本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种桑葚提取物及其制备方法和应用。
背景技术：
桑葚又名桑椹，是桑科植物桑树所结的果实，口感鲜美，营养丰富，富含粗蛋白、胡萝卜素、维生素、氨基酸和矿物质等成分。研究表明，桑葚中的物质具有抗氧化的作用，能够清除自由基，保护人体免受自由基的损伤。
自由基又称游离基，是具有非偶电子的基团或原子，自由基可通过电子转移、加成、脱氢等多种方式与生物体内的多糖、氨基酸、蛋白质、核酸、脂类等物质相互作用，造成这些物质氧化性损伤，进一步使细胞坏死或突变。
如何提供一种可清除自由基的纯天然物质，是自由基清除领域亟待解决的问题之一。
技术实现要素：
本发明主要解决的技术问题是提供一种桑葚提取物及其制备方法和应用，可制备出纯天然的桑葚提取物，该提取物具有自由基清除功能。
为解决上述技术问题，本发明提供一种桑葚提取物的制备方法，包括以下步骤：将桑葚干燥，并粉碎至60-80目，获得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，搅拌5-10min，混合均匀，其中，桑葚干粉与混和酶的质量比为1g:2-3mg，桑葚干粉与蒸馏水的料液比为1g:20-30ml；在混合后的液体中加入乙酸，使液体的ph值为4-5，再置于50-60℃水浴中1-2h；对水浴后的液体进行加热，使其沸腾5-10min，静置取上层液，对上层液进行离心，取上清液，对该上清液进行干燥，获得桑葚提取物。
其中，混和酶按质量百分比计，包括组分：70-80%纤维素酶、20-30%果胶酶。
其中，桑葚干粉为70目。
其中，桑葚干粉与混和酶的质量比为1g:2.5mg，桑葚干粉与蒸馏水的料液比为1g:25ml。
其中，加入乙酸后，液体的ph值为4.5。
其中，混和酶按质量百分比计，包括组分：75%纤维素酶、25%果胶酶。
为解决上述技术问题，本发明提供一种上述制备方法制备得到的桑葚提取物。
为解决上述技术问题，本发明提供一种桑葚提取物作为清除自由基药物或保健品的应用。具体地，桑葚提取物作为清除自由基药物或保健品的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。
本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明的桑葚提取物的制备方法，包括以下步骤：将桑葚干燥，并粉碎至60-80目，获得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，搅拌5-10min，混合均匀，其中，桑葚干粉与混和酶的质量比为1g:2-3mg，桑葚干粉与蒸馏水的料液比为1g:20-30ml；在混合后的液体中加入乙酸，使液体的ph值为4-5，再置于50-60℃水浴中1-2h；对水浴后的液体进行加热，使其沸腾5-10min，静置取上层液，对上层液进行离心，取上清液，对该上清液进行干燥，获得桑葚提取物。上述制备方法制备的桑葚提取物为纯天然物质，可对自由基进行清除。上述制备方法具有以下特点：简单、易操作；由于对桑葚细胞充分破碎，可更好地对桑葚中的物质进行提取；适宜的ph值可提高桑葚提取物的提取率；制备出的桑葚提取物具有较高的提取率，且无毒、无害。
具体实施方式
实施例1
桑葚提取物的制备方法包括以下步骤：将桑葚干燥，并粉碎至70目，获得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，搅拌8min，混合均匀，其中，桑葚干粉与混和酶的质量比为1g:2.5mg，桑葚干粉与蒸馏水的料液比为1g:25ml；在混合后的液体中加入乙酸，使液体的ph值为4.5，再置于55℃水浴中1.5h；对水浴后的液体进行加热，使其沸腾8min，静置取上层液，对上层液进行离心，取上清液，对该上清液进行干燥，获得桑葚提取物。
