837(cat.no.tlrl-imqs，invivogen)；r848(cat.no.tlrl-r848，invivogen)；cpg1826(cat.no.tlrl-1826，invivogen)；以及实验室级qs-21(thevax)。

免疫接种程序示于图4。小鼠于3周期间每周一次以表1及图5a-b、7a-c所示的疫苗制剂接种。所有小鼠于最后一次免疫接种完的7天后处死，收取脾脏。将脾细胞分离出来。

佐剂制剂

评估表1所列佐剂制剂以调查免疫原性组合物的最佳免疫反应。

表1

cd8⁺细胞的胞内细胞激素染色。

在6孔平底组织培养盘装入脾细胞(2*10⁷)并于37℃培养两小时，加入或不加入1微克/毫升hpv16-e7肽(其为全长pe的第49-57个氨基酸)及布雷非德菌素a(brefeldina)以及莫能菌素(monensin)，以增加细胞中细胞激素的累积，提升对于细胞激素产生细胞(cytokine-producingcell)的可检测性。经培养后，以300×g离心5分钟将细胞移入试管。弃置上清液，大致震荡混合孔盘内容物，然后以每一样本0.2毫克的荧光素异硫氰酸酯共轭(fluoresceinisothiocyanate-conjugated)抗小鼠cd8(复制体53-6.7，ebioscience)及抗小鼠cd3(复制体17a2，biolegend)进行表面标记物染色30分钟。在黑暗中于冰上以1毫升荧光流式细胞分选仪(facs)缓冲液(1％fbs于pbs中)及ic固定溶液(ebioscience)清洗细胞30分钟，之后再次悬浮于1毫升细胞透化清洗缓冲液(biolegend)。将细胞以permwash(bdpharmingen)清洗两次，而后以0.2毫克/样本的比例，在黑暗中于冰上以在细胞透化清洗缓冲液中稀释的异藻蓝蛋白共轭(allophycocyanin-conjugated)抗小鼠ifn-γ(复制体xmg1.2，ebioscience)对胞内ifn-γ进行染色30分钟。将细胞再次悬浮于1毫升facs缓冲液中，然后使用facscalibur流式细胞仪加以分析。

在免疫原性检验中，通过测量脾细胞中的cd3+/cd8+/ifn+t细胞数量评估各种疫苗制剂所诱发的抗原特异性t细胞介导免疫反应。图5a显示以各种疫苗制剂治疗的动物组每2*10⁷脾细胞中的e7特定cd8+/ifn+双阳性cd3+t细胞百分比。将各组数据与以pe407-e7-k3与50微克/剂的gpi-0100组合治疗的动物组的数据进行比较(图5b)。数据显示gpi-0100结合mpl或cpg1826可将免疫原性蛋白质诱发的t细胞介导免疫反应强化2至3倍。

图7a显示以不同疫苗制剂接种的动物组每2*10⁷脾细胞中的e7特定cd8+/ifn+双阳性cd3+t细胞百分比。将各组数据与以pe407-e7-k3与qs-21(10微克/剂；图7b)或gpi-0100(100微克/剂；图7c)组合治疗的动物组数据进行比较。数据显示，相较于仅含单一佐剂qs-21(10微克/剂)的疫苗组合物，qs-21结合mpl(10微克/剂)或cpg1826(10微克/剂)可将免疫原性蛋白质pe407-e7-k3诱发的t细胞介导免疫反应强化3至4倍(图7b)。此外，由包含组合佐剂qs-21及mpl或qs-21及cpg1826的疫苗制剂于动物组所诱发的t细胞介导免疫反应为仅包含单一佐剂gpi-0100(100微克/剂)(图7c)的疫苗制剂的8倍。

体液免疫性的研究

以如上所述的方式对动物进行接种并收集血清样本。将每一动物于各收集时点的血清样本在阻断缓冲液中稀释一万倍。使用elisa法测定hpv16e7特定igg程度(涂覆e7pet32a1微克/孔)。

图6显示疫苗组合物使用单一tlr激动剂佐剂时，仅诱发少量抗体，但如果以tlr激动剂佐剂配合基于皂苷的佐剂gpi-0100(50微克/剂)使用，则在第三次免疫接种后于小鼠身上诱发大量抗体。

图8显示疫苗组合物使用单一tlr激动剂佐剂时，仅诱发少量抗体，但如果以tlr激动剂佐剂配合基于皂苷的佐剂qs-21(10微克/剂)使用，包含qs-21+mpl或qs-21+cpg1826两种佐剂的制剂在对动物组进行第二次免疫接种后，在动物体内产生大量抗体(数据未示出)。qs-21结合所有tlr激动剂佐剂均于第三次免疫接种后产生大量抗体。数据显示qs-21或gpi-0100与polyi:c的组合并没有强化qs-21或gpi-0100的效果，因此gpi-100或qs-21可能是经由tlr3相关机制运作。咪唑喹啉佐剂(r837、r848)的作用路径与cpg1826相同，但却展现完全不同的t细胞介导免疫性。至于咪唑喹啉是否能够经由k细胞和/或巨噬细胞作用则仍有待调查。

