包含TOLL-样受体激动剂的抗体缀合物的制作方法

本申请要求2015年10月29日提交的美国临时申请号62/247896的权益，该文献作为引用整体并入本文。序列表本申请包含序列表，其已经以ascii格式通过电子方式提交并且作为引用整体并入本文。所述2016年10月5日生成的ascii拷贝称作pat057064-wo-pct_sl.txt且大小为55,525字节。发明领域本发明提供包含toll-氧受体激动剂的抗体缀合物和这类缀合物在治疗癌症中的用途。发明背景先天免疫性是一种快速的非特异性免疫应答，其可以抵御环境损伤，包括但不限于病原体，如细菌或病毒。适应性免疫性是较慢但更具特异性的免疫应答，其赋予对宿主持久或保护性免疫，并涉及原初t淋巴细胞向cd4+t辅助细胞和/或cd8+细胞毒性t细胞的分化和活化，以促进细胞和体液免疫。先天性免疫系统的抗原呈递细胞如树突细胞或巨噬细胞通过吞噬和处理外来抗原并将它们在细胞表面上呈递给t细胞、从而激活t细胞应答，用作先天性与适应性免疫系统之间的关键联系。toll样受体(tlr)是模式识别受体(prr)，其主要表达于树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、天然杀伤细胞和t淋巴细胞上。tlr与来自细菌、真菌、原生动物和病毒的病原体相关分子模式(pamps)结合，并作为抵御入侵病原体的第一道防线。tlr激活导致树突细胞的抗原摄取、成熟和t细胞刺激能力增加。tlr包含胞外n-末端富含亮氨酸重复序列(lrr)结构域，其次是富含半胱氨酸的区域、跨膜结构域和含有称为toll/il-1受体(tir)结构域的保守区域的胞内(细胞质)尾。lrr结构域对于配体结合和相关信号传导是重要的，并且是prr的共同特征。tir结构域在蛋白质-蛋白质相互作用中是重要的并且与先天性免疫相关。tlr对于诱导参与炎症应答的基因的表达是必需的，并且在抗原特异性获得性免疫的发展中起关键作用。仍然需要新的用于治疗疾病、特别是癌症的免疫疗法。发明概述本发明提供包含toll-样受体激动剂的抗体缀合物、其药学上可接受的盐、其药物组合物及其组合，它们可用于治疗疾病，特别是癌症。本发明还提供治疗、预防或改善癌症的方法，包括对有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体缀合物。本发明还提供包含tlr7激动剂和连接基的化合物，所述连接基用于缀合至抗-her2抗体，且由此构成本发明的免疫刺激缀合物。本发明的不同实施方案如本文所述。本发明的一个方面为具有式(i)结构的化合物及其药学上可接受的盐，其为tlr7激动剂：其中：rd是且re是h；或re是且rd是h；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-n3、-nhc(＝o)ch＝ch2、-sh、-sr7、-oh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-c(o)nhnh2、r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。本发明的一个方面为具有式(i)结构的化合物及其药学上可接受的盐，其为tlr7激动剂：其中：rd是且re是h；或re是且rd是h；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-n3、-nhc(＝o)ch＝ch2、sh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-c(o)nhnh2、r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。本发明的一个方面是具有式(ia)或式(ib)结构的式(i)化合物及其药学上可接受的盐：其中：r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-nhc(＝o)ch＝ch2、-n3、sh、-sr7、-oh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、或-co2h；r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。本发明的一个方面是具有式(ia)或式(ib)结构的式(i)化合物及其药学上可接受的盐：其中：r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-nhc(＝o)ch＝ch2、-n3、sh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、或-co2h；r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。本发明的另一个方面是具有式(ii)结构的抗体缀合物及其药学上可接受的盐：其中：r50是其中*表示与ab的连接点；ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是-nhr2或-nhchr2r3；r2是-c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是-s-、-nhc(＝o)ch2-、-s(＝o)2ch2ch2-、-(ch2)2s(＝o)2ch2ch2-、-nhs(＝o)2ch2ch2、-nhc(＝o)ch2ch2-、-ch2nhch2ch2-、-nhch2ch2-、x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；r12是h、甲基或苯基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。本发明的另一个方面是具有式(ii)结构的抗体缀合物及其药学上可接受的盐：其中：r50是其中*表示与ab的连接点；ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是-nhr2或-nhchr2r3；r2是-c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是-s-、-nhc(＝o)ch2-、-s(＝o)2ch2ch2-、-(ch2)2s(＝o)2ch2ch2-、-nhs(＝o)2ch2ch2、-nhc(＝o)ch2ch2-、-ch2nhch2ch2-、-nhch2ch2-、x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；r12是h、甲基或苯基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。本发明的另一个方面是具有式(iia)或式(iib)结构的式(ii)的抗体缀合物及其药学上可接受的盐：其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是或-s-；x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。本发明的另一个方面是具有式(iia)或式(iib)结构的式(ii)的抗体缀合物及其药学上可接受的盐：其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是或-s-；x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。本发明的另一个方面是药物组合物，其包括治疗有效量的式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。本发明的另一个方面是治疗her2-阳性癌症的方法，其中该方法包括对有这类治疗需要的受试者施用有效量的式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物或其药学上可接受的盐。her2-阳性癌症可以是胃癌、食管癌、食管胃接合处腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宮颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、膀胱癌、泌尿道癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、骨肉瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤和头颈癌的任意种。her2-阳性癌症可以具有高her2表达(例如具有3+ihc评分)或低her2表达(例如具有2+ihc评分)。本发明的另一个方面是式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗her2-阳性癌症的药剂中的用途。本发明的另一个方面是用于医学治疗方法中的抗体缀合物，其中该医学治疗方法用于治疗her2-阳性癌症，且其中所述抗体缀合物是式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物或其药学上可接受的盐。此外，本发明的另一个方面是抗体缀合物，当与单独的抗-her2抗体比较时，其用于将her2-阳性癌症抑制持续期限和/或减少her2-阳性癌症复发的方法。本文所述的抗体缀合物不仅可以用于治疗高her2-表达肿瘤(例如具有3+ihc评分)，而且可以用于治疗低her2-表达肿瘤(例如具有2+ihc评分)。附图简述图1描绘抗-her2-mab2-(c-1)缀合物在n87异种移植肿瘤模型中单一治疗后的结果。与未治疗的动物(空心圆形)相比，对于所有测试剂量都观察到肿瘤的消退，包括1mg/kg(实心菱形)、2.5mg/kg(实心三角形)、5mg/kg(实心圆圈)和10mg/kg(实心正方形)。当与未经治疗的动物(空心圆形)比较时，在用10mg/kg单独的未缀合的抗-her2-mab2(空心三角形)或同种型对照抗体-(c-1)缀合物(空心菱形)治疗的n87异种移植小鼠中未观察到n87胃肿瘤的退化。数据表示随时间变化的(剂量后)平均肿瘤体积(平均值+/-sem)。图2描绘使用抗-her2-mab1-(c-1)或抗-her2-mab1-(c-5)单剂量治疗人n87异种移植肿瘤后的结果。与未治疗的动物(空心圆形)相比，1mg/kg抗-her2-mab1-(c-1)(实心正方形)或1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心三角形)治疗后观察到人n87异种移植肿瘤消退，而使用0.3mg/kg抗-her2-mab1-(c-1)(实心圆圈)或0.3mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心菱形)治疗导致肿瘤停滞。当与未经治疗的动物(空心圆形)比较时，在用同种型对照抗体-(c-5)缀合物(空心菱形)治疗的n87异种移植小鼠中未观察到n87胃肿瘤的消退。数据表示随时间变化的(剂量后)平均肿瘤体积(平均值+/-sem)。图3描绘用单剂量的抗-her2-mab1-(c-5)治疗人n87异种移植肿瘤后的结果。与未治疗的动物(空心圆形)相比，使用5mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心正方形)或3mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心圆圈)治疗后观察到人n87异种移植肿瘤消退。而使用1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心三角形)治疗导致肿瘤停滞。数据表示随时间变化的(剂量后)平均肿瘤体积(平均值+/-sem)。图4描绘用单剂量的缀合不同化合物的抗-her2-mab1治疗人n87异种移植肿瘤后的结果。与未治疗的动物(空心圆形)相比，使用1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心三角形)、抗-her2-mab1-(c-60)(空心三角形)、抗-her2-mab1-(c-59)(实心正方形)、抗-her2-mab1-(c-61)(空心正方形)、抗-her2-mab1-(c-35)(实心六角形)、抗-her2-mab1-(c-37)(空心六角形)、抗-her2-mab1-(c-64)(实心菱形)或抗-her2-mab1-(c-62)(空心菱形)治疗后，人n87异种移植肿瘤初始消退，随后停滞。数据表示随时间变化的(剂量后)平均肿瘤体积(平均值+/-sem)。图5a和5b描绘使用单剂量的抗-大鼠her2-(c-46)缀合物治疗mmc小鼠乳腺肿瘤(大鼠her2-阳性)的结果。结果显示，在使用抗-大鼠her2-(c-46)缀合物(图5a)治疗的8只小鼠中的7只中观察到肿瘤完全消退，但是用裸抗-大鼠her2抗体治疗的8只小鼠中仅3只观察到肿瘤完全消退(图5b)。当乳腺癌同基因模型中肿瘤达到200mm3平均大小时，开始治疗。数据表示随时间变化的(剂量后)平均肿瘤体积(平均值+/-sem)。图6描绘用单剂量的抗-her2-mab1-(c-5)治疗人hcc1954乳腺异种移植肿瘤后的结果。与未治疗的动物(空心圆形)相比，使用10mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心正方形)或3mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心圆圈)治疗后观察到人hcc1954异种移植肿瘤消退，而使用1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心三角形)治疗导致肿瘤停滞。与未治疗的动物(空心圆形)相比，在用10mg/kg同种型对照抗体-(c-5)缀合物(空心菱形)或单独的未缀合的抗-her2-mab1(空心三角形)治疗的hcc1954异种移植小鼠中未观察到n87肿瘤的消退。数据表示随时间变化的(剂量后)平均肿瘤体积(平均值+/-sem)。图7描绘用单剂量的抗-her2-mab1-(c-5)治疗人skov3卵巢异种移植肿瘤后的结果。与未治疗的动物(空心圆形)相比，使用10mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心正方形)治疗后观察到人skov3异种移植肿瘤消退，而使用3mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)(实心圆圈)治疗导致肿瘤消退、然后肿瘤再生。与未治疗的动物(空心圆形)相比，在用10mg/kg同种型对照抗体-(c-5)缀合物(空心菱形)或单独的未缀合的抗-her2-mab1(空心三角形)治疗的skov3异种移植小鼠中未观察到肿瘤的消退。数据表示随时间变化的(剂量后)平均肿瘤体积(平均值+/-sem)。图8a-8c描绘显示n87(图8a)、hcc1954(图8b)和skov3(图8c)异种移植肿瘤上her2表达的代表性的免疫组织化学(ihc)图像。肿瘤基于其her表达水平为3+(n87和hcc1954)和2+(skov3)进行评分。发明详述本文描述了本发明的各种列举性实施方案。将认识到，每个实施方案中指定的特征可以与其它指定特征合并以提供本发明的另外的实施方案。在本申请全文中，如果说明书的文本(例如表1)与序列表之间存在差异，则以说明书的文本为准。定义如本文所用，术语“c4-c6烷基”是指包含4-6个碳原子的完全饱和的支链或直链烃。“c4-c6烷基”的非限制性实例包括正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基和己基。如本文所用，“her2”(也称作erbb2；neu；ngl；tkr1；cd340；p185；mln19；her-2/neu)是指表皮生长因子(egf)受体家族的跨膜酪氨酸激酶受体。her2包含胞外结合结构域、跨膜结构域和胞内酪氨酸激酶结构域。her2不具有其自身的配体结合结构域，因此不能结合生长因子，然而，her2与其它配体结合的egf受体家族成员如her1或her3紧密结合形成异二聚体，从而稳定配体结合和增强激酶-介导的下游信号传导途径的激活。人her2/neu基因定位于染色体位置17q12，并且在genbank中于ng_007503.1可以找到her2/neu基因的基因组序列。在人类中，存在五种her2同种型：a、b、c、d和e；术语“her2”在本文中用于共同地表示所有her2同种型。如本文所用，人her2蛋白还包括在其全长上与her2同种型a、b、c、d和e具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的蛋白质，其中这样的蛋白质仍然具有her2的至少一种功能。人her2同种型a(最长同种型)的mrna和蛋白质序列是：智人erb-b2受体酪氨酸激酶2(erbb2)，转录变体1，mrna[nm_004448.3]受体酪氨酸-蛋白激酶erbb-2同种型前体[智人][np_004439.2]其它人her2同种型的mrna和蛋白质序列可以在genebank中找到，其具有如下登记号：her2同种型b:nm_001005862.2(mrna)→np_001005862.1(蛋白质)；her2同种型c:nm_001289936.1(mrna)→np_001276865.1(蛋白质)；her2同种型d:nm_001289937.1(mrna)→np_001276866.1(蛋白质)；her2同种型e:nm_001289938.1(mrna)→np_001276867.1(蛋白质)。如本文所用，术语“抗体”是指衍生自特异性结合抗原的免疫球蛋白分子的蛋白质或多肽序列。抗体可以是多克隆或单克隆的、多或单链或完整的免疫球蛋白，并且可以源自天然来源或来自重组来源。天然存在的“抗体”是包含至少两条重(h)链和两条轻(l)链通过二硫键相互连接的糖蛋白。每条重链由重链可变区(本文缩写为vh)和重链恒定区组成。重链恒定区由ch1、ch2和ch3三个结构域组成。每条轻链是由轻链可变区(本文缩写为vl)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域cl组成。vh和vl区可以进一步再分成称为互补决定区(cdr)的高变区，其中散布有更保守的区域，称为构架区(fr)。vh和vl各自由三个cdr和四个fr组成，按照以下顺序从氨基末端排列到羧基-末端：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一成分(c1q)。抗体可以是单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼科抗体(camelisedantibody)或嵌合抗体。抗体可以是任何同种型(例如igg、ige、igm、igd、iga和igy)、类别(例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2)或亚类。术语“抗体片段”或“抗原结合片段”是指抗体的至少一部分，其保留与抗原表位(例如通过结合、空间位阻、稳定化/去稳定化、空间分布)特异性相互作用的能力。抗体片段的实例包括但不限于fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、scfv抗体片段、二硫键合的fvs(sdfv)、由vh和ch1结构域组成的fd片段、线性抗体、单一结构域抗体例如sdab(vl或vh)、骆驼科vhh结构域、由抗体片段形成的多特异性抗体，例如包含通过铰链区处的二硫键连接的两个fab片段的二价片段，和分离的cdr或抗体的其它表位结合片段。还可以将抗原结合片段掺入单结构域抗体、大分子抗体(maxibodies)、微抗体(minibodies)、纳米抗体(nanobodies)、细胞内抗体、双体、三抗体(triabodies)、四抗体(tetrabodies)、v-nar和双-scfv中(参见例如hollinger和hudson，naturebiotechnology23:1126-1136,2005)。抗原结合片段也可以基于多肽例如iii型纤连蛋白(fn3)被移植到支架中(参见美国专利:6,703,199，其描述了纤连蛋白多肽微型抗体)。术语“scfv”是指融合蛋白，其包含含有轻链可变区的至少一种抗体片段和含有重链可变区的至少一种抗体片段，其中轻和重链可变区域是连续连接的，例如经由合成连接体，例如短的柔性多肽连接体，并且能够被表达为单链多肽，并且其中scfv保留其衍生自的完整抗体的特异性。除非特别说明，否则如本文所用，scfv可以以任何顺序具有vl和vh可变区，例如相对于多肽的n-末端和c-末端，scfv可以包含vl-连接体-vh或可以包含vh-连接体-vl。如本文所用，术语“互补决定区”或“cdr”是指赋予抗原特异性和结合亲和力的抗体可变区内的氨基酸序列。例如，一般而言，每个重链可变区存在3种cdr(例如hcdr1、hcdr2和hcdr3)和每个轻链可变区存在3个cdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)。给定cdr的精确氨基酸序列边界可以使用许多众所周知的方案中的任何一种来确定，包括由kabat等人(1991),“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,”第5版，publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md(“kabat”编号方案),al-lazikani等人,(1997)jmb273,927-948(“chothia”编号方案)所述的那些或其组合。对于给定的cdr区(例如hccdr1、hccdr2、hccdr3、lccdr1、lccdr2或lccdr3)，在合并kabat和chothia编号方案中，在一些实施方案中，cdr对应于被定义为kabatcdr的一部分的氨基酸残基以及被定义为chothiacdr一部分的氨基酸残基。术语“表位”包括能够与免疫球蛋白特异性结合或以其它方式与分子相互作用的任何蛋白质决定簇。表位决定簇通常由分子的化学活性表面基团组成，例如氨基酸或碳水化合物或糖侧链，并且可以具有特定的三-维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是“线性”或“构象的”。构象和线性表位的区别在于在变性溶剂存在下与前者但不是后者的结合丧失。如本文所用，短语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指多肽，包括抗体、双特异性抗体等，其具有基本上相同的氨基酸序列或衍生自相同遗传来源。该术语还包括单一分子组合物的抗体分子制品。单克隆抗体组合物展示出对特定表型的单一结合特异性和亲和力。如本文所用，短语“人抗体”包括具有可变区的抗体，其中构架和cdr区均源自人源序列。此外，如果抗体含有恒定区，则该恒定区也衍生自这样的人序列，例如人种系序列或人种系序列的突变形式或含有衍生自人构架序列分析的共有构架序列的抗体，例如描述于knappik等人(2000.jmolbiol296,57-86)。可以使用众所周知的编号方案来定义免疫球蛋白可变域例如cdr的结构和位置，例如kabat编号方案、chothia编号方案或组合kabat和chothia(参见例如sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,u.s.departmentofhealthandhumanservices(1991),eds.kabat等人；allazikani等人,(1997)j.mol.bio.273:927948)；kabat等人,(1991)sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,nihpublicationno.91-3242u.s.departmentofhealthandhumanservices；chothia等人,(1987)j.mol.biol.196:901-917；chothia等人,(1989)nature342:877-883；和al-lazikani等人,(1997)j.mal.biol.273:927-948。本发明的人抗体可以包括不由人序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变或保守取代以促进稳定性或制造而导入的突变)。然而，如本文所使用的术语“人抗体”无意包括这样的抗体，其中衍生自另一种哺乳动物物种如小鼠的种系的cdr序列已被移植到人构架序列上。如本文所用，短语“重组人抗体”包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如从对人免疫球蛋白基因是转基因或转染色体的动物(例如小鼠)分离的抗体或由其制备的杂交瘤、从转化的表达人抗体的宿主细胞、例如从转染瘤(transfectoma)分离的抗体、从重组的组合人抗体文库分离的抗体，和通过任何其它方式制备、表达、产生或分离的抗体，所述任何其它方式涉及将全部或部分人免疫球蛋白基因，序列剪接到其它dna序列。这样的重组人抗体具有可变区，其中构架和cdr区来源于人种系免疫球蛋白序列。然而，在某些实施方案中，可以对这样的重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用对人ig序列转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，因此，重组抗体vh和vl区的氨基酸序列的区域是可能并非在体内人抗体种系库中天然存在，而是来源于或与人种系vh和vl序列相关的序列。如本文所用的术语“fc区”是指包含ch3、ch2和抗体的恒定结构域的铰链区的至少一部分的多肽。任选地，fc区可以包括存在于一些抗体类别中的ch4结构域。fc区可以包含抗体恒定结构域的整个铰链区。在一个实施方案中，本发明包含抗体的fc区和ch1区。在一个实施方案中，本发明包含抗体的fc区ch3区。在另一个实施方案中，本发明包括来自抗体恒定结构域的fc区、ch1区和cκ/λ区。在一个实施方案中，本发明的结合分子包含恒定区，例如重链恒定区。在一个实施方案中，与野生型恒定区相比，这样的恒定区是修饰的。也就是说，本文公开的本发明的多肽可以包含对三个重链恒定结构域(ch1、ch2或ch3)中的一个或多个和/或轻链恒定区结构域(cl)的改变或修饰。示例修饰包括在一个或多个结构域中一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。可以包括这类改变以优化效应子功能、半衰期等。如本文所用，术语“结合特异性”是指单个抗体结合位点与一种抗原决定簇反应而不与不同抗原决定簇反应的能力。抗体的结合位点位于分子的fab部分上，并且由重和轻链的高变区构建。抗体的结合亲和力是单一抗原决定簇与抗体上单一结合位点之间反应的强度。它是在抗原决定簇与抗体结合位点之间操作的吸引力和排斥力的总和。如本文所用，术语“亲和力”是指抗体与抗原在单个抗原位点处的相互作用的强度。在每个抗原位点中，抗体“臂”的可变区通过弱的非共价力与抗原在许多位点相互作用；相互作用越强，则亲和力越强。术语“保守序列修饰”是指不显著影响或改变含氨基酸序列的抗体或抗体片段的结合特征的氨基酸修饰。这种保守修饰包括氨基酸置换、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术，例如位点定向诱变和pcr介导的诱变，将修饰导入本发明的抗体或抗体片段。保守氨基酸取代是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代的取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-支链侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，抗体内的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同侧链家族的其它氨基酸残基替代，并且可以使用本文所述的功能测定来测试改变的抗体。术语“同源”或“同一性”是指两个聚合物分子之间的亚基序列同一性，例如两个核酸分子之间，例如两个dna分子或两个rna分子之间或两个多肽分子之间。当两个分子中的亚基位置都被相同的单体亚基占据时；例如如果两个dna分子的一个位置被腺嘌呤占据，则它们在该位置是同源的或相同的。两个序列之间的同源性是匹配或同源位置数目的直接函数；例如，如果两个序列中位置的一半(例如长度为10个亚基的聚合物中的5个位置)是同源的，则这两个序列是50％同源的；如果90％的位置(例如10个中的9个)匹配或同源，则两个序列是90％同源的。可以通过在比较窗口中比较两个最佳比对的序列来确定“序列同一性”的百分比，其中与参比序列(不包含添加或删除)相比，其比较窗口中的氨基酸序列的片段可以包含添加或缺失(例如缺口或突出端)以便两个序列的最佳比对。百分比可以通过下列步骤来计算：确定两个序列中出现相同氨基酸残基的位置数，以产生匹配位置的数目；将匹配位置的数目除以比较窗口中位置的总数，并且将结果乘以100以产生序列同一性的百分比。输出是主题序列相对于查询序列的百分比同一性。术语“癌症”和“癌性的”是指或描述哺乳动物中典型地以不受调节的细胞生长为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤(包括髓母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜细胞肉瘤)、神经内分泌肿瘤(包括类癌瘤、胃泌素瘤和胰岛细胞癌)、间皮瘤、神经鞘瘤(包括听神经瘤)、脑膜瘤、腺癌、黑素瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌、包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的鳞状癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌包括胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食管癌、胆道肿瘤以及头颈部癌。“her2阳性癌症”或“表达her2的癌症”是包含her2蛋白存在于其细胞表面的细胞的癌症。本领域已知用于检测或确定癌细胞上her2的存在的许多方法。例如，在一些实施方案中，可以通过免疫组织化学(ihc)、流式细胞术、蛋白质印迹、免疫荧光测定、放射免疫测定(ria)、酶联免疫吸附测定(elisa)、均相时间分辨荧光(htrf)或正电子发射断层摄影术(pet)来确定细胞表面上存在her2。如本文所用，术语“组合”或“药物组合”是指由多于一种活性成分的混合或组合产生的产品，并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分例如本发明的化合物和一种或多种另外的治疗剂以单一实体或剂量的形式同时施用于受试者。术语“非固定组合”是指将活性成分例如本发明的化合物和一种或多种另外的治疗剂作为单独的实体同时、伴随地或依次地施用于受试者，没有具体限制，其中这样的施用提供了受试者体内活性成分的治疗有效水平。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如施用3种或更多活性成分。如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指本发明化合物与至少一种和任选多于一种其它药学上可接受的化学成分的混合物，例如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂。本文所用的术语“旋光异构体”或“立体异构体”是指本发明的给定化合物可以存在的各种立体异构构型中的任意一种且包括几何异构体。应当理解的是，取代基可以连接在碳原子的手性中心上。术语“手性”是指在其镜像配偶体上具有不可叠加特性的分子，而术语“非手性”是指在其镜像配偶体上为可叠加的分子。因此，本发明包括本发明化合物的对映体、非对映体或外消旋体。“对映体”是互为不可叠加镜像的一对立体异构体。一对对映体的1：1混合物是“外消旋”混合物。在适宜的情况下，该术语用于指外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称原子、但是不互为镜像的立体异构体。绝对立体化学是根据cahn-lngold-prelogr-s系统来规定的。当一种化合物是纯对映体时，每个手性碳上的立体化学可以用r或s来说明。拆分的其绝对构型不明的化合物可以根据它们在钠d线波长下旋转平面偏振光的方向(右旋-或左旋-)而被指定为(+)或(-)。本文所述的本发明的某些化合物可以含有一个或多个不对称中心或轴，因此可以产生对映体、非对映体和可以在绝对立体化学上被定义为(r)-或(s)-的其它立体异构形式。如本文所用，术语“药学上可接受的载体”包括任意和所有的溶剂、分散介质、包衣衣料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等及其组合，正如本领域技术人员已知的(参见例如remington'spharmaceuticalsciences,第18版mackprintingcompany,1990,pp.1289-1329)。除外任意常规载体与活性成分不相容，其在治疗或药物组合物中的应用是本发明所涵盖的。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指不消除本发明化合物的生物活性和特性并且不会对所施用的受试者产生显著刺激的盐。本文所用的术语“受试者”涵盖哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于人、黑猩猩、猿、猴子、牛、马、绵羊、山羊、猪、家兔、狗、猫、大鼠、小鼠、豚鼠等。非哺乳动物的实例包括鸟类、鱼等。受试者通常是人。术语“需要治疗的受试者”是指在生物学上、医学上或生活质量方面从这类治疗中获益的受试者。如本文所用，术语“治疗有效量”是指将引起受试者的生物学或医药响应的本发明抗体缀合物的量，所述响应例如是降低或抑制酶或蛋白质活性，或者改善症状、缓解病症、减慢或延迟疾病进展，或者预防疾病等。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于受试者时有效地至少部分缓解、抑制、预防和/或改善病症或障碍或疾病的本发明抗体缀合物的用量。如本文所用，术语“tlr7激动剂”是指能够激活toll-样受体7(tlr7)的化合物或抗体缀合物。本文所用的术语“治疗”是指缓解、减轻或改善疾病或病症症状、预防额外症状、改善或预防潜在的症状代谢原因、抑制疾病或病症、阻止疾病或病症发展、缓解疾病或病症、导致疾病或病症消退、缓解因疾病或病症导致的病状或通过预防和/或治疗方式停止疾病或病症症状的方法。本文提供的化合物名称使用chemdrawultra12.0版或jchem5.3.1版(chemaxon)得到。除非另有指定，否则术语“本发明的化合物”、“本发明化合物”或“本文提供的化合物”是指式(i)及其子式的化合物(即式(ia)和式(ib)的化合物)及其药学上可接受的盐、立体异构体(包括非对映异构体和对映体)、互变体和同位素标记的化合物(包括氘代取代物)。除非另有指定，否则术语“本发明的抗体缀合物”是指式(ii)及其子式的化合物(即式(iia)和式(iib)的化合物)及其药学上可接受的盐、立体异构体(包括非对映异构体和对映体)、互变体和同位素标记的化合物(包括氘代取代物)的抗体缀合物。除非本文另有说明或者上下文清楚地有相反含义，否则本文所用的术语“一个”、“一种”、“该/所述”以及本发明的上下文中(尤其是在权利要求书的上下文中)所使用的类似术语应理解为既包括单数，又包括复数。本发明的免疫刺激化合物本发明的免疫刺激化合物是具有式(i)结构的tlr7激动剂：其中：rd是且re是h；或re是且rd是h；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-n3、-nhc(＝o)ch＝ch2、-sh、-sr7、-oh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-c(o)nhnh2、r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。本发明化合物的某些方面和实例在下列另外列举的实施方案的列表中提供。将认识到，每个实施方案中指定的特征可以与其它指定特征组合以提供本发明的另外的实施方案。实施方案1.式(i)的化合物及其药学上可接受的盐，其中：rd是且re是h；或re是且rd是h；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-n3、-nhc(＝o)ch＝ch2、sh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-c(o)nhnh2、r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案2.具有式(ia)或式(ib)结构的式(i)化合物及其药学上可接受的盐：其中：r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-n3、-nhc(＝o)ch＝ch2、sh、-sr7、-oh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-c(o)nhnh2、r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案3.式(ia)或式(ib)的化合物及其药学上可接受的盐，其中：r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-n3、-nhc(＝o)ch＝ch2、sh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-c(o)nhnh2、r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案4.具有式(ia)或式(ib)结构的式(i)化合物及其药学上可接受的盐：其中：r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、-nhc(＝o)ch＝ch2、-n3、sh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、或-co2h；r5是x1是x2是x3是r6是2-吡啶基或4-吡啶基；r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案5.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-；r4是-onh2、-nh2、r5是x1是x2是x3是m各自独立地选自1、2、3和4；且n各自独立地选自1、2、3和4；且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案6.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-；r4是-onh2、-nh2、r5是x1是x2是x3是n各自独立地选自1、2、3和4，且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案7.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-；r4是-onh2、-nh2、r5是x1是x2是x3是n各自独立地选自1、2、3和4，且t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案8.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)n；r4是-onh2、-nh2、r5是且n各自独立地选自1、2、3和4。实施方案9.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)n；r4是r5是且n各自独立地选自1、2、3和4。实施方案10.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)n；r4是-onh2或-nh2；且n各自独立地选自1、2、3和4。实施方案11.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)n；r4是且n各自独立地选自1、2、3和4。实施方案12.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhr2。实施方案13.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r1是–nhchr2r3。实施方案14.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r2是-c4烷基。实施方案15.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r2是–c5烷基。实施方案16.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r2是-c6烷基。实施方案17.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r3是l1oh。实施方案18.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l1是-(ch2)-。实施方案19.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l1是-(ch2ch2)-。实施方案20.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l2是-(ch2)n-*、-((ch2)no)t(ch2)n-*、-(ch2)nx1(ch2)n-*、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-*、-(ch2)nnhc(＝o(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-*、或-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n*，其中*表示与r4的连接点。实施方案21.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l2是-c(＝o)(ch2)n*-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-*、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-*、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-*、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-*、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-*、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-*、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-*或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-*，其中*表示与r4的连接点。实施方案22.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l2是-(ch2)n-*或-c(＝o)(ch2)n-*，其中*表示与r4的连接点。实施方案23.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中l2是-(ch2ch2)-*或-c(＝o)(ch2ch2)-*，其中*表示与r4的连接点。实施方案24.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l2是-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-*、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-*、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-*、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-*或-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-*，其中*表示与r4的连接点。实施方案25.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r4是实施方案26.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r4是-onh2、或-nh2。实施方案27.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r4是实施方案28.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r4是-nhc(＝o)ch＝ch2、-n3、sh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-nhch(＝o)或–nhch(＝s)。实施方案29.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r4是实施方案30.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r4是-sr7或-oh。实施方案31.式(i)的化合物、式(ia)或式(ib)，其中r5是实施方案32.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x1是实施方案33.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x1是实施方案34.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x1是实施方案35.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x2是实施方案36.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x2是实施方案37.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x2是实施方案38.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x2是实施方案39.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x2是实施方案40.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x3是实施方案41.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x3是实施方案42.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x3是实施方案43.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x3是实施方案44.