一种中药组合物及应用的制作方法

本发明属于中药
技术领域：
，尤其涉及一种中药组合物及应用。
背景技术：
：阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)是一种原因不明以认知功能减退为主要临床表现的神经系统退行性疾病，主要表现为进行性智能障碍，记忆力减退，伴有人格和情感改变。随着我国人口老龄化的日益严重，ad已越来越成为一个严重的社会问题。因此，寻找各种途径去实现治疗和缓解ad的研究工作都十分必要也具有十分重要的意义。目前ad的治疗药物主要为西药，传统治疗ad的药物主要是乙酰胆碱酯酶抑制剂，通过抑制乙酰胆碱酯酶减缓大脑皮层中枢神经释放乙酰胆碱的降解，从而增加乙酰胆碱的浓度，改善ad病人的认知功能和行为障碍，延缓疾病的发生，但临床治疗效果不佳，而使其临床应用受到较大的限制。并且乙酰胆碱酯酶抑制剂仅仅解决了“标”的问题，没有改变“本”，这些药物仅能在短时期(6～12个月)内改善ad患者的症状(如认知能力)，对患者的日常生活和神经精神症状(如情感障碍、焦虑、精神变态等)没有显著的改善。技术实现要素：有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种具有治疗阿尔茨海默病的中药组合物及应用。本发明提供了一种中药组合物，包括远志皂苷与人参皂苷；所述远志皂苷与人参皂苷的质量比小于等于1。优选的，所述远志皂苷与人参皂苷的质量比为1：(1～2)。优选的，所述远志皂苷与人参皂苷的质量比为1：1。优选的，所述远志皂苷与人参皂苷的质量比为1：2。本发明还提供了上述中药组合物在制备治疗和/或改善阿尔茨海默病的药物或保健食品中的应用。优选的，所述治疗和/或改善阿尔茨海默病为降低脑内乙酰胆碱酶含量。优选的，所述治疗和/或改善阿尔茨海默病为降低脑内p-tau蛋白水平、gsk3蛋白水平与aβ蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。本发明还提供了一种药物，包括上述的中药组合物。本发明还提供了一种保健食品，包括上述的中药组合物。本发明提供了一种中药组合物，包括远志皂苷与人参皂苷；所述远志皂苷与人参皂苷的质量比小于等于1。与现有技术相比，本发明通过将远志皂苷与人参皂苷两种有效部位合用，显著改善了阿尔茨海默病大鼠的行为学障碍，有明确的治疗阿尔茨海默病作用，且药效明显优于单用其中任何一种。附图说明图1为本发明实施例1中的各组大鼠的定位巡航红外热分布图；图2为本发明实施例1中的各组大鼠的空间探索红外热分布图；图3为本发明实施例2中的各组大鼠海马组织he染色图；图4为本发明实施例3中的各组大鼠蛋白含量表达图。具体实施方式下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明提供了一种中药组合物，包括远志皂苷与人参皂苷；所述远志皂苷与人参皂苷的质量比小于等于1。中医认为“肾主智，肾虚则智不足善忘其前言”，肾虚髓空、脑府失养、神机运行失常是阿尔茨海默病(ad)主要病机。人参，五加科人参属植物，我国的名贵中药，在中国、欧洲、东南亚、美洲应用广泛。《神农本草经》记载“人参，味甘微寒，主补五脏(肝、心、脾、肺、肾)，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目，开心益智”。远志，远志科远志属植物，主产与我国东北、华北、西北和华中以及四川等地。《神农本草经》记载“远志，味苦辛温，安神益智，解郁，治惊悸，健忘，梦遗，失眠，咳嗽多痰，痈疽疮肿”。本发明通过将远志皂苷与人参皂苷两种有效部位合用，显著改善了阿尔茨海默病大鼠的行为学障碍，有明确的治疗阿尔茨海默病作用，且药效明显优于单用其中任何一种；经本发明实验验证，其可降低脑内乙酰胆碱酶含量或降低脑内p-tau蛋白水平、gsk3蛋白水平与aβ蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。