不同平台融合蛋白所诱发的t细胞介导免疫原性反应

进一步利用上述发现的最佳佐剂组合检验不同免疫原性蛋白质pe407-e7-k3及rap1-cd28convpet-e7-k3所诱发的t细胞介导免疫原性反应，并执行与图5a所示相同的免疫原性测定。从乐斯科生物科技股份有限公司购入5周龄小鼠57bl/6。免疫接种程序与图4所示相同。表2显示用于此研究的疫苗制剂。

图9显示融合蛋白rap1-cd28convpet-e7-k3诱发的t细胞介导免疫反应较融合蛋白pe407-e7-k3强。然而，不论使用何种佐剂组合，两种平台所诱发的t细胞介导免疫反应的模式相似。

表2

tc-1肿瘤动物模型的研究

疫苗：100微克的pe407-e7-k3与不同佐剂或其组合配制成剂。疫苗制剂如图10a所示。以tc-1细胞株(5*10⁴细胞/小鼠，皮下注射)刺激7天之后，每7天对小鼠接种疫苗一次，共计三次(图10b)。结果显示相较于单一佐剂gpi-0100(100微克/剂)，组合佐剂qs-21(10微克/剂)与mpl(10微克/剂)、qs-21(10微克/剂)与cpg1826(10微克/剂)、gpi-0100(50微克/剂)与mpl(50微克/剂)，或gpi-0100(50微克/剂)与cpg1826(50微克/剂)更能够有效抑制tc-1肿瘤细胞的生长(图11)。

表3显示各种融合蛋白成分的序列标识符(seqidno.)。

表4显示在动物体内测试t细胞介导免疫反应效果的融合蛋白及抗原序列。

表3

*：粗体字代表人工核输出信号的氨基酸序列；带下划线的字代表内质网滞留信号的氨基酸序列。

**：vp1-3a肽(seqidno:50)是由vp1的a.a.127-a.a.176与3a的a.a.21-a.a.35所组成的融合抗原；亦即fmdvvp1肽(seqidno:48)与fmdv3a肽(seqidno:49)的融合蛋白。

***：fhn肽(seqidno:53)是由融合蛋白的a.a.65-a.a.82与血球凝集素神经氨酸酶的a.a.101-a.a.111所组成的融合抗原；亦即，ndvf肽(seqidno:51)与ndvhn肽(seqidno:52)的融合蛋白。

表4

上述实施例及实例的选择及描述用以说明本发明的原理及其实际应用，以利于本领域的技术人员运用本发明及各种实施例，并就实际使用需要进行适当的各种修改。熟悉本发明所属领域技术的人员应可轻易想到不脱离本发明精神及范畴的替代实施例。本说明书中引述及讨论的所有参考文献均以其整体于此合并参照，如同其各自于此提及而并入本说明书的程度。