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：x3是实施方案45.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r6是2-吡啶基或4-吡啶基。实施方案46.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r7各自独立地选自h和c1-c6烷基。实施方案47.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r7各自是h.实施方案48.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：r7各自是c1-c6烷基。实施方案49.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：m各自独立地选自1、2、3和4。实施方案50.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：m各自是1或2。实施方案51.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：n各自独立地选自1、2、3和4。实施方案52.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：n各自是2或3。实施方案53.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案54.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：t各自独立地选自1、2、3、4、5和6。实施方案55.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，选自：1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；(2r)-2-氨基-3-((1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-2,5-二氧代吡咯烷-3-基)硫基)丙酸；(6r)-6-(2-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-2-氧代乙基)-5-氧代硫代吗啉-3-甲酸；3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫代)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；(2s)-2-氨基-3-((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)硫基)丙酸；(6r)-6-(2-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)-5-氧代硫代吗啉-3-甲酸；3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；1-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；1-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；(2r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,19-二氧代-10,13,16-三氧杂-4-硫杂-7-氮杂十九烷-1-酸；(2r,5s)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,19-二氧代-10,13,16-三氧杂-4-硫杂-7-氮杂十九烷-1-酸；(2r,5r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,19-二氧代-10,13,16-三氧杂-4-硫杂-7-氮杂十九烷-1-酸；(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,14-二氧代-4,7,10-三氧杂-17-硫杂-13-氮杂二十碳烷-20-酸；(16r,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,14-二氧代-4,7,10-三氧杂-17-硫杂-13-氮杂二十碳烷-20-酸；(16s,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,14-二氧代-4,7,10-三氧杂-17-硫杂-13-氮杂二十碳烷-20-酸；1-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-1h-吡咯-2,5-二酮；(2r)-2-氨基-28-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,28-二氧代-10,13,16,19,22,25-六氧杂-4-硫杂-7-氮杂二十八烷-1-酸；(2r,5s)-2-氨基-28-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,28-二氧代-10,13,16,19,22,25-六氧杂-4-硫杂-7-氮杂二十八烷-1-酸；(2r,5r)-2-氨基-28-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,28-二氧代-10,13,16,19,22,25-六氧杂-4-硫杂-7-氮杂二十八烷-1-酸；(28r)-28-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-25-羧基-1,23-二氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-26-硫杂-22-氮杂二十九烷-29-酸；(25r,28r)-28-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-25-羧基-1,23-二氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-26-硫杂-22-氮杂二十九烷-29-酸；(25s,28r)-28-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-25-羧基-1,23-二氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-26-硫杂-22-氮杂二十九烷-29-酸；1-((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮；(2r)-2-氨基-3-((2-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)硫基)戊二酸；n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺；(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-(羧基甲基)-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,14-二氮杂二十碳烷-20-酸；(16s,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-(羧基甲基)-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,14-二氮杂二十碳烷-20-酸；(16r,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-(羧基甲基)-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,14-二氮杂二十碳烷-20-酸；(20r)-20-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-17-羧基-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-18-硫杂-10,14-二氮杂二十一烷-21-酸；(17r,20r)-20-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-17-羧基-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-18-硫杂-10,14-二氮杂二十一烷-21-酸；(17s,20r)-20-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-17-羧基-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-18-硫杂-10,14-二氮杂二十一烷-21-酸；5-(4-((4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺；1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮；n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙酰胺；(2r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,9,19-三氧代-13,16-二氧杂-4-硫杂-7,10-二氮杂十九烷-1-酸；(2r,5s)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,9,19-三氧代-13,16-二氧杂-4-硫杂-7,10-二氮杂十九烷-1-酸；(2r,5r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,9,19-三氧代-13,16-二氧杂-4-硫杂-7,10-二氮杂十九烷-1-酸；(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,11,14-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,13-二氮杂二十碳烷-20-酸；(16r,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,11,14-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,13-二氮杂二十碳烷-20-酸；(16s,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,11,14-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,13-二氮杂二十碳烷-20-酸；4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-n-(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-甲酰胺；3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；1-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸；1-((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮；3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸；n-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺；4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基酯；(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸；(s)-1-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；1-(3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸；1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙酮；1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-氨基乙氧基)丙-1-酮；n-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺；(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙酮；(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮；(s)-n-(2-(2-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺；n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺；5-(4-((4-(2-(2-(氨基氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺；n-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺；5-(4-((4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺；n-(2-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺；5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯；(s)-5-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯；(s)-2-氨基-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(((s)-1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸；(s)-2-氨基-6-(5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸；5-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯；(s)-2-氨基-6-(5-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酰氨基)己酸；5-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯；(s)-2-氨基-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸；5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸全氟苯基酯；3-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酸全氟苯基酯；3-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯基酯；(s)-2-氨基-6-(3-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酰氨基)己酸；和n-(15-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五基)-5-((3as,4s,6ar)-2-氧代六氢-1h-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰胺。实施方案56.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，选自：1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮；1-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮和1-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮。实施方案57.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，选自：(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸；4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((r)-6-氨基-2-((s)-2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)-3-苯基丙酰氨基)己酰氨基)苄基酯；4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基酯；(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸；(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸；n-(2-((5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基)二硫烷基)乙基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺；1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-甲基-4-(甲硫基)戊-2-酮；(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)(羟基)磷酰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸；(2r,2'r)-3,3'-((2-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)亚氨基)丙-1,3-二基)双(硫烷二基))双(2-氨基丙酸)；(r)-2-氨基-6-((((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫代)甲基)-17-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-10,17-二氧代-8,14-二氧杂-4-硫杂-7,11-二氮杂十七-6-烯酸；和2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙-1-醇。此外，用重同位素、特别是氘取代(即h2或d)因较大的代谢稳定性而可以提供一些治疗优势，例如体内半衰期增加或剂量需求减小或治疗指数改善。应理解，在本上下文中的氘被视为式(i)化合物的取代基。这种重同位素、特别是氘的浓度可以被定义为同位素富集因子。本文所用的术语“同位素富集因子”指同位素丰度与具体同位素天然丰度之比。如果本发明化合物上的取代基是所示的氘，则这种化合物对每一指定氘原子具有的同位素富集因子至少是3500(在每一指定氘原子上的氘纳入52.5％)、至少4000(60％氘纳入)、至少4500(67.5％氘纳入)、至少5000(75％氘纳入)、至少5500(82.5％氘纳入)、至少6000(90％氘纳入)、至少6333.3(95％氘纳入)、至少6466.7(97％氘纳入)、至少6600(99％氘纳入)或至少6633.3(99.5％氘纳入)。本发明的药学上可接受的溶剂合物包括这样的化合物，其中结晶溶剂可以被同位素取代，例如d2o、d6-丙酮、d6-dmso。制备式(i)及其子式的化合物的方法用于制备式(i)及其子式的化合物的通用方法如本文所述。在所述反应中，如果它们是终产物中期望的，可以保护反应官能团，例如羟基、氨基、亚氨基、巯基或羧基，以避免它们不需要地参与反应。在本文范围内，仅将不是本发明化合物特别期望的终产物的成分的易于除去的基团称作“保护基”，上下文中另有指示的除外。用这类保护基保护官能团、保护基自身及裂解反应描述在例如标准参考书中，例如j.f.w.mcomie,“protectivegroupsinorganicchemistry”,plenumpress,london和newyork1973，t.w.greene和p.g.m.wuts,“protectivegroupsinorganicsynthesis”,第3版,wiley,newyork1999,“thepeptides"；第3卷(编辑:e.gross和j.meienhofer),academicpress,london和newyork1981，“methodenderorganischenchemie"(methodsoforganicchemistry),houbenweyl,第4版,第15/i卷,georgthiemeverlag,stuttgart1974,h.-d.jakubke和h.jeschkeit,“peptide,proteine"(aminoacids,peptides,proteins),verlagchemie,weinheim,deerfieldbeach和basel1982，和jochenlehmann,“chemiederkohlenhydrate:monosaccharideundderivate"(chemistryofcarbohydrates:monosaccharidesandderivatives),georgthiemeverlag,stuttgart1974。保护基的特征在于它们易于被除去(即不发生不期望的副反应)，例如通过溶剂分解、还原、光解或可替代地在生理条件下(例如通过酶裂解)。在某些实施方案中，通过使式(i)及其子式的化合物的游离碱形式与化学计算量的适合的药学上可接受的有机酸或无机酸或适合的阴离子交换试剂反应，将本文提供的式(i)及其子式的化合物制备成药学上可接受的酸加成盐。典型地这类反应在水或有机溶剂或两者的混合物中进行。通常，如果切实可行，则非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈的应用是期望的。或者，使用原料或中间体的盐制备式(i)及其子式的化合物的盐形式。具有至少一个成盐基团的本发明的化合物的盐可以用本领域技术人员已知的方式来制备。例如，具有酸基团的本发明化合物的盐可以例如通过用金属化合物如适合的有机羧酸的碱金属盐例如2-乙基己酸的钠盐、用有机碱金属或碱土金属化合物如相应的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐如氢氧化钠或氢氧化钾、碳酸钠或碳酸钾或者碳酸氢钠或碳酸氢钾、用相应的钙化合物或用氨或适合的有机胺处理所述化合物来形成，优选使用化学计量或仅少量过量的成盐剂。本发明化合物的酸加成盐是用常规方式获得的，例如是通过用酸或适合的阴离子交换试剂处理所述化合物获得。含有酸和碱性成盐基团例如游离羧基和游离氨基的本发明化合物的内盐可以例如通过例如用弱碱将盐如酸加成盐中和至等电点或者通过用离子交换剂处理来形成。可以根据本领域技术人员已知的方法将盐转化成游离化合物。可以例如通过用适合的酸处理来对金属和铵盐进行转化，可以例如通过用适合的碱性试剂处理来对酸加成盐进行转化。所有上述方法步骤均可在本领域技术人员已知的反应条件(包括具体提及的那些反应条件)下、在不存在或者通常在存在溶剂或稀释剂(包括例如对所用的试剂而言是惰性的并且可溶解它们的溶剂或稀释剂)的情况下、在不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂(例如离子交换剂，如阳离子交换剂，例如h+形式的阳离子交换剂)的情况下、根据反应的性质和/或反应物的性质在降低的、正常的或升高的温度下、例如在约-100℃至约190℃(包括例如约-80℃至约150℃)的温度范围内、例如在-80至-60℃下、在室温下、在-20至40℃下或在回流温度下、在大气压下或在密闭的容器中、适宜时在压力下、和/或在惰性气氛中、例如在氩气或氮气气氛下进行。式(i)及其子式的化合物的药学上可接受的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、溴化物/氢溴酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐(edisylate/ethanedisulfonate)、富马酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate/glucoheptonate)、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟甲磺酸盐(trifenatate)、三苯乙酸盐或昔萘酸盐(xinafoate)。用于形成式(i)及其子式的化合物的某些药学上可接受的酸加成盐的有机酸或无机酸包括但不限于乙酸、己二酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、苯磺酸、碳酸、樟脑磺酸、癸酸、chlortheophyllonate、柠檬酸、乙二磺酸、富马酸、d-甘油-d-古洛庚糖酸、半乳糖二酸、半乳糖二酸/粘酸、glucepticacid、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基硫酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸(mesylicacid/methanesulfonicacid)、粘酸、萘甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、萘磺酸、2-萘磺酸、烟酸、硝酸、十八酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、磺基水杨酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸和三苯乙酸。在一个实施方案中，本发明提供乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、溴化物/氢溴酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、三氟甲磺酸盐、三苯乙酸盐或昔萘酸盐形式的3-(3-氟-4-(3-(哌啶-4-基)丙氧基)苯基)-1-甲基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-胺。在一个实施方案中，本发明提供乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、溴化物/氢溴酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、三氟甲磺酸盐、三苯乙酸盐或昔萘酸盐形式的3-(4-(((1r,4r)-4-氨基环己基)甲氧基)-3-氟苯基)-1-甲基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-胺。在一个实施方案中，本发明提供乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、溴化物/氢溴酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、三氟甲磺酸盐、三苯乙酸盐或昔萘酸盐形式的3-(4-((4-氨基双环[2.2.2]辛-1-基)甲氧基)-3-氟苯基)-1-甲基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-胺。在一个实施方案中，本发明提供乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、溴化物/氢溴酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、三氟甲磺酸盐、三苯乙酸盐或昔萘酸盐形式的3-(4-((4-氨基双环[2.2.2]辛-1-基)甲氧基)-3-氯苯基)-1-甲基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-6-胺。在一个实施方案中，本发明提供乙酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、溴化物/氢溴酸盐、樟脑磺酸盐、右旋樟脑磺酸、癸酸盐、氯化物/盐酸盐、chlortheophyllonate、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、谷氨酸盐、戊二酸盐、乙醇酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、十二烷基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、萘磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、三氟甲磺酸盐、三苯乙酸盐或昔萘酸盐形式的4-((2-氯-4-(6-甲氧基-1-甲基-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯氧基)甲基)双环[2.2.2]辛-1-胺。额外适合的酸加成盐的清单可以在例如“remington'spharmaceuticalsciences”,第20版,mackpublishingcompany,easton,pa.,(1985)；和“handbookofpharmaceuticalsalts:properties,selectionanduse”，stahl和wermuth(wiley-vch,weinheim,germany,2002)中找到。适合于任何特定反应可选择的溶剂包括那些具体提及的溶剂，或者例如水；酯，如低级烷基-链烷酸酯，例如乙酸乙酯；醚如脂族醚，例如乙醚或环醚，例如四氢呋喃或二噁烷；液体芳香烃，如苯或甲苯；醇类如甲醇，乙醇或1-或2-丙醇；腈如乙腈；卤代烃类，如甲基氯或氯仿；酰胺如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺；碱如杂环氮碱，例如吡啶或n-甲基吡咯烷-2-酮；甲酸酐，例如低级链烷酸酐，例如乙酸酐；环状、直链或支链烃，如环己烷，己烷或异戊烷，甲基环己烷或那些溶剂的混合物，例如水溶液，方法中另有指示的除外。这类溶剂混合物也可以用于后处理，例如通过色谱或分配。在某些实施方案中，式(i)及其子式的化合物作为溶剂合物(例如水合物)制备或形成。在某些实施方案中，式(i)及其子式的化合物的水合物通过使用有机溶剂如二噁英、四氢呋喃或甲醇，从含水/有机溶剂混合物中重结晶来制备。此外，本发明的化合物，包括它们的盐，也可以以其水合物的形式获得，或者包括用于其结晶的其它溶剂。本发明的化合物可以固有地或经设计与可药用溶剂(包括水)形成溶剂合物。因此，本发明既包括溶剂化的形式，也包括非溶剂化的形式。术语“溶剂合物”是指本发明的化合物(包括其药学上可接受的盐)与一个或多个溶剂分子的分子复合物。这类溶剂分子是药物领域中常用的那些，其已知对接受者是无害的，例如水、乙醇等。术语“水合物”是指其中溶剂是水的复合物。本发明的化合物的任何不对称碳原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集的形式、例如(r)-、(s)-或(r,s)-构型存在。在某些实施方案中，每个不对称原子在(r)-或(s)-构型中具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％对映体过量或至少99％对映体过量。如果可能，带有不饱和键的原子上的取代基可以以顺式-(z)-或反式-(e)-形式存在。因此，如本文所用，本发明化合物可以为可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映异构体、光学异构体(对映体)、外消旋体或其混合物存在。任何得到的异构体混合物可以基于组分的物理化学差异，例如通过色谱和/或分级结晶分离成纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体。任何所得的终产物或中间体的外消旋体可以用已知方法被拆分成旋光对映体，例如通过分离用旋光活性酸或碱获得的其非对映体盐并释放旋光活性的酸性或碱性化合物来拆分。特别地，因此碱性部分可被用于将本发明的化合物拆分成其旋光对映体，例如通过分级结晶用旋光活性的酸例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-o,o'-对-甲苯酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐来拆分。外消旋产物也可以通过手性色谱法、例如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(hplc)来拆分。在某些实施方案中，将式(i)或其子式的化合物制备成其各立体异构体。在另外的实施方案中，通过使化合物的外消旋混合物与旋光拆分试剂反应以形成非对映异构体化合物对、分离该非对映异构体并且回收光学纯的对映体，将式(i)或其子式的化合物制备成其各立体异构体。在某些实施方案中，拆分对映体使用式(i)或其子式的化合物的共价非对映异构体衍生物或通过使用易离解复合物(例如结晶非对映异构体盐)来进行。非对映异构体具有不同的物理特性(例如熔点、沸点、溶解度、反应性等)，并且易于通过利用这些不同性分离。在某些实施方案中，基于溶解度差异通过色谱法或通过分离/拆分技术分离非对映异构体。然后通过不会导致外消旋化的任意实用方式回收光学纯对映体与拆分试剂。适用于从其外消旋混合物中拆分化合物的立体异构体的技术的更详细描述可以在jeanjacques,andrecollet,samuelh.wilen,“enantiomers,racematesandresolutions,”johnwiley和sons,inc.,1981中找到。可以将根据本发明可获得的异构体混合物以本领域技术人员已知的方式分离成单独的异构体；非对映异构体可以例如通过在多相溶剂混合物之间分配、重结晶和/或色谱分离来分离，例如用硅胶或通过使用反相柱的中压液相色谱法，并且例如可以通过与光学纯盐形成试剂形成盐并分离可如此获得的非对映异构体的混合物来分离外消旋体，例如通过分级结晶或通过使用旋光柱材料的色谱法。根据原料和方法的选择的不同，本发明化合物的某些实施方案以可能的异构体之一或其混合物的形式存在，例如为纯光学异构体或异构体混合物，例如外消旋体和非对映体混合物，视不对称碳原子的数目而定。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、非对映异构体混合物和光学纯形式。旋光(r)-和(s)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备或使用常规技术来拆分。如果化合物含有双键，则取代基可以是e或z构型。如果化合物含有二取代的环烷基，则环烷基取代基可以具有顺式或反式构型。所有的互变异构形式也被包括在内。中间体和终产物可根据标准方法后处理和/或纯化，例如，使用色谱方法、分配方法、(重)结晶等。本发明还涉及这样的方法形式，其中在该方法的任何阶段可作为中间体获得的化合物用作原料并且进行其余的工艺步骤或其中在反应条件下形成原料或以衍生物的形式使用，例如以受保护的形式或以盐形式或通过根据本发明的方法可获得的化合物在工艺条件下生产并且在原位进一步处理。用于合成本发明化合物的所有原料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂可商购或可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。通过本文通用方案中所述的方法并且如实施例中示例的制备式(i)及其子式(式(ia)和式(ib))的化合物。方案1a示例用于制备式(a1)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a1)。在方案1a中，连接基是具有末端羰基部分(即–l’-c(＝o))的任意连接基(l’)。此外，在方案1a中，r1如本文所述，且r4是反应部分，其可以与硫醇、二硫化物、胺、酮、二酮、叠氮化物或炔反应。方案1b示例用于制备式(a1)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a1)。在方案1b中，连接基是具有末端羰基部分(即–l’-c(＝o))的任意连接基(l’)。此外，在方案1b中，r1如本文所述和r4部分具有氨基(例如羟基胺或胺)，且rb是具有被保护的氨基的部分，其中prot是保护基，例如boc、fmoc和cbz。方案1这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。方案2a示例用于制备式(a2)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a2)。在方案2a中，连接基是具有末端羰基部分(即–l’-c(＝o))的任意连接基(l’)。此外，在方案2a中，r1如本文所述，且r4是反应部分，其可以与硫醇、二硫化物、胺、酮、二酮、叠氮化物或炔反应。方案2b示例用于制备式(a2)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a2)。在方案2b中，连接基是具有末端羰基部分(即–l’-c(＝o))的任意连接基(l’)。此外，在方案2b中，r1如本文所述和r4部分具有氨基(例如羟基胺或胺)，且rb是具有被保护的氨基的部分，其中prot是保护基，例如boc、fmoc和cbz。方案2这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。方案3a示例用于制备式(ia)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–l2-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a1)。这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。在方案3a中，连接基(l2)包含具有末端羰基部分(即–la-c(＝o))的连接基部分(la)。方案3b示例用于制备式(i)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–l2-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a1)。这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。在方案3b中，连接基(l2)包含具有末端羰基部分(即–la-c(＝o))的连接基部分(la)，且rb是具有被保护的氨基的部分，其中prot是保护基，例如boc、fmoc和cbz。方案3方案4a示例用于制备式(ib)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–l2-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a2)。这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。在方案4a中，连接基(l2)包含具有末端羰基部分(即–la-c(＝o))的连接基部分(la)。方案4b示例用于制备式(ib)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–l2-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a2)。这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。在方案4b中，连接基(l2)包含具有末端羰基部分(即–la-c(＝o))的连接基部分(la)，且rb是具有被保护的氨基的部分，其中prot是保护基，例如boc、fmoc和cbz。方案4在方案3和4中，r4是-onh2、-nh2、-n3、-nhc(＝o)ch＝ch2、sh、-ssr6、-s(＝o)2(ch＝ch2)、-(ch2)2s(＝o)2(ch＝ch2)、-nhs(＝o)2(ch＝ch2)、-nhc(＝o)ch2br、-nhc(＝o)ch2i、-c(o)nhnh2、-co2h、-c(o)nhnh2、rb是-onh-；la是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；l2是-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；其中x1是x2是且x3是且r1、r7、r8、r9和r10如本文所定义。方案5示例用于制备式(b1)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过中间体(int-a1)仲胺的烷基化连接至中间体(int-a1)。在方案5中，连接基(la)初始被末端醛(即–la-c(＝o)h)官能化，且然后与中间体(int-a1)的仲胺反应。此外，在方案5中，r1如本文所述，且r4是反应部分，其可以与硫醇、二硫化物、胺、酮、二酮、叠氮化物或炔反应。方案5这类n-烷基化可以使用还原剂例如nacnbh3、nabh4或nabh(oac)3进行。方案6示例用于制备式(b2)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过中间体(int-a2)仲胺的烷基化连接至中间体(int-a2)。在方案6中，连接基(la)初始被末端醛(即–la-c(＝o)h)官能化，然后与中间体(int-a2)的仲胺反应。此外，在方案6中，r1如本文所述，且r4是反应部分，其可以与硫醇、二硫化物、胺、酮、二酮、叠氮化物或炔反应。方案6这类n-烷基化可以使用还原剂例如nacnbh3、nabh4或nabh(oac)3进行。方案7示例用于制备式(ia)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过中间体(int-a1)仲胺的烷基化连接至中间体(int-a1)。在方案7中，连接基部分la初始被末端醛(即–l’-c(＝o)h)官能化，然后与中间体(int-a1)的仲胺反应，由此形成连接基l2，其包含具有末端-ch2-基团的连接基部分la。这类n-烷基化可以使用还原剂例如nacnbh3、nabh4或nabh(oac)3进行。方案7方案8示例用于制备式(ib)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–l2-r4部分通过中间体(int-a2)仲胺的烷基化连接至中间体(int-a2)。在方案8中，连接基部分la初始被末端醛(即–l’-c(＝o)h)官能化，然后与中间体(int-a2)的仲胺反应，由此形成连接基l2，其包含具有末端-ch2-基团的连接基部分la。这类n-烷基化可以使用还原剂例如nacnbh3、nabh4或nabh(oac)3进行。方案8在方案7和8中，r4如方案3和4中所述；la是-(ch2)(n-1)-、-((ch2)(n-1)o)((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)(n-1)x1(ch2)n-、-(ch2)(n-1)nhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)(n-1)nhc(＝o(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-或-((ch2)(n-1)o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-或-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n；其中x1是且r1和r7如本文所定义。方案9示例用于制备式(a1)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a1)。在方案9中，连接基是具有末端羰基部分(即–l’-c(＝o))的任意连接基(l’)。此外，在方案9中，r1如本文所述，r4是且rc是方案9这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。方案10示例用于制备式(a2)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a2)。在方案10中，连接基是具有末端羰基部分(即–l’-c(＝o))的任意连接基(l’)。此外，在方案10中，r1如本文所述，r4是且rc是方案10这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。方案11示例用于制备式(ia)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–连接基-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a1)。在方案11中，连接基(l2)包含具有末端羰基部分(即–la-c(＝o))的连接基部分(la)。这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。方案11方案12示例用于制备式(ib)的某些化合物的非限制性合成方案，其中–l2-r4部分通过酰胺键连接至中间体(int-a2)。在方案12中，连接基(l2)包含具有末端羰基部分(即–la-c(＝o))的连接基部分(la)。这类酰胺键形成可以使用加热、edci偶联、hatu偶联、hbtu偶联、tbtu偶联或t3p偶联进行。方案12在方案11和12中，r4是rc是la是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-；l2是-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-；其中x1是x2是且x3是且r1和r7如本文所定义。中间体用于制备本发明式(i)及其子式的化合物(即式(ia)和式(ib)的化合物)的中间体的合成如下所述。中间体15-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1)的合成步骤1:4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(3)的制备向圆底烧瓶中加入4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2-胺(1,商购,1.0当量)、4-(溴甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(2,商购,1.0当量)、碳酸铯(1.0当量)和dmf(1.0m)。将该反应混合物在室温搅拌18小时，真空除去溶剂。向得到的混合物中加入etoac，真空除去溶剂。向该混合物中加入dcm，真空除去溶剂。