按照本发明，所述远志皂苷与人参皂苷的质量比优选为1：(1～10)，更优选为1：(1～5)，再优选为1：(1～2)，最优选为1：1或1：2。本发明还提供了上述中药组合物在制备治疗和/或改善阿尔茨海默病的药物或保健食品中的应用。在本发明提供的实施例中，治疗和/或改善阿尔茨海默病降低脑内乙酰胆碱酶含量或降低脑内p-tau蛋白水平、gsk3蛋白水平与aβ蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。本发明还提供了一种药物，包括上述的中药组合物；作为优选，该药物还包括药学上可接受的辅料；作为优选，该药物的剂型为膏剂、颗粒剂、丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服剂或糖浆剂。但药物的剂型并非限定于此，本领域技术人员认为可行的剂型均在本发明的保护范围之内。本发明还提供了一种保健食品，包括本发明提供的中药组合物。作为优选，该保健食品还包括食品上可接受的食品添加剂。作为优选，该保健食品的剂型为颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂、片剂、粉剂、软糖、乳剂或口服液。但保健食品的剂型并非限定于此，本领域技术人员认为可行的剂型均在本发明的保护范围之内。为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种中药组合物及应用进行详细描述。以下实施例中所用的试剂均为市售。实施例1远志皂苷和人参皂苷组合物改善ad行为学障碍的药效学研究1.1实验方法1.1.1实验分组及给药wistar大鼠，雄性，体重180～220g，购自吉林大学白求恩医学院动物实验中心，许可证号：scxk(吉)2015-0007。适应性饲养一周后，随机分为7组，即：空白组，模型组，远志皂苷组，人参皂苷组，远志皂苷和人参皂苷组合1:1组，远志皂苷和人参皂苷组合2:1组，远志皂苷和人参皂苷组合1:2组。除空白组外，其余各组均腹腔注射d-半乳糖60mg/kg和灌胃alcl3200mg/kg造模，每天1次，连续60d。第30d开始空白组和模型组按10ml/kg给予双蒸水，远志皂苷和人参皂苷组合组分别按300mg远志皂苷+300mg人参皂苷，400mg远志皂苷+200mg人参皂苷，200mg远志皂苷+400mg人参皂苷/kg给予组合物，远志皂苷组600mg/kg给予远志皂苷，人参皂苷组均按600mg/kg灌胃给予人参皂苷，每日一次，连续30d。远志皂苷和人参皂苷均为总皂苷，质量分数各达到50％以上。1.1.2跳台行为学实验末次给药后，进行大鼠跳台实验。实验时首先将大鼠放在sdt-8跳台实验视频分析系统铜栅上适应5min，然后通以36v电流，以大鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应，记录大鼠的错误次数作为学习成绩，训练5min。24h后，重新再次进行实验，将大鼠置于塑料跳台上适应5min，然后通以36v电流，记录第1次跳下平台的潜伏期和5min内的跳下平台的错误次数，若大鼠停留在平台上超过5min，其潜伏期以300s计。1.1.3morris行为学实验分为适应性实验、定位巡航实验和空间搜索实验。适应性实验：实验前一天，将大鼠面朝池壁放入水中游泳120s后除湿放回笼中，进行适应。定位航行实验：在迷宫(直径120cm，高50cm)内注入一定量水，水温控制在24±2℃。选取4个入水点，并将迷宫等分为4个象限。在其中任一象限正中放置透明塑料平台(直径10cm)，没于水下2cm，并在实验过程中保持其位置不变。水中加入脱脂奶粉使大鼠不能见到平台。将大鼠分别从各象限入水点面朝池壁顺次放入水中，记录其在120s内寻找并爬上平台的时间，即为逃避潜伏期，爬上平台后允许大鼠在平台上停留20s，间隔60s后进行下一次测试。