序列表

<110>生控基因疫苗股份有限公司

<120>包含免疫原性蛋白质及组合佐剂并用以诱发抗原特异性t细胞反应的疫苗组合物

<130>10021-004pct

<150>us/62121406

<151>2015-02-26

<160>55

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>28

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>hcd28核心

<400>1

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151015

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<210>2

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<220>

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<400>2

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<210>3

<211>34

<212>prt

<213>人工序列

<220>

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<400>3

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<212>prt

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<220>

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151015

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<213>人工序列

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<400>5

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151015

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<210>6

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<213>人工序列

<220>

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151015

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505560

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65707580

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115120125

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130135140

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145150

<210>7

<211>24

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>hiv-tat最小

<400>7

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151015

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20

<210>8

<211>641

<212>prt

<213>人工序列

<220>

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<400>8

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151015

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165170175

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180185190

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450455460

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465470475480

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<210>9

<211>252

<212>prt

<213>绿脓杆菌

<400>9

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<213>绿脓杆菌

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165170175

aspilelysglyservalleuhisserarghisthrgluleulysglu

180185190

lysleuargserileasnglnglyleuaspargleuargargvalser

195200205

hisglnglytyrserthrglualaglupheglugluproargvalile

210215220

aspleutrpaspleualaglnseralaasnleuthrasplysgluleu

225230235240

glualapheargglugluleulyshispheglualalysileglulys

245250255

hisasnhistyrglnlysglnleugluilealahisglulysleuarg

260265270

hisalagluservalglyaspglygluargvalserargserargglu

275280285

lyshisalaleuleugluglyargthrlysgluleuglytyrthrval

290295300

lyslyshisleuglnaspleuserglyargileserargalaarghis

305310315320

asngluleu

<210>12

<211>357

<212>prt

<213>人类

<400>12

metalaproargargvalargserpheleuargglyleuproalaleu

151015

leuleuleuleuleupheleuglyprotrpproalaalaserhisgly

202530

glylystyrserargglulysasnglnprolysproserprolysarg

354045

gluserglygluglupheargmetglulysleuasnglnleutrpglu

505560

lysalaglnargleuhisleuproprovalargleualagluleuhis

65707580

alaaspleulysileglngluargaspgluleualatrplyslysleu

859095

lysleuaspglyleuaspgluaspglyglulysglualaargleuile

100105110

argasnleuasnvalileleualalystyrglyleuaspglylyslys

115120125

aspalaargglnvalthrserasnserleuserglythrglngluasp

130135140

glyleuaspaspproargleuglulysleutrphislysalalysthr

145150155160

serglylyspheserglyglugluleuasplysleutrparggluphe

165170175

leuhishislysglulysvalhisglutyrasnvalleuleugluthr

180185190

leuserargthrglugluilehisgluasnvalileserproserasp

195200205

leuseraspilelysglyservalleuhisserarghisthrgluleu

210215220

lysglulysleuargserileasnglnglyleuaspargleuargarg

225230235240

valserhisglnglytyrserthrglualaglupheglugluproarg

245250255

valileaspleutrpaspleualaglnseralaasnleuthrasplys

260265270

gluleuglualapheargglugluleulyshispheglualalysile

275280285

glulyshisasnhistyrglnlysglnleugluilealahisglulys

290295300

leuarghisalagluservalglyaspglygluargvalserargser

305310315320

argglulyshisalaleuleugluglyargthrlysgluleuglytyr

325330335

thrvallyslyshisleuglnaspleuserglyargileserargala

340345350

arghisasngluleu

355

<210>13

<211>101

<212>prt

<213>人类免疫缺陷病毒

<400>13

metgluprovalaspproargleugluprotrplyshisproglyser

151015

glnprolysthrprocysthrlyscystyrcyslyslyscyscysleu

202530

hiscysglnvalcysphemetthrlysglyleuglyilesertyrgly

354045

arglyslysargargglnargargargalaproglnaspasnlysasn

505560

hisglnvalserleuserlysglnprothrserargalaargglyasp

65707580

prothrglyglnglugluserlysglulysvalglulysgluthrval

859095

valaspprovalthr

100

<210>14

<211>4

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>内质网滞留序列

<400>14

lysaspgluleu

1

<210>15

<211>6

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28-pet连接子

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<400>15

argxaaargxaalysarg

15

<210>16

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>内质网滞留序列

<400>16

lyslysaspleuargaspgluleulysaspgluleu

1510

<210>17

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>内质网滞留序列

<400>17

lyslysaspgluleuargaspgluleulysaspgluleu

1510

<210>18

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>内质网滞留序列

<400>18

lyslysaspgluleuargvalgluleulysaspgluleu

1510

<210>19

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>内质网滞留序列

<400>19

lysaspgluleulysaspgluleulysaspgluleu

1510

<210>20

<211>46

<212>prt

<213>绿脓杆菌

<400>20

proleugluthrphethrarghisargglnproargglytrpglugln

151015

leugluglncysglytyrprovalglnargleuvalalaleutyrleu

202530

alaalaargleusertrpasnglnvalaspglnvalilearg

354045

<210>21

<211>98

<212>prt

<213>人乳头瘤病毒16型

<400>21

methisglyaspthrprothrleuhisglutyrmetleuaspleugln

151015

progluthrthraspleutyrcystyrgluglnleuasnaspserser

202530

gluglugluaspgluileaspglyproalaglyglnalagluproasp

354045

argalahistyrasnilevalthrphecyscyslyscysaspserthr