然后通过isco色谱法(0–10％meoh:dcm,梯度)纯化粗反应混合物，得到4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(3)，为固体。步骤2:(4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(4)在圆底烧瓶中制备氢化铝锂(lah)(1.0当量,粉末)在thf(0.3m)中的浆液，冷却至0℃，剧烈搅拌15分钟。向该混合物中分批加入4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯(3,1.0当量，来自在先步骤)。除去冰浴，将该反应混合物在室温搅拌4小时，额外添加lah，直至反应完成)。向该反应混合物中加入et2o，然后将该混合物转入锥形瓶，在剧烈搅拌下冷却至0℃。然后通过缓慢添加饱和硫酸钠溶液使反应淬灭。得到白色沉淀，通过包含硅藻土的釉料过滤混合物，用thf和et2o洗涤。然后真空除去挥发性物质，将该物质不经进一步纯化用于下一步。步骤3:4-(4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5)在0℃将亚硫酰氯(10.0当量)加入到包含(4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇(4,1.0当量，来自步骤2)在dcm(0.1m)中的溶液的圆底烧瓶中。然后除去冰浴，将该反应混合物在室温搅拌4小时。然后将该反应混合物冷却回0℃，缓慢地通过添加naoh(1.0m,40.0当量)和饱和nahco3(水溶液)猝灭。将该物质转入分液漏斗，用dcm3x洗涤。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去挥发性物质。然后在圆底烧瓶中将得到的粗产物溶于dmf(0.1m)，不经进一步纯化使用。向该物质中加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.0当量)和huenig碱(1.2当量)，在室温搅拌18小时。然后用etoac稀释该反应混合物，转入分液漏斗，用饱和nacl(水溶液)2x和水2x洗涤。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去挥发性物质。通过isco色谱法(0–10％meoh:dcm,梯度)纯化粗反应混合物，得到4-(4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5)，为固体。步骤4:4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7)向圆底烧瓶中加入4-(4-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5,1.0当量，来自步骤3)、商购戊胺(6,3.0当量)、huenig碱(5.0当量)和dmso(0.5m)。将该反应混合物加热至120℃，搅拌18小时。然后将该反应混合物冷却至室温，加入水。然后冷冻该混合物，通过冻干除去大部分挥发性物质。通过isco色谱法(0–10％meoh(meoh包含0.7nnh3):dcm,梯度)纯化粗反应混合物，得到4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7)，为固体。步骤5:5-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1)在圆底烧瓶中在0℃将hcl的二噁烷溶液(4.0m,20.0当量)加入到4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(6,1.0，来自步骤4)在dcm(0.1m)中的溶液中。然后除去冰浴，将该反应混合物在室温搅拌3小时。然后将nh3的meoh溶液(0.7n)加入到反应混合物中，真空除去挥发性物质。将添加nh3的meoh溶液(0.7n)、真空除去挥发性物质再重复两次。然后通过isco色谱法(0–20％meoh(meoh包含0.7nnh3):dcm，梯度)纯化粗反应混合物，得到5-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.10(s,1h),6.91(d,1h),6.74(d,1h),6.22(d,1h),5.52(s,2h),3.92(s,3h),3.61(s,2h),3.54(t,2h),3.35(s,3h),3.22(m,4h),2.69(m,4h),1.51(m,2h),1.30(m,2h),1.18(m,2h),0.89(s,3h).lrms[m+h]＝438.3。中间体2(s)-2-((2-氨基-5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)己-1-醇(int-2)的合成步骤1:3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯甲酸乙酯(9)的制备向圆底烧瓶中加入4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2-胺(1,商购,1.0当量)、3-(溴甲基)-4-甲氧基苯甲酸乙酯(8,商购,1.0当量)、碳酸铯(1.0当量)和dmf(1.0m)。将该反应混合物在室温搅拌18小时。然后真空除去溶剂。向得到的混合物中加入etoac，真空除去溶剂。向该混合物中加入dcm，真空除去溶剂。然后通过isco色谱法(0–10％meoh:dcm，梯度)纯化粗反应混合物，得到3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯甲酸乙酯(9)，为固体。步骤2:(3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯基)甲醇(10)在圆底烧瓶中制备lah(1.0当量,粉末)在thf(0.3m)中的浆液，冷却至0℃，剧烈搅拌15分钟。向该混合物中分批加入3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯甲酸乙酯(9,1.0，来自步骤1)。然后除去冰浴，将该反应混合物在室温搅拌4小时(如果截止到此时反应未完成，则额外加入lah并且持续搅拌至反应完成)。然后使用et2o将该反应混合物转入锥形瓶。将该混合物冷却至0℃，剧烈搅拌。然后通过缓慢添加饱和硫酸钠溶液使反应淬灭。得到白色沉淀，通过包含硅藻土的釉料过滤该混合物，用thf和et2o洗涤。然后真空除去挥发性物质，所得材料不经进一步纯化用于下一步。步骤3:4-(3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11)在0℃将亚硫酰氯(10.0当量)加入到包含(3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苯基)甲醇(10,1.0，来自步骤2)在dcm(0.1m)中的溶液的圆底烧瓶中。然后除去冰浴，将该反应混合物在室温搅拌4小时。然后将该反应混合物冷却至0℃，缓慢地通过添加naoh(1.0m,40.0当量)和饱和nahco3(水溶液)猝灭。将该物质转入分液漏斗，用dcm3x洗涤。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去挥发性物质。然后在圆底烧瓶中将得到的粗产物溶于dmf(0.1m)，不经进一步纯化使用。向该物质中加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.0当量)和huenig碱(1.2当量)，在室温搅拌18小时。然后用etoac稀释该反应混合物，转入分液漏斗，用饱和nacl(水溶液)2x和水2x洗涤。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空除去挥发性物质。通过isco色谱法(0–10％meoh:dcm,梯度)纯化粗反应混合物，得到4-(3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11)，为固体。步骤4:(s)-4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12)向圆底烧瓶中加入4-(3-((2-氨基-4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(11,1.0，来自步骤3)、商购(s)-2-氨基己-1-醇(3.0当量)、huenig碱(5.0当量)和dmso(0.5m)。将该反应混合物加热至120℃，搅拌18小时。然后将该反应混合物冷却至室温，加入水。然后冷冻该混合物，通过冻干除去大部分挥发性物质。通过isco色谱法(0–10％meoh(meoh包含0.7nnh3):dcm，梯度)纯化粗反应混合物，得到(s)-4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12)，为固体。步骤5:实施例1-(s)-2-((2-氨基-5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)己-1-醇(int-2)在圆底烧瓶中在0℃将hcl的二噁烷溶液(4.0m,20.0当量)加入到(s)-4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12,1.0，来自步骤4)在dcm(0.1m)中的溶液中。然后除去冰浴，将该反应混合物在室温搅拌3小时。然后将nh3的meoh溶液(0.7n)加入到该反应混合物中，真空除去挥发性物质。将添加nh3的meoh溶液(0.7n)、真空除去挥发性物质再重复2次。然后通过isco色谱法(0–20％meoh(meoh包含0.7nnh3):dcm，梯度)纯化粗反应混合物，得到(s)-2-((2-氨基-5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)己-1-醇(int-2)，为固体:1h(cd3od):δ7.50(d,1h),7.29(d,1h),7.09(d,1h),6.63(s,1h),6.29(d,1h),5.69(d,1h),5.40(d,1h),4.34(m,1h),3.95(s,3h),3.51(m,2h),3.42(s,2h),3.12(m,4h),2.56(m,2h),1.48(m,1h),1.21(m,3h),0.96(m,2h),0.83(t,3h).lrms[m+h]＝468.3.中间体35-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-3)的合成根据(s)-2-((2-氨基-5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)己-1-醇(int-2)的合成制备5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-3)，除外在步骤4中使用商购n-戊胺替代(s)-2-氨基己-1-醇。1hnmr(cd3od):δ7.42(d,1h),7.32(d,1h),7.09(d,1h),6.70(s,1h),6.25(d,1h),5.54(d,2h),3.92(s,3h),3.52(t,2h),3.46(s,2h),3.14(m,4h),2.60(m,4h),1.48(m,2h),1.30(m,2h),1.13(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝438.3。本发明的抗体缀合物本发明的抗体缀合物包含tlr7激动剂并且具有式(ii)的结构：其中：r50是其中*表示与ab的连接点；ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是-nhr2或-nhchr2r3；r2是-c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是-s-、-nhc(＝o)ch2-、-s(＝o)2ch2ch2-、-(ch2)2s(＝o)2ch2ch2-、-nhs(＝o)2ch2ch2、-nhc(＝o)ch2ch2-、-ch2nhch2ch2-、-nhch2ch2-、x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；r12是h,甲基或苯基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。本发明化合物的某些方面和实例在下列另外列举的实施方案的列表中提供。将认识到，每个实施方案中指定的特征可以与其它指定特征组合以提供本发明的另外的实施方案。实施方案58.式(ii)的抗体缀合物，其中：r50是其中*表示与ab的连接点；ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是-nhr2或-nhchr2r3；r2是-c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是-s-、-nhc(＝o)ch2-、-s(＝o)2ch2ch2-、-(ch2)2s(＝o)2ch2ch2-、-nhs(＝o)2ch2ch2、-nhc(＝o)ch2ch2-、-ch2nhch2ch2-、-nhch2ch2-、x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；r12是h、甲基或苯基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。实施方案59.具有式(iia)或式(iib)结构的式(ii)的抗体缀合物及其药学上可接受的盐：其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是-nhr2或-nhchr2r3；r2是-c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是-s-、-nhc(＝o)ch2-、-s(＝o)2ch2ch2-、-(ch2)2s(＝o)2ch2ch2-、-nhs(＝o)2ch2ch2、-nhc(＝o)ch2ch2-、-ch2nhch2ch2-、-nhch2ch2-、x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；r12是h、甲基或苯基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。实施方案60.式(iia)或式(iib)的抗体缀合物及其药学上可接受的盐，其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是-nhr2或-nhchr2r3；r2是-c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是-s-、-nhc(＝o)ch2-、-s(＝o)2ch2ch2-、-(ch2)2s(＝o)2ch2ch2-、-nhs(＝o)2ch2ch2、-nhc(＝o)ch2ch2-、-ch2nhch2ch2-、-nhch2ch2-、x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；r8各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl和–oh；r9各自独立地选自h、c1-c6烷基、f、cl、-nh2、-och3、-och2ch3、-n(ch3)2、-cn、-no2和–oh；r10各自独立地选自h、c1-6烷基、氟、被–c(＝o)oh取代的苄氧基、被–c(＝o)oh取代的苄基、被–c(＝o)oh取代的c1-4烷氧基和被–c(＝o)oh取代的c1-4烷基；r12是h、甲基或苯基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。实施方案61.具有式(iia)或式(iib)结构的式(ii)的抗体缀合物及其药学上可接受的盐：其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是–c3-c6烷基或-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是或-s-；x1是x2是x3是r7各自独立地选自h和c1-c6烷基；m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。实施方案62.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：ab是特异性地结合人的抗体或其抗原结合片段her2；r1是–nhr2或–nhchr2r3；r2是-c4-c6烷基；r3是l1oh；l1是-(ch2)m-；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是x1是x2是x3是m各自独立地选自1、2、3和4；n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18且y是1-16的整数。实施方案63.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n；r40是x1是x2是x3是n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。实施方案64.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-；r40是x1是x2是x3是n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。实施方案65.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)n；r40是且n各自独立地选自1、2、3和4，且y是1-16的整数。实施方案66.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：ab是特异性地结合人her2的抗体或其抗原结合片段；r1是–nhr2；r2是-c4-c6烷基；l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-或-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-；r40是x1是x2是x3是n各自独立地选自1、2、3和4；t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18，且y是1-16的整数。实施方案67.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r1是–nhr2。实施方案68.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r1是–nhchr2r3。实施方案69.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r2是-c4烷基。实施方案70.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r2是–c5烷基。实施方案71.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r2是-c6烷基。实施方案72.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r3是l1oh；实施方案73.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：l1是-(ch2)-。实施方案74.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：l1是-(ch2ch2)-。实施方案75.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l2是-(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)n-、-(ch2)nx1(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-(ch2)nnhc(＝o(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n。实施方案76.式(i)、式(ia)或式(ib)的化合物，其中：l2是-c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)((ch2)no)t(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-、-c(＝o)nh((ch2)no)t(ch2)nx1(ch2)n-、-c(＝o)x2x3c(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)nc(＝o)nh(ch2)n-。实施方案77.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：l2是-(ch2)n-或-c(＝o)(ch2)n-。实施方案78.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：l2是-c(＝o)x2x3c(＝o)(ch2)n-、-c(＝o)x2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2-、-c(＝o)(ch2)nc(r7)2ss(ch2)nnhc(＝o)(ch2)n-或-(ch2)nx2c(＝o)(ch2)nnhc(＝o)((ch2)no)t(ch2)n-。实施方案79.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r40是或-s-。实施方案80式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r40是实施方案81.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r40是实施方案82.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r40是或-s-。实施方案83.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r40是实施方案84.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r40是实施方案85.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：r40是实施方案86.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x1是实施方案87.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x1是实施方案88.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x1是实施方案89.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x2是实施方案90.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x2是实施方案91.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x2是实施方案92.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x2是实施方案93.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x2是实施方案94.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x3是实施方案95.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x3是实施方案96.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x3是实施方案97.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x3是实施方案98.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：x3是实施方案99.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：m各自独立地选自1、2、3和4。实施方案100.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：m各自是1或2。实施方案101.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：n各自独立地选自1、2、3和4。实施方案102.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：n各自是2或3。实施方案103.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：t各自独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18。实施方案104.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中：t各自独立地选自1、2、3、4、5和6。实施方案105.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中y是1-16的整数。实施方案106.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中y是1-8的整数。实施方案107.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，其中y是1-4的整数。实施方案108.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，选自：其中y是1-4的整数，且ab是抗-her2抗体或其抗原结合片段。实施方案109.式(ii)、式(iia)或式(iib)的抗体缀合物，选自：还提供了用于评估本发明的抗体缀合物的分析方法的一些方面的方案。这样的分析方法和结果可以证明所述缀合物具有有利的性质，例如可以使它们更容易制备，更容易施用于患者，更有效和/或对患者更安全。一个实例是通过尺寸排阻色谱法(sec)确定分子大小，其中样品中所需抗体种类的量相对于存在于样品中的高分子量污染物(例如二聚体、多聚体或聚集抗体)或者低分子量重量污染物(例如抗体片段、降解产物或单个抗体链)的量来确定。通常，由于例如聚集体对抗体样品的其他性质的影响，例如但不限于清除速率、免疫原性和毒性，因此期望具有较高量的单体和较低量的例如聚集的抗体。另一个实例是通过疏水作用色法谱(hic)测定疏水性，其中相对于已知性质的一组标准抗体评估样品的疏水性。通常，由于疏水性对抗体样品的其他性质的影响，例如但不限于聚集、随时间的聚集、对表面的粘附、肝毒性、清除率和药代动力学暴露，所以期望具有低疏水性。参见damle,n.k.,natbiotechnol.2008；26(8):884-885；singh,s.k.,pharmres.201532(11):3541-71。当通过疏水作用色谱法测定时，较高的疏水性指数评分(即从hic柱更快地洗脱)反映缀合物的较低疏水性。如实施例70和表3所示，大多数测试的抗体缀合物显示疏水性指数大于0.8。在一些实施方案中，提供了通过疏水作用色谱法测定的疏水指数为0.8或以上的抗体缀合物。抗-her2抗体本文提供的抗体缀合物包括抗体或其抗体片段(例如抗原结合片段)，其特异性地结合人her2(抗-her2抗体)。her2超表达在许多类型的癌症中观察到，例如胃癌、食管癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、膀胱癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、骨肉瘤、神经母细胞瘤或头颈癌。包含抗-her2抗体的抗体缀合物可以特异性地靶向至her2-阳性癌症或肿瘤。在一些实施方案中，本文提供的抗体缀合物包括单克隆抗体或其抗体片段，其特异性地结合人her2，例如人或人源化抗-her2单克隆抗体。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体或其抗体片段可以选自曲妥珠单抗、培妥珠单抗、margetuximab或ht-19或其抗体片段或其位点特异性突变体。曲妥珠单抗(商品名herceptin或herclon)是人源化单克隆抗体，其结合her2受体的胞外结构域的近膜部分(hudisca,nengljmed.2007；357(1):39-51)。曲妥珠单抗重链和轻链可变区的氨基酸序列描述在美国专利5,821,337中。曲妥珠单抗与人her2残基557–561、570–573和593–603形成的3个环区发生相互作用(cho等人,nature421:756-760,2003)。曲妥珠单抗可能通过预防her2受体二聚化、促进her2受体内吞破坏、抑制胞外结构域的脱落而干扰her2信号传导(hudisca,nengljmed.2007；357(1):39-51)。抗-her2抗体的另一重要作用机制是抗体依赖性细胞毒性(adcc)的介导。在adcc中，抗-her2抗体结合肿瘤细胞，然后通过fcε受体(fcεr)相互作用募集免疫细胞、例如巨噬细胞。曲妥珠单抗具有保守的人iggfc区并且能够募集负责抗体依赖性细胞毒性的免疫效应细胞(hudisca,nengljmed.2007；357(1):39-51)。曲妥珠单抗于1998年9月获得美国fda批准，用于治疗肿瘤过度表达her2和接受一种或多种化疗方案治疗其转移性疾病的患者中的转移性乳腺癌。培妥珠单抗(也称作2c4,omnitarg,perjeta)是人源化单克隆抗体，其结合her2受体的胞外结构域，并且抑制her2与其它her受体的二聚化。培妥珠单抗重链和轻链的氨基酸序列描述在美国专利7,560,111中。培妥珠单抗主要与人her2的245–333区内的残基发生相互作用，特别是残基his245、val286、ser288、leu295、his296或lys311(franklin等人,cancercell5:317–328,2004)。显示培妥珠单抗在破坏乳腺癌和前列腺癌细胞系中her1-her2和her3-her2复合物形成方面比曲妥珠单抗更有效(agus等人,jclinoncol.2005；23(11):2534-43.epubfeb7,2005)。对于效能而言，培妥珠单抗无需抗体-依赖性细胞毒性，因为对于其活性而言无需完整的fc区域(agus等人,jclinoncol.2005；23(11):2534-43.epubfeb7,2005)。培妥珠单抗受到美国fda批准，应用于与曲妥珠单抗和多西他赛组合，用于治疗具有her2-阳性转移乳腺癌的患者，其在2012年6月中未因转移性疾病接受抗-her2疗法或化疗。margetuximab(也称为mgah22)是另一种抗-her2单克隆抗体(参见http://www.macrogenics.com/products-margetuximab.html)。margetuximab的fc区被优化，使其与活化fcεrs的结合增加，但与免疫效应细胞上抗体和fcεrs的结合减少。margetuximab目前正在进行临床试验，用于治疗具有复发或顽固性晚期乳腺癌患者，所述患者通过免疫组织化学发现其肿瘤her2表达处于2+水平，并缺乏通过fish扩增her2基因的证据。ht-19是另一种抗-her2单克隆抗体，其结合人her2中的表位不同于曲妥珠单抗或培妥珠单抗的表位，并且经证实其抑制her2信号传导与曲妥珠单抗相差无几，且与曲妥珠单抗和培妥珠单抗组合促进her2降解(bergstromd.a.等人,cancerres.2015；75:lb-231)。其它适合的抗-her2单克隆抗体包括但不限于：如下美国专利中所述的抗-her2抗体：9,096,877；9,017,671；8,975,382；8,974,785；8,968,730；8,937,159；8,840,896；8,802,093；8,753,829；8,741,586；8,722,362；8,697,071；8,652,474；8,652,466；8,609,095；8,512,967；8,349,585；8,241,630；8,217,147；8,192,737；7,879,325；7,850,966；7,560,111；7,435,797；7,306,801；6,399,063；6,387,371；6,165,464；5,772,997；5,770,195；5,725,856；5,720,954；5,677,171。在一些实施方案中，抗-her2抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)包含具有表1中所述任意vh结构域的氨基酸序列的vh结构域。其它适合的抗-her2抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)可以包括已经突变的氨基酸，而在vh结构域中与表1中所述序列中所示vh区具有至少80、85、90、95、96、97、98或99百分比同一性。本公开在某些实施方案中还提供特异性地结合her2的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)，其中抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)包含vhcdr，其具有表1中所列vhcdr的任意一个的氨基酸序列。在具体的实施方案中，本发明提供特异性地结合her2的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)，其包含(或可选地由其组成)具有表1中所列vhcdr的任意一个的氨基酸序列的1、2、3、4、5或以上vhcdr。在一些实施方案中，抗-her2抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)包含具有表1中所述任意vl结构域的氨基酸序列的vl结构域。其它适合的抗-her2抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)可以包括已经突变的氨基酸，而在vl结构域中与表1中所述序列中所示vl区具有至少80、85、90、95、96、97、98或99百分比同一性。本公开在某些实施方案中还提供特异性地结合her2的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)，该抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)包含vlcdr，其具有表1中所列vlcdr的任意一个的氨基酸序列。在具体的实施方案中，本发明提供特异性地结合her2的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)，其包含(或可选地由其组成)具有表1中所列vlcdr的任意一个的氨基酸序列的1、2、3或以上的vhcdr。表1.示例性抗-her2单克隆抗体的序列本文公开的其它抗-her2抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)包括已经突变、而在cdr区中具有与表1中所述序列中所示的cdr区中至少80、85、90、95、96、97、98或99百分比同一性的氨基酸。在一些实施方案中，它包括突变氨基酸序列，其中在cdr区中与表1中所述序列中所示的cdr区相比不超过1、2、3、4或5个氨基酸发生突变。本文还提供了核酸序列，其编码特异性地结合her2的抗体和及其抗原结合片段的vh、vl、全长重链和全长轻链，例如表1中的核酸序列。这类核酸序列可以被优化用于在哺乳动物细胞中表达。本文公开的其它抗-her2抗体包括这样一些抗体，其中氨基酸或编码氨基酸的核酸已经突变，而具有与表1中所述序列至少80、85、90、95、96、97、98或99百分比同一性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括氨基酸序列，其中与表1中所述序列中所示的可变区相比，可变区中不超过1、2、3、4或5个氨基酸已经突变，同时保留基本上相同的治疗活性。由于提供的抗体各自与her2结合，所以可以“混合并匹配”vh、vl、全长轻链和全长重链序列(氨基酸序列和编码氨基酸序列的核苷酸序列)以产生其它本文公开的her2-结合抗体。这类“混合和匹配的”her2结合抗体可以使用本领域已知的结合测定来测试(例如elisa，在示例中描述的测定法)。当链被混合和匹配时，来自特定vh/vl配对的vh序列应被结构相似的vh序列替代。来自特定全长重链/全长轻链配对的全长重链序列应当被结构相似的全长重链序列启替代。来自特定vh/vl配对的vl序列应当被结构上相似的vl序列替代。来自特定全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列应当被结构相似的全长轻链序列替代。因此，在一个实施方案中，本发明提供分离的单克隆抗体或其抗原结合区：包含seqidno:7的氨基酸序列的重链可变区；和包含seqidno:17的氨基酸序列的轻链可变区；其中该抗体特异性地结合her2。在另一个实施方案中，本发明提供(i)分离的单克隆抗体，其具有：包含任意seqidno:9、21、23、30或32的氨基酸序列的全长重链；和包含seqidno:19的氨基酸序列的全长轻链；或(ii)包含其抗原结合部分的功能性蛋白质。在另一个实施方案中，本公开提供包含如表1中所述的重链cdr1、cdr2和cdr3和轻链cdr1、cdr2和cdr3的her2-结合抗体或其组合。抗体的vhcdr1的氨基酸序列如seqidno:1、4和6中所示。抗体的vhcdr2的氨基酸序列如seqidno:2和5中所示。抗体的vhcdr3的氨基酸序列如seqidno:3中所示。抗体的vlcdr1的氨基酸序列如seqidno:11和14中所示。抗体的vlcdr2的氨基酸序列如seqidno:12和15中所示。抗体的vlcdr3的氨基酸序列如seqidno:13和16中所示。鉴于各抗体结合her2并且抗原结合特异性主要由cdr1、cdr2和cdr3区提供，所以vhcdr1、cdr2和cdr3序列和vlcdr1、cdr2和cdr3序列可以被“混合和匹配”(即来自不同抗体的cdr可以混合并匹配，不过抗体各自必须含有vhcdr1、cdr2和cdr3以及vlcdr1、cdr2和cdr3)以产生本文公开的其它her2结合分子。这类“混合和匹配的”her2可以使用本领域已知的结合测定和实施例中描述的那些(例如elisa)来测试结合抗体。当vhcdr序列混合和匹配时，来自特定vh序列的cdr1、cdr2和/或cdr3序列应当被结构上相似的cdr序列替代。同样，当vlcdr序列被混合和匹配时，来自特定vl序列的cdr1、cdr2和/或cdr3序列应当被结构类似的cdr序列替代。对普通技术人员而言将是显而易见的是，通过用本文对本公开的单克隆抗体所示的cdr序列的结构上相似的序列取代一个或多个vh和/或vlcdr区序列，可以产生新颖的vh和vl序列。因此，本公开提供分离的单克隆抗体或其抗原结合区，其包含：含有选自seqidno:1、4和6的氨基酸序列的重链cdr1；含有选自seqidnos:2和5的氨基酸序列的重链cdr2；含有seqidno:3的氨基酸序列的重链cdr3；含有选自seqidno:11和14的氨基酸序列的轻链cdr1；含有选自seqidno:12和15的氨基酸序列的轻链cdr2；和含有选自seqidno:13和16的氨基酸序列的轻链cdr3；其中该抗体特异性地结合her2。在某些实施方案中，特异性地结合her2的抗体是表1中所述的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含：重链互补决定区1(hcdr1)，其包含seqidno:1的氨基酸序列；重链互补决定区2(hcdr2)，其包含seqidno:2的氨基酸序列；重链互补决定区3(hcdr3)，其包含seqidno:3的氨基酸序列；轻链互补决定区1(lcdr1)，其包含seqidno:11的氨基酸序列；轻链互补决定区2(lcdr2)，其包含seqidno:12的氨基酸序列；和轻链互补决定区3(lcdr3)，其包含seqidno:13的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含：hcdr1，其包含seqidno:4的氨基酸序列；hcdr2，其包含seqidno:5的氨基酸序列；hcdr3，其包含seqidno:3的氨基酸序列；lcdr1，其包含seqidno:14的氨基酸序列；lcdr2，其包含seqidno:15的氨基酸序列；和lcdr3，其包含seqidno:16的氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含含有seqidno:7的氨基酸序列的重链可变区和包含含有seqidno:17的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含含有seqidno:9的氨基酸序列的重链和包含含有seqidno:19的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含含有seqidno:21的氨基酸序列的重链和包含含有seqidno:19的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含含有seqidno:23的氨基酸序列的重链和包含含有seqidno:19的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含含有seqidno:30的氨基酸序列的重链和包含含有seqidno:19的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，特异性地结合人her2的抗体包含含有seqidno:32的氨基酸序列的重链和包含含有seqidno:19的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，本公开提供特异性地结合人her2中的表位的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)。在一些实施方案中，本公开提供特异性地结合人her2中的表位的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)，其中所述表位包含seqidno:26的残基557–561、570–573和593–603的一个或多个。在一些实施方案中，本公开提供特异性地结合人her2中的表位的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)，其中所述表位包含seqidno:26的残基245–333的一个或多个。在一些实施方案中，本公开提供特异性地结合人her2中的表位的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)，其中所述表位包含如下的残基的一个或多个：seqidno:26的his245、val286、ser288、leu295、his296或lys311。一旦确定了抗原上期望的表位，则可能对该表位产生抗体，例如使用本发明中描述的技术。或者，在发现过程中，抗体的产生和表征可以阐明关于期望表位的信息。从这些信息中，可以竞争性筛选用于结合至相同表位的抗体。实现这一目的的方法在于进行交叉竞争研究以发现彼此竞争性结合的抗体，例如抗体竞争结合抗原。基于其交叉竞争的“框并”(binning)抗体的高流通量筛选描述在国际专利申请号wo2003/48731中。如本领域技术人员将理解，实际上抗体可以特异性结合的任何物质可以是表位。表位可以包含抗体结合的那些残基。框架或fc区的修饰本文公开的抗体和抗体缀合物可以包含修饰的抗体或其抗原结合片段，其包含对vh和/或vl内的框架残基的修饰，例如以改善抗体/抗体缀合物的特性。在一些实施方案中，进行框架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法在于使一个或多个框架残基“反向-突变”至相应的种系序列。通过比较抗体框架序列和抗体衍生自的种系序列可以鉴定这类残基。为了“匹配”框架区序列与期望的种系构型，可以通过例如位点定向诱变使残基“反向-突变”至相应的种系序列。这类“反向-突变的”抗体预期也由本发明所涵盖。另一种类型的框架修饰牵涉框架区内、乃至一个或多个cdr区内的一个或多个残基突变，以除去t-细胞表位，由此降低抗体的潜在免疫原性。这种方法也称作“去免疫”并且进一步详细描述在carr等人的美国专利公开号20030153043中。除了在框架或cdr区内进行修饰之外或作为替代，本文公开的抗体可以被改造成包括fc区内的修饰，典型地以改变抗体的一个或多个功能特性，例如血清半衰期、补体结合、fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本文公开的抗体可以被化学修饰(例如一个或多个化学部分可以连接至抗体)或可以被修饰以改变其糖基化，同样是为了改变抗体的一个或多个功能特性。这些实施方案各自在下文中进一步详细描述。在一个实施方案中，ch1的铰链区被修饰，使得该铰链区内半胱氨酸残基的数量改变，例如增加或减少。该方法进一步描述在bodmer等人的美国专利5,677,425中。ch1的铰链区内半胱氨酸残基的数量改变，例如以有利于轻链和重链的组装或增加或降低抗体的稳定性。在一些实施方案中，可用于本文公开的抗体缀合物的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)包括修饰或改造的抗体，例如被修饰以导入一个或多个半胱氨酸残基作为与药物部分缀合的位置的抗体(junutulajr,等人:natbiotechnol2008,26:925-932)。在一个实施方案中，本发明提供修饰的抗体或其抗体片段，其包含在本文所述的位置上一个或多个氨基酸被半胱氨酸取代。半胱氨酸取代的位置位于抗体恒定区内，且由此适用于各种抗体，且选择所述位置以提供稳定和同源缀合物。修饰的抗体或片段可以具有两个或多个半胱氨酸取代，且这些取代可以与另外的如本文所述的抗体修饰和缀合方法联用。用于在抗体特定位置上插入半胱氨酸的方法是本领域公知的，参见例如lyons等人(1990)proteineng.,3:703-708、wo2011/005481、wo2014/124316、wo2015/138615。在某些实施方案中，修饰的抗体或抗体片段包含在其恒定区上选自如下位置的一个或多个氨基酸被半胱氨酸取代：抗体或抗体片段的重链的117、119、121、124、139、152、153、155、157、164、169、171、174、189、205、207、246、258、269、274、286、288、290、292、293、320、322、326、333、334、335、337、344、355、360、375、382、390、392、398、400和422位，且其中这些位置根据eu系统编号。