本发明属于天然植物有效成分提取分离制备领域，涉及一种罗汉果提取物的制备方法，尤其涉及一种罗汉果苷v含量大于40%的罗汉果提取物的制备方法。
背景技术：
罗汉果是罗汉果属葫芦科植物的果实，是一种多用途药食同源药材。罗汉果味极甜、性凉、无毒，入脾肺经，具有清肺止咳、润肠通便、清热解毒、益肝健脾、镇静止渴、促进胃肠道机能、抗病毒、抗肿瘤、降糖降压等多种药理功效。大量研究资料表明，罗汉果不仅含有多种药理活性成分，且可以作为低糖含量的甜味剂使用，因此目前被广泛应用于食品、保健品、医药、饮料、化妆品行业。
罗汉果中含有多种皂苷类活性成分，其中罗汉果苷v是主要指标性成分之一，罗汉果皂苷苷元具有典型的葫芦烷型四环三萜结构。罗汉果苷v可以作为评价罗汉果提取物质量优劣的指标性成分，因为其苷元结合了糖基而易溶于水、乙醇等极性溶剂，难溶于丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂，终产物为白色无定形粉末。
关于罗汉果提取物制备的研究主要集中在国内，相关专利文献报道较多，但真正能够应用于生产的较少，主要体现在以下几个方面：（1）过程繁琐，收率低下；（2）使用大量有机溶剂，对设备要求高，投入大；（3）工艺过程能耗大，成本高；（4）工序中引入其他物质，影响产品质量。如cn101029071b公开了从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷v的方法，该方法是将罗汉果干果进行醇提、浓缩、经乙酸乙酯、正丁醇萃取，然后使用硅胶柱、c18反相硅胶柱层析、干燥后得高纯度甜苷v产品，该方法主要缺陷为工艺繁琐、溶剂损耗大、收率低，不利于规模化工业生产；cn100572552c公开了罗汉果苷v≥40%的罗汉果提取物及其制备方法，该方法是将罗汉果鲜果水提、浓缩、酶解、大孔树脂吸附、离子交换树脂脱色，最后经浓缩干燥得产品，该方法由于在上柱前未进行过滤，导致树脂的后续处理成本较大，不利于连续化生产；cn101407535b公开了一种高纯度罗汉果甜甙v的制备方法，该方法是使用一定纯度的罗汉果提取物为原料，经甲醇溶解、丙酮萃取、正相硅胶吸附、分离、结晶与重结晶获得最终产品，该方法工艺简单，但过程中使用了大量的有机溶剂，对生产场所的要求较高，此外获得的产品也有一定的有机溶剂残留，影响品质；cn101863946b公开了一种干罗汉果提取高含量罗汉果甜甙v的方法，该方法是将罗汉果干果破碎后，经醇提、浓缩、离心、大孔树脂吸附分离、离子交换树脂脱色、最后经浓缩、干燥，得成品，此方法由于未经过滤处理，使得上柱液中大分子杂质较多，影响树脂的吸附性能，利用率低且后续处理难度相对较大，产品成本较高。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种适用于工业化大生产的罗汉果提取物制备方法，该方法能够解决上述现有制备技术的缺陷，能够连续化生产且具有成本低、能耗低、收率高、安全高效等特点。
一种罗汉果提取物的制备方法，包括以下步骤：
（1）药材前处理：将罗汉果适当破碎，破碎后的物料以罗汉果籽不碎为度；
（2）连续逆流提取：将破碎处理后的罗汉果输入连续逆流管式提取机中，逆向输入纯净水，其中水与药材质量比为5-8:1，并保持连续逆流提取管温度为45-85℃，提取30-60min，得到罗汉果提取液；
（3）离心过滤：将得到的罗汉果提取液输入液渣分离装置，按40-100kg/h进行压榨分离除去大颗粒料渣，然后输入高速离心装置，以2000-6000r/min的速度离心20-60min，得到罗汉果提取物离心液；
（4）除色：将离心液导入强碱性阴离子大孔脱色树脂，用纯化水洗脱至流出液无甜味为止，得到罗汉果提取物脱色液，其中脱色树脂用量为离心液体积的0.01-0.1倍，优选地为0.05-0.8倍；
（5）聚合物树脂分离精制：将脱色液导入聚合物树脂富集精制，用20%-80%乙醇水溶液洗脱至流出液无甜味为止，得到最终罗汉果富集液，其中聚合物树脂用量为脱色液的0.02-0.08倍，优选地为0.04-0.06倍；
（6）浓缩喷雾干燥：将富集液真空减压85℃以下浓缩到密度为1.12-1.25g/ml，然后再喷雾干燥得到最终成品，成品为白色无定形粉末或者类白色物质，其中罗汉果苷v含量≥40%。本成品可以进一步精制得到罗汉果苷v含量更高的罗汉果提取物。
进一步地，步骤（4）中所述脱色树脂选用d151、d303、s-8、d-309、lx-700、d290或xda-7树脂，其中优选d303、d290或lx-700树脂；所述脱色树脂柱径高比为1:2-1:10，其中优选为1:3-1:5。