505560

leuargleucysvalglnserthrhisvalaspileargthrleuglu

65707580

aspleuleumetglythrleuglyilevalcysproilecyssergln

859095

lyspro

<210>22

<211>105

<212>prt

<213>人乳头瘤病毒18型

<400>22

methisglyprolysalathrleuglnaspilevalleuhisleuglu

151015

proglnasngluileprovalaspleuleucyshisgluglnleuser

202530

aspsergluglugluasnaspgluileaspglyvalasnhisglnhis

354045

leuproalaargargalagluproglnarghisthrmetleucysmet

505560

cyscyslyscysglualaargilelysleuvalvalgluserserala

65707580

aspaspleuargalapheglnglnleupheleuasnthrleuserphe

859095

valcysprotrpcysalaserglngln

100105

<210>23

<211>190

<212>prt

<213>丙型肝炎

<400>23

metserthrasnprolysproglnarglysthrlysargasnthrasn

151015

argargproglnaspvallyspheproglyglyglyglnilevalgly

202530

glyvaltyrleuleuproargargglyproargleuglyvalargala

354045

thrarglysthrsergluargserglnproargglyargargglnpro

505560

ileprolysalaargargprogluglyargthrtrpalaglnprogly

65707580

tyrprotrpproleutyrglyasngluglymetglytrpalaglytrp

859095

leuleuserproargglyserargproasntrpglyprothrasppro

100105110

argargargserargasnleuglylysvalileaspthrleuthrcys

115120125

glyphealaaspleumetglytyrileproleuvalglyalaproleu

130135140

glyglyvalalaargalaleualahisglyvalargvalleugluasp

145150155160

glyvalasntyralathrglyasnleuproglycysserpheserile

165170175

pheleuleualaleuleusercysleuthrthrproalaser

180185190

<210>24

<211>154

<212>prt

<213>乙型肝炎

<400>24

metalaalaargmetcyscysglnleuaspproalaargaspvalleu

151015

cysleuargprovalglyalagluserargglyargproleuprogly

202530

proleuglyalaleuproproserseralaseralavalproalaasp

354045

hisglyserhisleuserleuargglyleuprovalcysserpheser

505560

seralaglyprocysalaleuargphethrseralaargargmetglu

65707580

thrthrvalasnalaprotrpserleuprothrvalleuhislysarg

859095

thrileglyleuserglyargsermetthrtrpilegluglutyrile

100105110

lysaspcysvalphelysasptrpglugluleuglyglugluilearg

115120125

leulysvalphevalleuglyglycysarghislysleuvalcysser

130135140

proalaprocysasnphephethrserala

145150

<210>25

<211>192

<212>prt

<213>猪圆环病毒

<400>25

asnglyilepheasnthrargleuserargthrpheglytyrthrile

151015

lysargthrthrvallysthrprosertrpalavalaspmetmetarg

202530

pheasnileasnasppheleuproproglyglyglyserasnproarg

354045

servalpropheglutyrtyrserileserlysvallysvalgluphe

505560

trpprocysserproilethrglnglyaspserglyvalglyserser

65707580

alavalileleuaspaspasnphevalthrlysalathralaleuthr

859095

tyraspprotyrvalasntyrserserarghisthrilethrglnpro

100105110

phesertyrhisserargtyrphethrprolysprovalleuaspser

115120125

thrileasptyrpheglnproasnasnlysargasnglnleutrpleu

130135140

argleuglnthralaglyasnvalasphisvalglyleuglythrala

145150155160

phegluasnseriletyraspglnglutyrasnileargvalthrmet

165170175

tyrvalglnpheargglupheasnleulysaspproproleuasnpro

180185190

<210>26

<211>220

<212>prt

<213>猪生殖与呼吸综合症病毒

<400>26

arghishisphethrprosergluargglnleucysleuserserile

151015

glnthralapheasnglnglyalaglythrcysileleuseraspser

202530

glyargilesertyrthrvalglupheserleuprothrhishisthr

354045

valargleuileargvalthralaproproseralaleuaspglnval

505560

ileargasnalaleualaserproglyserglyglyaspleuglyglu

65707580

alailearggluglnprogluglnalaargleualaleuthrleuala

859095

alaalaglusergluargphevalargglnglythrglyasnaspglu

100105110

alaglyalaalaasnalaaspvalvalserleuthrcysprovalala

115120125

alaglyglucysalaglyproalaaspserglyaspalaleuleuglu

130135140

argasntyrprothrglyalaglupheleuglyaspglyglyaspval

145150155160

arghishisphethrprosergluargglnleucysleuserserile

165170175

glnthralapheasnglnglyalaglythrcysileleuseraspser

180185190

glyargilesertyrthrvalglupheserleuprothrhishisthr

195200205

valargleuileargvalthralaproproserala

210215220

<210>27

<211>165

<212>prt

<213>猪生殖与呼吸综合症病毒

<400>27

asnasnlysglucysthrvalalaglnalaleuglyasnglyasplys

151015

pheargalathrasplysargvalvalaspserleuargalailecys

202530

alaaspleugluglyserserserproleuprolysvalalahisasn

354045

leuglyphetyrpheserproaspleuthrglnphealalysleupro

505560

ilegluleuaspprohistrpprovalvalserthrglnasnasnglu

65707580

lystrpproaspargleuvalalaserleuargproleuasplystyr

859095

serargalacysileglyalaglytyrmetvalglyproservalphe

100105110

leuglythrproglyvalvalsertyrtyrleuthrlysphevallys

115120125

glyglualaglnvalleuprogluthrvalpheserthrglyargile

130135140

gluvalaspcysargglutyrleuaspasparggluarggluvalala

145150155160

alaserleuprohis

165

<210>28

<211>58

<212>prt

<213>猪生殖与呼吸综合症病毒

<400>28

glyserserleuaspaspphecystyraspserthralaproglnlys

151015

valleuleualapheserilethrtyralaserasnaspserserser

202530

hisleuglnleuiletyrasnleuthrleucysgluleuasnglythr

354045

asptrpleualaasnlyspheasptrpala

5055

<210>29

<211>62

<212>prt

<213>猪生殖与呼吸综合症病毒

<400>29

metglyserleuaspaspphecysasnaspserthralaalaglnlys

151015

leuvalleualapheserilethrtyrthrproilephevalalagly

202530

glyserserserthrtyrglntyriletyrasnleuthrilecysglu

354045

leuasnglythrasptrpleuserasnhispheasptrpala

505560

<210>30

<211>68

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28-pet

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(11)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(17)..(17)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(30)..(30)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(32)..(32)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<400>30

thraspiletyrphecyslysxaagluxaaxaatyrproproprotyr

151015

xaaaspasnglulysserasnglythrileilehisargxaaargxaa

202530

lysargglytrpgluglnleugluglncysglytyrprovalglnarg

354045

leuvalalaleutyrleualaalaargleusertrpasnglnvalasp

505560

glnvalilearg

65

<210>31

<211>28

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28共有序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(11)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(17)..(17)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<400>31

thraspiletyrphecyslysxaagluxaaxaatyrproproprotyr

151015

xaaaspasnglulysserasnglythrileilehis

2025

<210>32

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28关键区

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(5)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<400>32