在一些实施方案中，修饰的抗体或抗体片段包含在其恒定区上选自如下位置的一个或多个氨基酸被半胱氨酸取代：抗体或抗体片段的轻链的107、108、109、114、129、142、143、145、152、154、156、159、161、165、168、169、170、182、183、197、199和203位，其中这些位置根据eu系统编号，且其中轻链人κ轻链。在某些实施方案中，修饰的抗体或其抗体片段包含在其恒定区上两个或多个氨基酸被半胱氨酸取代的组合，其中该组合包含抗体重链的375位、抗体重链的152位、抗体重链的360位或抗体轻链的107位上的取代，且其中位置根据eu系统编号。在某些实施方案中，修饰的抗体或其抗体片段包含其恒定区上一个氨基酸被半胱氨酸取代，其中取代在抗体重链的375位、抗体重链的152位、抗体重链的360位、抗体轻链的107位、抗体轻链的165位或抗体轻链的159位上，且其中这些位置根据eu系统编号，且其中轻链是κ链。在具体的实施方案中，修饰的抗体或其抗体片段包含在其恒定区上两个氨基酸被半胱氨酸取代的组合，其中修饰的抗体或其抗体片段包含在抗体重链152和375位上的半胱氨酸，其中这些位置根据eu系统编号。在另外具体的实施方案中，修饰的抗体或其抗体片段包含抗体重链360位上一个氨基酸被半胱氨酸取代，且其中所述位置根据eu系统编号。在另外具体的实施方案中，修饰的抗体或其抗体片段包含抗体轻链107位上一个氨基酸被半胱氨酸取代，且其中所述位置根据eu系统编号，且轻链是κ链。在另外的实施方案中，可用于本文公开的抗体缀合物的抗体或抗体片段(例如抗原结合片段)包括修饰或改造的抗体，例如被修饰以导入一个或多个另外的反应性氨基酸(非半胱氨酸)的抗体，包括pcl、吡咯赖氨酸(pyrrolysine)、肽标记(例如s6、a1和ybbr标记)和非天然氨基酸以替代天然序列的至少一个氨基酸，由此在抗体或抗原结合片段上得到反应位点，用于缀合式(i)或其子式的药物部分，例如，抗体或抗体片段可以被修饰以并入pcl或吡咯赖氨酸(w.ou等人(2011)pnas108(26),10437-10442；wo2014124258)或非天然氨基酸(j.y.axup等人procnatlacadsciusa,109(2012),pp.16101–16106；对于综述，参见c.c.liu和p.g.schultz(2010)annurevbiochem79,413-444；c.h.kim,等人,(2013)curropinchembiol.17,412-419)，作为用于缀合至药物的位点。类似地，用于酶缀合方法的肽标记可被导入抗体(stropp.等人chembiol.2013,20(2):161-7；rabukad.,curropinchembiol.2010dec；14(6):790-6；rabukad等人,natprotoc.2012,7(6):1052-67)。另一个实例是使用4’-磷酸泛酰巯基乙胺转移酶(pptase)用于缀合辅酶a类似物(wo2013184514)。用于缀合这类修饰或改造的抗体与有效负载或连接基-有效负载组合的方法是本领域公知的。在另一个实施方案中，抗体的fc铰链区被突变以减少抗体的生物半衰期。更具体地，一个或多个氨基酸突变被导入fc-铰合片段的ch2-ch3结构域界面区，使得该抗体相对于天然fc-铰合结构域spa结合具有受损的葡萄球菌蛋白a(spa)结合。这种方法进一步详细描述在ward等人的美国专利no.6,165,745中。在其它实施方案中，通过用不同的氨基酸残基替代至少一个氨基酸残基来改变fc区，以改变抗体的效应子功能。例如，一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基替代，使得抗体对效应子配体具有改变的亲和力，但保留了母体抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应子配体可以是例如fc受体或补体的c1成分。这种方法描述在例如winter等人的美国专利5,624,821和5,648,260中。在另一个实施方案中，选自氨基酸残基的一个或多个氨基酸可以被不同的氨基酸残基替代，使得抗体具有改变的c1q结合和/或减少或消除的补体依赖性细胞毒性(cdc)。这种方法描述在例如idusogie等人的美国专利6,194,551中。在另一个实施方案中，改变一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。这种方法描述在例如bodmer等人的pct公开wo94/29351中。异型氨基酸残基包括但不限于jefferis等人,mabs.1:332-338(2009)所述的igg1、igg2和igg3亚类的重链恒定区以及κ同种型的轻链恒定区。在另一个实施方案中，修饰fc区以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(adcc)和/或抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)的能力，例如通过修饰一个或多个氨基酸残基以增加抗体对活化fcγ受体的亲和力，或降低抗体对抑制性fcγ受体的亲和力。人类活化fcγ受体包括fcγria、fcγriia、fcγriiia和fcγriiib，并且人抑制性fcγ受体包括fcγriib。这种方法描述于例如presta的pct公开号wo00/42072中。此外，已经描述了人igg1上fcγr1、fcγrii、fcεriii和fcrn的结合位点，并描述了具有改善结合的变体(参见shields等人,j.biol.chem.276:6591-6604,2001)。已经描述了单克隆抗体的fc-介导的效应子功能的优化，例如增加的adcc/adcp功能(参见strohl,w.r.,currentopinioninbiotechnology2009；20:685–691.)。在一些实施方案中，抗体缀合物包含免疫球蛋白重链，其包含赋予增强的adcc/adcp功能的突变或突变组合，例如，一个或多个这些突变选自g236a、s239d、f243l、p247i、d280h、k290s、r292p、s298a、s298d、s298v、y300l、v305i、a330l、i332e、e333a、k334a、a339d、a339q、a339t、p396l(所有位置均通过eu编号)。在另一个实施方案中，fc区被修饰以增加抗体介导adcc和/或adcp的能力，例如通过修饰一个或多个氨基酸以增加抗体对活化受体的亲和力，该活化受体典型地不识别母体抗体，例如fcαri。这种方法描述在例如borrok等人,mabs.7(4):743-751中。在具体的实施方案中，抗体缀合物包含免疫球蛋白重链，其包含赋予增强的adcc和/或adcp功能的一个或多个抗体序列的突变或融合。在又一个实施方案中，改变了抗体的糖基化。例如，可以制备非糖基化抗体(即抗体缺少糖基化)。可以改变糖基化以例如增加抗体对“抗原”的亲和力。这类碳水化合物修饰可以通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点来实现，例如可以进行一个或多个氨基酸取代，其导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除该位点上的糖基化。这类非糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力，这类方法描述于例如co等人的美国专利5,714,350和6,350,861中。另外地或备选地，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，例如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的平分型glcnac结构的抗体。已经证明这类改变的糖基化模式增加了抗体的adcc能力。这类碳水化合物修饰可以通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来完成。本领域已经描述了具有改变的糖基化机制的细胞，并且可以用作其中表达本发明的重组抗体从而产生具有改变的糖基化的抗体的宿主细胞。例如，hang等人的ep1,176,195描述了编码岩藻糖基转移酶的fut8基因被功能性破坏的细胞系，使得在这类细胞系中表达的抗体显示出低岩藻糖基化。presta的pct公开号wo03/035835描述了变体cho细胞系lecl3细胞，其具有降低的将岩藻糖连接到asn(297)-连接的碳水化合物的能力，还导致该宿主细胞中表达的抗体的低岩藻糖化(也参见shields等人,(2002)j.biol.chem.277:26733-26740)。umana等人的pct公开号wo99/54342描述了经改造以表达糖蛋白修饰糖基转移酶(例如β(1,4)-n乙酰葡糖胺基转移酶iii(gntiii))的细胞系，使得在改造的细胞系中表达的抗体表现出增加的平分型glcnac结构，其导致抗体的adcc活性增加(也参见umana等人,nat.biotech.17:176-180,1999)。在另一个实施方案中，抗体被修改以增加其生物半衰期。各种方法都是可能的。例如，可以导入一个或多个以下突变：t252l、t254s、t256f，如ward的美国专利6,277,375中所述。或者，为了增加生物半衰期，可以在ch1或cl区内改变抗体以包含取自igg的fc区的ch2结构域的两个环的补救受体结合表位，如presta等人的美国专利5,869,046号和6,121,022中所述。抗-her2抗体的生产抗-her2抗体及其抗体片段(例如抗原结合片段)可以通过本领域已知的任意方式生产，包括但不限于重组表达、化学合成和抗体四聚体的酶消化，而全长单克隆抗体可以通过例如杂交瘤或重组生产方法得到。重组表达可以来自本领域已知的任意适合的宿主细胞，例如哺乳动物宿主细胞、细菌宿主细胞、酵母宿主细胞、昆虫宿主细胞等。还提供了编码本文所述抗体的多核苷酸，例如编码包含如本文所述的互补决定区的重链或轻链可变区或片段的多核苷酸。在一些实施方案中，编码重链可变区的多核苷酸与seqidno:8的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的核酸序列同一性。在一些实施方案中，编码轻链可变区的多核苷酸与seqidno:18的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的核酸序列同一性。在一些实施方案中，编码重链的多核苷酸与seqidno:10、22或24的任意种的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的核酸序列同一性。在一些实施方案中，编码轻链的多核苷酸与seqidno:20或34的多核苷酸具有至少85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的核酸序列同一性。本文公开的一些多核苷酸编码抗-her2抗体的可变区。本文公开的一些多核苷酸编码抗-her2抗体的可变区和恒定区。一些多核苷酸序列编码包含抗-her2抗体的重链和轻链的可变区的多肽。一些多核苷酸编码两个多肽片段，其分别与本文公开的任何抗-her2抗体的重链和轻链的可变区基本上相同。多核苷酸序列可以通过全新固相dna合成或通过编码抗-her2抗体或其结合片段的现有序列(例如如以下实施例中所述的序列)的pcr诱变来产生。直接化学合成核酸可以通过本领域已知的方法完成，例如磷酸三酯法(narang等人,meth.enzymol.68:90,1979)；磷酸二酯法(brown等人,meth.enzymol.68:109,1979)；二乙基亚磷酰胺法(beaucage等人,tetra.lett.,22:1859,1981)；和固相支持法(美国专利4,458,066)。通过pcr将突变导入多核苷酸序列可以如下列文献中所述进行：例如，pcrtechnology:principlesandapplicationsfordnaamplification,h.a.erlich(ed.),freemanpress,ny,ny,1992；pcrprotocols:aguidetomethodsandapplications,innis等人(ed.),academicpress,sandiego,ca,1990；mattila等人,nucleicacidsres.19:967,1991；和eckert等人,pcrmethodsandapplications1:17,1991。还提供了用于生产上述抗-her2抗体的表达载体和宿主细胞。可以使用各种表达载体来表达编码抗-her2抗体链或结合片段的多核苷酸。病毒的和非病毒表达载体均可用于在哺乳动物宿主细胞中产生抗体。非病毒载体和系统包括质粒、附加型载体，典型地带有用于表达蛋白质或rna和人类人工染色体的表达盒(参见例如harrington等人,natgenet15:345,1997)。例如，用于在哺乳动物(例如人)细胞中表达抗-her2多核苷酸和多肽的非病毒载体包括pthiohisa、b&c；pcdnatm3.1/his；pebvhisa、b&c(invitrogen,sandiego,ca)；mpsv载体和大量其它本领域已知用于表达另外的蛋白质的载体。有用的病毒载体包括基于逆转录病毒、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒、基于sv40的载体、乳头瘤病毒、hbpeb病毒、牛痘病毒载体和西门利克森林(semlikiforest)病毒的载体。参见rent等人,上文；smith,annu.rev.microbiol.49:807,1995；和rosenfeld等人,cell68:143,1992。表达载体的选择取决于待表达载体的预期宿主细胞。典型地，表达载体含有与编码抗-her2抗体链或片段的多核苷酸可操作连接的启动子和其它调节序列(例如增强子)。在一些实施方案中，除诱导条件外，使用诱导型启动子来防止插入序列的表达。诱导型启动子包括例如阿拉伯糖、lacz，金属硫蛋白启动子或热休克启动子。转化生物体的培养物可以在非诱导条件下扩增，而不偏向编码序列的群体，其表达产物被宿主细胞更好地耐受。除了启动子外，对于有效表达抗-her2抗体链或片段也可能需要或期望其它调节元件。元件典型地包括atg起始密码子和相邻的核糖体结合位点或其它序列。此外，通过包含适合于所使用细胞系统的增强子，可以提高表达效率(参见例如scharf等人,resultsprobl.celldiffer.20:125,1994；和bittner等人,meth.enzymol.,153:516,1987)。例如，sv40增强子或cmv增强子可用于增加哺乳动物宿主细胞中的表达。表达载体也可以提供分泌信号序列位置以与所插入的抗-her2抗体序列编码的多肽形成融合蛋白。更经常地，所插入的抗-her2抗体序列在包含在载体中之前与信号序列连接。用于接收编码抗-her2抗体轻链和重链可变结构域的序列的载体有时也编码恒定区或其部分。这类载体允许可变区表达为具有恒定区的融合蛋白，从而导致产生完整的抗体或其片段。典型地，这样的恒定区域是人类。用于载荷和表达抗-her2抗体链的宿主细胞可以是原核生物或真核生物。大肠杆菌是可用于克隆和表达本公开的多核苷酸的一种原核宿主。其它可用的微生物宿主包括杆菌，例如枯草芽孢杆菌和其它肠杆菌科(enterobacteriaceae)，例如沙门氏菌属(salmonella)、沙雷氏菌属(serratia)和各种假单胞菌(pseudomonas)属的种类。在这些原核宿主中，也可以形成表达载体，其典型地含有与宿主细胞相容的表达控制序列(例如复制起点)。另外，将存在任何数量的众所周知的启动子，例如乳糖启动子系统、色氨酸(trp)启动子系统、β-内酰胺酶启动子系统或来自λ噬菌体(phagelambda)的启动子系统。启动子典型地任选地与操纵子序列控制表达，且具有核糖体结合位点序列等，用于启动和完成转录和翻译。其它微生物如酵母也可以用于表达本文公开的抗-her2多肽。也可以使用与杆状病毒载体组合的昆虫细胞。在一些具体的实施方案中，使用哺乳动物宿主细胞来表达和生产本公开的抗her2多肽。例如，它们可以是表达内源免疫球蛋白基因的杂交瘤细胞系(例如骨髓瘤杂交瘤克隆)或携带外源表达载体(例如sp2/0骨髓瘤细胞)的哺乳动物细胞系。这些包括任何正常死亡或正常或异常无限增殖动物或人细胞。例如，已经开发了许多能够分泌完整免疫球蛋白的适合的宿主细胞系，包括各种cho细胞系、cos细胞系、hela细胞、骨髓瘤细胞系、转化的b细胞和杂交瘤。例如winnacker,fromgenestoclones,vchpublishers,n.y.,n.y.,1987中描述了使用哺乳动物组织细胞培养物来表达多肽。哺乳动物宿主细胞的表达载体可以包括表达控制序列，例如复制起点、启动子和增强子(参见例如queen等人,immunol.rev.89:49-68,1986)和必需的加工信息位点，例如核糖体结合位点、rna剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止子序列。表达载体通常含有来源于哺乳动物基因或哺乳动物病毒的启动子。适合的表达启动子可以是组成型的、细胞类型特异性的、阶段特异性的和/或可调制的或可调节的。有用的启动子包括但不限于本领域已知的金属硫蛋白启动子、组成型腺病毒主要晚期启动子、地塞米松诱导型mmtv启动子、sv40启动子、mrppoliii启动子、组成型mpsv启动子、四环素诱导型cmv启动子(例如人即时-早期cmv启动子)、组成型cmv启动子和启动子-增强子组合。用于导入含有感兴趣多核苷酸序列的表达载体的方法根据细胞宿主的类型而变化。例如，氯化钙转染通常用于原核细胞，而磷酸钙处理或电穿孔可用于其它细胞宿主(通常参见sambrook等人，同上)。其它方法包括电穿孔、磷酸钙处理、脂质体介导的转化、注射和显微注射、弹道法、病毒体、免疫脂质体，聚阳离子：核酸缀合物、裸dna、人造病毒体、与疱疹病毒结构蛋白vp22融合(elliot和o'hare，cell88：223,1997)、活性剂增强的dna摄取和离体转导。对于重组蛋白质的长期高产量生产而言，通常期望稳定的表达。例如，可以使用本文公开的含有病毒复制起点或内源表达元件和选择标记基因的表达载体来制备稳定表达抗-her2抗体链或结合片段的细胞系。载体导入后，细胞在转换为选择性培养基之前可以在富集培养基中生长1-2天。可选择标记的目的是赋予对选择的抗性，并且其存在允许在选择性培养基中成功表达导入的序列的细胞的生长。使用适合细胞类型的组织培养技术可以使耐受的、稳定转染的细胞增殖。用于制备式(iia)和式(iib)的抗体缀合物的方法用于形成式(ii)的免疫刺激缀合物的通用反应方案如下方案13所示：方案13此处：rg1是反应基团，其与式(ia)的相容性r4基团反应，形成相应的r40基团，例如马来酰亚胺与硫醇反应，得到琥珀酰亚胺环，或羟基胺与酮反应，得到肟；r1、r4、l2、ab和r40如本文所定义。用于形成式(iib)的免疫刺激缀合物的通用反应方案如下方案14所示：方案14其中：rg1是是反应基团，其与式(ib)的相容性r4基团反应，形成相应的r40基团，例如马来酰亚胺与硫醇反应，得到琥珀酰亚胺环，或羟基胺与酮反应，得到肟；r1、r4、l2、ab和r40如本文所定义。治疗用途和治疗方法所提供的抗体缀合物可用于各种应用，包括但不限于治疗癌症，例如her2阳性癌症。在某些实施方案中，本文提供的抗体缀合物用于抑制肿瘤生长、减小肿瘤体积、诱导分化和/或减少肿瘤的致癌性，例如her2实体瘤。应用方法可以为体外、离体或体内方法。在一些实施方案中，在某些实施方案中，本文提供了通过向有需要的受试者例如人体患者施用本文所述的任何抗体缀合物来治疗、预防或改善疾病例如her2阳性癌症的方法。还提供了本发明的抗体缀合物在治疗或预防受试者例如人体患者中的疾病中的用途。另外提供了抗体缀合物在治疗或预防受试者中的疾病中的用途。在一些实施方案中，提供了抗体缀合物在制备用于治疗或预防受试者中的疾病的药剂中的用途。在某些实施方案中，用抗体缀合物治疗的疾病是癌症，例如her2阳性癌症。在上面的定义部分列出了可以用抗体缀合物治疗的各种癌症。her2阳性癌症可以是包含her2蛋白存在于其细胞表面的细胞的任何癌症。例如，her2阳性癌可以是胃癌、食管癌、食管胃接合处腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、宮颈癌、子宫癌、子宫内膜癌、膀胱癌、泌尿道癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、骨肉瘤、神经母细胞瘤、胶质母细胞瘤、神经内分泌肿瘤和头颈癌中的任一种的原发性肿瘤或转移瘤。在某些实施方案中，癌症的特征是抗体缀合物的抗体、抗体片段(例如抗原结合片段)所结合的表达her2的细胞。在某些实施方案中，癌症的特征在于除了her2表达之外还同时表达多种人类表皮生长因子受体。在一些实施方案中，her2阳性癌症可以具有高her2表达，例如具有3+的免疫组织化学(ihc)评分，其被定义为由americansocietyofclinicaloncology和collegeofamericanpathologists(asco/cap)ihc评分确定的>30％的侵入性肿瘤细胞的均匀强烈的膜染色(参见english等人,moldiagnther.2013年4月；17(2):85–99)。在一些实施方案中，her2阳性癌症可以具有相对较低的her2表达，例如具有2+的ihc评分，其被定义为完整膜染色，其在至少10％的细胞中是强度不均匀或强度弱但具有明显的周向分布，或非常罕见的肿瘤中显示通过asco/capihc评分30％或更少的肿瘤细胞的完全膜染色(参见english等人,moldiagnther.2013年4月；17(2):85–99)。在一些实施方案中，提供了在需要的受试者中治疗her2阳性癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的任何抗体缀合物。her2阳性癌症可以是包含her2蛋白存在于其细胞表面的细胞的任何癌症。在一些实施方案中，当与单独的抗-her2抗体相比时，使用的抗体缀合物能够持续一段时间抑制her2阳性癌症和/或减少her2阳性癌症的复发。还考虑了本文所述的抗体缀合物可用于治疗各种非恶性疾病或病症，例如炎性肠病(ibd)、胃肠溃疡、梅尼特里埃病、乙型肝炎、丙型肝炎、分泌性腺瘤或蛋白丧失综合征、肾脏疾病、血管生成疾病、眼部疾病如年龄相关性黄斑变性、眼假组织胞浆菌病综合征(presumedocularhistoplasmosissyndrome)或年龄相关性黄斑变性/骨相关病症例如骨关节炎/佝偻病和骨质疏松症、高粘稠度综合征、奥斯勒-韦伯-朗迪病、慢性阻塞性肺疾病，或烧伤、创伤、放射、中风、缺氧或局部缺血后水肿，糖尿病肾病、佩吉特氏病、光老化(例如由人体皮肤紫外线辐射引起)、良性前列腺肥大；某些微生物感染，包括微生物病原体的感染，所述微生物病原体选自腺病毒、汉坦病毒(hantaviruses)、伯氏疏螺旋体(borreliaburgdorfei)、耶尔森氏菌属(yersinia)的种类和百日咳博德特氏菌、血小板聚集导致的血栓；生殖病症，例如子宫内膜异位症、卵巢过度刺激综合征、先兆子痫、功能失调性子宫出血或月经过多；急性和慢性肾病(包括增生性肾小球肾炎)；肥大性瘢痕形成、内毒素休克和真菌感染、家族性腺瘤病息肉病、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、缺血性损伤、肺、肾或肝纤维化、婴儿肥厚性幽门狭窄、尿路梗阻综合征、银屑病关节炎。这类抗体缀合物的施用方法包括但不限于肠胃外(例如静脉内)施用，例如作为推注或持续输注一段时间的注射；口服施用、肌内施用、瘤内施用、肌内施用、腹膜内施用、脑脊髓内施用、皮下施用、关节内施用、滑膜内施用、淋巴结注射或鞘内施用。为了治疗疾病，本发明的抗体缀合物的适当剂量取决于各种因素，例如待治疗的疾病的类型、疾病的严重程度和病程、疾病的应答性、在先的疗法、患者的临床病史等。可以将抗体缀合物施用一次或在一系列持续几天到几个月的治疗中施用，或直到治愈或实现疾病状态的减少(例如肿瘤大小的减小)。最佳给药方案可以从患者体内药物积聚的测量值来计算，并且将根据特定抗体缀合物的相对效能的不同而变化。在一些实施方案中，剂量为0.01mg-20mg(例如0.01mg、0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg、0.07mg、0.08mg、0.09mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg或20mg)/kg体重，并且可以每天、每周、每个月或每年给予一次或多次。在某些实施方案中，可以将本发明的抗体缀合物每2周给予一次或每3周给予一次。在某些实施方案中，可以将本发明的抗体缀合物仅给予一次。治疗临床医师可以基于确定的药物在体液或组织中的停留时间或浓度估计用于给药的重复率。联合疗法在某些情况中，本发明的抗体缀合物可以与另外的治疗剂组合，例如另外的抗癌药、抗过敏药、抗恶心药(止吐药)、疼痛缓解剂、细胞保护剂及其组合。考虑用于联合疗法的一般化疗剂包括阿那曲唑比卡鲁胺硫酸博来霉素白消安白消安注射剂卡培他滨n4-戊氧羰基-5-脱氧-5-氟胞苷、卡铂卡莫司汀苯丁酸氮芥顺铂克拉屈滨环磷酰胺(或)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿糖胞苷(cytosar-)、阿糖胞苷脂质体注射剂达卡巴嗪(dtic-)、放线菌素d(放线菌素d,cosmegan)、盐酸柔红霉素柠檬酸柔红霉素脂质体注射剂地塞米松、多西他赛盐酸多柔比星)、依托泊苷氟达拉滨磷酸盐5-氟尿嘧啶氟他胺tezacitibine、吉西他滨(二氟脱氧胞苷)、羟基脲伊达比星异环磷酰胺伊立替康l-天冬酰胺酶甲酰四氢叶酸钙、美法仑6-巯嘌呤甲氨蝶呤米托蒽醌美罗塔(mylotarg)、紫杉醇phoenix(钇90/mx-dtpa)、喷司他丁、聚苯丙生(polifeprosan)20与卡莫司汀植入物枸橼酸他莫昔芬替尼泊苷6-硫鸟嘌呤、噻替派、替拉唑胺盐酸拓扑替康注射液长春碱长春新碱长春瑞滨表柔比星奥沙利铂依西美坦来曲唑和氟维司群本文使用的术语“药物组合”是指一种剂量单位形式的固定组合或非固定组合或用于合并施用的套件，其中两种或更多种治疗剂可以同时独立施用或在时间间隔内分开施用，特别是在这些时间间隔允许组合伴侣展示协作的情况下，例如协同作用。术语“联合疗法”是指施用两种或更多种治疗剂以治疗本公开中描述的治疗性病症或病症。这种施用包括以基本上同时的方式共同施用这些治疗剂，例如在具有固定比例的活性成分的单个胶囊中。或者，这种施用包括在多个或分开的容器(例如胶囊、粉末和液体)中共同施用各自的活性成分。粉末和/或液体可以在施用前重构或稀释至期望的剂量。此外，这类施用还包括以大致相同的时间或在不同的时间以连续的方式使用各种类型的治疗剂。在任一情况下，治疗方案将提供药物组合在治疗本文所述的病症或病症中的有益作用。联合疗法可以提供“协同作用”并且证明“协同性”，即当一起使用的活性成分所达到的效果大于单独使用化合物产生的效果的总和。当活性成分是：(1)同时在合并的单位剂量制剂中共同配制和施用或递送；(2)通过交替或平行作为分开的制剂递送；或(3)通过一些方案，可以获得协同作用。当以交替疗法递送时，可以获得协同作用，此时依次施用或递送所述化合物，例如通过在单独的注射器中的不同注射剂。通常，在交替治疗期间，依次施用每种活性成分的有效剂量，即连续施用，而在联合疗法中，将两种或多种活性成分的有效剂量一起施用。在一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种另外的抗-her2抗体，例如上述曲妥珠单抗、培妥珠单抗、margetuximab或ht-19或与另外的抗-her2缀合物，例如曲妥珠单抗美坦新偶联物(也称作或t-dm1)。在一个实施方案中，本发明提供提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种酪氨酸激酶抑制剂，包括但不限于egfr抑制剂、her3抑制剂、igfr抑制剂和met抑制剂。例如，酪氨酸激酶抑制剂包括但不限于盐酸厄洛替尼linifanib(n-[4-(3-氨基-1h-吲唑-4-基)苯基]-n'-(2-氟-5-甲基苯基)脲,也称作abt869,购自genentech)；苹果酸舒尼替尼波舒替尼(4-[(2,4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基]喹啉-3-甲腈，也称作ski-606且描述在美国专利6,780,996中)；达沙替尼帕唑帕尼索拉非尼zactima(zd6474)；和伊马替尼或甲磺酸伊马替尼(和)。表皮生长因子受体(egfr)抑制剂包括但不限于盐酸厄洛替尼吉非替尼n-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3”s”)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺,)；凡他尼布拉帕替尼(3r,4r)-4-氨基-1-((4-((3-甲氧基苯基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-醇(bms690514)；卡纽替尼二盐酸盐(ci-1033)；6-[4-[(4-乙基-1-哌嗪基)甲基]苯基]-n-[(1r)-1-苯基乙基]-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(aee788,cas497839-62-0)；莫立替尼(tak165)；培利替尼(ekb569)；afatinib奈拉替尼(hki-272)；n-[4-[[1-[(3-氟苯基)甲基]-1h-吲唑-5-基]氨基]-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-氨基甲酸,(3s)-3-吗啉基甲酯(bms599626)；n-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氢-2-甲基环戊二烯并[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(xl647,cas781613-23-8)；和4-[4-[[(1r)-1-苯基乙基]氨基]-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚(pki166,cas187724-61-4)。egfr抗体包括但不限于西妥昔单抗帕木单抗马妥珠单抗(emd-72000)；尼妥珠单抗(hr3)；扎芦木单抗；theracimh-r3；mdx0447(cas339151-96-1)；和ch806(mab-806,cas946414-09-1)。其它her2抑制剂包括但不限于奈拉替尼(hki-272,(2e)-n-[4-[[3-氯-4-[(吡啶-2-基)甲氧基]苯基]氨基]-3-氰基-7-乙氧基喹啉-6-基]-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰胺且描述在pct公开号wo05/028443中)；拉帕替尼或拉帕替尼二甲苯磺酸盐(3r,4r)-4-氨基-1-((4-((3-甲氧基苯基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-醇(bms690514)；(2e)-n-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3s)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺(bibw-2992,cas850140-72-6)；n-[4-[[1-[(3-氟苯基)甲基]-1h-吲唑-5-基]氨基]-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-氨基甲酸,(3s)-3-吗啉基甲酯(bms599626,cas714971-09-2)；卡纽替尼二盐酸盐(pd183805或ci-1033)；和n-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氢-2-甲基环戊二烯并[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(xl647,cas781613-23-8)。her3抑制剂包括但不限于ljm716、mm-121、amg-888、rg7116、regn-1400、av-203、mp-rm-1、mm-111和mehd-7945a。met抑制剂包括但不限于cabozantinib(xl184,cas849217-68-1)；foretinib(gsk1363089,在先的xl880,cas849217-64-7)；tivantinib(arq197,cas1000873-98-2)；1-(2-羟基-2-甲基丙基)-n-(5-(7-甲氧基喹啉-4-基氧基)吡啶-2-基)-5-甲基-3-氧代-2-苯基-2,3-二氢-1h-吡唑-4-甲酰胺(amg458)；cryzotinib(pf-02341066)；(3z)-5-(2,3-二氢-1h-吲哚-1-基磺酰基)-3-({3,5-二甲基-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-1h-吡咯-2-基}亚甲基)-1,3-二氢-2h-吲哚-2-酮(su11271)；(3z)-n-(3-氯苯基)-3-({3,5-二甲基-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]-1h-吡咯-2-基}亚甲基)-n-甲基-2-氧代二氢吲哚-5-磺酰胺(su11274)；(3z)-n-(3-氯苯基)-3-{[3,5-二甲基-4-(3-吗啉-4-基丙基)-1h-吡咯-2-基]亚甲基}-n-甲基-2-氧代二氢吲哚-5-磺酰胺(su11606)；6-[二氟[6-(1-甲基-1h吡唑-4-基)-1,2,4-三唑并[4,3-b]哒嗪-3-基]甲基]-喹啉(jnj38877605,cas943540-75-8)；2-[4-[1-(喹啉-6-基甲基)-1h-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡嗪-6-基]-1h-吡唑-1-基]乙醇(pf04217903,cas956905-27-4)；n-((2r)-1,4-二噁烷-2-基甲基)-n-甲基-n'-[3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-5-氧代-5h-苯并[4,5]环庚三烯并[1,2-b]吡啶-7-基]磺酰胺(mk2461,cas917879-39-1)；6-[[6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-1,2,4-三唑并[4,3-b]哒嗪3-基]硫代]-喹啉(sgx523,cas1022150-57-7)；和(3z)-5-[[(2,6-二氯苯基)甲基]磺酰基]-3-[[3,5-二甲基-4-[[(2r)-2-(1-吡咯烷甲基)-1-吡咯烷基]羰基]-1h-吡咯-2-基]亚甲基]-1,3-二氢-2h-吲哚-2-酮(pha665752,cas477575-56-7)。igfr抑制剂包括但不限于bms-754807、xl-228、osi-906、gsk0904529a、a-928605、axl1717、kw-2450、mk0646、amg479、imca12、medi-573和bi836845。对于综述，参见例如yee,jnci,104；975(2012)。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种增殖信号传导途径抑制剂的组合来进行，包括但不限于mek抑制剂、braf抑制剂、pi3k/akt抑制剂、shp2抑制剂和另外的mtor抑制剂和cdk抑制剂。例如，促分裂原活化蛋白激酶(mek)抑制剂包括但不限于xl-518(也称作gdc-0973,目录号1029872-29-4,购自acccorp.)；2-[(2-氯-4-碘苯基)氨基]-n-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟-苯甲酰胺(也称作ci-1040或pd184352且描述在pct公开号wo2000035436中)；n-[(2r)-2,3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-苯甲酰胺(也称作pd0325901且描述在pct公开号wo2002006213)；2,3-双[氨基[(2-氨基苯基)硫代]亚甲基]-丁二腈(也称作u0126且描述在美国专利2,779,780中)；n-[3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-6-甲氧基苯基]-1-[(2r)-2,3-二羟基丙基]-环丙烷磺酰胺(也称作rdea119或bay869766且描述在pct公开号wo2007014011中)；(3s,4r,5z,8s,9s,11e)-14-(乙基氨基)-8,9,16-三羟基-3,4-二甲基-3,4,9,19-四氢-1h-2-benzoxacyclotetradecine-1,7(8h)-二酮](也称作e6201且描述在pct公开号wo2003076424中)；2’-氨基-3’-甲氧基黄酮(也称作pd98059，购自biaffingmbh&co.,kg，germany)；vemurafenib(plx-4032,cas918504-65-1)；(r)-3-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3h,8h)-二酮(tak-733,cas1035555-63-5)；pimasertib(as-703026,cas1204531-26-9)；和trametinibdimethylsulfoxide(gsk-1120212,cas1204531-25-80)。braf抑制剂包括但不限于vemurafenib(或)、gdc-0879、plx-4720(购自symansis)、dabrafenib(或gsk2118436)、lgx818、cep-32496、ui-152、raf265、瑞戈非尼(bay73-4506)、cct239065或索拉非尼(或甲苯磺酸索拉非尼或)或伊匹木单抗(或mdx-010、mdx-101或yervoy)。磷酸肌醇酯3-激酶(pi3k)抑制剂包括但不限于4-[2-(1h-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉(也称作gdc0941、rg7321、gne0941、pictrelisib或pictilisib；且描述在pct公开号wo09/036082和wo09/055730中)；2-甲基-2-[4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]苯基]丙腈(也称作bez235或nvp-bez235且描述的pct公开号wo06/122806)；4-(三氟甲基)-5-(2,6-二吗啉代嘧啶-4-基)吡啶-2-胺(也称作bkm120或nvp-bkm120且描述在pct公开号wo2007/084786中)；tozasertib(vx680或mk-0457,cas639089-54-6)；(5z)-5-[[4-(4-吡啶基)-6-喹啉基]亚甲基]-2,4-噻唑烷二酮(gsk1059615,cas958852-01-2)；(1e,4s,4ar,5r,6as,9ar)-5-(乙酰基氧基)-1-[(二-2-丙烯基氨基)亚甲基]-4,4a,5,6,6a,8,9,9a-八氢-11-羟基-4-(甲氧基甲基)-4a,6a-二甲基环戊二烯并[5,6]萘并[1,2-c]吡喃-2,7,10(1h)-三酮(px866,cas502632-66-8)；8-苯基-2-(吗啉-4-基)-色烯-4-酮(ly294002,cas154447-36-6)；(s)-n1-(4-甲基-5-(2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1,2-二甲酰胺(也称作byl719或alpelisib)；2-(4-(2-(1-异丙基-3-甲基-1h-1,2,4-三唑-5-基)-5,6-二氢苯并[f]咪唑并[1,2-d][1,4]氧杂吖庚因-9-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙酰胺(也称作gdc0032,rg7604或taselisib)。mtor抑制剂包括但不限于坦罗莫司地磷莫司(在先称作deferolimus,二甲基膦酸(1r,2r,4s)-4-[(2r)-2[(1r,9s,12s,15r,16e,18r,19r,21r,23s,24e,26e,28z,30s,32s,35r)-1,18-二羟基-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-2,3,10,14,20-五氧代-11,36-二氧杂-4-氮杂三环[30.3.1.04,9]三十六烷-16,24,26,28-四烯-12-基]丙基]-2-甲氧基环己酯，也称作ap23573和mk8669且描述在pct公开号wo03/064383中)；依维莫司(或rad001)；雷帕霉素(ay22989,)；simapimod(cas164301-51-3)；(5-{2,4-双[(3s)-3-甲基吗啉-4-基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-基}-2-甲氧基苯基)甲醇(azd8055)；2-氨基-8-[反式-4-(2-羟基乙氧基)环己基]-6-(6-甲氧基-3-吡啶基)-4-甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮(pf04691502,cas1013101-36-4)；和n2-[1,4-二氧代-4-[[4-(4-氧代-8-苯基-4h-1-苯并吡喃-2-基)吗啉鎓-4-基]甲氧基]丁基]-l-精氨基酰基甘氨酰基-l-α-天冬氨酰基l-丝氨酸-内盐(sf1126,cas936487-67-1)。cdk抑制剂包括但不限于palbociclib(也称作pd-0332991,6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-{[5-(1-哌嗪基)-2-吡啶基]氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮)。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种促凋亡药剂(pro-apoptotics)来进行，包括但不限于iap抑制剂、bcl2抑制剂、mcl1抑制剂、trail剂、chk抑制剂。例如，iap抑制剂包括但不限于lcl161、gdc-0917、aeg-35156、at406和tl32711。iap抑制剂的其它实例包括但不限于公开在wo04/005284、wo04/007529、wo05/097791、wo05/069894、wo05/069888、wo05/094818、us2006/0014700、us2006/0025347、wo06/069063、wo06/010118、wo06/017295和wo08/134679中的那些，全部文献作为引用并入本文。bcl-2抑制剂包括但不限于4-[4-[[2-(4-氯苯基)-5,5-二甲基-1-环己烯-1-基]甲基]-1-哌嗪基]-n-[[4-[[(1r)-3-(4-吗啉基)-1-[(苯硫基)甲基]丙基]氨基]-3-[(三氟甲基)磺酰基]苯基]磺酰基]苯甲酰胺(也称作abt-263且描述在pct公开号wo09/155386中)；tetrocarcina；抗霉素(antimycin)；棉酚(gossypol)((-)bl-193)；奥巴克拉(obatoclax)；-2-氨基-6-环戊基-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代乙基)-4h色酮-3-甲酸乙酯(ha14–1)；奥利美生(g3139,)；bakbh3肽；(-)-棉酚乙酸(at-101)；4-[4-[(4'-氯[1,1'-联苯]-2-基)甲基]-1-哌嗪基]-n-[[4-[[(1r)-3-(二甲基氨基)-1-[(苯硫基)甲基]丙基]氨基]-3-硝基苯基]磺酰基]-苯甲酰胺(abt-737,cas852808-04-9)；和navitoclax(abt-263,cas923564-51-6)。促凋亡受体激动剂(paras)包括dr4(trailr1)和dr5(trailr2)，包括但不限于度拉纳明(amg-951,rhapo2l/trail)；马帕木单抗(hrs-etr1,cas658052-09-6)；来沙木单抗(hgs-etr2,cas845816-02-6)；apomab可那木单抗(amg655,cas896731-82-1)；和替加珠单抗(cs1008,cas946415-34-5,购自daiichisankyo)。关卡激酶(chk)抑制剂包括但不限于7-羟基星状孢子素(ucn-01)；6-溴-3-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-5-(3r)-3-哌啶基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(sch900776,cas891494-63-6)；5-(3-氟苯基)-3-脲基噻吩-2-甲酸n-[(s)-哌啶-3-基]酰胺(azd7762,cas860352-01-8)；4-[((3s)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基)氨基]-3-(1h-苯并咪唑-2-基)-6-氯喹啉-2(1h)-酮(chir124,cas405168-58-3)；7-氨基放线菌素d(7-aad)、isogranulatimide、debromohymenialdisine；n-[5-溴-4-甲基-2-[(2s)-2-吗啉基甲氧基]-苯基]-n'-(5-甲基-2-吡嗪基)脲(ly2603618,cas911222-45-2)；莱菔硫烷(sulforaphane)(cas4478-93-7,异硫氰酸4-甲基亚磺酰基丁酯)；9,10,11,12-四氢-9,12-环氧-1h-二吲哚并[1,2,3-fg:3',2',1'-kl]吡咯并[3,4-i][1,6]苯并二氮芳辛(benzodiazocine)-1,3(2h)-二酮(sb-218078,cas135897-06-2)；和tat-s216a(ygrkkrrqrrrlyrspampenl(seqidno:33))和cbp501((d-bpa)sws(d-phe-f5)(d-cha)rrrqrr)。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种免疫调节剂来进行(例如共刺激分子激活剂或免疫关卡分子抑制剂的一种或多种)。在某些实施方案中，所述免疫调节剂是共刺激分子激活剂。在一个实施方案中，共刺激分子激动剂选自ox40、cd2、cd27、cds、icam-1、lfa-1(cd11a/cd18)、icos(cd278)、4-1bb(cd137)、gitr、cd30、cd40、baffr、hvem、cd7、light、nkg2c、slamf7、nkp80、cd160、b7-h3或cd83配体的激动剂(例如拮抗抗体或其抗原结合片段或可溶性融合体)。在某些实施方案中，免疫调节剂是免疫关卡分子的抑制剂。在一个实施方案中，免疫调节剂是pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla4、tim3、lag3、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfrβ的抑制剂。在一个实施方案中，免疫关卡分子抑制剂抑制pd-1、pd-l1、lag-3、tim-3或ctla4或其任意的组合。术语“抑制”或“抑制剂”包括指定分子例如免疫关卡抑制剂的某些参数的下降，例如活性。例如，该术语包括活性例如pd-1或pd-l1活性抑制至少为5％、10％、20％、30％、40％、50％或以上。