如果大鼠在120s内未能找到平台，则将其引上平台并停留20s，记录其潜伏期为120s。实验连续进行5天。空间探索实验：定位航行实验结束24h后，取出平台，在原平台所在象限的相对象限入水点将大鼠放入水中，采集其120s内穿越有效区域的次数及原平台所在象限路程/总路程等实验参数。1.1.4体内乙酰胆碱酯酶活力的测定(1)样品的处理行为学实验结束后，麻醉动物，取血，冰台快速取大脑，放入玻璃皿中，玻璃皿加入少量冰冷的生理盐水漂洗，用干净的滤纸吸去大脑组织表面的水分和血液。精密称重，放入小烧杯中。加入少量冰冷的生理盐水，用眼科剪尽快剪碎组织块。将剪碎的组织倒入玻璃匀浆器中，再用少许冰冷生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆器中进行冰浴匀浆。然后再加入冷冻的生理盐水，按脑组织重量与匀浆总体积1：10的比例，稀释混匀。将制备好的10％脑匀浆以3000rpm/min离心15min，取上清待测。取出的血以2500rpm/min离心10min，取上层血清。测时将血清用生理盐水按1：9稀释。(2)脑组织蛋白含量的测定采用考马斯亮蓝试剂盒测定脑组织蛋白含量。(3)ache活力的测定用改良ellman比色法测定ache的活力，按乙酰胆碱脂酶测定试剂盒的方法测定。设标准管组、不加药测定管组、受试化合物测定管组(加药组)，每组均设空白对照管和测定管，大鼠脑组织匀浆液和血清取样量为每管30μl。反应体系混匀，37℃准确反应6min，然后终止反应，混匀放置15min，在412nm波长测定各管吸光度。血清中ache活力(u/ml)＝(a测定管-a对照管)/(a标准管-a空白管)×标准管浓度(1μmol/ml)/蛋白量(mg/ml)。1.2数据统计方法采用spss10.0统计软件进行数据处理。实验结果以均数±标准差表示，student’st-test进行组间比较。p<0.05为差异有统计学意义。1.3实验结果1.3.1远志皂苷和人参皂苷组合物对大鼠跳台行为学障碍的药效学研究与空白组比较，模型组大鼠的初次错误次数及24h错误次数均明显增加，24h错误潜伏期缩短；与模型组比较，远志皂苷和人参皂苷组合组大鼠初次错误次数及24h错误次数明显减少，24h错误潜伏期延长，其中远志人参1：1组和远志人参1：2组，比单用远志皂苷或人参皂苷任何一种效果明显，远志人参2：1组效果不如单用远志皂苷或人参皂苷，见表1。表1对ad大鼠记忆获得和记忆巩固障碍的影响(n＝10)与空白组比较，#p<0.05；与模型组比较，**p<0.01，*p<0.05。1.3.2远志皂苷和人参皂苷组合物对大鼠morris水迷宫行为学障碍的药效学研究1.3.2.1定位巡航实验1.3.2.1.1各组动物热红外轨迹定位巡航红外热分布图(图1，其中a为空白组，b为模型组，c为远志人参1:1组，d为远志人参2:1组，e为远志人参1:2组，f为远志皂苷组，g为人参皂苷组)可以看出，空白组动物很快就可以找到目标所在位置(第三象限)，而模型组动物主要在外围活动，活动区域在各象限分布无显著差异，表明模型组大鼠学习记忆能力和记忆获得能力受损。远志皂苷和人参皂苷组合组动物可以很快找到目标所在区域，活动范围较模型组相比显著缩小，其中远志人参1：1组和远志人参1：2组，比单用远志皂苷或人参皂苷任何一种效果明显，远志人参2：1组效果不如单用远志皂苷或人参皂苷改善ad大鼠学习记忆能力效果好。1.3.2.1.2ad大鼠逃避潜伏期与空白组比较，模型组大鼠5天内潜伏期内均增加，表明模型组大鼠学习记忆行为能力明显受损。与模型组比较，远志皂苷和人参皂苷组合组大鼠5天内潜伏期内均缩短，以前3天变化明显，其中远志人参1：1组和远志人参1：2组，比单用远志皂苷或人参皂苷任何一种效果明显，远志人参2：1组效果不如单用远志皂苷或人参皂苷，见表2。