lysxaagluxaaxaatyrproproprotyr

1510

<210>33

<211>187

<212>prt

<213>人类

<400>33

metasnglyaspaspalaphealaargargprothrvalglyalagln

151015

ileproglulysileglnlysalapheaspaspilealalystyrphe

202530

serlysgluglutrpglulysmetlysalaserglulysilephetyr

354045

valtyrmetlysarglystyrglualametthrlysleuglyphelys

505560

alathrleuproprophemetcysasnlysargalagluaspphegln

65707580

glyasnaspleuaspasnaspproasnargglyasnglnvalgluarg

859095

proglnmetthrpheglyargleuglnglyileserprolysilemet

100105110

prolyslysproalaglugluglyasnaspserglugluvalproglu

115120125

alaserglyproglnasnaspglylysgluleucysproproglylys

130135140

prothrthrserglulysilehisgluargserglyprolysarggly

145150155160

gluhisalatrpthrhisargleuarggluarglysglnleuvalile

165170175

tyrglugluileseraspproglugluaspasp

180185

<210>34

<211>314

<212>prt

<213>人类

<400>34

metproleugluglnargserglnhiscyslysproglugluglyleu

151015

glualaargglyglualaleuglyleuvalglyalaglnalaproala

202530

thrglugluglnglualaalaserserserserthrleuvalgluval

354045

thrleuglygluvalproalaalagluserproaspproproglnser

505560

proglnglyalaserserleuprothrthrmetasntyrproleutrp

65707580

serglnsertyrgluaspserserasnglngluglugluglyproser

859095

thrpheproaspleugluserglupheglnalaalaleuserarglys

100105110

valalagluleuvalhispheleuleuleulystyrargalaargglu

115120125

provalthrlysalaglumetleuglyservalvalglyasntrpgln

130135140

tyrphepheprovalilepheserlysalaserserserleuglnleu

145150155160

valpheglyilegluleumetgluvalaspproileglyhisleutyr

165170175

ilephealathrcysleuglyleusertyraspglyleuleuglyasp

180185190

asnglnilemetprolysalaglyleuleuileilevalleualaile

195200205

ilealaarggluglyaspcysalaprogluglulysiletrpgluglu

210215220

leuservalleugluvalphegluglyarggluaspserileleugly

225230235240

aspprolyslysleuleuthrglnhisphevalglngluasntyrleu

245250255

glutyrargglnvalproglyseraspproalacystyrglupheleu

260265270

trpglyproargalaleuvalgluthrsertyrvallysvalleuhis

275280285

hismetvallysileserglyglyprohisilesertyrproproleu

290295300

hisglutrpvalleuarggluglygluglu

305310

<210>35

<211>181

<212>prt

<213>人类

<400>35

phemetglnalagluglyargglythrglyglyserthrglyaspala

151015

aspglyproglyglyproglyileproaspglyproglyglyasnala

202530

glyglyproglyglualaglyalathrglyglyargglyproarggly

354045

alaglyalaalaargalaserglyproglyglyglyalaproarggly

505560

prohisglyglyalaalaserglyleuasnglycyscysargcysgly

65707580

alaargglyprogluserargleuleugluphetyrleualametpro

859095

phealathrprometglualagluleualaargargserleualagln

100105110

aspalaproproleuprovalproglyvalleuleulysgluphethr

115120125

valserglyasnileleuthrileargleuthralaalaasphisarg

130135140

glnleuglnleuserilesersercysleuglnglnleuserleuleu

145150155160

mettrpilethrglncyspheleuprovalpheleualaglnpropro

165170175

serglyglnargarg

180

<210>36

<211>296

<212>prt

<213>人类

<400>36

pheserglyalaleuaspvalleuglnmetlysglugluaspvalleu

151015

lyspheleualaalaglythrhisleuglyglythrasnleuaspphe

202530

glnmetgluglntyriletyrlysarglysseraspglyiletyrile

354045

ileasnleulysargthrtrpglulysleuleuleualaalaargala

505560

ilevalalailegluasnproalaaspvalservalileserserarg

65707580

asnthrglyglnargalavalleulysphealaalaalathrglyala

859095

thrproilealaglyargphethrproglythrphethrasnglnile

100105110

glnalaalaphearggluproargleuleuvalvalthraspproarg

115120125

alaasphisglnproleuthrglualasertyrvalasnleuprothr

130135140

ilealaleucysasnthraspserproleuargtyrvalaspileala

145150155160

ileprocysasnasnlysglyalaalahisservalglyleumettrp

165170175

trpmetleualaarggluvalleuargmetargglythrileserarg

180185190

gluhisprotrpgluvalmetproaspleutyrphetyrargasppro

195200205

glugluileglulysglugluglnalaalaalaglulysalavalthr

210215220

lysgluglupheglnglyglutrpthralaproalaprogluphethr