因此，抑制无需为100％。抑制性分子的抑制在dna、rna或蛋白质水平上进行。在一些实施方案中，抑制性核酸(例如dsrna、sirna或shrna)可以用于抑制抑制性分子的表达。在另外的实施方案中，抑制性信号的抑制剂是多肽，例如可溶性配体(例如pd-1-ig或ctla-4ig)或抗体或其抗原结合片段，其结合抑制性分子；例如抗体或其片段(本文也称作“抗体分子”)，其结合pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla4、tim3、lag3、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfrβ或其组合。在一个实施方案中，抗体分子是完整抗体或其片段(例如fab、f(ab')2、fv或单链fv片段(scfv))。在另外的实施方案中，抗体分子具有重链恒定区(fc)，其选自例如igg1、igg2、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重链恒定区；特别地选自例如igg1、igg2、igg3和igg4的重链恒定区，更具体地为igg1或igg4的重链恒定区(例如人igg1或igg4)。在一个实施方案中，重链恒定区是人igg1或人igg4。在一个实施方案中，恒定区改变，例如突变以改变抗体分子特性(例如增加或减少fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数量、效应细胞功能或补体功能的一种或多种)。在某些实施方案中，抗体分子是双特异性或多特异性抗体分子形式。在一个实施方案中，双特异性抗体分子具有与pd-1或pd-l1的第一种结合特异性和第二种结合特异性，例如对tim-3、lag-3或pd-l2的第二种结合特异性。在一个实施方案中，双特异性抗体分子结合pd-1或pd-l1和tim-3。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子结合pd-1或pd-l1和lag-3。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子结合pd-1和pd-l1.在另一个实施方案中，双特异性抗体分子结合pd-1和pd-l2。在另一个实施方案中，双特异性抗体分子结合tim-3和lag-3。上述分子的任意组合可以在多特异性抗体分子中进行，例如三特异性抗体，其包括对pd-1或pd-1的第一种结合特异性和对tim-3、lag-3或pd-l2中的两种或多种的第二种和第三种结合特异性。在某些实施方案中，免疫调节剂是pd-1抑制剂，例如人pd-1。在另一个实施方案中，免疫调节剂是pd-1抑制剂，例如人pd-l1。在一个实施方案中，pd-1或pd-l1抑制剂是pd-1或pd-l1的抗体分子。pd-1或pd-l1抑制剂可以单独施用或与另外的免疫调节剂联合施用，例如与lag-3、tim-3或ctla4抑制剂联合施用。在一个示例性的实施方案中，将pd-1或pd-l1的抑制剂，例如抗-pd-1或pd-l1抗体分子与lag-3抑制剂、例如抗-lag-3抗体分子联合施用。在另一个实施方案中，将pd-1或pd-l1的抑制剂、例如抗-pd-1或pd-l1抗体分子与tim-3抑制剂、例如抗-tim-3抗体分子联合施用。在另外的实施方案中，将pd-1或pd-l1的抑制剂、例如抗-pd-1抗体分子与lag-3抑制剂、例如抗-lag-3抗体分子和tim-3抑制剂、例如抗-tim-3抗体分子联合施用。免疫调节剂与pd-1抑制剂(例如pd-l2、ctla4、tim3、lag3、vista、btla、tigit、lair1、cd160、2b4和/或tgfr的一种或多种)的其它组合也属于本发明的范围。本领域已知或本文公开的任意抗体分子可以用于上述关卡分子抑制剂的组合。在一个实施方案中，pd-1抑制剂是选自nivolumab、pembrolizumab或pidilizumab的抗-pd-1抗体。在一些实施方案中，抗-pd-1抗体是nivolumab。nivolumab的可选名称包括dx-1106、mdx-1106-04、ono-4538或bms-936558。在一些实施方案中，抗-pd-1抗体是nivolumab(cas注册号:946414-94-4)。nivolumab是特异性地打断pd1的完整人igg4单克隆抑制剂。nivolumab(克隆5c4)和特异性地结合pd1的其它人单克隆抗体公开在美国专利8,008,449和pct公开号wo2006/121168中。在另外的实施方案中，抗-pd-1抗体是pembrolizumab。pembrolizumab(商品名keytruda，在先的lambrolizumab,也称作merck3745、mk-3475或sch-900475)是结合pd1的人源化igg4单克隆抗体。pembrolizumab公开在例如hamid,o.等人(2013)newenglandjournalofmedicine369(2):134–44,pct公开号wo2009/114335和美国专利8,354,509中。在一些实施方案中，抗-pd-1抗体是pidilizumab。pidilizumab(ct-011；curetech)是结合pd1的人源化igg1k单克隆抗体。pidilizumab和其它人源化抗-pd-1单克隆抗体公开在pct公开号wo2009/101611中。其它抗-pd1抗体公开在美国专利8,609,089、美国公开号2010028330和/或美国公开号20120114649中。其它抗-pd1抗体包括amp514(amplimmune)。在一些实施方案中，pd-1抑制剂是免疫粘附素(例如免疫粘附素，其包含与恒定区(例如免疫球蛋白序列的fc区)融合的pd-ll或pd-l2的胞外或pd-1结合部分。在一些实施方案中，pd-1抑制剂是amp-224。在一些实施方案中，pd-ll抑制剂是抗-pd-ll抗体。在一些实施方案中，抗-pd-ll抑制剂选自yw243.55.s70、mpdl3280a、medi-4736或mdx-1105msb-0010718c(也称作a09-246-2)，其公开在例如wo2013/0179174中，并且具有本文公开的序列(或序列与之基本上相同或相似，例如与指定序列至少85％、90％、95％相同或更高的序列)。在一个实施方案中，pd-l1抑制剂是mdx-1105。mdx-1105，也称作bms-936559，其为描述在pct公开号wo2007/005874中的抗-pd-ll抗体。在一个实施方案中，pd-l1抑制剂是yw243.55.s70。yw243.55.s70抗体是描述在pct公开号wo2010/077634中的抗-pd-ll。在一个实施方案中，pd-l1抑制剂是mdpl3280a(genentech/roche)。mdpl3280a是人fc优化的igg1单克隆抗体，其结合pd-l1。mdpl3280a和其它结合pd-l1的人单克隆抗体公开在美国专利7,943,743和美国公开号20120039906中。在另外的实施方案中，pd-l2抑制剂是amp-224。amp-224是pd-l2fc融合可溶性受体，其阻断pd1与b7-h1之间的相互作用(b7-dcig；amplimmune；例如公开在pct公开号wo2010/027827和wo2011/066342中)。在一个实施方案中，lag-3抑制剂是抗-lag-3抗体分子。在一个实施方案中，lag-3抑制剂是bms-986016。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种细胞因子的组合来进行，包括但不限于干扰素、il2、il15、il7或il21。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种sting受体激动剂(干扰素基因刺激剂)的组合来进行，例如wo2014/189805中所述的化合物。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种血管发生抑制剂的组合来进行，例如贝伐珠单抗阿昔替尼丙氨酸布立尼布(bms-582664,(s)-((r)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1h-吲哚-5-基氧基)-5-甲基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基氧基)丙-2-基)2-氨基丙酸酯)；索拉非尼帕唑帕尼苹果酸舒尼替尼西地尼布(azd2171,cas288383-20-1)；vargatef(bibf1120,cas928326-83-4)；foretinib(gsk1363089)；替拉替尼(bay57-9352,cas332012-40-5)；apatinib(yn968d1,cas811803-05-1)；伊马替尼ponatinib(ap24534,cas943319-70-8)；tivozanib(av951,cas475108-18-0)；瑞戈非尼(bay73-4506,cas755037-03-7)；伐他拉尼二盐酸盐(ptk787,cas212141-51-0)；brivanib(bms-540215,cas649735-46-6)；凡他尼布(或azd6474)；莫替沙尼二磷酸盐(amg706,cas857876-30-3,n-(2,3-二氢-3,3-二甲基-1h-吲哚-6-基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-3-吡啶甲酰胺，描述在pct公开号wo02/066470中)；度维替尼双乳酸(tki258,cas852433-84-2)；linfanib(abt869,cas796967-16-3)；cabozantinib(xl184,cas849217-68-1)；来妥替尼(cas111358-88-4)；n-[5-[[[5-(1,1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺(bms38703,cas345627-80-7)；(3r,4r)-4-氨基-1-((4-((3-甲氧基苯基)氨基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-5-基)甲基)哌啶-3-醇(bms690514)；n-(3,4-二氯-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[[(3aα,5β,6aα)-八氢-2-甲基环戊二烯并[c]吡咯-5-基]甲氧基]-4-喹唑啉胺(xl647,cas781613-23-8)；4-甲基-3-[[1-甲基-6-(3-吡啶基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基]氨基]-n-[3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺(bhg712,cas940310-85-0)；或阿柏西普在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种热激蛋白抑制剂的组合来进行，例如tanespimycin(17-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素，也称作kos-953和17-aag,购自sigma且描述在美国专利4,261,989中)；瑞螺旋霉素(ipi504)、ganetespib(sta-9090)；[6-氯-9-(4-甲氧基-3,5-二甲基吡啶-2-基甲基)-9h-嘌呤-2-基]胺(biib021或cnf2024,cas848695-25-0)；反式-4-[[2-(氨基羰基)-5-[4,5,6,7-四氢-6,6-二甲基-4-氧代-3-(三氟甲基)-1h-吲唑-1-基]苯基]氨基]环己基甘氨酸酯(snx5422或pf04929113,cas908115-27-5)；5-[2,4-二羟基-5-(1-甲基乙基)苯基]-n-乙基-4-[4-(4-吗啉基甲基)苯基]-3-异噁唑甲酰胺(auy922,cas747412-49-3)；或17-二甲基氨基乙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dmag)。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种hdac抑制剂或其它表观遗传调节剂的组合来进行。示例性hdac抑制剂包括但不限于：voninostat罗米地新treichostatina(tsa)；oxamflatin；伏林司他(辛二酰苯胺异羟肟酸)；pyroxamide(辛二酰基(syberoyl)-3-氨基吡啶酰胺异羟肟酸)；trapoxina(rf-1023a)trapoxinb(rf-10238)；环[(αs,2s)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰基-o-甲基-d-酪氨酰基-l-异亮氨酰基-l-脯氨酰基](cyl-1)；环[(αs,2s)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰基-o-甲基-d-酪氨酰基-l-异亮氨酰基-(2s)-2-哌啶羰基](cyl-2)；环[l-丙氨酰基-d-丙氨酰基-(2s)-η-氧代-l-α-氨基环氧乙烷辛酰基-d-脯氨酰基](hc-毒素)；环[(αs,2s)-α-氨基-η-氧代-2-环氧乙烷辛酰基-d-苯基丙氨酰基-l-亮氨酰基-(2s)-2-哌啶羰基](wf-3161)；chlamydocin((s)-环(2-甲基丙氨酰基-l-苯基丙氨酰基-d-脯氨酰基-η-氧代-l-α-氨基环氧乙烷辛酰基)；apicidin(环(8-氧代-l-2-氨基癸酰基-1-甲氧基-l-色氨酰基-l-异亮氨酰基-d-2-哌啶羰基)；罗米地新(fr-901228)；丁酸4-苯酯；spiruchostatina；mylproin(丙戊酸)；恩替司他(ms-275,n-(2-氨基苯基)-4-[n-(吡啶-3-基-甲氧基羰基)-氨基-甲基]-苯甲酰胺)；depudecin(4,5:8,9-二无水-1,2,6,7,11-五脱氧-d-苏型-d-ido-十一-1,6-dienitol)；4-(乙酰基氨基)-n-(2-氨基苯基)-苯甲酰胺(也称作ci-994)；n1-(2-氨基苯基)-n8-苯基-辛二酰胺(也称作bml-210)；4-(二甲基氨基)-n-(7-(羟基氨基)-7-氧代庚基)苯甲酰胺(也称作m344)；(e)-3-(4-(((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)(2-羟基乙基)氨基)-甲基)苯基)-n-羟基丙烯酰胺；帕比司他莫西司他和贝林司他(也称作pxd101,或(2e)-n-羟基-3-[3-(苯基氨磺酰基)苯基]丙-2-烯酰胺或chidamide(也称作cs055或hbi-8000,(e)-n-(2-氨基-5-氟苯基)-4-((3-(吡啶-3-基)丙烯酰氨基)甲基)苯甲酰胺)。其它表观遗传调节剂包括但不限于ezh2抑制剂(zeste增强子同源物2)、eed(胚胎外胚层发育)或lsd1(赖氨酸特异性组蛋白脱甲基酶1a或kdm1a)。在另一个实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与一种或多种吲哚胺-吡咯2,3-二加氧酶(ido)抑制剂的组合来进行，例如indoximod(也称作nlg-8189)、α-环己基-5h-咪唑[5,1-a]异二氢吲哚-5-乙醇(也称作nlg919)或(4e)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亚硝基亚甲基]-1,2,5-噁二唑-3-胺(也称作incb024360)。在一些实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法，通过对有此需要的受试者施用本发明的抗体缀合物与上述抑制剂、激活剂、免疫调节剂、激动剂或调节剂的任意两种或多种的组合来进行。例如，本发明的抗体缀合物可以与一种或多种关卡抑制剂和/或一种或多种免疫激活剂的组合来进行。除上述治疗方案外，患者还可以进行手术除去癌细胞和/或放疗。药物组合物为了制备包括本文所述的一种或多种抗体缀合物的药物或无菌组合物，所提供的抗体缀合物可以与药学上可接受的载体或赋形剂混合。可以通过与生理学可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合、以例如冻干粉末、浆液、水溶液、洗剂或混悬液形式制备治疗剂和诊断剂的制剂(参见例如hardman等人,goodman和gilman’sthepharmacologicalbasisoftherapeutics,mcgraw-hill,newyork,n.y.,2001；gennaro,remington:thescienceandpracticeofpharmacy,lippincott,williams和wilkins,newyork,n.y.,2000；avis等人(eds.),pharmaceuticaldosageforms:parenteralmedications,marceldekker,ny,1993；lieberman等人(eds.),pharmaceuticaldosageforms:tablets,marceldekker,ny,1990；lieberman等人(eds.)pharmaceuticaldosageforms:dispersesystems,marceldekker,ny,1990；weiner和kotkoskie,excipienttoxicityandsafety,marceldekker,inc.,newyork,n.y.,2000)。在一些实施方案中，包含本发明的抗体缀合物的药物组合物是冻干物制剂。在某些实施方案中，包含抗体缀合物的药物组合物是包含抗体缀合物、组氨酸、蔗糖和聚山梨醇酯20的小瓶中的冻干物。在某些实施方案中，包含抗体缀合物的药物组合物是包含抗体缀合物、琥珀酸钠和聚山梨醇酯20的小瓶中的冻干物。在某些实施方案中，包含抗体缀合物的药物组合物是包含抗体缀合物、海藻糖、柠檬酸盐和聚山梨醇酯8的小瓶中的冻干物。例如，可以用注射用水、盐水重构冻干物。在一个具体的实施方案中，溶液包含在ph约为5.0的抗体缀合物、组氨酸、蔗糖和聚山梨醇酯20。在另一个具体的实施方案中，溶液包含抗体缀合物、琥珀酸钠和聚山梨醇酯20。在另一个具体的实施方案中，溶液包含在ph约为6.6的抗体缀合物、海藻酸脱水物、柠檬酸盐脱水物、柠檬酸和聚山梨醇酯8。对于静脉内施用，得到的溶液通常被进一步稀释入载体溶液。选择用于治疗的施用方案取决于几个因素，包括实体的血清或组织更新率、症状水平、实体的免疫原性和生物基质中靶细胞的可接近性。在某些实施方案中，施用方案最大限度地递送给患者的治疗量与可接受的副作用水平一致。因此，所递送的生物制剂的量部分地取决于特定的实体和所治疗疾病的严重程度。可选择适当剂量的抗体、细胞因子和小分子的指导原则是可得到的(参见例如wawrzynczak,antobidytherapy,biosscientificpub.ltd,oxfordshire,uk,1996；kresina(ed.),monoclonalantibody,cytokinesandarthritis,marceldekker,newyork,n.y.,1991；bach(ed.),monoclonalantibodyandpeptidetherapyinautoimmunediseases,marceldekker,newyork,n.y.,1993；baert等人,newengl.j.med.348:601-608,2003；milgrom等人,newengl.j.med.341:1966-1973,1999；slamon等人,newengl.j.med.344:783-792,2001；beniaminovitz等人,newengl.j.med.342:613-619,2000；ghosh等人,newengl.j.med.348:24-32,2003；lipsky等人,newengl.j.med.343:1594-1602,2000)。由临床医生确定合适的剂量，例如使用本领域已知或怀疑影响治疗或预测会影响治疗的参数或因素。一般而言，剂量以稍小于最佳剂量的量开始，此后以小增量增加剂量，直至相对于任何副作用达到所期望或最佳的效果。重要的诊断量度包括那些症状，如炎症或产生炎症细胞因子的水平。本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以获得有效实现特定患者所需治疗反应、组合物和施用方式的活性成分的量，而对患者无毒性。所选剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所用本发明特定组合物或其酯、盐或酰胺的活性；所用特定化合物的施用途径、施用时间、具体排泄速率；治疗的持续时间；与所用特定组合物联合使用的其它药物、化合物和/或材料；受治患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和以前的病史和医学领域中已知的因素等。包含本发明的抗体缀合物的组合物可以通过连续输注或间隔剂量提供，例如一天、一周或每周1-7次，每隔一周一次，每三周一次，每四周一次，每五周一次，每六周一次，每七周一次或每八周一次。可通过静脉内、皮下、局部、口服、经鼻、直肠、肌肉内、脑内或通过吸入提供剂量。特定的剂量方案是涉及最大剂量或剂量频率的方案，其避免了显著的不期望的副作用。对于本发明的抗体缀合物，施用于患者的剂量可以为0.0001mg/kg-100mg/kg患者体重。剂量可以为0.001mg/kg-50mg/kg、0.005mg/kg-20mg/kg、0.01mg/kg-20mg/kg、0.02mg/kg-10mg/kg、0.05-5mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-8mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.1mg/kg-2mg/kg、0.1mg/kg-1mg/kg患者体重。抗体缀合物的剂量可以使用以千克(kg)计的患者体重乘以以mg/kg计的施用剂量来计算。本发明的抗体缀合物剂量可以重复，并且可以分开少于1天、至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月、4个月、5个月或至少6个月施用。在一些实施方案中，可以将本发明的抗体缀合物每周2次、每周1次、每2周1次、每3周1次、每4周1次或更低频率施用。在一个具体的实施方案中，将本发明抗体缀合物的给药每2周重复1次。对于特定患者的有效量根据如下因素的不同而改变，例如待治疗的病症、患者总体健康状况、施用方法、途径和剂量以及副作用的严重程度(参见例如maynard等人,ahandbookofsopsforgoodclinicalpractice,interpharmpress,bocaraton,fla.,1996；dent,goodlaboratoryandgoodclinicalpractice,urchpubl.,london,uk,2001)。施用途径可以是例如局部或经皮施用，通过皮下、静脉内、腹膜内、脑内、肌内、眼内、动脉内、脑脊髓内、病灶内施用或通过持续释放系统或通过植入物注射或输注(参见例如sidman等人,biopolymers22:547-556,1983；langer等人,j.biomed.mater.res.15:167-277,1981；langer,chem.tech.12:98-105,1982；epstein等人,proc.natl.acad.sci.usa82:3688-3692,1985；hwang等人,proc.natl.acad.sci.usa77:4030-4034,1980；美国专利6,350,466和6,316,024)。在必要时，组合物还可以包含增溶剂或局部麻醉剂如利多卡因以缓解注射部位的疼痛或它们两者。另外，也可以使用肺部施用，例如通过使用吸入器或喷雾器和具有雾化剂的制剂。参见例如美国专利6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078；和pct公开号wo92/19244、wo97/32572、wo97/44013、wo98/31346和wo99/66903，所有文献各自通过引用完整地并入本文。这类额外的成分的实例是本领域众所周知的。用于共同施用或使用第二种治疗剂例如细胞因子、类固醇、化疗剂、抗生素或辐射的方法是本领域已知的(参见例如hardman等人,(eds.)(2001)goodman和gilman'sthepharmacologicalbasisoftherapeutics,10.sup.thed.,mcgraw-hill,newyork,n.y.；poole和peterson(eds.)(2001)pharmacotherapeuticsforadvancedpractice:apracticalapproach,lippincott,williams&wilkins,phila.,pa.；chabner和longo(eds.)(2001)cancerchemotherapyandbiotherapy,lippincott,williams&wilkins,phila.,pa.)。治疗剂的有效量可以将症状减少至少10％；至少20％；至少约30％；至少40％或至少50％。可以与本发明抗体缀合物联合施用的额外的疗法(例如预防剂或治疗剂)可以如下施用：与本发明抗体缀合物少于5分钟间隔、少于30分钟间隔、1小时间隔、在约1小时间隔、在约1-约2小时间隔、在约2小时-约3小时间隔、在约3小时-约4小时间隔、在约4小时-约5小时间隔、在约5小时-约6小时间隔、在约6小时-约7小时间隔、在约7小时-约8小时间隔、在约8小时-约9小时间隔、在约9小时-约10小时间隔、在约10小时-约11小时间隔、在约11小时-约12小时间隔、在约12小时-18小时间隔、18小时-24小时间隔、24小时-36小时间隔、36小时-48小时间隔、48小时-52小时间隔、52小时-60小时间隔、60小时-72小时间隔、72小时-84小时间隔、84小时-96小时间隔或96小时-120小时间隔。可以在同一次一患者随访中施用两种或多种疗法。在某些实施方案中，可以将本发明的抗体缀合物配制成确保体内适当分布的形式。示例性靶向部分包括叶酸或生物素(参见例如low等人的美国专利5,416,016)；甘露糖苷类(umezawa等人,(1988)biochem.biophys.res.commun.153:1038)；抗体(bloeman等人,(1995)febslett.357:140；owais等人,(1995)antimicrob.agentschemother.39:180)；表面活性剂蛋白质a受体(briscoe等人,(1995)am.j.physiol.1233:134)；p120(schreier等人(1994)j.biol.chem.269:9090)；另外参见k.keinanen；m.l.laukkanen(1994)febslett.346:123；j.j.killion；i.j.fidler(1994)immunomethods4:273。本发明提供将包含本发明的抗体缀合物的药物组合物单独或与其它疗法组合施用于有此需要的受试者的方案。本发明联合疗法的疗法(例如预防剂或治疗剂)可同时或依次施用于受试者。本发明联合疗法的疗法(例如预防或治疗剂)也可以循环施用。循环疗法包括在一段时间内施用第一疗法(例如第一预防剂或治疗剂)，接着施用第二疗法(例如第二预防剂或治疗剂)一段时间，并重复该依次施用，即循环，以便减少对疗法之一(例如活性剂)发生耐受性，以避免或减少疗法之一(例如活性剂)的副作用，和/或改善疗法的效能。本发明联合疗法的疗法(例如预防或治疗剂)可以对受试者同时施用。术语“同时”不限于完全同时施用治疗剂(例如预防剂或治疗剂)，而是指将包含本发明的抗体或其片段的药物组合物以一定顺序并且在一定的时间间隔内施用于受试者，使得本发明的抗体或抗体缀合物可以与其它疗法一起起作用，得到比如果它们以其他方式施用的益处增加的益处。例如，每种疗法可以在同一时间或在不同时间以任何顺序依次施用于受试者；然而，如果不是同时施用，则应当及时地在足够接近的时间施用，以便得到期望的治疗效果或预防效果。每种疗法可以分别以任何适当的形式和通过任何适合的途径施用于受试者。在不同的实施方案中，可以将疗法(例如预防或治疗剂)以如下方式施用于受试者：少于5分钟间隔、少于15分钟间隔、少于30分钟间隔、少于1小时间隔、在约1小时间隔、在约1小时-约2小时间隔、在约2小时-约3小时间隔、在约3小时-约4小时间隔、在约4小时-约5小时间隔、在约5小时-约6小时间隔、在约6小时-约7小时间隔、在约7小时-约8小时间隔、在约8小时-约9小时间隔、在约9小时-约10小时间隔、在约10小时-约11小时间隔、在约11小时-约12小时间隔、24小时间隔、48小时间隔、72小时间隔或1周间隔。在另外的实施方案中，在同一次患者随访中施用两种或多种疗法(例如预防或治疗剂)。联合疗法的预防或治疗剂可以在同一药物组合物中施用于受试者。或者，联合疗法的预防或治疗剂可以以分开的药物组合物形式同时施用于受试者。预防或治疗剂可以通过相同或不同的施用途径施用于受试者。应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于示例性目的，并且可以对本领域技术人员启示其各种变型或改变，并且将被包括在本申请以及待批权利要求的精神和范围内。实施例在下列实施例中进一步描述本发明，但这些实施例并不意欲限定权利要求中所述的本发明范围。实施例11-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-1)的合成向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量),hbtu(1.2当量)、huenig碱(3.0当量),3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸(1.2当量)和dmso(0.1m)。将该反应混合物在室温搅拌3小时，然后通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)，得到1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-1)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cdcl3):δ7.35(d,1h),7.12(d,1h),6.86(d,1h),6.72(s,2h),6.69(d,1h),6.40(s,1h),5.46(t,1h),5.33(s,2h),4.16(s,2h),3.95(s,3h),3.82(m,6h),3.40(m,4h),3.21(m,2h),2.67(m,4h),1.39(m,2h),1.26(m,2h),1.14(m,2h),0.86(t,3h).lrms[m+h]＝589.3.实施例2(2r)-2-氨基-3-((1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)硫基)丙酸(c-2)的合成向圆底烧瓶中加入1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-1,1.0当量)，溶于acn-pbs缓冲液(1:2,0.02m)。向该混合物中加入溶于dpbs缓冲液(0.07m)的l-半胱氨酸(2.0当量)。将该反应混合物在室温搅拌1小时。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)，得到(2r)-2-氨基-3-((1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)硫基)丙酸(c-2)，为固体，为非对映异构体混合物的tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.36(d,1h),7.28(d,1h),7.05(d,1h),6.81(d,1h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),4.26(m,2h),4.02(m,1h),3.95(s,3h),3.78(m,6h),3.55(m,2h),3.44(m,1h),3.23(m,3h),3.12(m,2h),2.76(m,2h),2.53(m,1h),1.53(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝710.3.实施例3(6r)-6-(2-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-2-氧代乙基)-5-氧代硫代吗啉-3-甲酸(c-3)的合成向圆底烧瓶中加入(2r)-2-氨基-3-((1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)硫基)丙酸(c-1)，溶于pbs缓冲液(ph7.5,100mm含有5nmedta的磷酸盐)和乙腈(1:1,0.012m)。然后将该反应混合物在40℃搅拌6小时。此时，将粗反应混合物冷却至室温，通过rp-hplc纯化(0.5mnh4oac的acn溶液:10mmnh4oac的h2o溶液,c18柱)，得到(6r)-6-(2-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-2-氧代乙基)-5-氧代硫代吗啉-3-甲酸(c-3)，为位置异构体和非对映异构体混合物。1hnmr(cd3od):δ7.38(d,1h),7.13(s,1h),6.94(d,1h),6.74(d,1h),6.22(d,1h),5.52(s,2h),4.24(m,1h),3.93(s,3h),3.82(m,1h),3.67(s,2h),3.60(m,4h),3.54(t,2h),3.43(m,2h),3.18(m,1h),3.01(m,1h),2.87(m,1h),2.58(m7h),1.50(m,2h),1.29(m,2h),1.17(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝710.4.实施例43-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4b)的合成向圆底烧瓶中加入1-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-1,1.0当量)、l-半胱氨酸(1.0当量)和pbs:mecn(2:1,0.008m)。将该反应混合物在室温搅拌1小时，然后向该反应混合物中加入1mnaoh(20.0当量)。然后将该反应体系再搅拌3小时，然后通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.5mmnh4oac的mecn溶液:10mmnh4oac的h2o溶液,c18柱)，得到3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-4asr)、c-4arr)、(c-4brr)和(c-4brr))，为固体:1hnmr(dmso):δ7.88(s,1),7.26(s,1h),6.98(s,1h),6.77(d,1h),6.64(s,1h),6.46(s,1h),6.01(s,1h),5.40(s,2h),3.85(s,3h),3.36(m,17h),2.29(m,8h),1.90(s,2h),1.39(m,2h),1.21(m,2h),1.09(m,2h),0.81(t,3h).lrms[m+h]＝728.4.(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4arr)(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4brr)(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-4bsr).实施例51-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-5)的合成向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙醛(4.0当量)、氰基硼氢化钠(13.0当量)和meoh(0.04m)。将该反应混合物在室温搅拌1小时，然后通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)，得到1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-5)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cdcl3):δ7.32(d,1h),7.12(d,1h),6.87(d,1h),6.72(s,2h),6.70(d,1h),6.41(d,1h),5.45(t,1h),5.31(s,2h),4.07(s,2h),3.95(s,3h),3.73(t,2h),3.40(m,4h),3.17(m,6h),2.89(m,4h),1.39(m,2h),1.26(m,2h),1.14(m,2h),0.86(t,3h).lrms[m+h]＝561.3.注意：通过向圆底烧瓶中添加1-(2-羟基乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(1.0当量)、戴斯-马丁试剂(dess-martinperiodinane)(1.5当量)和dcm(0.1m)制备2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙醛，在室温搅拌2小时。然后过滤该反应化合物，真空除去挥发性物质，未经进一步纯化地使用所述产物。实施例6(2s)-2-氨基-3-((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)硫基)丙酸(c-6)的合成除用化合物(c-5)替代化合物(c-1)外，按照与实施例2类似的方法制备(2s)-2-氨基-3-((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)硫基)丙酸(c-6)，得到(2s)-2-氨基-3-((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-2,5-二氧代吡咯烷-1-基)硫基)丙酸(c-6)，为固体，为非对映异构体混合物的tfa盐：1hnmr(cd3od):δ7.36(d,1h),7.21(m,1h),7.02(m,1h),6.78(m,1h),6.23(d,1h),5.56(m,2h),4.21(m,1h),4.09(s,1h),4.03(m,1h),3.95(m,3h),3.75(m,2h),3.54(t,2h),3.43(m,1h),3.34(m,1h),3.22(m,2h),3.03(m,6h),2.84(m,2h),2.63(m,1h),1.52(m,2h),1.30(m,2h),1.18(m,2h),0.88(t,3h)。cms[m+h]＝682.4.实施例7(6r)-6-(2-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)-5-氧代硫代吗啉-3-甲酸(c-7)的合成除用化合物(c-5)替代化合物(c-1)外，按照与实施例3类似的方法制备(6r)-6-(2-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)-5-氧代硫代吗啉-3-甲酸(c-7)，得到(6r)-6-(2-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)-5-氧代硫代吗啉-3-甲酸(c-7)，为位置异构体和非对映异构体混合物：1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.10(s,1h),6.91(d,1h),6.72(d,1h),6.22(d,1h),5.51(s,2h),4.13(m,1h),3.92(s,3h),3.88(m,1h),3.58(s,2h),3.52(t,2h),3.40(m,2h),3.16(m,1h),2.99(m,1h),2.86(m,1h),2.67(m10h),1.49(m,2h),1.29(m,2h),1.17(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝682.3.实施例83-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8b)的合成除用化合物(c-5)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8b)，得到化合物混合物(c-8a)和(c-8b)，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-8asr)、c-8arr)、(c-8brr)和(c-8brr))，为固体:1hnmr(dmso):δ7.81(s,1),7.33(s,1h),6.96(s,1h),6.76(d,1h),6.69(s,1h),6.48(s,1h),6.10(s,1h),5.45(s,2h),3.82(s,3h),3.37(m,17h),2.35(m,8h),1.90(s,2h),1.41(m,2h),1.20(m,2h),1.08(m,2h),0.80(t,3h).lrms[m+h]＝700.4.(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8arr)；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8brr)；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-8bsr).实施例91-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-9)的合成除用3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸替代3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸外，按照与实施例1类似的方法制备1-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-9)，得到1-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-9)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.27(d,1h),7.06(d,1h),6.82(s,2h),6.81(d,1h),6.24(d,1h),5.58(s,2h),4.38(s,2h),3.96(s,3h),3.86(m,4h),3.67(m,4h),3.56(m,4h),3.24(m,4h),2.61(t,2h),1.53(m,2h),1.31(m,2h),1.20(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝633.3.实施例103-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10b)的合成除用化合物(c-9)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10b)，得到化合物(c-10a)和(c-10b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-10asr)、c-10arr)、(c-10brr)和(c-10brr))，为固体，为tfa盐.通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfainh2o的溶液,c18柱):1hnmr(cd3od):δ7.35(d,1h),7.29(d,1h),7.05(d,1h),6.77(m,1h),6.23(s,1h),5.56(s,2h),4.32(m,2h),3.94(s,3h),3.86(m,3h),3.72(m,3h),3.54(m,10h),3.21(m,4h),2.67(m,4h),1.52(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝772.4.(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10arr)；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10brr)；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-10bsr).实施例111-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-11)的合成除用3-(2-(2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸替代3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸外，按照与实施例1类似的方法制备1-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-11)，得到1-(2-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-11)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.26(d,1h),7.05(d,1h),6.82(d,1h),6.80(s,2h),6.24(d,1h),5.58(s,2h),4.32(s,2h),3.96(s,3h),3.74(t,2h),3.64(m,2h),3.58(m,12h),3.64(m,4h),3.20(m,4h),2.68(m,2h),1.53(m,2h),1.32(m,2h),1.20(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝721.4.实施例12(2r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,19-二氧代-10,13,16-三氧杂-4-硫杂-7-氮杂十九烷-1-酸(c-12a)和(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,14-二氧代-4,7,10-三氧杂-17-硫杂-13-氮杂二十碳烷-20-酸(c-12b)的合成除用化合物(c-11)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备(2r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,19-二氧代-10,13,16-三氧杂-4-硫杂-7-氮杂十九烷-1-酸(c-12)和(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,14-二氧代-4,7,10-三氧杂-17-硫杂-13-氮杂二十碳烷-20-酸(c-12b)，得到化合物(c-12a)和(c-12b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-12asr),c-12arr),(c-12brr)和(c-12brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):1hnmr(cd3od):δ7.36(d,1h),7.31(s,1h),7.06(d,1h),6.79(d,1h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),4.34(s,2h),4.23(m,1h),3.96(s,3h),3.86(m,4h),3.76(m,4h),3.58(m,14h),3.27(m,4h),3.22(m,2h),2.84(m,1h),2.71(m,2h),1.53(m,2h),1.31(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝860.4.