进一步地，步骤（5）中所述聚合物树脂是指以苯乙烯、甲基丙烯酸酯或苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物为基质的聚合物填料，优选基质为苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物，所选填料粒径为5μm-300μm，优选地为50μm-150μm，所选填料孔径为100å-1000å，优选地为300-500å。
本发明优点：
1.本发明将罗汉果破碎处理后直接采取连续逆流提取的方式进行提取，大大简省提取步骤，且可以连续生产，一边进样一边出渣。制备过程中全程采用低毒无害的纯水或者含水乙醇作为提取精制溶剂，生产高效安全，对于生产场地、设备的要求低，适合工业化大规模生产。
2.本发明采用强碱性阴离子大孔树脂进行初步的脱色和除杂处理后直接导入以苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物为基质的微球型填料进行进一步的分离精致，最终浓缩喷雾干燥得到终产物，整个过程连续进行，所用树脂容易再生重复利用，极大的提高了制备效率，节省了时间、简化了过程，有利于过程控制和质量控制，非常适合工业化生产。
3.终产物有效成分含量高，杂质含量低，所得罗汉果提取物中罗汉果苷v含量≥40%。
具体实施方式
以下实施例旨在进一步说明本发明，而不是对本发明的限制，一切基于本发明所做出的改进皆在本发明范围之内。
实施例1
（1）药材前处理：将罗汉果1000kg适当破碎，破碎后的物料以罗汉果籽不碎为度；
（2）连续逆流提取：将破碎处理后的罗汉果输入连续逆流管式提取机中，按溶剂药材质量比8:1逆向输入8倍于药材质量的纯净水，并保持连续逆流提取管温度为65℃，提取45min，得到罗汉果提取液；
（3）离心过滤：将得到的罗汉果提取液输入液渣分离装置，按80kg/h进行压榨分离除去大颗粒料渣，然后输入高速离心装置，以4500r/min的速度离心30min，得到罗汉果提取物离心液；
（4）除色：将离心液导入d303脱色树脂，用纯化水洗脱至流出液无甜味为止，得到罗汉果提取物脱色液，其中脱色树脂用量为离心液体积的0.03倍；
（5）聚合物树脂分离精制：将脱色液导入以苯乙烯为基质的聚合物填料中富集精制，用50%的食用乙醇洗脱至流出液无甜味为止，得到最终罗汉果富集液，其中苯乙烯聚合物树脂用量为脱色液的0.04倍；
（6）浓缩喷雾干燥：将富集液真空减压85℃以下浓缩到密度为1.12-1.25g/ml，然后再喷雾干燥得到最终成品，成品为白色无定形粉末或者类白色物质，其中罗汉果苷v含量为45.23%。
实施例2
（1）药材前处理：将500kg罗汉果适当破碎，破碎后的物料以罗汉果籽不碎为度；
（2）连续逆流提取：将破碎处理后的罗汉果输入连续逆流管式提取机中，以溶剂药材质量比6:1的比例逆向输入6倍于药材质量的纯净水，并保持连续逆流提取管温度为55℃，提取30min，得到罗汉果提取液；
（3）离心过滤：将得到的罗汉果提取液输入液渣分离装置，按60kg/h进行压榨分离除去大颗粒料渣，然后输入高速离心装置，以2000r/min的速度离心55min，得到罗汉果提取物离心液；
（4）除色：将离心液导入d290脱色树脂，用纯化水洗脱至流出液无甜味为止，得到罗汉果提取物脱色液，其中脱色树脂用量为离心液体积的0.05倍；
（5）聚合物树脂分离精制：将脱色液导入以甲基丙烯酸酯为基质的聚合物填料中富集精制，用35%的食用乙醇洗脱至流出液无甜味为止，得到最终罗汉果富集液，其中苯乙烯聚合物树脂用量为脱色液的0.06倍；
（6）浓缩喷雾干燥：将富集液真空减压85℃以下浓缩到密度为1.12-1.25g/ml，然后再喷雾干燥得到最终成品，成品为白色无定形粉末或者类白色物质，其中罗汉果苷v含量为49.56%。
实施例3
（1）药材前处理：将罗汉果800kg适当破碎，破碎后的物料以罗汉果籽不碎为度；
（2）连续逆流提取：将破碎处理后的罗汉果输入连续逆流管式提取机中，以溶剂药材质量比6:1逆向输入纯化水，并保持连续逆流提取管温度为45℃，提取30min，得到罗汉果提取液；
（3）离心过滤：将得到的罗汉果提取液输入液渣分离装置，按88kg/h进行压榨分离除去大颗粒料渣，然后输入高速离心装置，以6000r/min的速度离心30min，得到罗汉果提取物离心液；
（4）除色：将离心液导入lx-700脱色树脂，用纯化水洗脱至流出液无甜味为止，得到罗汉果提取物脱色液，其中脱色树脂用量为离心液体积的0.05倍；
（5）聚合物树脂分离精制：将脱色液导入以苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物为基质的聚合物填料中富集精制，用65%的食用乙醇洗脱至流出液无甜味为止，得到最终罗汉果富集液，其中苯乙烯聚合物树脂用量为脱色液的0.06倍；
（6）浓缩喷雾干燥：将富集液真空减压85℃以下浓缩到密度为1.12-1.25g/ml，然后再喷雾干燥得到最终成品，成品为白色无定形粉末或者类白色物质，其中罗汉果苷v含量为42.38%。