225230235240

alathrglnprogluvalalaasptrpsergluglyvalglnvalpro

245250255

servalproileglnglnpheprothrgluasptrpseralaglnpro

260265270

alathrgluasptrpseralaalaprothralaglnalathrglutrp

275280285

valglyalathrthrasptrpser

290295

<210>37

<211>279

<212>prt

<213>人类

<400>37

glyseraspvalargaspleuasnalaleuleuproalavalproser

151015

leuglyglyglyglyglycysalaleuprovalserglyalaalagln

202530

trpalaprovalleuaspphealaproproglyalaseralatyrgly

354045

serleuglyglyproalaproproproalapropropropropropro

505560

proproprohisserpheilelysglngluprosertrpglyglyala

65707580

gluprohisglugluglncysleuseralaphethrvalhispheser

859095

glyglnphethrglythralaglyalacysargtyrglyprophegly

100105110

proproproproserglnalaserserglyglnalaargmetphepro

115120125

asnalaprotyrleuprosercysleugluserglnproalailearg

130135140

asnglnglytyrserthrvalthrpheaspglythrprosertyrgly

145150155160

histhrproserhishisalaalaglnpheproasnhisserphelys

165170175

hisgluaspprometglyglnglnglyserleuglygluglnglntyr

180185190

servalproproprovaltyrglycyshisthrprothraspsercys

195200205

thrglyserglnalaleuleuleuargthrprotyrserseraspasn

210215220

leutyrglnmetthrserglnleuglucysmetthrtrpasnglnmet

225230235240

asnleuglyalathrleulysglyvalalaalaglyserserserser

245250255

vallystrpthrgluglyglnserasnhisserthrglytyrgluser

260265270

aspasnhisthrthrproile

275

<210>38

<211>406

<212>prt

<213>人类

<400>38

serglyglyhisglnleuglnleualaalaleutrpprotrpleuleu

151015

metalathrleuglnalaglypheglyargthrglyleuvalleuala

202530

alaalavalglusergluargseralagluglnlysalaileilearg

354045

valileproleulysmetaspprothrglylysleuasnleuthrleu

505560

gluglyvalphealaglyvalalagluilethrproalagluglylys

65707580

leumetglnserhisproleutyrleucysasnalaseraspaspasp

859095

asnleugluproglypheileserilevallysleugluserproarg

100105110

argalaproalahisproleuilecysglyproproglyleuasplys

115120125

argleuleuprogluthrproglyprocystyrserasnserglnpro

130135140

valtrpleucysleuthrproargglnproleugluprohispropro

145150155160

glygluglyproserglutrpserseraspthralagluglyargpro

165170175

cysprotyrprohiscysglnvalleuseralaglnproglyserglu

180185190

glugluleuglugluleucysgluglnalavalserglyglyhisgln

195200205

leuglnleualaalaleutrpprotrpleuleumetalathrleugln

210215220

alaglypheglyargthrglyleuvalleualaalaalavalgluser

225230235240

gluargseralagluglnlysalaileileargvalileproleulys

245250255

metaspprothrglylysleuasnleuthrleugluglyvalpheala

260265270

glyvalalagluilethrproalagluglylysleumetglnserhis

275280285

proleutyrleucysasnalaseraspaspaspasnleugluprogly

290295300

pheileserilevallysleugluserproargargalaproalahis

305310315320

proleuilecysglyproproglyleuasplysargleuleuproglu

325330335

thrproglyprocystyrserasnserglnprovaltrpleucysleu

340345350

thrproargglnproleugluprohisproproglygluglyproser

355360365

glutrpserseraspthralagluglyargprocysprotyrprohis

370375380

cysglnvalleuseralaglnproglysergluglugluleugluglu

385390395400

leucysgluglnalaval

405

<210>39

<211>284

<212>prt

<213>人类

<400>39

lysleuthrilegluserthrpropheasnvalalagluglylysglu

151015

valleuleuleuvalhisasnleuproglnhisleupheglytyrser

202530

trptyrlysglygluargvalaspglyasnargglnileileglytyr

354045

valileglythrglnglnalathrproglyproalatyrserglyarg

505560

gluileiletyrproasnalaserleuleuileglnasnileilegln

65707580

asnaspthrglyphetyrthrleuhisvalilelysseraspleuval

859095

asngluglualathrglyglnpheargvaltyrprogluleuprolys

100105110

proserileserserasnasnserlysprovalgluasplysaspala

115120125

valalaphethrcysgluprogluthrglnaspalathrtyrleutrp

130135140

trpvalasnasnglnserleuprovalserproargleuglnleuser

145150155160

asnglyasnargthrleuthrleupheasnvalthrargasnaspthr

165170175

alasertyrlyscysgluthrglnasnprovalseralaargargser