(2r,5s)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,19-二氧代-10,13,16-三氧杂-4-硫杂-7-氮杂十九烷-1-酸(c-12asr)；(2r,5r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,19-二氧代-10,13,16-三氧杂-4-硫杂-7-氮杂十九烷-1-酸(c-12arr)；(16r,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,14-二氧代-4,7,10-三氧杂-17-硫杂-13-氮杂二十碳烷-20-酸(c-12brr)；(16s,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,14-二氧代-4,7,10-三氧杂-17-硫杂-13-氮杂二十碳烷-20-酸(c-12bsr).实施例131-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-13)的合成除用1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷-21-酸替代3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸外，按照与实施例1类似的方法制备1-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-13)，得到1-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-13)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.38(d,1h),7.27(d,1h),7.07(d,1h),6.84(d,1h),6.82(s,2h),6.25(d,1h),5.59(s,2h),4.36(s,2h),3.97(s,3h),3.65(m,32h),3.20(m,4h),2.71(m,2h),1.55(m,2h),1.32(m,2h),1.21(m,2h),0.89(t,3h).lcms[m+h]＝853.5.实施例14(2r)-2-氨基-28-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,28-二氧代-10,13,16,19,22,25-六氧杂-4-硫杂-7-氮杂二十八烷-1-酸(c-14a)和(28r)-28-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-25-羧基-1,23-二氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-26-硫杂-22-氮杂二十九烷-29-酸(c-14b)的合成除用化合物(c-13)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备(2r)-2-氨基-28-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,28-二氧代-10,13,16,19,22,25-六氧杂-4-硫杂-7-氮杂二十八烷-1-酸(c-14a)和(28r)-28-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-25-羧基-1,23-二氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-26-硫杂-22-氮杂二十九烷-29-酸(c-14b)，得到化合物(c-14a)和(c-14b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-14asr)、c-14arr)、(c-14brr)和(c-14brr))，为固体，为hcl盐(rp-hplc纯化后，将产物溶于乙腈，用过量2nhcl处理，然后冻干):1hnmr(cd3od):δ7.47(s,1h),7.39(d,1h),7.13(d,1h),6.82(d,1h),6.25(d,1h),5.58(s,2h),4.38(s,2h),4.32(m,1h),4.00(s,3h),3.77(m,4h),3.76(m,4h),3.64(m,28h),3.55(m,5h),3.31(m,4h),3.12(m,1h),2.86(m,1h),2.72(s,2h),2.62(m,1h),1.54(m,2h),1.31(m,2h),1.20(m,2h),0.89(t,3h).lcms[m+h]＝992.4.(2r,5s)-2-氨基-28-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,28-二氧代-10,13,16,19,22,25-六氧杂-4-硫杂-7-氮杂二十八烷-1-酸(c-14asr)；(2r,5r)-2-氨基-28-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,28-二氧代-10,13,16,19,22,25-六氧杂-4-硫杂-7-氮杂二十八烷-1-酸(c-14arr)；(25r,28r)-28-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-25-羧基-1,23-二氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-26-硫杂-22-氮杂二十九烷-29-酸(c-14brr)；(25s,28r)-28-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-25-羧基-1,23-二氧代-4,7,10,13,16,19-六氧杂-26-硫杂-22-氮杂二十九烷-29-酸(c-14bsr).实施例151-((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-15)的合成步骤1:按照与实施例1类似的方法制备1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮，除用3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙酸替代3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸外。步骤2:向圆底烧瓶中加入1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(1.0当量)、cuso4(0.25当量)、l-抗坏血酸盐(1.1当量)、1-(丙-2-炔-1-基)-1h-吡咯-2,5-二酮(2.2当量)和t-buoh/水(1:1,v/v,0.012m)的混合物。将该反应混合物置于真空中，随后用n2吹扫(该步骤重复4次以上)。然后将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到1-((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-15)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.94(s,1h),7.37(d,1h),7.29(s,1h),7.05(d,1h),6.85(s,2h),6.81(d,1h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),4.73(s,2h),4.52(t,2h),4.36(s,2h),3.95(s,3h),3.85(t,2h),3.84(m,4h),3.66(t,2h),3.54(m,6h),3.27(m,4h),2.63(t,2h),1.53(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝758.4.实施例163-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16b)的合成除用化合物(c-15)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16b)，得到化合物(c-16a)和(c-16b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-16asr)、c-16arr)、(c-16brr)和(c-16brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):1hnmr(cd3od):δ7.91(s,1h),7.36(d,1h),7.30(s,1h),7.06(d,1h),6.80(d,1h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),4.54(s,2h),4.44(m,2h),4.34(s,2h),4.25(m,1h),3.95(s,3h),4.83(m,6h),3.68(t,2h),3.55(m,6h),3.25(m,2h),2.86(m,1h),2.64(m,2h),1.53(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝897.4(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16arr)；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16brr)；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-16bsr).实施例17n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-17)的合成除用3-(2-(2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸替代3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸外，按照与实施例1类似的方法制备n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-17)，得到n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-17)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.28(d,1h),7.06(d,1h),6.82(d,1h),6.80(s,2h),6.24(d,1h),5.58(s,2h),4.37(s,2h),3.96(s,3h),3.84(m,4h),3.40(m,4h),3.56(m,6h),3.48(t,2h),3.20(m,6h),2.69(t,2h),2.45(t,2h),1.53(m,2h),1.31(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝748.4.实施例18(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-(羧基甲基)-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,14-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-18a)和(20r)-20-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-17-羧基-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-18-硫杂-10,14-二氮杂二十一烷-21-酸(c-18b)的合成除用化合物(c-17)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-(羧基甲基)-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,14-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-18a)和(20r)-20-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-17-羧基-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-18-硫杂-10,14-二氮杂二十一烷-21-酸(c-18b)，得到化合物(c-18a)和(c-18b)的混合物，为其相应的非对映异构体(化合物(c-18asr)、c-18arr)、(c-18brr)和(c-18brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.30(s,1h),7.07(d,1h),6.80(d,1h),6.25(d,1h),5.57(s,2h),4.35(s,2h),4.19(m,1h),3.95(s,3h),3.89(s,3h),3.76(m,3h),3.60(s,4h),3.53(m,4h),3.41(m,1h),3.36(m,2h),3.22(s,2h),2.70(t,2h),2.42(2h),1.53(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝887.4.(16s,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-(羧基甲基)-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,14-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-18asr)；(16r,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-(羧基甲基)-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,14-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-18arr)；(17r,20r)-20-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-17-羧基-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-18-硫杂-10,14-二氮杂二十一烷-21-酸(c-18brr)；(17s,20r)-20-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-17-羧基-1,11,15-三氧代-4,7-二氧杂-18-硫杂-10,14-二氮杂二十一烷-21-酸(c-18bsr).实施例195-(4-((4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-19)的合成通过两步顺序制备5-(4-((4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-19)。在第一步中，向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.2当量)、huenig碱(2.4当量)和dmf(0.2m)。将该反应混合物加热至60℃，然后搅拌18小时。然后将该粗反应混合物冷却至室温，通过isco色谱法纯化(0–20％meoh:dcm)，得到中间体(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯。在第二步骤中，按照与(int-1)的合成中最后步骤类似的方法，用于得到5-(4-((4-(3-氨基丙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-19)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.24(d,1h),7.10(d,1h),6.85(d,1h),6.57(d,1h),6.11(s,1h),5.42(s,2h),3.95(s,3h),3.52(s,2h),3.35(m,2h),2.80(t,2h),2.51(m,4h),2.45(m,4h),1.72(m,2h),1.40(m,2h),1.28(m,4h),1.15(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝495.3.实施例201-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(c-20)的合成除用2,2-二甲基-4-氧代-3,8,11-三氧杂-5-氮杂十四烷-14-酸替代(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯外，按照与实施例19类似的方法制备1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(c-20)，得到1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(c-20)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.24(d,1h),7.11(s,1h),6.86(d,1h),6.57(d,1h),6.12(d,1h),5.42(s,2h),3.96(s,3h),3.76(t,2h),3.59(m,12h),3.37(t,2h),2.76(t,2h),2.66(t,2h),2.45(m,4h),1.41(m,2h),1.28(m,2h),1.16(m,2h),0.89(t,3h).lrms[m+h]＝597.4.实施例21n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙酰胺(c-21)的合成向圆底烧瓶中加入1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(c-20)(1.0当量)、diea(10.0当量)和dmf(0.004m)，将该混合物在室温搅拌15分钟。然后向单独的烧瓶中加入2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(1.5当量)、diea(10.0当量)和dmf(0.006m)。将该混合物在室温再搅拌15分钟，然后混合两种溶液，将该反应混合物在室温搅拌1小时。通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙酰胺(c-21)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3cn):δ7.30(d,1h),7.05(s,1h),6.98(s,1h),6.86(d,1h),6.82(s,2h),6.74(s,1h),6.68(d,1h),6.21(d,1h),6.08(t,1h),5.38(s,2h),4.08(s,2h),3.89(s,3h),3.70(t,2h),3.41(m,14h),3.29(m,2h),2.55,(t,2h),2.38(m,4h),1.41(m,2h),1.26(m,2h),1.13(m,2h),0.85(t,3h).lcms[m+h]＝734.4.实施例22(2r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,9,19-三氧代-13,16-二氧杂-4-硫杂-7,10-二氮杂十九烷-1-酸(c-22a)和(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,11,14-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,13-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-22b)的合成除用化合物(c-21)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备(2r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,9,19-三氧代-13,16-二氧杂-4-硫杂-7,10-二氮杂十九烷-1-酸(c-22a)和(19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,11,14-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,13-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-22b)，得到化合物(c-22a)和(c-22b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-22asr)、c-22arr)、(c-22brr)和(c-22brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.32(s,1h),7.08(d,1h),6.81(d,1h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),4.34(s,2h),4.20(m,1h),3.96(s,3h),3.82(m,9h),3.56(m,9h),3.38(m,3h),3.21(m,2h),2.70(t,2h),1.54(m,2h),1.32(m,2h),1.19(m,2h),0.89(t,3h).lcms[m+h]＝873.4.(2r,5s)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,9,19-三氧代-13,16-二氧杂-4-硫杂-7,10-二氮杂十九烷-1-酸(c-22asr)；(2r,5r)-2-氨基-19-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-(羧基甲基)-6,9,19-三氧代-13,16-二氧杂-4-硫杂-7,10-二氮杂十九烷-1-酸(c-22arr)；(16r,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,11,14-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,13-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-22brr)；(16s,19r)-19-氨基-1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-16-羧基-1,11,14-三氧代-4,7-二氧杂-17-硫杂-10,13-二氮杂二十碳烷-20-酸(c-22bsr).实施例234-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-n-(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-甲酰胺(c-23)的合成向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1当量)、(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸4-硝基苯酯(0.9当量)、三乙胺(3.0当量)和dmso(0.01m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-n-(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1–基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-甲酰胺(c-23)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.96(s,1h),7.36(d,1h),7.26(d,1h),7.05(d,1h),6.85(s,2h),6.79(d,1h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),4.74(s,2h),4.53(t,2h),4.35(s,2h),3.95(s,3h),3.86(t,2h),3.85(m,4h),3.54(m,12h),3.22(m,6h),1.53(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝817.4.注意：使用如下方法制备(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸4-硝基苯酯：步骤1:将三乙胺(2.5当量)和二碳酸二-叔丁酯(1.1当量)加入到2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙胺(1.0当量)在ch2cl2(0.05m)中的溶液中，将该反应混合物在室温搅拌30分钟。然后真空浓缩该反应混合物，使用rp-c18isco纯化残余物，然后冻干，得到(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。步骤2:用n2吹扫(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1当量)和1-(丙-2-炔-1-基)-1h-吡咯-2,5-二酮(2.0当量)在t-buoh(0.08m)中的溶液5次，然后加入l-抗坏血酸盐(1.0当量0.16m的h2o溶液)和cuso4(0.2当量0.03m的h2o溶液)。再用n2气体吹扫反应混合物5次，然后在室温搅拌4h。然后通过iscorp-c18纯化该反应混合物，冻干，得到(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。步骤3:真空浓缩(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯在tfa(0.02m)中的溶液，得到1-((1-(23-氨基-3,6,9,12,15,18,21-七氧杂二十三基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮。lcms[m+h]＝354.2.步骤4:将氯甲酸4-硝基苯酯(1.10当量)和三乙胺(2.50当量)加入到1-((1-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮(1当量)在ch2cl2(0.01m)中的溶液中，将该反应混合物在室温搅拌10分钟。然后真空浓缩该反应混合物，通过rp-c18isco纯化，然后冻干，得到(2-(2-(2-(2-(4-((2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸4-硝基苯酯lcms[m+h]＝519.2.实施例243-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24b)的合成除用化合物(c-23)替代化合物(c-1)外，按照实施例4与类似的方法3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24b)，得到化合物(c-24a)和(c-24b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-24asr)、c-24arr)、(c-24brr)和(c-24brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):lcms[m+h]＝956.4.(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24arr)；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24brr)；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-1-氧代-5,8,11-三氧杂-2-氮杂十三烷-13-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-24bsr).实施例251-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-25)的合成向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙醛(4.0当量)、氰基硼氢化钠(13.0当量)和meoh(0.04m)。将该反应混合物在室温搅拌1小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到1-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-25)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.36(d,1h),7.16(d,1h),6.96(d,1h),6.83(s,2h),6.76(d,1h),6.23(d,1h),5.53(s,2h),3.93(s,3h),3.84(s,2h),3.78(m,2h),3.71(m,2h),3.64(m,2h),3.54(m,2h),3.35(m,4h),3.27(t,2h),2.95(m,4h),1.52(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝605.4.注意：通过向圆底烧瓶中添加1-(2-(2-羟基乙氧基)乙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(1.0当量)、戴斯-马丁试剂(1.5当量)和dcm(0.1m)并且在室温将该反应混合物搅拌2小时制备2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)乙醛。然后过滤该反应混合物，真空除去挥发性物质，不经进一步纯化使用产物。实施例263-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26b)的合成除用化合物(c-25)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26b)，得到化合物(c-26a)和(c-26b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-26asr)、c-26arr)、(c-26brr)和(c-26brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):lcms[m+h]＝744.4(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26arr)；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26brr)；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-26bsr).实施例271-((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-27)的合成步骤1:向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、2-叠氮基乙醛(4.0当量)、氰基硼氢化钠(32.0当量)和meoh(0.02m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到5-(4-((4-(2-叠氮基乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺，为固体:lcms[m+h]＝507.3.步骤2:向圆底烧瓶中加入5-(4-((4-(2-叠氮基乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(1.0当量)、1-(丙-2-炔-1-基)-1h-吡咯-2,5-二酮(2.3当量)和t-buoh和水的混合物(2:1,v/v,0.008m)。给该反应混合物真空脱气，用n2吹扫5次，以除去o2。使用注射器将l-抗坏血酸盐(1.1当量的0.5mlh2o溶液，脱气，用n2吹扫5次以除去o2)加入到该反应混合物中，然后使用注射器加入cuso4(0.2当量的0.5ml水溶液，真空脱气，用n2吹扫5次以除去o2)。然后将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到1-((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-27)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.95(s,1h),7.36(d,1h),7.22(d,1h),7.02(d,1h),6.86(s,2h),6.79(d,1h),6.23(d,1h),5.57(s,2h),4.76(s,2h),4.52(t,2h),4.26(s,2h),3.95(s,3h),3.54(t,2h),2.85(m,8h),2.94(t,2h),1.53(m,2h),1.31(m,2h),1.18(m,2h),0.88(t,3h).lcms[m+h]＝642.4.注意：通过向圆底烧瓶中加入2-叠氮基乙醇(1.0当量)、戴斯-马丁试剂(1.5当量)和dcm(0.20m)且然后在室温将该反应混合物搅拌2小时制备2-叠氮基乙醛。然后过滤该反应化物，真空除去挥发性物质，将产物不经进一步纯化使用。实施例283-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28b)的合成除用化合物(c-27)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28b)，得到化合物(c-28a)和(c-28b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-28asr)、c-28arr)、(c-28brr)和(c-28brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):lcms[m+h]＝781.4(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28arr)；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28brr)；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-(((1-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)甲基)氨基)-4-氧代丁酸(c-28bsr).实施例29n-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-29)的合成除用1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)-3-氧代-7,10,13,16,19,22-六氧杂-4-氮杂二十五烷-25-酸替代3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸外，按照与实施例1类似的方法制备n-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-29)，得到n-(21-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-21-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十一烷基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-29)，为固体，为tfa盐:1hnmr(dmso):δ8.00(t,1h),7.42(d,1h),7.38(s,3h),7.20(s,1h),7.00(s,2h),6.95(s,1h),6.57(s,1h),6.23(d,1h),5.57(s,2h),4.30(s,2h),3.87(s,3h),3.59(m,4h),3.49(m,28h),3.35(t,2h),3.14(m,2h),2.32(m,2h),1.45(m,2h),1.21(m,2h),1.09(m,2h),0.81(t,3h).lrms[m+h]＝924.4.实施例304-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基酯(c-30)的合成步骤1:向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量),hoat(2.0当量)、huenig碱(14.0当量)、((s)-3-甲基-1-(((s)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯(1.2当量)和吡啶:dmf(1:4,0.02m)。将该反应混合物在室温搅拌4小时，然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄酯，为固体:lcms[m+h]＝1065.5.步骤2:将4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄酯溶于dmf(0.007m)，加入哌啶(100.0当量)。将该反应体系在室温搅拌30分钟。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄酯，为固体:lcms[m+h]＝843.5.步骤3:向圆底烧瓶中加入4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄酯(1.0当量)、3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸(1.1当量)、huenig碱(5.0当量)、hatu(1.05当量)和dmf(0.004m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄酯(c-30)，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝1038.5.实施例31(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-31)的合成步骤1:向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量),hoat(2.0当量)、huenig碱(14.0当量)、三乙酸(3s,4r,5r,6r)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.2当量)和吡啶:dmf(1:4,0.015m)。将该反应混合物在室温搅拌4小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到三乙酸(3s,4r,5r,6r)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯，为固体:lcms[m+h]＝1212.4.步骤2:将三乙酸(3s,4r,5r,6r)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.0当量)溶于meoh、thf和水(2:1:0.4)(0.005m)。然后加入lioh(8.0当量)，将该反应体系在室温搅拌2小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-氨基丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸，为固体:lcms[m+h]＝850.4.步骤3:向圆底烧瓶中加入(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-氨基丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(1.0当量、3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸(2.0当量)、huenig碱(6.0当量)、hbtu(1.8当量)和dmf(0.003m)。将该反应体系保持在室温下搅拌15分钟。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-31)，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝1001.3.实施例32(s)-1-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-32)的合成除用化合物(int-2)替代化合物(int-1)外，按照与实施例1类似的方法制备(s)-1-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-32)，得到(s)-1-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-32)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.49(d,2h),7.21(d,1h),6.82(s,2h),6.77(d,1),6.28(d,1h),5.67(d,1h),5.51(d,1h),4.36(m,1h),4.18(s,2h),3.98(s,3h),3.76(t,2h),3.54(dd,1h),3.46(dd,1h),3.16(m,4h),3.05(m,4h),2.71(t,2h),1.48(m,1h),1.26(m,3h),1.05(m,1h),0.84(t,3h).lrms[m+h]＝619.4.实施例331-(3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-33)的合成除用化合物(int-3)替代化合物(int-1)外，按照与实施例1类似的方法制备1-(3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-33)，得到1-(3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1h-吡咯-2,5-二酮(c-33)，为固体，为tfa盐.lrms[m+h]＝589.3.实施例343-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34a)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34b)的合成除用化合物(c-33)替代化合物(c-1)外，按照与实施例4类似的方法制备3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34)和2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34b)，得到化合物(c-34a)和(c-34b)的混合物，为其相应的非对映异构体(以下化合物(c-34asr)、c-34arr)、(c-34brr)和(c-34brr))，为固体，为tfa盐。通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱):1hnmr(dmso):δ7.51(s,2h),7.39(m,2h),7.27(d,1h),7.15(d,1h),6.59(s,1h),6.22(t,1h),5.56(s,2h),3.86(s,4h),3.66(m,3h),3.42(m,8h),3.25(m,4h),3.08(m,2h),2.81(m,3h),2.65(m,1h),1.43(m,2h),1.22(m,3h),1.07(m,2h),0.83(t,3h).lcms[m+h]＝728.3(s)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34asr)；(r)-3-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34arr)；(r)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34brr)；(s)-2-(((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)-4-((3-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)氨基)-4-氧代丁酸(c-34bsr).实施例351-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙酮(c-35)的合成步骤1:向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、2-(((叔丁氧羰基)氨基)氧基)乙酸(1.1当量)、hatu(1.05当量)、huenig碱(5.0当量)和dmf(0.2m)。将该反应混合物在室温搅拌18小时，然后通过isco色谱法(0–20％meoh:dcm)纯化粗反应混合物，得到2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基氨基甲酸叔丁酯。步骤2:在0℃将hcl(20.0当量,4m的二噁烷溶液)加入到装有2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基氨基甲酸叔丁酯(1.0当量)和dcm(0.1m)的圆底烧瓶中。除去冰浴，将反应混合物在室温搅拌3小时。真空除去挥发性物质。将meoh(含有8％nh4oh)加入到得到的残余物中，真空除去挥发性物质。将该步骤重复2次以上。