在本实施例中，混和酶按质量百分比计，包括组分：75%纤维素酶、25%果胶酶。
本实施例的桑葚提取物可对自由基进行清除，由于其为纯天然物质，对人体无副作用。
实施例2
桑葚提取物的制备方法包括以下步骤：将桑葚干燥，并粉碎至70目，获得桑葚干粉；取桑葚干粉，加入包括纤维素酶和果胶酶的混和酶，再加入蒸馏水，搅拌8min，混合均匀，其中，桑葚干粉与混和酶的质量比为1g:2.2mg，桑葚干粉与蒸馏水的料液比为1g:22ml；在混合后的液体中加入乙酸，使液体的ph值为4.5，再置于50℃水浴中1.5h；对水浴后的液体进行加热，使其沸腾8min，静置取上层液，对上层液进行离心，取上清液，对该上清液进行干燥，获得桑葚提取物。
在本实施例中，混和酶按质量百分比计，包括组分：70%纤维素酶、30%果胶酶。
本实施例的桑葚提取物可对自由基进行清除，由于其为纯天然物质，对人体无副作用。
实施例3
桑葚提取物片剂的制备：将实施例1或实施例2制备的桑葚提取物用单冲压片机打成直径为7mm，重量为350mg的片，即得桑葚提取物片剂。
实施例4
桑葚提取物胶囊剂的制备：将实施例1或实施例2制备的桑葚提取物以350mg填充入1号肠溶胶囊，即得桑葚提取物胶囊剂。
实施例5
桑葚提取物颗粒剂的制备：将实施例1或实施例2制备的桑葚提取物加水制成软材，过15目筛进行造粒，干燥后即得桑葚提取物颗粒剂。
实施例6
桑葚提取物散剂的制备：将实施例1或实施例2制备的桑葚提取物过250目筛，即得桑葚提取物散剂。
下面通过实验说明本发明桑葚提取物的自由基清除效果。
dpph（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一种稳定的有机自由基，其乙醇溶液呈紫色，在波长517nm处有强烈吸收。当有自由基清除剂存在时，dpph的孤对电子被配对，从而使其褪色，褪色程度与其接受电子呈定量关系，因此可用比色法进行定量分析。下面以dpph来说明桑葚提取物的自由基清除效果。
将实施例1制备的桑葚提取物、实施例2制备的桑葚提取物、vc用蒸馏水配制成溶液，浓度均为：10mg/l、20mg/l、30mg/l、40mg/l、50mg/l；dpph利用无水乙醇配制成2×10-4mol/l的溶液；取相同体积的样品待测溶液和dpph溶液，混合均匀，室温下放置20min，于波长517nm处测定吸光度ai；取相同体积的样品待测溶液和无水乙醇，混合均匀，室温下放置20min，于波长517nm处测定吸光度aj；取相同体积的dpph溶液和无水乙醇，混合均匀，室温下放置20min，于波长517nm处测定吸光度ac；计算各待测样品的自由基清除率，清除率=[1-（ai-aj）/ac]×100%。
以样品待测溶液浓度为横坐标，清除率为纵坐标绘制曲线，根据曲线的线性回归方程，计算实施例1制备的桑葚提取物、实施例2制备的桑葚提取物清除自由基的半抑制浓度（ic50）。
实验结果：实施例1制备的桑葚提取物的ic50为7.80mg/l，实施例2制备的桑葚提取物的ic50为7.82mg/l。根据实验结果，可以看出实施例1和实施例2制备的桑葚提取物具有强的自由基清除能力。根据曲线走向，当浓度为40-50mg/l时，曲线趋于平稳且有向下的趋势，当浓度为45mg/l时，实施例1制备的桑葚提取物、实施例2制备的桑葚提取物、vc的自由基清除率达到最大，分别为98%、97.5%、85%，根据上述结果，可以看出实施例1和实施例2制备的桑葚提取物的自由基最大清除率较vc大，即实施例1和实施例2制备的桑葚提取物基本上能清除所有的自由基。
利用上述实验方法计算桑葚花青素对自由基清除能力的ic50，通过计算，ic50值为12.33mg/l。根据计算结果，可以看出实施例1或实施例2制备的桑葚提取物较桑葚花青素具有更好的自由基清除能力。
综上所述，本发明的桑葚提取物可对自由基进行清除，且其为纯天然物质，对人体无副作用。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。