180185190

aspservalileleuasnvalleutyrglyproaspthrproileile

195200205

serproproaspsersertyrleuserglyalaasnleuasnleuser

210215220

cyshisseralaserasnproserproglntyrsertrpphevalasn

225230235240

glythrpheglnglnhisthrglnvalleuleuilealalysilegln

245250255

proasnasnasnglythrtyralacysphevalserasnleualathr

260265270

glyargasnasnserilevallysserilethrval

275280

<210>40

<211>407

<212>prt

<213>绿脓杆菌

<400>40

alagluglualapheaspleutrpasnglucysalalysalacysval

151015

leuaspleulysaspglyvalargserserargmetservalasppro

202530

alailealaaspthrasnglyglnglyvalleuhistyrsermetval

354045

leugluglyglyasnaspalaleulysleualaileaspasnalaleu

505560

serilethrseraspglyleuthrileargleugluglyglyvalglu

65707580

proasnlysprovalargtyrsertyrthrargglnalaargglyser

859095

trpserleuasntrpleuvalproileglyhisglulysproserasn

100105110

ilelysvalpheilehisgluleuasnalaglyasnglnleuserhis

115120125

metserproiletyrthrileglumetglyaspgluleuleualalys

130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

alaglnthrglnproargargglulysargtrpserglutrpalaser

180185190

glylysvalleucysleuleuaspproleuaspglyvaltyrasntyr

195200205

leualaglnglnargcysasnleuaspaspthrtrpgluglylysile

210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheprogluglyglyserleu

245250255

alaalaleuthralahisglnalacyshisleuproleugluthrphe

260265270

thrarghisargglnproargglytrpgluglnleugluglncysgly

275280285

tyrprovalglnargleuvalalaleutyrleualaalaargleuser

290295300

trpasnglnvalaspglnvalileargasnalaleualaserprogly

305310315320

serglyglyaspleuglyglualailearggluglnprogluglnala

325330335

argleualaleuthrleualaalaalaglusergluargphevalarg

340345350

glnglythrglyasnaspglualaglyalaalaasnalaaspvalval

355360365

serleuthrcysprovalalaalaglyglucysalaglyproalaasp

370375380

serglyaspalaleuleugluargasntyrprothrglyalagluphe

385390395400

leuglyaspglyglyaspval

405

<210>41

<211>61

<212>prt

<213>绿脓杆菌

<400>41

glyglyserleualaalaleuthralahisglnalacyshisleupro

151015

leugluthrphethrarghisargglnproargglytrpgluglnleu

202530

gluglncysglytyrprovalglnargleuvalalaleutyrleuala

354045

alaargleusertrpasnglnvalaspglnvalilearg

505560

<210>42

<211>313

<212>prt

<213>绿脓杆菌

<400>42

alagluglualapheaspleutrpasnglucysalalysalacysval

151015

leuaspleulysaspglyvalargserserargmetservalasppro

202530

alailealaaspthrasnglyglnglyvalleuhistyrsermetval

354045

leugluglyglyasnaspalaleulysleualaileaspasnalaleu

505560

serilethrseraspglyleuthrileargleugluglyglyvalglu

65707580

proasnlysprovalargtyrsertyrthrargglnalaargglyser

859095

trpserleuasntrpleuvalproileglyhisglulysproserasn

100105110

ilelysvalpheilehisgluleuasnalaglyasnglnleuserhis

115120125

metserproiletyrthrileglumetglyaspgluleuleualalys

130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

alaglnthrglnproargargglulysargtrpserglutrpalaser

180185190

glylysvalleucysleuleuaspproleuaspglyvaltyrasntyr

195200205

leualaglnglnargcysasnleuaspaspthrtrpgluglylysile

210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheprogluglyglyserleu

245250255

alaalaleuthralahisglnalacyshisleuproleugluthrphe

260265270

thrarghisargglnproargglytrpgluglnleugluglncysgly

275280285

tyrprovalglnargleuvalalaleutyrleualaalaargleuser

290295300

trpasnglnvalaspglnvalilearg

305310

<210>43

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>nesk

<400>43

leuglnlyslysleuglugluleugluleualalysaspgluleu

151015

<210>44

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>nes共有序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(3)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(7)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(9)..(9)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(11)