然后通过isco色谱法(0–10％meoh(8％nh4oh):dcm)纯化粗反应混合物，得到1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙酮(c-35)，为固体:1hnmr(cdcl3):δ7.12(d,1h),7.00(s,1h),6.90(s,1h),6.69(d,1h),6.38(d,1h),5.52(t,1h),5.30(s,2h),4.35(s,2h),3.94(s,3h),3.64(s,2h),3.52(m,2h),3.38(m,4h),2.44(m,4h),1.62(s,2h),1.45(m,2h),1.38(m,2h),1.25(m,2h),1.12(m,2h),0.87(t,3h).lrms[m+h]＝511.4.实施例361-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-氨基乙氧基)丙-1-酮(c-36)的合成除用3-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)丙酸替代2-(((叔丁氧羰基)氨基)氧基)乙酸外，按照与实施例35类似的方法制备1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-氨基乙氧基)丙-1-酮(c-36)，得到1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-氨基乙氧基)丙-1-酮(c-36)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.26(d,1h),7.09(d,1h),6.86(d,1h),6.59(d,1h),6.13(d,1h),5.43(s,2h),4.57(s,2h),3.94(s,3h),3.73(t,2h),3.58(m,4h),3.54(m,2h),3.37(m,2h),2.93(t,2h),2.66(m,2h),2.44(m,4h),1.41(m,2h),1.27(m,2h),1.15(m,2h),0.87(t,3h).lrms[m+h]＝553.4.实施例37n-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-37)的合成除用1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-氨基乙氧基)丙-1-酮(c-36)替代int-1外，按照与实施例35类似的方法制备n-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-37)，得到n-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-37)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.27(d,1h),7.09(d,1h),6.86(d,1h),6.59(d,1h),6.13(d,1h),5.44(s,2h),4.08(s,2h),3.93(s,3h),3.72(t,2h),3.56(m,8h),3.40(m,4h),2.64(t,2h),2.44(m,4h),1.43(m,2h),1.27(m,2h),1.14(m,2h),0.87(t,3h).lrms[m+h]＝626.4.实施例38(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙酮(c-38)的合成除用化合物(int-2)替代化合物(int-1)外，按照与实施例35类似的方法制备(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙酮(c-38)，得到(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙酮(c-38)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.54(d,1),7.40(d,1h),7.13(d,1h),6.68(s,1h),6.29(d,1h),5.69(d,1h),5.48(d,1h),4.36(m,3h),3.96(s,3h),3.74(m,2h),3.51(m,4h),2.66(m,4h),1.49(m,1h),1.38(m,3h),1.24(m,2h),0.96(m,2h),0.84(t,3h).lrms[m+h]＝541.3.实施例39(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(c-39)除用化合物(int-2)替代化合物(int-1)外和用2,2-二甲基-4-氧代-3,8,11-三氧杂-5-氮杂十四烷-14-酸替代2-(((叔丁氧羰基)氨基)氧基)乙酸外，按照与实施例35类似的方法制备(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(c-39)，得到(s)-1-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)丙-1-酮(c-39)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.56(d,1h),7.44(d,1h),7.16(d,1h),6.77(s,1h),6.31(d,1h),5.71(d,1h),5.50(d,1h),4.38(m,1h),3.98(s,3h),3.78(m,4h),3.72(m,2h),3.67(m,6h),3.53(m,4h),3.14(m,2h),2.77(m,2h),2.69(m,4h),1.51(m,1h),1.26(m,3h),1.02(m,2h),0.86(t,3h).lrms[m+h]＝627.5.实施例40(s)-n-(2-(2-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-40)的合成除用化合物(c-39)替代化合物(int-1)外，按照与实施例35类似的方法制备(s)-n-(2-(2-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-40)，得到(s)-n-(2-(2-(3-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-40)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.54(d,1h),7.47(d,1h),7.17(d,1h),6.78(s,1h),6.30(d,1h),5.68(d,1h),5.50(d,1h),4.36(m,1h),4.09(s,2h),3.97(s,3h),3.73(m,8h),3.56(m,4h),3.43(t,2h),3.23(m,2h),2.88(m,4h),2.66(t,2h),1.49(m,1h),1.26(m,3h),1.04(m,2h),0.84(t,3h).lrms[m+h]＝700.4.实施例41n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-41)的合成除用化合物(c-20)替代化合物(int-1)外，按照与实施例35类似的方法制备n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-41)，得到n-(2-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-41)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.25(d,1h),7.11(s,1h),6.86(d,1h),6.58(d,1h),6.12(d,1h),5.43(s,2h),4.10(s,2h),3.96(s,3h),3.76(t,2h),3.60(m,12h),3.44(t,2h),3.36(t,2h),2.66(t,2h),2.46(m,4h),1.40(m,2h),1.30(m,2h),1.15(m,2h),0.89(t,3h).lrms[m+h]＝670.4.实施例425-(4-((4-(2-(2-(氨基氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-42)的合成水合肼步骤1.在第一步中，向圆底烧瓶中加入在dce(0.02m)中的5-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)和2-(2-((1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)氧基)乙氧基)乙醛(1.2当量)，向该混合物中加入乙酸(6.0当量)，将该混合物在室温搅拌15分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.0当量)。在室温再持续搅拌3小时。然后真空除去挥发性物质。将残余物溶于meoh，通过反相hplc、使用c18柱纯化(用10-50％乙腈-包含0.05％tfa的h2o洗脱)，得到2-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)异二氢吲哚-1,3-二酮。lcms[m+h]＝671.40.步骤2.向圆底烧瓶中加入2-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)异二氢吲哚-1,3-二酮(1.0当量)、水合肼(10.0当量)、meoh(0.02m)和水(0.2m)。将该混合物在室温搅拌4小时。通过反相hplc、使用c18柱纯化该反应混合物(用10-50％乙腈-包含0.05％tfa的h2o)。收集包含期望的产物的级分，减压浓缩，然后将残余物溶于meoh，上前置条件的spherepl-hco3mp-树脂柱，用meoh洗脱，浓缩洗脱液，得到5-(4-((4-(2-(2-(氨基氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-42)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.22(d,1h),7.08(d,1h),6.83(d,1h),6.56(d,1h),6.10(d,1h),5.40(s,2h),3.94(s,3h),3.76(m,2h),3.60(m,4h),3.50(s,2h),3.34(d,3h),2.59(m,4h),2.49(s,4h),1.38(m,2h),1.26(m,2h),1.12(m,2h),0.87(t,3h).lcms[m+h]＝541.40.注意：在两步法中制备2-(2-((1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)氧基)乙氧基)乙醛：步骤1:在0℃向n-羟基酞酰亚胺(1.0当量)、二甘醇(1.0当量)和三苯膦(1.3当量)在thf(0.2m)中的溶液中加入dead(2.2m甲苯溶液,1.3当量)。将得到的溶液在室温搅拌过夜。真空浓缩该反应混合物。通过硅胶色谱法纯化残余物(用20-70％etoa/己烷洗脱)。这种色谱后产物仍然包含一些ph3po，然后通过反相色谱法再纯化(c18柱，用20-40-100％ch3cn/水洗脱)，得到2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)异二氢吲哚-1,3-二酮lcms[m+h]＝252.10.步骤2:向搅拌的2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)异二氢吲哚-1,3-二酮(1.0当量)和碳酸氢钠(2.0当量)在干dcm(0.08m)中的溶液中加入戴斯-马丁试剂(2.0当量)，将得到的混合物在室温搅拌3小时。用dcm稀释该反应混合物，然后用1nnaoh溶液和盐水洗涤，分离有机层，用mgso4干燥，真空蒸发。通过硅胶色谱法纯化粗混合物(用30-70％etaoc/己烷洗脱)，得到2-(2-((1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)氧基)乙氧基)乙醛。lcms[m+h]＝250.10.实施例43n-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-43)的合成除用化合物(c-19)用于替代化合物(int-1)外，按照与实施例35类似的方法制备n-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-43)，得到n-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-43)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.12(d,1h),6.98(d,1h),6.73(d,1h),6.45(d,1h),6.00(d,1h),5.30(s,2h),3.97(s,2h),3.84(s,3h),3.41(s,2h),3.25(s,2h),2.40(s,6h),2.27(m,3h),1.63(m,2h),1.28(m,2h),1.17(m,3h),1.02(m,2h),0.77(t,3h).lcms[m+h]＝568.40.实施例445-(4-((4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-44)的合成除用(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯替代(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯外，按照与实施例19类似的方法制备5-(4-((4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-44)，得到5-(4-((4-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(c-44)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.36(d,1h),7.13(d,1h),6.92(d,1h),6.73(d,1h),6.21(s,1h),5.51(s,2h),3.92(s,3h),3.69(m,12h),3.53(t,2h),3.12(m,2h),2.84(m,8h),1.50(m,2h),1.28(m,2h),1.17(m,2h),0.87(t,3h).lrms[m+h]＝569.3.实施例45n-(2-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-45)的合成除用化合物(c-44)替代化合物(int-1)外，按照与实施例35类似的方法制备n-(2-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-43)，得到n-(2-(2-(2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-45)，为固体:1hnmr(cdcl3):δ7.20(s,1h),6.97(d,1h),6.90(s,1h),6.87(s,1h),6.76(d,1h),6.56(d,1h),6.17(d,1h),5.84(s,2h),5.21(s,2h),4.69(m,2h),4.07(s,2h),3.85(s,3h),3.53(m,8h),3.45(m,2h),3.39(s,2h),3.24(m,2h),2.52(t,2h),2.40(m,8h),1.22(m,2h),1.16(m,2h),1.02(m,2h),0.78(t,3h).lrms[m+h]＝642.4.实施例465-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-酯(c-46)的合成向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、二异丙基胺(1.3当量)、戊二酸二琥珀酰亚胺酯(1.3当量)和dmso(0.1m)。将该反应混合物在室温搅拌3小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-酯(c-46)，为固体，为tfa盐:1hnmr(dmso):δ7.41(s,1h),7.37(s,3h),7.19(s,1h),6.94(s,1h),6.57(s,1h),6.22(d,1h),5.56(s,2h),4.30(s,2h),3.86(s,3h),3.44(m,4h),3.35(m,2h),2.92(m,2h),2.80(m,8h),2.71(m,2h),1.83(m,2h),1.44(m,2h),1.20(m,2h),1.09(m,2h),0.80(t,3h).lrms[m+h]＝649.3.实施例47(s)-5-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-47)的合成除用化合物(int-2)替代化合物(int-1)外，按照与实施例46类似的方法制备(s)-5-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-47)，得到(s)-5-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-47)，为固体，为tfa盐:1hnmr(dmso):δ7.54(s,1h),7.43(s,3h),7.22(s,1h),6.61(s,1h),6.28(d,1h),6.24(d,1h),5.67(d,1h),5.50(d,1h),4.82(s,1h),4.39(s,1h),4.22(m,2h),3.89(s,3h),3.36(m,4h),3.28(m,2h),2.92(m,2h),2.82(m,8h),2.72(m,2h),1.84(m,2h),1.34(m,2h),1.15(m,2h),0.86(m,2h),0.77(t,3h).lrms[m+h]＝679.3.实施例48(s)-2-氨基-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(((s)-1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-48)的合成向圆底烧瓶中加入(s)-5-(4-(3-((2-氨基-4-((1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-47(1.0eq)、boc-lys-oh(2.0eq)、diea(5.0eq)和dmf(30mm)。将该反应体系在室温搅拌16小时，真空除去挥发性物质。使用rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到(s)-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(((s)-1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)己酸lcms[m+1]＝810.5.用在0.1mdcm中30％tfa体积处理(s)-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(((s)-1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)己，真空除去挥发性物质，得到(s)-2-氨基-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(((s)-1-羟基己-2-基)氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-48)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.49(m,2h),7.21(d,1h),6.77(s,1h),6.29(d,1h),5.68(d,1h),5.50(d,1h),4.36(m,1h),4.20(m,2h),3.99(s,3h),3.93(m,1h),3.76(m,2h),3.50(m,2h),3.19(m,4h),2.44(t,2h),2.24(t,2h),2.16(m,4h),1.88(m,4h),1.51(m,2h),1.25(m,6h),1.03(m,2h),0.84(t,3h).lrms[m+h]＝710.3.实施例49(s)-2-氨基-6-(5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-49)的合成除用化合物(c-46)替代化合物(c-47)外，按照与实施例48类似的方法制备(s)-2-氨基-6-(5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-49)，得到(s)-2-氨基-6-(5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-49)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.22(d,1h),7.01(d,1h),6.78(d,1h),6.23(s,1h),5.56(s,2h),4.07(m,2h),3.95(s,3h),3.79(m,1h),3.73(m,2h),3.55(m,2h),2.98(m,4h),2.43(t,2h),2.23(t,2h),2.04(m,4h),1.89(m,4h),1.54(m,6h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝680.4.实施例505-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-50)的合成除用化合物(c-19)替代化合物(int-1)外，按照与实施例46类似的方法制备5-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-50)，得到5-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-50)，为固体，为tfa盐:1hnmr(dmso):δ8.00(s,1h),7.40(m,4h),7.02(s,1h),6.82(s,1h),6.55(d,1h),6.21(d,1h),5.53(s,2h),3.83(,m,5h),3.00(m,8h),2.81(m,4h),2.69(m,2h),2.19(m,2h),1.84(m,2h),1.75(m,4h),1.45(m,2h),1.22(m,4h),1.09(m,4h),0.80(t,3h).lrms[m+h]＝706.4.实施例51(s)-2-氨基-6-(5-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-51)的合成除用化合物(c-50)替代化合物(c-47)外，按照与实施例48类似的方法制备(s)-2-氨基-6-(5-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酰氨基)己酸，得到(s)-2-氨基-6-(5-((3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-51)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.35(d,1h),7.12(s,1h),6.94(d,1h),6.75(d,1h),6.22(s,1h),5.52(s,2h),3.92(s,3h),3.86(t,1h),3.71(s,2h),3.54(,m,2h),3.22(m,8h),3.05(m,2h),2.82(m,2h),2.21(m,4h),1.89(m,4h),1.53(m,6h),1.30(m,4h),1.18(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝737.4.实施例525-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-52)的合成除用化合物(int-3)替代化合物(int-1)外，按照与实施例46类似的方法制备5-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-52)，得到5-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(c-52)，为固体，为tfa盐:lrms[m+h]＝649.4.实施例53(s)-2-氨基-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-53)的合成除用化合物(c-52)替代化合物(c-47)外，按照与实施例48类似的方法制备(s)-2-氨基-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-53)，得到s)-2-氨基-6-(5-(4-(3-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-4-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酰氨基)己酸(c-53)，为固体，为tfa盐:1hnmr(dmso):δ8.22(s,3h),7.79(t,1h),7.51(s,2h),7.42(m,2h),7.27(t,1h),7.17(d,1h),6.61(s,1h),6.23(d,1h),5.57(s,2h),4.05(m,2h),3.87(s,5h),3.42(m,3h),3.02(m,3h),2.89(m,2h),2.31(t,2h),2.09(t,2h),1.72(m,4h),1.41(m,5h),1.22(m,2h),1.07(m,2h),0.83(t,3h).lrms[m+h]＝680.4.实施例545-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸全氟苯酯(c-54)的合成向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、diea(3.0当量)、戊二酸双(全氟苯基)酯(2.0当量)和dmf(0.01m)。将该反应体系在室温搅拌2小时，然后通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)，得到5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-5-氧代戊酸全氟苯酯(c-54)，为固体，为tfa盐.lcms[m+1]＝718.4.注意：戊二酸双(全氟苯基)酯通过下列步骤制备：将戊二酰二氯(1.0当量)、thf(0.15m)和三乙胺(2.2当量)加入到圆底烧瓶中，将该反应混合物冷却至0℃。然后缓慢地加入5,6-五氟苯酚(2.1当量)在thf(1.2m)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌2小时。通过硅胶过滤该混合物，然后真空浓缩。通过硅胶柱纯化残余物，用己烷-乙酸乙酯(9:1)洗脱，浓缩，得到戊二酸双(全氟苯基)酯，为固体。lcms[m+23]＝487.2.实施例553-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酸全氟苯酯(c-55)的合成除用3,3'-氧代二丙酸双(全氟苯基)酯替代戊二酸双(全氟苯基)酯外，按照与实施例54类似的方法制备3-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酸全氟苯酯(c-55)，为固体，为tfa盐。1hnmr(乙腈-d3)δ7.33(d,1h),7.30(d,1h),6.95(d,1h),6.73(d,1h),6.22(d,1h),6.06(m,1h),5.43(s,2h),4.18(s,2h),3.92(s,3h),3.81(t,2h),3.74(t,2h),3.47(m,2h),2.95(t,2h),2.60(t,2h),2.14(d,2h),1.45(m,2h),1.28(m,2h),1.15(m,2h),0.87(t,3h).lrms[m+h]＝748.4.19fnmr(471mhz,乙腈-d3)δ-154.71(d,2f),-160.40(d,1f),-164.57(dd,2f).实施例563-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸全氟苯酯(c-56)的合成除用3,3'-(乙-1,2-二基双(氧基))二丙酸双(全氟苯基)酯替代戊二酸双(全氟苯基)酯外，按照与实施例54类似的方法制备3-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸酯(c-56)，得到3-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙氧基)丙酸酯(c-54).lrms[m+h]＝792.4.实施例57(s)-2-氨基-6-(3-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酰氨基)己酸(c-57)的合成向圆底烧瓶中加入3-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酸全氟苯酯(c-55,1.0当量)、boc-lys-oh(2.0当量)、diea(5.0当量)和dmf(30mm)。将该反应体系在室温搅拌16小时，真空除去挥发性物质。使用rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，真空除去挥发性物质，得到(s)-6-(3-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酰氨基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)己酸。lcms[m+1]＝810.5。用在0.1mdcm中30％tfa体积处理boc保护的化合物，然后真空除去挥发性物质，得到(s)-2-氨基-6-(3-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)丙酰氨基)己酸(c-57)，为固体，为tfa盐:1hnmr(dmso):δ8.18(m,3h),7.80(s,1h),7.41(m,4h),7.18(s,1h),6.94(d,1h),6.59(d,1h),6.22(d,1h),5.56(s,2h),4.24(m,1h),3.86(m,7h),3.56(m,4h),3.44(m,4h),3.01(m,4h),2.60(m,2h),2.28(m,2h),1.74(m,2h),1.45(m,2h),1.38(m,3h),1.21(m,3h),1.09(m,2h),0.80(t,3h).lcms[m+1]＝710.5.实施例58n-(15-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五基)-5-((3as,4s,6ar)-2-氧代六氢-1h-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰胺(c-58)的合成除用17-氧代-21-((3as,4s,6ar)-2-氧代六氢-1h-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)-4,7,10,13-四氧杂-16-氮杂二十一烷-1-酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯替代戊二酸二琥珀酰亚胺酯外，按照与实施例46类似的方法制备n-(15-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五基)-5-((3as,4s,6ar)-2-氧代六氢-1h-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰胺(c-58)，得到n-(15-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-15-氧代-3,6,9,12-四氧杂十五基)-5-((3as,4s,6ar)-2-氧代六氢-1h-噻吩并[3,4-d]咪唑-4-基)戊酰胺(c-58)，为固体，为tfa盐:1hnmr(dmso):δ7.84(m,2h),7.42(m,4h),7.22(m,1h),6.94(d,1h),6.56(d,1h),6.42(s,1h),6.37(s,1h),6.22(s,1h),5.57(s,2h),4.29(m,2h),4.11(m,2h),3.86(s,3h),3.60(m,4h),3.48(m,16h),3.37(m,4h),3.16(m,4h),3.08(m,2h),2.80(m,1h),2.56(m,2h),2.05(m,2h),1.58(m,1h),1.45(m,5h),1.23(m,4h),1.07(m,2h),0.80(t,3h).lrms[m+h]＝911.6.实施例594-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((r)-6-氨基-2-((s)-2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)-3-苯基丙酰氨基)己酰氨基)苄基酯(c-59)的合成根据对实施例(c-30)所示的方案制备4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((r)-6-氨基-2-((s)-2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)-3-苯基丙酰氨基)己酰氨基)苄酯(c-59)，为固体，为tfa盐，除在第一步中用((s)-1-(((r)-6-氨基-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代己-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯替代((s)-3-甲基-1-(((s)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯外:1hnmr(cd3od):δ8.26(d,1h),7.91(t,1h),7.61(d,2h),7.35(m,3h),7.25(m,3h),7.19(m,3h),7.03(d,1h),6.79(d,1h),6.76(s,2h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),5.11(s,2h),4.41(m,1h),4.33(s,2h),3.98(t,1h),3.95(s,3h),3.70(m,3h),3.54(t,2h),3.24(m,4h),3.10(m,1h),3.02(m,1h),2.83(m,1h),2.47(t,2h),1.92(m,2h),1.52(m,4h),1.42(m,2h),1.30(m,3h),1.18(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝1013.5.实施例604-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄酯(c-60)的合成根据对实施例(c-30)所示的方案制备4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸4-((s)-2-((s)-2-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基酯(c-60)，为固体，为tfa盐，除在第一步中用((s)-3-甲基-1-(((s)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯替代((s)-3-甲基-1-(((s)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸(9h-芴-9-基)甲酯外:1hnmr(cd3od):δ9.65(s,1h),8.20(d,1h),7.97(d,1h),7.60(m,2h),7.34(m,2h),7.31(s,1h),7.22(d,1h),7.03(d,1h),6.80(m,2h),6.77(s,2h),6.23(d,1h),5.57(s,2h),5.11(s,2h),4.48(t,1h),4.31(s,3h),4.15(t,1h),3.95(m,4h),3.68(m,4h),3.62(m,2h),3.53(m,8h),2.49(t,2h),2.11(m,1h),1.52(m,2h),1.44(d,3h),1.28(m,2h),1.18(m,2h),0.98(m,6h),0.87(t,3h).lrms[m+h]＝952.6.实施例61(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-61)的合成步骤1:向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、hoat(2.0当量)、huenig碱(14.0当量)、三乙酸(3s,4r,5r,6r)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.2当量)和吡啶:dmf(1:4,0.015m)。将该反应混合物在室温搅拌4小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到三乙酸(3s,4r,5r,6r)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯，为固体:lcms[m+h]＝1212.4.步骤2:将三乙酸(3s,4r,5r,6r)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.0当量)溶于meoh、thf和水(2:1:0.4)(0.005m)。然后加入lioh(8.0当量)，将该反应体系在室温搅拌2小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-氨基丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸，为固体:lcms[m+h]＝850.4.步骤3:向圆底烧瓶中加入(2r,3r,4r,5s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-氨基丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(1.0当量)、3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸(2.0当量)、huenig碱(6.0当量)、hbtu(1.8当量)和dmf(0.003m)。将该反应体系保持在室温搅拌15分钟。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后通过rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-61)，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝1001.3.实施例62(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-62)的合成根据对实施例(c-61)所示的方案制备(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-(((4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-62)，为固体，为tfa盐，除在最后的步骤中用3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸替代3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸外:1hnmr(cd3od):δ8.20(d,1h),7.37(d,1h),7.21(m,2h),7.05(m,1h),6.99(d,1h),6.78(m,3h),6.23(d,1h),5.55(s,2h),5.09(s,2h),3.92(m,4h),4.81(d,1h),4.00(s,2h),3.94(s,3h),3.89(d,1h),3.62(m,9h),3.53(m,8h),2.90(m,3h),2.66(t,2h),2.37(t,2h),1.51(m,2h),1.29(m,2h),1.17(m,2h),0.87(t,3h).lrms[m+h]＝1045.4.实施例63n-(2-((5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基)二硫烷基)乙基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-63)的合成步骤1:向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-5-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(1.3当量)、huenig碱(20.0当量)和dmf(0.03m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后使用rp-c18isco(acn:h2o,其中tfa作为调节剂)纯化粗反应混合物，然后冻干，得到1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊-2-酮，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝614.3.步骤2:向圆底烧瓶中加入1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-甲基-4-(甲基二硫烷基)戊-2-酮1.0当量)、(2s,3s)-1,4-二巯基丁-2,3-二醇(1.0当量)和二甲基乙酰胺:h2o(1:1,0.03m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后使用rp-c18isco(acn:h2o,其中tfa作为调节剂)纯化粗反应混合物，然后冻干，得到1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-巯基-4-甲基戊-2-酮，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝568.3.步骤3:向圆底烧瓶中加入1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-巯基-4-甲基戊-2-酮(1.0当量)、2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙-1-胺hcl盐(2.0当量)、huenig碱(10.0当量)和thf:pbs(1:1,0.03m)。将该反应混合物在室温搅拌15分钟。然后使用rp-c18isco(acn:h2o，其中tfa作为调节剂)纯化粗反应混合物，然后冻干，得到1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-((2-氨基乙基)二硫烷基)-4-甲基戊-2-酮，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝643.4.步骤4:向圆底烧瓶中加入1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-((2-氨基乙基)二硫烷基)-4-甲基戊-2-酮(1.0当量)、3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酸(1.0当量)、huenig碱(5.0当量)、hatu(1.0当量)和dmf(0.02m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后使用rp-c18isco(acn:h2o,其中tfa作为调节剂)纯化粗反应混合物，然后冻干，得到n-(2-((5-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基)二硫烷基)乙基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)丙酰胺(c-63)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.37(d,1h),7.26(d,1h),7.08(m,1h),6.83(d,1h),6.81(s,2h),6.24(d,1h),5.58(s,2h),4.37(s,2h),4.20(br,4h),3.97(s,3h),3.75(t,2h),3.55(t,2h),3.38(m,2h),3.38(br,4h),2.72(t,2h),2.55(m,2h),2.45(t,2h),1.89(m,2h),1.54(m,2h),1.31(m,8h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝794.4.实施例641-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-甲基-4-(甲基硫基)戊-2-酮(c-64)的合成按照对中间体int-1所述的方法制备1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-甲基-4-(甲基硫基)戊-2-酮(c-63)，除在步骤3中使用4-甲基-4-(甲基硫基)-1-(哌嗪-1-基)戊-2-酮替代哌嗪-1-甲酸叔丁酯外。使用rp-c18isco(acn:h2o,其中tfa作为调节剂)纯化粗反应混合物，然后冻干，得到1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-4-甲基-4-(甲基硫基)戊-2-酮(c-64)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ7.36(d,1h),7.25(d,1h),7.05(m,1h),6.81(d,1h),6.24(d,1h),5.58(s,2h),4.34(s,2h),3.90(br,4h),3.96(s,3h),3.55(t,2h),3.28(br,4h),2.55(m,2h),1.95(s,3h),1.80(m,2h),1.54(m,2h),1.31(m,2h),1.27(s,6h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝582.4.实施例65(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)(羟基)磷酰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-65)的合成步骤1:在0℃向圆底烧瓶中加入2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙-1-醇(c-68)(1.0当量)、三氯化磷(3.0当量)、三乙胺(9.0当量)和thf(0.2m)，搅拌1h。