<223>xaa可以是任何自然产生的氨基酸

<400>44

leuxaaxaalysleuxaaxaaleuxaaleuxaa

1510

<210>45

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>nes

<400>45

leuglnlyslysleuglugluleugluleuala

1510

<210>46

<211>192

<212>prt

<213>猪圆环病毒

<400>46

asnglyilepheasnthrargleuserargthrpheglytyrthrile

151015

lysargthrthrvallysthrprosertrpalavalaspmetmetarg

202530

pheasnileasnasppheleuproproglyglyglyserasnproarg

354045

servalpropheglutyrtyrserileserlysvallysvalgluphe

505560

trpprocysserproilethrglnglyaspserglyvalglyserser

65707580

alavalileleuaspaspasnphevalthrlysalathralaleuthr

859095

tyraspprotyrvalasntyrserserarghisthrilethrglnpro

100105110

phesertyrhisserargtyrphethrprolysprovalleuaspser

115120125

thrileasptyrpheglnproasnasnlysargasnglnleutrpleu

130135140

argleuglnthralaglyasnvalasphisvalglyleuglythrala

145150155160

phegluasnseriletyraspglnglutyrasnileargvalthrmet

165170175

tyrvalglnpheargglupheasnleulysaspproproleuasnpro

180185190

<210>47

<211>328

<212>prt

<213>猪瘟病毒

<400>47

argleusercyslysgluasphisargtyralaileserserthrasn

151015

gluileglyproleuglyalagluglyleuthrthrthrtrplysglu

202530

tyrserhisglyleuglnleuaspaspglythrvalargalailecys

354045

ilealaglyserphelysvalthralaleuasnvalvalserargarg

505560

tyrleualaserleuhislysargalaleuprothrservalthrphe

65707580

gluleuleupheaspglythrserproalailegluglumetglyglu

859095

asppheglypheglyleucyspropheaspthrthrprovalvallys

100105110

glylystyrasnthrthrleuleuasnglyseralaphetyrleuval

115120125

cysproileglytrpthrglyvalileglucysthralavalserpro

130135140

thrthrleuargthrgluvalvallysthrphelysargglulyspro

145150155160

pheprohisargalaaspcysvalthrthrilevalglulysgluasp

165170175

leuphehiscyslysleuglyglyasntrpthrcysvallysglyasn

180185190

provalthrtyrthrglyglyglnvallysglncysargtrpcysgly

195200205

pheaspphelysgluproaspglyleuprohistyrproileglylys

210215220

cysileleualaasngluthrglytyrargvalvalaspserthrasp

225230235240

cysasnargaspglyvalvalileserthrgluglygluhisglucys

245250255

leuileglyasnthrthrvallysvalhisalaleuaspglyargleu

260265270

alaprometprocysargprolysgluilevalserseralaglypro

275280285

valarglysthrsercysthrpheasntyrthrlysthrleuargasn

290295300

lystyrtyrgluproargaspsertyrpheglnglntyrmetleulys

305310315320

glyglutyrglntyrtrppheasp

325

<210>48

<211>50

<212>prt

<213>口蹄疫病毒

<400>48

alathrvaltyrasnglyserserlystyrglyaspthrserthrser

151015

asnvalargglyaspleuglnvalleualaglnlysalagluargthr

202530

leuprothrserpheasnpheglyalailelysalathrargvalthr

354045

gluleu

50

<210>49

<211>15

<212>prt

<213>口蹄疫病毒

<400>49

alaalailegluphephegluglymetvalhisaspserilelys

151015

<210>50

<211>65

<212>prt

<213>口蹄疫病毒

<400>50

alathrvaltyrasnglyserserlystyrglyaspthrserthrser

151015

asnvalargglyaspleuglnvalleualaglnlysalagluargthr

202530

leuprothrserpheasnpheglyalailelysalathrargvalthr

354045

gluleualaalailegluphephegluglymetvalhisaspserile

505560

lys

65

<210>51

<211>18

<212>prt

<213>副黏液病毒

<400>51

leuleuproasnmetprolysasplysgluglycysalalysalapro

151015

leuglu

<210>52

<211>11

<212>prt

<213>副黏液病毒

<400>52

proaspgluglnasptyrglnileargmetala

1510

<210>53

<211>29

<212>prt

<213>副黏液病毒

<400>53

leuleuproasnmetprolysasplysgluglycysalalysalapro

151015

leugluproaspgluglnasptyrglnileargmetala

2025

<210>54

<211>525

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>pe407-e7-k3融合蛋白

<400>54

alagluglualapheaspleutrpasnglucysalalysalacysval

151015

leuaspleulysaspglyvalargserserargmetservalasppro

202530

alailealaaspthrasnglyglnglyvalleuhistyrsermetval

354045

leugluglyglyasnaspalaleulysleualaileaspasnalaleu

505560

serilethrseraspglyleuthrileargleugluglyglyvalglu

65707580

proasnlysprovalargtyrsertyrthrargglnalaargglyser

859095

trpserleuasntrpleuvalproileglyhisglulysproserasn

100105110

ilelysvalpheilehisgluleuasnalaglyasnglnleuserhis

115120125

metserproiletyrthrileglumetglyaspgluleuleualalys

130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

alaglnthrglnproargargglulysargtrpserglutrpalaser

180185190

glylysvalleucysleuleuaspproleuaspglyvaltyrasntyr

195200205

leualaglnglnargcysasnleuaspaspthrtrpgluglylysile

210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheprogluglyglyserleu

245250255

alaalaleuthralahisglnalacyshisleuproleugluthrphe

260265270

thrarghisargglnproargglytrpgluglnleugluglncysgly

275280285

tyrprovalglnargleuvalalaleutyrleualaalaargleuser

290295300

trpasnglnvalaspglnvalileargasnalaleualaserprogly

305310315320

serglyglyaspleuglyglualailearggluglnprogluglnala

325330335

argleualaleuthrleualaalaalaglusergluargphevalarg

340345350

glnglythrglyasnaspglualaglyalaalaasnalaaspvalval

355360365

serleuthrcysprovalalaalaglyglucysalaglyproalaasp

370375380

serglyaspalaleuleugluargasntyrprothrglyalagluphe

385390395400

leuglyaspglyglyaspvalgluphehismetvalaspmethisgly

405410415

aspthrprothrleuhisglutyrmetleuaspleuglnprogluthr

420425430

thraspleutyrcystyrgluglnleuasnaspserserglugluglu

435440445

aspgluileaspglyproalaglyglnalagluproaspargalahis

450455460

tyrasnilevalthrphecyscyslyscysaspserthrleuargleu

465470475480

cysvalglnserthrhisvalaspileargthrleugluaspleuleu

485490495

metglythrleuglyilevalcysproilecysserglnlysproleu

500505510

glulysaspgluleulysaspgluleulysaspgluleu

515520525

<210>55

<211>290

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白

<400>55

alaglupheglugluproargvalileaspleutrpaspleualagln

151015

seralaasnleuthrasplysgluleuglualapheargglugluleu

202530

lyshispheglualalysileglulyshisasnhistyrglnlysgln

354045

leugluilealahisglulysleuarghisalagluservalglyasp

505560

glygluargvalserargserargglulyshisalaleuleuglugly

65707580

argthrlysgluleuglytyrthrvallyslyshisleuglnaspleu

859095

serglyargileserargalaarggluleuthraspiletyrphecys

100105110

lysilegluphemettyrproproprotyrleuaspasnglulysser

115120125

asnglythrileilehisargalaargtyrlysargglytrpglugln

130135140

leugluglncysglytyrprovalglnargleuvalalaleutyrleu

145150155160

alaalaargleusertrpasnglnvalaspglnvalileargglyser

165170175

gluphemethisglyaspthrprothrleuhisglutyrmetleuasp

180185190

leuglnprogluthrthraspleutyrcystyrgluglnleuasnasp

195200205

sersergluglugluaspgluileaspglyproalaglyglnalaglu

210215220

proaspargalahistyrasnilevalthrphecyscyslyscysasp

225230235240

serthrleuargleucysvalglnserthrhisvalaspileargthr

245250255

leugluaspleuleumetglythrleuglyilevalcysproilecys

260265270

serglnlysproleuglulysaspgluleulysaspgluleulysasp

275280285

gluleu

290