然后通过缓慢添加冰水使反应停止，用etoac3x洗涤。然后冻干包含期望的产物的水层。分离膦酸氢2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙酯，不经进一步纯化用于下一步：lcms[m+h]＝546.3.步骤2:向圆底烧瓶中加入三乙酸(2s,3r,4s,5s,6s)-2-(2-(3-((((9h-芴基-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-(羟基甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.0当量)、膦酸氢2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙酯(2.0当量)、新戊酰氯(42.0当量)和吡啶(0.03m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。此时，加入在吡啶:h2o(1:0.1,0.14m)中的二碘化物(1.06当量)，将该混合物搅拌10min。然后使用rp-hplc(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)纯化粗反应混合物，得到三乙酸(2s,3r,4s,5s,6s)-2-(2-(3-((((9h-芴基-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-((((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)(羟基)磷酰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝1292.5.步骤3:向圆底烧瓶中加入三乙酸(2s,3r,4s,5s,6s)-2-(2-(3-((((9h-芴基-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-((((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)(羟基)磷酰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-(甲氧基羰基)四氢-2h-吡喃-3,4,5-三基酯(1.0当量)、氢氧化锂-h2o(10.0当量)和meoh:h2o(3:1.5,0.007m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。使用rp-c18isco(acn:h2o,其中tfa作为调节剂)纯化粗反应混合物，然后冻干，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)(羟基)磷酰基)氧基)甲基)-2-(3-氨基丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸，为固体，为tfa盐:lcms[m+h]＝930.4.步骤4:向圆底烧瓶中加入(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)(羟基)磷酰基)氧基)甲基)-2-(3-氨基丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(1.0当量),3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸(1.0当量)、huenig碱(6.0当量)、hatu(1.0当量)和dmf(0.005m)。将该反应体系保持在室温下搅拌15分钟。然后通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)，得到(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(4-((((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙氧基)(羟基)磷酰基)氧基)甲基)-2-(3-(3-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1h-吡咯-1-基)乙氧基)丙酰氨基)丙酰氨基)苯氧基)-3,4,5-三羟基四氢-2h-吡喃-2-甲酸(c-65)，为固体，为tfa盐:1hnmr(cd3od):δ8.19(s,1h),7.37(d,1h),7.14(m,3h),6.79(s,2h),6.77(d,1h),6.22(d,1h),5.53(s,2h),4.86(s,2h),4.84(d,1h),4.08(s,2h),3.95(d,1h),3.92(s,3h),4.00(br,4h),3.76(s,2h),3.62(m,5h),3.53(m,10h),3.27(m,2h),2.85(m,4h),2.63(m,2h),2.37(t,2h),1.52(m,2h),1.31(m,2h),1.17(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h/2z]＝563.4.实施例66(2r,2'r)-3,3'-((2-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)亚氨基)丙-1,3-二基)双(硫烷二基))双(2-氨基丙酸)(c-66)的合成向圆底烧瓶中加入1-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-(氨基氧基)乙-1-酮(c-35)(2.4当量)、(2r,2'r)-3,3'-((2-氧代丙-1,3-二基)双(硫烷二基))双(2-氨基丙酸)(1.0当量)和乙醇(0.02m)。将该反应混合物在室温搅拌30min。然后通过rp-hplc纯化粗反应混合物(0.035％tfa的acn溶液:0.05％tfa的h2o溶液,c18柱)，得到(2r,2'r)-3,3'-((2-((2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙氧基)亚氨基)丙-1,3-二基)双(硫烷二基))双(2-氨基丙酸)(c-66)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.35(d,1h),7.28(d,1h),7.05(m,1h),6.80(d,1h),6.23(d,1h),5.57(s,2h),4.32(s,2h),4.20(m,1h),4.05(m,1h),3.94(s,3h),3.81(m,4h),3.55(m,2h),3.44(m,2h),3.20(m,4h),2.96(m,1h),2.88(m,1h),1.53(m,2h),1.31(m,2h),1.18(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝789.3.实施例67(r)-2-氨基-6-((((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)甲基)-17-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-10,17-二氧代-8,14-二氧杂-4-硫杂-7,11-二氮杂十七-6-烯酸(c-67)的合成向圆底烧瓶中加入n-(2-(3-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙氧基)乙基)-2-(氨基氧基)乙酰胺(c-37)(2.4当量)、(2r,2'r)-3,3'-((2-氧代丙-1,3-二基)双(硫烷二基))双(2-氨基丙酸)(1.0当量)和乙醇(0.02m)。将该反应混合物在室温搅拌30min。使用rp-c18isco(acn:h2o,其中tfa作为调节剂)纯化粗反应混合物，然后冻干，得到(r)-2-氨基-6-((((r)-2-氨基-2-羧基乙基)硫基)甲基)-17-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)-10,17-二氧代-8,14-二氧杂-4-硫杂-7,11-二氮杂十七-6-烯酸(c-67)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.36(d,1h),7.29(d,1h),7.07(m,1h),6.80(d,1h),6.24(d,1h),5.57(s,2h),4.57(s,2h),4.31(m,2h),4.11(m,1h),4.03(m,1h),3.95(s,3h),3.86(br,4h),3.73(t,2h),3.54(m,6h),3.40(m,2h),3.20(m,8h),2.96(m,2h),2.67(t,2h),1.52(m,2h),1.30(m,2h),1.19(m,2h),0.88(t,3h).lrms[m+h]＝904.4.实施例682-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙-1-醇(c-68)的合成向圆底烧瓶中加入5-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-n4-戊基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-2,4-二胺(int-1,1.0当量)、2-溴乙-1-醇(1.3当量)、三乙胺(20.0当量)和乙腈(0.03m)。将该反应混合物在室温搅拌2小时。然后通过isco色谱法纯化粗反应混合物(0–10％meoh:dcm，梯度)，得到2-(4-(4-((2-氨基-4-(戊基氨基)-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶-5-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙-1-醇(c-68)，为固体:1hnmr(cd3od):δ7.22(d,1h),7.08(d,1h),6.83(d,1h),6.55(d,1h),6.10(d,1h),5.39(s,2h),3.93(s,3h),3.66(t,2h),3.50(s,2h),3.32(m,2h),3.20(s,1h),2.51(m,10h),1.37(m,2h),1.27(m,2h),1.25(s,1h),1.12(m,2h),0.86(t,3h).lrms[m+h]＝482.4.实施例69测定式(i)化合物以确定其作为toll-样受体7激动剂的活性。报道基因测定用人tlr7和nf-kb驱动的萤光素酶报道基因载体(pnifty-萤光素酶)稳定转染人胚胎肾293(hek293)细胞。作为对照测定，使用用pnifty-luc转染的正常hek293。将细胞在补充有2mml-谷氨酰胺、10％热灭活fbs、1％青霉素和链霉素、2μg/ml嘌呤霉素(invivogen#ant-pr-5)和5μg/ml杀稻瘟菌素(blasticidin/invitrogen#46-1120)的dmem中培养。bright-glotm萤光素酶测定缓冲液和底物由promega#e263b和#e264b提供(分别为测定底物和缓冲液)。由greinerbio-one(#789163-g)提供384孔澄清底板，并且是定制的条形码板。将细胞以25,000个细胞/孔接种在384-孔板中，最终体积为50μl培养基。在37℃和5％co2下培养过夜(18小时)后使细胞粘附于平板。然后将系列稀释的实验和阳性对照化合物分配到各孔中，并在37℃和5％co2下温育7小时。仅用dmso刺激的细胞也用作阴性对照。温育后，根据制造商的说明将30μl预混合测定缓冲液和底物缓冲液加入到各孔中。在clipr机器上读取发光信号，积分时间为每个板20秒。对于每种化合物产生剂量响应曲线，并且将ec50值确定为产生50％最大信号的浓度。选择的测定结果游离形式或药学上可接受盐形式的各种式(i)化合物表现出药理学性质，例如，如本申请中描述的体外测试所指示。在这些实验中的ec50值是作为引发基线与最大响应之间半程响应的所述测试化合物的浓度给出。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-2μm的ec50值。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-1μm的ec50值。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-500nm的ec50值。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-250nm的ec50值。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-100nm的ec50值。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-50nm的ec50值。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-25nm的ec50值。在其它实例中，式(i)化合物具有1nm-10nm的ec50值。为了示例本发明化合物的体外活性，式(i)的某些化合物对tlr7刺激的ec50值列于表2中。半胱氨酸加合物被认为是由溶酶体内降解引起的推定的分解代谢物(bioconjugatechem.2006,17,114-124)。表2的某些化合物是用半胱氨酸衍生相应母体化合物的结果。表2实施例70通过使tlr7激动剂缀合至抗-her2抗体突变体的特异性半胱氨酸残基生成抗-her2-tlr7激动剂缀合物具有特异性半胱氨酸(cys)突变的抗-her2抗体的制备在先已在2014/124316和wo2015/138615中描述了具有位点特异性半胱氨酸突变的抗-her2抗体的制备，例如曲妥珠单抗，其各自以引用的方式并入本文。简言之，化学合成编码抗-her2抗体例如曲妥珠单抗的重和轻链的可变区的dna，并将其克隆入两种哺乳动物表达载体pog-hc和pog-lc中，其包含人igg1和人类κ轻链的恒定区。载体含有cmv启动子和信号序列：mktfilllwvlllwvifllpgata(seqidno：27)。使用寡核苷酸定向诱变制备抗-her2抗体的cys突变体构建体，并且通过dna测序证实cys突变体构建体的序列。例如，半胱氨酸可以在抗-her2抗体中的一个或多个以下位置(所有位置通过eu编号)导入：(a)抗体重链的152、360和/或375位；和b)抗体轻链的107、159和/或165位。例如，可以在重链的152位导入半胱氨酸，产生具有seqidno：19的轻链序列和seqidno：30的重链序列的抗-her2mab4。如前所述(meissner等人，biotechnolbioeng.75：197-203(2001))，通过使用瞬时转染方法共转染重链和轻链质粒，在293freestyletm细胞中表达抗-her2抗体的cys突变体。表达的抗体通过标准蛋白a亲和层析从细胞上清液纯化。使用类似的方法将曲妥珠单抗的重链和轻链可变区克隆入用于在cho细胞中表达的两种载体中。重链载体编码人igg1抗体的恒定区，包括信号肽(mplllllpllwagala)(seqidno：28)、驱动重链表达的cmv启动子和用于稳定转染入cho细胞的适当信号和选择序列。轻链载体编码人κ轻链的恒定区，包括信号肽(msvltqvlallllwltgtrc)(seqidno：29)、驱动轻链表达的cmv启动子和用于稳定转染入cho细胞的适当信号和选择序列。为了产生抗体，将重链载体和轻链载体共转染入cho细胞系中。对细胞进行选择，然后将稳定转染的细胞在抗体生产优化的条件下培养。通过标准蛋白a亲和层析从细胞上清液中纯化抗体。使用标准诱变方法进行针对抗体载体恒定区的其他突变。cys突变体抗-her2抗体的还原、再氧化和与tlr7激动剂的缀合使用junutulajr,等人,naturebiotechnology26:925-932(2008)中所述的方法，使包含连接基的本发明式(i)化合物与改造至抗体中的cys残基缀合。因为在哺乳动物细胞中表达的抗体中的改造的cys残基在生物合成过程中被加合物(二硫化物)如谷胱甘肽(gsh)和/或半胱氨酸修饰(chen等人2009)，所以最初表达的修饰的cys与硫醇反应性试剂如马来酰亚氨基-或溴-乙酰胺或碘乙酰胺基团不反应。为了缀合改造的cys残基，需要通过还原二硫化物来去除谷胱甘肽或半胱氨酸加合物，其通常需要还原所表达的抗体中的所有二硫化物。这可以通过首先将抗体暴露于还原剂例如二硫苏糖醇(dtt)，接着再氧化抗体的所有天然二硫键以恢复和/或稳定功能性抗体结构来完成。因此，为了还原改造的cys残基的半胱氨酸或gsh加合物之间的天然二硫键和二硫键，将新鲜制备的dtt加入先前纯化的曲妥珠单抗的cys突变体中，至终浓度为10mm或20mm。抗体与dtt在37℃温育1小时后，将混合物对pbs透析3天，每日缓冲液交换以除去dtt并重新氧化天然二硫键。通过反相hplc监测再氧化过程，其能够将抗体四聚体与单独的重和轻链分子分开。在加热至80℃的prlp-s4000a柱(50mmx2.1mm,agilent)上分析反应物，并通过含有0.1％tfa的30-60％乙腈水溶液的线性梯度以1.5ml/min的流速进行柱洗脱。在280nm处监测柱上蛋白质的洗脱。允许透析继续直至再氧化完成。再氧化恢复链内和链间二硫键，而透析允许半胱氨酸和谷胱甘肽连接到新导入的cys残基以透析掉。再氧化后，将含有马来酰亚胺的化合物以与改造的cys1.5:1、2:1或5:1的典型比例加入到pbs缓冲液(ph7.2)中的再氧化的抗体中，并且温育进行1小时。典型地，通过标准方法、经蛋白a树脂纯化除去过量的游离化合物，接着将缓冲液交换成pbs。将抗-her2抗体的cys突变体(例如曲妥珠单抗)交替还原并使用树脂上方法再氧化。将蛋白a琼脂糖珠(1ml/10mg抗体)在pbs(无钙或镁盐)中平衡，然后以批次方式加入到抗体样品中。通过将850mg半胱氨酸hcl溶解在10ml通过将3.4gnaoh添加至250ml0.5m磷酸钠ph8.0而制备的溶液中，来制备0.5m半胱氨酸储备液，然后将20mm半胱氨酸加入到抗体/珠浆液中，并在室温下适度混合30-60分钟。将珠加载到重力柱上，并在不到30分钟内用50倍床体积的pbs洗涤，然后将柱用重新悬浮在一个床体积的pbs中的珠封闭。为了调节再氧化的速率，任选加入50nm至1μm氯化铜。通过除去树脂的小试样，在igg洗脱缓冲液(thermo)中洗脱并如上所述通过rp-hplc分析来监测再氧化进程。一旦再氧化进行到期望的完全性，则可通过在改造的半胱氨酸上加入2-3摩尔过量的化合物来立即启动缀合，并使混合物在室温下反应5-10分钟，然后将柱用至少20个柱体积的pbs洗涤。用igg洗脱缓冲液洗脱抗体缀合物，并用0.1体积的0.5m磷酸钠ph8.0中和，将缓冲液交换为pbs。或者，不用在树脂上开始与抗体缀合，而用至少20个柱体积的pbs洗涤柱，用igg洗脱缓冲液洗脱抗体，并且用缓冲液ph8.0中和。然后将抗体用于缀合反应或急骤冷冻以供将来使用。抗-her2-tlr7激动剂缀合物的特性分析抗体-tlr7激动剂缀合物以确定缀合程度。从还原和去糖基化的样品的lc-ms数据推断化合物与抗体之比。lc/ms允许定量缀合物样品中连接至抗体的连接基-有效负载(化合物)的平均分子数量。hplc将抗体分离为轻链和重链，并根据每个链的连接基-有效载荷组的数量分离重链(hc)和轻链(lc)。质谱数据能够确定混合物中的成分种类，例如lc、lc+1、lc+2、hc、hc+1、hc+2等。从lc和hc链上的平均负载量，可以对抗体缀合物计算平均化合物与抗体之比。给定缀合物样品的化合物与抗体之比表示与含有两条轻链和两条重链的四聚体抗体连接的化合物(连接基-有效负载)分子的平均数目。使用superdex20010/300gl(gehealthcare)和/或蛋白质kw-8035μm300x8mm(shodex)柱上的分析型大小排阻色谱法(ansec)分析缀合物；基于分析型大小排阻色谱法分析聚集。还通过tosohbioscience(kingofprussia,pa,usa)tskgelbutyl-npr柱(100mm×4.6mm,2.5μm)上的疏水作用色谱法(anhic)分析缀合物，所述柱子安装在agilent1260lc系统(santaclara,ca,usa)，使用缓冲液a(20mmhis-hcl，1.5m硫酸铵，ph6.0)和缓冲液b(20mmhis-hcl，15％异丙醇，ph6.0)的二元梯度，通过用0.5个体积的3m硫酸铵稀释约20μg抗体(最初在pbs中)制备样品。根据已知疏水性的四个标准样品的线性回归计算疏水性指数。报道了按面积计算的最大峰的疏水性。大多数缀合物实现了高的化合物与抗体之比，主要是单体并且显示出低疏水性(高疏水性指数对应于从hic柱早期洗脱)。通过该方法的缀合导致大多数化合物的缀合效率大于95％(表3)。大部分缀合物含有少于4％的二聚化和寡聚化材料(表3)。疏水性指数(hi)为0.80或更高被认为是有利的特性。大部分缀合物显示hi值大于0.8(表3)。这启示缀合物可以被有效地制备并且具有有利的特征。表3.抗-her2-tlr7激动剂缀合物的特性a缀合物中的抗-her2抗体为：抗-her2mab1具有seqidno:19的lc；seqidno:9的hc。抗-her2mab2具有seqidno:19的lc；seqidno:21的hc。抗-hher2mab3具有seqidno:19的lc；seqidno:23的hc。抗-her2mab4具有seqidno:19的lc；seqidno:30的hc。抗-her2mab5具有seqidno:19的lc；seqidno:32的hc。b根据lcms的化合物与抗体之比。c通过分析型大小排阻色谱法测定的聚集；包括二聚化和寡聚化种类。blq＝低于定量限。d疏水作用色谱法(hic)测定：峰最大值的保留时间用于计算疏水性指数。e尽管未观察到聚集或通过ansec观察到低水平聚集，但是后期从柱上的洗脱启示无效结果。实施例71通过未改造的抗-her2抗体的天然二硫键的部分还原生成抗-her2-tlr7激动剂缀合物本发明的一些化合物还可以使用涉及抗体部分还原的方法(doronina,s.o.等人,nat.biotechnol.21,778-784,2003)与未改造抗体的天然半胱氨酸残基缀合。首先通过加入tcep至终浓度为10mm并且在37℃温育混合物1小时，在含有2mmedta的pbs中部分还原抗-her2抗体(浓度为5至10mg/ml)的链间和链内二硫键。在脱盐和加入1％w/vps-20洗涤剂后，使部分还原的抗体(1-2mg/ml)在4℃与每10mg抗体0.5-1mgtlr7激动剂化合物反应过夜。通过标准方法、经蛋白a层析纯化所得的缀合物，并将缓冲液交换为pbs，如上所述通过ms、ansec和anhic进行分析。对于一个缀合物实例，将测定的化合物与抗体之比、聚集行为和疏水性数据概括在表3中，该实例通过还原抗-her2mab3、然后与化合物c-1缀合而制备。实施例72使用1,3-二氯丙-2-酮再连接未改造抗-her2抗体的天然链间二硫键生成抗-her2-tlr7激动剂缀合物在可替代选择的方法中(美国专利申请20150150998)，可以修饰未改造的重组抗-her2抗体的链间二硫键，并且使用如下两个步骤与本发明的激动剂化合物缀合。方案15使用1,3二氯丙-2-酮桥连、随后添加到导入的酮上的两步法与天然半胱氨酸的缀合步骤1:链间二硫桥的还原和使用1,3-二氯丙-2-酮的重新桥接：在4℃将tcep·hcl(1.63mm)加入到抗-her2抗体mab3(136μm)和1,3-二氯丙-2-酮(33mm)在0.1mhepes缓冲液(ph8.0)中的溶液中。将所得混合物在4℃适度搅拌16h。然后使用pd-10脱盐柱(gehealthcare)将反应混合物缓冲液交换至pbs中。使用50kamicon过滤器浓缩所得溶液，得到修饰的抗-her2抗体。通过esi-ms(洗脱液a:水+0.1％甲酸；洗脱液b:乙腈+0.04％甲酸；梯度：3-80％b，2分钟–流速1.0ml/min。柱:proswiftmonolith4.6*50mm40℃)证实修饰；145398da(通过pngasef脱糖基化后)。步骤2:激动剂化合物(c-37)的缀合：使修饰的抗-her2抗体(30mg/ml)与3.0mm包含连接的氨基-氧基部分的化合物(c-37)在0.1m乙酸苯胺鎓缓冲液(ph4.6)中以15％(v/v)dmso终浓度反应。将该反应混合物在23℃下温育约16小时。然后使用50kamicon过滤器将反应混合物缓冲液交换成pbs(ph7.4)，产生修饰的抗-her2-化合物缀合物。使用化合物(c-35)缀合至修饰的抗-her2抗体得到类似的缀合物。如上所述，通过ms、ansec和anhic分析缀合物。将测定的化合物与抗体之比、聚集行为和疏水性数据概括在表3中。两个实例缀合物实现了高化合物与抗体之比，主要是单体且显示出低疏水性(高疏水性指数对应于从hic柱的早期洗脱)。通过该方法缀合导致缀合效率大于85％(表3)。该缀合物含有少于2％的二聚化和寡聚化材料(表3)。该缀合物显示出hi值大于0.85(表3)。这表明缀合物可以被有效地制备并且具有有利的特征。实施例73通过缀合至抗-her2抗体的天然赖氨酸残基生成抗-her2-tlr7激动剂缀合物天然抗体可以通过已建立的方法用本发明的某些化合物官能化。例如，将抗-大鼠her2抗体(7.16.4；购自bioxcell；westlebanon，nh)在ph7.2的pbs中以4mg/ml与760μm化合物c-47)混合，最终dmso浓度为20％(v/v)。将该反应体系在室温温育过夜，然后用50mmtrisph8淬灭。类似的方法用于制备与抗-her2mab3或与激动剂化合物c-46和c-50的缀合物。通过标准方法、经蛋白a层析纯化得到的抑制剂缀合物，并将缓冲液交换为pbs。如上所述通过ms、ansec和anhic分析抗体缀合物。将测定的化合物与抗体之比、聚集行为和疏水性数据概括在表3中。几种赖氨酸反应的抗体缀合物显示在所用的ansec柱上出现晚期洗脱和/或拖尾峰，这启示柱相互作用，这使得难以检测聚集物。实施例74使用a1-标记的抗-her2突变体抗体与包含氨基-氧基反应基团的激动剂化合物的两-步缀合生成抗-her2-tlr7激动剂缀合物翻译后4'-磷酸泛酰巯基乙胺化(phosphorpantetheinylation)是用结构多样性小分子对重组蛋白进行位点特异性标记的通用方法(yinj，等人，proc.natl.acad.sci.usa102：15815-15820,2005；zhouz等人，acschem.biol.2：337-346,2007)。采用基于混杂4'-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(pptases)的催化作用的这种酶促方法用于制备高度均一的抗体缀合物(参见wo2013184514)。通过将11或12聚体s6、ybbr和a1肽序列并入抗体恒定区的不同位点来实现酶标记。例如，序列gdsldmlewslm(seqidno：31)的a1标记可以在抗-her2mab2的重链中的残基e388(eu编号)之后引入以产生具有seqidno：19的轻链序列和seqidno:32的重链序列的抗-her2mab5。一种策略是通过翻译后4'-磷酸泛酰巯基乙胺化来制备位点特异性抗体-化合物缀合物的两步法(参见wo2013184514)。该方法的第一步是基于pptase催化的带有含生物正交基团如叠氮基、烯、炔、酮或醛部分的coa类似物的肽标记的抗体的标记。在生物正交标记的抗体的亲和纯化之后，两步骤方法的第二步涉及缀合包含与生物正交基团反应的部分的化合物。作为实例，以下部分描述了在重链恒定区内的特异性位点上包含a1标记插入的抗-her2突变体抗体的两步方法。此外，虽然两步法以肟连接化学为示例，但该策略可扩展至其它生物正交化学，例如点击化学，包括无铜点击化学，staudinger连接，基于异腈的点击化学和四嗪连接。肟连接化学已被几个研究小组用作制备位点特异性蛋白缀合物的有效的生物正交方法(axupjy,等人,procnatlacadsciusa.109:16101-16106,2012；rabukad,等人,natprotoc.7:1052-1067,2012)。为了将翻译后4'-磷酸泛酰巯基乙胺化与肟连接相结合，使用coa生物合成酶coaa、coad和coae、以化学酶方式由相应的泛酸盐前体分子(化合物int-4)制备酮-修饰的coa类似物(worthingtonas,burkartmd(2006)orgbiomolchem.4:44-46)(kosanm,haushalterrw,smithar,burkartmd(2012)natmethods9:981-984)。接下来，使用pptase催化将生物正交酮基团以酶方式位点特异性地缀合在抗-her2抗体的嵌入的a1标记上。具体地，在约0.5μm来自大肠杆菌(escherichiacoli)的acpsppt酶存在下，将2.5μm抗-her2mab5与30μm酮-coa类似物(化合物c-69)(相对于抗体为12摩尔当量)在补充有12.5mmmgcl2和20mmnacl的75mmtris-hcl缓冲液(ph8.0)中于37℃缀合2天。为了驱动缀合反应完成，向反应混合物补充大约1μm的枯草芽孢杆菌(b.subtilius)sfppptase，同时化合物c-69的浓度增加至约60μm。将该反应体系在室温再温育4天。通过获得还原和去糖基化样品的解卷积esi-ms谱来证实用酮-coa类似物(化合物c-69)标记抗-her2mab5抗体。测定的质量与相应的酮官能化重链的计算分子量一致。通过蛋白a亲和层析(mabselectsure，gehealthcarelifesciences)去除pptase酶和过量酮-coa类似物后，用piercetmigg洗脱缓冲液(thermofisherscientific)洗脱酮激活的抗体抗-her2-mab5-(c-69)，然后用1mtris-hcl缓冲液(ph8.0)立即中和。将中和的抗体溶液缓冲液交换到pbs中，并使用50kamicon过滤器浓缩。作为两步方法的第二步骤，酮基团的位点特异性连接使得激动剂化合物随后肟连接至酮激活的抗her2mab5-(c-69)。在含有7％(v/v)dmso的100mm乙酸苯胺鎓缓冲液(ph4.6)中，使48μm酮官能化抑制剂与30倍摩尔过量(1.4mm)氨基氧基激动剂c-35和c-37反应。在室温温育17小时后，通过用50kamicon过滤器超滤除去过量的氨基氧基试剂，并用pbs重复洗涤。如上所述通过ms、ansec和anhic对抗体缀合物进行概况分析。将测定的化合物与抗体之比、聚集行为和疏水性数据概括在表3中。如表3所示，两步法提供了用氨基氧基激动剂c-35和c-37对酮激活的抗-her2mab5-(c-69)的近似定量标记。酮-辅酶a类似物(化合物c-69)通过使5mm化合物(int-4)与25mmatp在10μm金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)coaa、25μm大肠杆菌coad和20μm大肠杆菌coae存在下、在37℃下在含有20mmmgcl2的50mmhepes缓冲液(ph8.0)中反应约16h，使化合物(int-4)转化为酮官能化coa类似物(c69)。将该反应混合物以20,817×g离心2分钟后，通过具有10kda截留值的amiconultra离心过滤器、通过超滤分离可溶性酶。抗-her2mab5-(c-69)-(c-35)和抗-her2mab5-(c-69)的形呈验证了化合物(i-4)到酮官能化的coa类似物(c59)的酶转化(参见表3)。实施例75抗-her2-tlr7激动剂组合物的体外稳定性测试在该反应中形成的琥珀酰亚胺环的水解增强了含有马来酰亚胺的有效负载和抗体的cys残基之间形成的键的稳定性。在小鼠血清中体外温育后，研究了琥珀酰亚胺环水解对用本发明激动剂化合物制备的抗体缀合物的稳定性的影响。通过lc-ms监测有效负载解离产生的质量变化和与抗体缀合的马来酰亚胺有效负载的琥珀酰亚胺环的水解。据报道，琥珀酰亚胺环的水解受到某些条件例如高ph、高温或高盐的刺激(j.am.chem.soc.1955,77:3922；biochemistry1976,15:2836；biochem.j.1979,179:191–197；jpharmsci.1984,73:1767-1771；bioorg.med.chem.lett.17:6286–6289,2007)。为了探测缀合物的体外稳定性，将抗-her2抗体mab2缀合物在37℃在50-70％小鼠血清中温育。在每个时间点(典型地为0、8、24、48和72小时)取50微克缀合物样品，并立即快速冷冻。样品稍后解冻以进行处理和分析。简言之，用pngasef处理抗体以去除n-连接的聚糖和在重链的铰链区附近切割的蛋白水解酶，以便在用dtt还原以破坏二硫键之前将fab与fc分离。然后通过esi-ms分析轻链、重链fab和重链fc片段。根据相应缀合物种类的相对ms强度，计算去缀合抗体、具有连接有效载荷与水解琥珀酰亚胺环的缀合物和具有完整琥珀酰亚胺环的连接有效载荷的缀合物的相对群体。对于一小组缀合物，解缀合的程度和琥珀酰亚胺水解的程度示于表4和5。通常，缀合物在72小时体外温育过程中失去少于13％的化合物载量，并且通常琥珀酰亚胺环水解在48小时内完成超过85％。由化合物(c-5)和化合物(c-21)示例的本发明的某些化合物由于通过反向马来酰亚胺反应对去缀合的低敏感性和通过琥珀酰亚胺环水解的进一步稳定化，而表现出改善的缀合物稳定性。表4.抗-her2-tlr7激动剂缀合物的琥珀酰亚胺环水解随体外小鼠血清中温育时间的变化a抗-her2mab2具有seqidno:19的lc；seqidno:21的hc。表5.抗-her2-tlr7激动剂缀合物的化合物与抗体之比随体外小鼠血清中温育时间的变化a抗-her2mab2具有seqidno:19的lc；seqidno:21的hc。实施例76抗-her2-tlr7激动剂缀合物在n87胃肿瘤异种移植模型中的体内测试材料和方法对于n87胃癌异种移植小鼠模型，将6-8周龄的雌性scid-浅褐色小鼠(购自harlanlaboratories)用于植入。n87细胞(购自atcc，目录号crl-5822，供应商批号7686255)在无菌条件下在含有5％co2的37℃培养箱中生长两周。使细胞在含有10％胎牛血清的rpmi培养基中生长。将细胞每3-4天用0.05％胰蛋白酶/edta传代。在植入当天，提起n87细胞(传代x4)，并以1x106个细胞和50％基质胶/100μl的浓度重悬于rpmi1640无血清培养基中。对细胞进行radil测试以确保它们不含支原体和鼠类病毒。使用28g针头(100μl注射体积)将n87细胞皮下注射植入下腹侧。植入后，通过卡尺测量肿瘤，并且一旦肿瘤可触摸，每周称重两次小鼠。然后每周两次对肿瘤进行二维测量。使用(lxw2)/2计算卡尺测量值。根据“护理和使用实验室动物指南”和机构动物护理和使用委员会的规定，将小鼠喂养正常饮食，并饲养在spf动物设施中。当异种移植肿瘤达到约200mm3时，通过静脉内途径给小鼠施用0.3-10mg/kg的抗-her2抗体或抗-her2-tlr7激动剂缀合物。同种型对照抗体通过表达针对在啮齿动物中未发现的靶标的抗体并通过针对抗-her2抗体所述的类似方法缀合而产生。每周测量两次肿瘤。使用prism5(graphpad)软件绘制平均肿瘤体积。当肿瘤大小达到2000mm3时，达到功效研究的终点。注射后，密切监测小鼠的临床恶化迹象。如果由于任何原因，小鼠表现出任何发病的迹象，包括呼吸窘迫、驼背姿势、活动减少、后腿麻痹、呼吸急促作为胸腔积液的征兆、体重减轻接近20％或15％加上其它体征，或者如果它们进行正常活动(喂养，可动性)受损，则对小鼠实施安乐死。结果用1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg或10mg/kg的单剂量的抗-her2-mab2-(c-1)缀合物静脉内治疗n87胃肿瘤异种移植物小鼠，其中化合物(c-1)缀合至抗-her2-mab2重链的cys152和cys375。在所有测试剂量(包括测试的最低剂量-1mg/kg(图1))下用抗-her2-mab2-(c-1)缀合物处理的小鼠中观察到n87异种移植肿瘤的完全消退。与未处理的动物(图1)相比，在用10mg/kg单独的未缀合抗-her2-mab2或同种型对照抗体-(c-1)缀合物处理的n87异种移植小鼠中未观察到肿瘤消退。以0.3mg/kg或1mg/kg(10只小鼠/组)的单剂量的抗-her2-mab1-(c-1)或抗-her2-mab1-(c-5)处理n87胃肿瘤异种移植物小鼠。尽管用1mg/kg单剂量的抗-her2-mab1-(c-1)处理导致人n87异种移植肿瘤完全消退，但是0.3mg/kg抗-her2-mab1-(c-1)导致肿瘤停滞(图2)。类似地，尽管用单剂量1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)处理导致人n87异种移植肿瘤完全消退，但0.3mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)导致肿瘤停滞(图2)。与未处理的动物相比，在用同种型对照抗体-(c-5)缀合物处理的n87异种移植小鼠中未观察到n87胃肿瘤的消退。这些数据显示，肿瘤消退可以通过抗-her2-tlr7激动剂缀合物(例如抗-her2-mab1-(c-1)或抗-her2-mab1-(c-5)、抗-her2-mab2-(c-1))以低剂量例如1mg/kg单一治疗来实现。在单独的研究中，用1mg/kg、3mg/kg或5mg/kg(每组8只小鼠)以单剂量的抗-her2-mab1-(c-5)处理n87胃肿瘤异种移植物小鼠。在本研究中，尽管用单剂量的3mg/kg或5mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)处理导致人n87异种移植肿瘤完全消退，但是1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)导致肿瘤停滞(图3)。另外，用单剂量的抗-her2-mab1-(c-5)、抗-her2-mab1-(c-35)、抗-her2-mab1-(c-37)、抗-her2-mab1-(c-59)、抗-her2-mab1-(c-60)、抗-her2-mab1-(c-61)、抗-her2-mab1-(c-62)或抗-her2-mab1-(c-64)以1mg/kg处理n87胃肿瘤异种移植物小鼠(每组6只小鼠)。用单剂量1mg/kg缀合不同化合物的抗her2-mab1处理导致肿瘤停滞(图4)，类似于在单剂量1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)处理后观察到的结果。实施例77抗-大鼠her2-tlr7激动剂缀合物在mmc(大鼠her2+)乳腺癌同基因模型中的体内测试材料和方法对于mmc(大鼠her2+)乳腺癌同基因模型，将6-10周龄的雌性fvb/n转基因小鼠(fvb-tg(mmtv-erbb2)nk1mul/j；原始购自laboratories，室内繁殖)用于植入，所述小鼠表达包含val664至glu664突变的活化大鼠erbb2(c-neu)癌基因。使mmc细胞(来源于得自fvb/n转基因小鼠的肿瘤，所述小鼠得自professornoradisis,universityofwashington)在无菌条件下在含有5％co2的37℃培养箱中生长两周。使细胞在含有20％胎牛血清和青霉素/链霉素的dmem培养基中生长。将细胞每3-4天用0.05％胰蛋白酶/edta传代。在植入当天，提起细胞(传代x4)，并以2.5x105个细胞和10％基质胶/100μl的浓度重悬于rpmi1640无血清培养基中。对细胞进行radil测试以确保它们不含支原体和鼠类病毒。使用28号针头(100μl注射体积)将mmc细胞皮下注射植入下腹侧。植入后，通过卡尺测量肿瘤，并且一旦肿瘤可触摸，每周称重两次小鼠。然后每周两次对肿瘤进行二维测量。使用(lxw2)/2计算卡尺测量值。根据“护理和使用实验室动物指南”和机构动物护理和使用委员会的规定，将小鼠喂养正常饮食，并饲养在spf动物设施中。当肿瘤达到约200mm3时，通过静脉内途径给每组8只的各组施用1mg/kg抗-大鼠her2抗体(7.16.4,购自bioxcell；westlebanon,nh)或1mg/kg抗-大鼠her2-tlr7激动剂缀合物(抗-大鼠her2-(c-46))。每周测量两次肿瘤。使用prism5(graphpad)软件绘制平均肿瘤体积。当肿瘤大小达到2000mm3时，达到功效研究的终点。注射后，密切监测小鼠的临床恶化迹象。如果由于任何原因，小鼠表现出任何发病的迹象，包括呼吸窘迫、驼背姿势、活动减少、后腿麻痹、呼吸急促作为胸腔积液的征兆、体重减轻接近20％或15％加上其它体征，或者如果它们进行正常活动(喂养，可动性)受损，则对小鼠实施安乐死。结果为了测试抗-大鼠her2-(c-46)缀合物在mmc大鼠her2+乳腺癌同基因模型中的功效，用1mg/kg抗-大鼠her2-(c-46)缀合物或未缀合的抗-大鼠her2(每组8只小鼠)处理携带mmc乳腺肿瘤的小鼠。如图5a和5b所示，在用单剂量抗-大鼠her2-(c-46)缀合物处理的八只小鼠中的七只小鼠中观察到mmc小鼠乳腺肿瘤(大鼠her2+)的完全消退(图5a)，但是在用裸抗大鼠her2抗体处理的八只小鼠中只有三只观察到完全消退(图5b)。这些数据启示，抗-大鼠her2-(c-46)缀合物比单独的未缀合的抗-大鼠her2抗体，对大鼠her2-阳性同基因乳腺癌在治疗上更为有效。实施例78抗-her2-tlr7激动剂缀合物在hcc1954乳腺肿瘤异种移植模型中的体内测试材料和方法对于hcc1954乳腺异种移植物小鼠模型，将6-8周龄的雌性scid-浅褐色小鼠(购自harlanlaboratories)用于植入。使hcc1954细胞(得自atcc，目录号crl-2338,供应商批号5107643)在无菌条件下在含有5％co2的37℃培养箱中生长两周。使细胞在含有10％胎牛血清的rpmi培养基中生长。将细胞每3-4天用0.05％胰蛋白酶/edta传代。在植入当天，提起(收获)hcc1954细胞(传代x17)，并以1x106个细胞和50％基质胶/100μl的浓度重悬于rpmi1640无血清培养基中。对细胞进行radil测试以确保它们不含支原体和鼠类病毒。使用27g针头(100μl注射体积)将hcc1954细胞皮下注入右侧乳房脂肪垫。植入后，通过卡尺测量肿瘤，并且一旦肿瘤可触摸，每周称重两次小鼠。然后每周两次对肿瘤进行二维测量。使用(lxw2)/2计算卡尺测量值。根据“护理和使用实验室动物指南”和机构动物护理和使用委员会的规定，将小鼠喂养正常饮食，并饲养在spf动物设施中。当异种移植肿瘤达到约200mm3时，通过静脉内途径给小鼠施用1-10mg/kg抗-her2抗体或抗-her2-tlr7激动剂缀合物。同种型对照抗体通过表达针对在啮齿动物中未发现的靶标的抗体并通过对抗-her2抗体所述的类似方法缀合而产生。每周测量两次肿瘤。使用prism5(graphpad)软件绘制平均肿瘤体积。当肿瘤大小达到2000mm3时，达到功效研究的终点。注射后，密切监测小鼠的临床恶化迹象。如果由于任何原因，小鼠表现出任何发病的迹象，包括呼吸窘迫、驼背姿势、活动减少、后腿麻痹、呼吸急促作为胸腔积液的征兆、体重减轻接近20％或15％加上其它体征，或者如果它们进行正常活动(喂养，可动性)受损，则对小鼠实施安乐死。结果通过静脉内给hcc1954乳腺肿瘤异种移植物小鼠用单剂量1mg/kg、3mg/kg或10mg/kg的抗-her2-mab1-(c-5)缀合物处理，其中化合物(c-5)缀合至抗-her2-mab1重链的cys152和cys375(8只小鼠/组)。尽管用单剂量的10mg/kg或3mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)处理导致人hcc1954异种移植肿瘤完全消退，但是1mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)导致初始肿瘤消退，然后是肿瘤停滞(图6)。在用单独的10mg/kg未缀合的抗-her2-mab2处理的hcc1954异种移植物小鼠中未观察到肿瘤消退(图6)。这些数据表明，在高her2表达hcc1954乳腺肿瘤异种移植物中，通过3mg/kg抗-her2-tlr7激动剂缀合物(抗-her2-mab1-(c-5))单次处理，可实现肿瘤消退。实施例79抗-her2-tlr7激动剂缀合物在skov3卵巢肿瘤异种移植模型中的体内测试材料和方法对于skov3卵巢异种移植物小鼠模型，将6-8周龄的雌性scid-浅褐色小鼠(购自harlanlaboratories)用于植入。使skov3细胞(得自atcc，目录号htb-77,供应商批号7349765)在无菌条件下在含有5％co2的37℃培养箱中生长两周。使细胞在含有10％胎牛血清的mccoy’s5a培养基中生长。将细胞每3-4天用0.05％胰蛋白酶/edta传代。在植入当天，提起(收获)skov3细胞(传代x11)，并以5x106个细胞和50％基质胶/100μl的浓度重悬于mccoy’s5a无血清培养基中。对细胞进行radil测试以确保它们不含支原体和鼠类病毒。使用281/2g(100μl注射体积)将skov3细胞皮下注入下腹侧。植入后，通过卡尺测量肿瘤，并且一旦肿瘤可触摸，每周称重两次小鼠。然后每周两次对肿瘤进行二维测量。使用(lxw2)/2计算卡尺测量值。根据“护理和使用实验室动物指南”和机构动物护理和使用委员会的规定，将小鼠喂养正常饮食，并饲养在spf动物设施中。当异种移植肿瘤达到约200mm3时，通过静脉内途径给小鼠施用3-10mg/kg抗-her2抗体或抗-her2-tlr7激动剂缀合物。同种型对照抗体通过表达针对在啮齿动物中未发现的靶标的抗体并通过对抗-her2抗体所述的类似方法缀合而产生。每周测量两次肿瘤。使用prism5(graphpad)软件绘制平均肿瘤体积。当肿瘤大小达到2000mm3时，达到功效研究的终点。注射后，密切监测小鼠的临床恶化迹象。如果由于任何原因，小鼠表现出任何发病的迹象，包括呼吸窘迫、驼背姿势、活动减少、后腿麻痹、呼吸急促作为胸腔积液的征兆、体重减轻接近20％或15％加上其它体征，或者如果它们进行正常活动(喂养，可动性)受损，则对小鼠实施安乐死。对于her2免疫组织化学(ihc)，使用用于her2染色和异种移植物her2评分的标准化指导原则和方案(参见例如english等人,moldiagnther.2013apr；17(2):85–99)。结果通过静脉内给skov3卵巢肿瘤异种移植物小鼠用单剂量3mg/kg或10mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)缀合物处理，其中化合物(c-5)缀合至抗-her2-mab1重链的cys152和cys375。尽管用单剂量的10mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)处理导致8只小鼠中的7只的人skov3异种移植肿瘤完全消退，但是3mg/kg抗-her2-mab1-(c-5)导致初始肿瘤消退，然后是肿瘤停滞(图7)。当与未处理的动物相比时，在用单独的10mg/kg未缀合的抗-her2-mab1或同种型对照抗体-(c-5)缀合物处理的skov3异种移植物小鼠中未观察到肿瘤消退(图7)。这些数据显示，肿瘤消退可以通过在异种移植物模型中以10mg/kg抗-her2-tlr7激动剂缀合物(例如抗-her2-mab1-(c-1)或抗-her2-mab1-(c-5))单次处理来实现，其中与n87和hcc异种移植模型相比，her2表达水平较低(图8c与图8a和8b相比)。基于her2表达水平，n87和hcc1954具有3+ihc评分，skov3具有2+ihc评分。因此，本文描述的抗-her2-tlr7激动剂缀合物不仅可以在高her2表达肿瘤中抑制肿瘤生长(例如具有3+ihc评分)，而且可以在低her2表达肿瘤中抑制肿瘤生长(例如具有2+ihc评分)。当前第1页12当前第1页12