表2各组动物连续5天逃避潜伏期(s)第1天第2天第3天第4天第5天空白组36.56±7.7917.91±1.5515.56±3.1811.67±5.0910.41±8.10模型组51.04±3.44#36.54±3.29##29.53±7.35##25.36±7.57#22.78±7.48#远志人参1：1组44.49±3.58*29.53±7.62*20.05±5.13*18.38±3.49#16.69±5.41远志人参2：1组49.04±4.0734.04±3.9527.03±5.1523.36±7.5719.78±7.48远志人参1：2组42.13±2.98**27.33±3.12**19.15±2.93**16.82±5.91**15.99±6.21*远志皂苷组47.23±4.21*31.48±2.33*25.72±4.45*20.46±5.46*18.44±6.22人参皂苷组48.32±5.47*33.15±3.46*28.41±8.82*22.56±6.78*17.86±2.74与空白组比较，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。1.3.2.2空间搜索实验1.3.2.2.1各组动物热红外轨迹空间探索红外热分布图(图2，其中a为空白组，b为模型组，c为远志人参1:1组，d为远志人参2:1组，e为远志人参1:2组，f为远志皂苷组，g为人参皂苷组)可以看出，空白组大鼠在原平台所在第三象限(原象限)出现的频率较多，而模型组动物主要在外围活动，活动区域在各象限分布无显著差异，上述结果表明模型组大鼠记忆巩固能力受损。与模型组比较，其中远志人参1：1组和远志人参1：2组，比单用远志皂苷或人参皂苷任何一种效果明显，远志人参2：1组效果不如单用远志皂苷或人参皂苷改善ad大鼠记忆巩固能力效果好。1.3.2.1.2各组动物空间搜索区域运动情况与空白组比较，模型组大鼠在有效区域(第三象限)的运动时间、运动距离及进入有效区域的次数均减少，进入有效区域的百分比明显减少。与模型组比较，其中远志人参1：1组和远志人参1：2组，比单用远志皂苷或人参皂苷任何一种效果明显，进入有效区域对的运动时间、距离次数均有所增加，在第三象限的游泳时间和游泳路程，均有所增加，远志人参2：1组效果不如单用远志皂苷或人参皂苷，见表3。表3各组动物空间搜索实验数据与空白组比较，#p<0.05；与模型组比较，**p<0.01，*p<0.05。1.3.3远志皂苷和人参皂苷组合物对ad大鼠脑内乙酰胆碱酯酶含量的影响与空白组比较，模型组大鼠的脑内乙酰胆碱酯酶水平明显增加；与模型组比较，远志人参1：1组和远志人参1：2组，比单用远志皂苷或人参皂苷任何一种效果明显，远志人参2：1组效果不如单用远志皂苷或人参皂苷，见表4。表4人参远志配伍对ad大鼠脑内乙酰胆碱酯酶的影响(n＝10)组别ache活力(u/mg组织)空白组0.079±0.033模型组0.199±0.023##远志人参1：1组0.123±0.021*远志人参2：1组0.153±0.202*远志人参1：2组0.119±0.123**远志皂苷组0.144±0.011*人参皂苷组0.157±0.031*与空白组比较，##p<0.01；与模型组比较，**p<0.01，*p<0.05。1.4结论跳台实验和morris水迷宫实验从行为学评价远志皂苷、人参皂苷组合物以及单用远志皂苷或人参皂苷的体内抗ad作用，表明人参皂苷组合物能明显增加ad大鼠记忆获得、巩固能力，改善认知障碍，降低脑内乙酰胆碱酯酶含量，效果优于单用远志皂苷或人参皂苷。实施例2远志皂苷和人参皂苷组合物对ad大鼠脑海马组织病理形态学研究2.1实验方法大鼠断头，取大脑，分离海马组织和皮层，海马组织浸入4％多聚甲醛中固定，经脱水、浸蜡、石蜡包埋制备石蜡切片，然后依次经过二甲苯脱蜡、降梯度酒精水化、苏木素及伊红染色、升梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封片的操作，制备he染色的心肌组织切片，于光学显微镜下观察海马组织的病理改变。2.2实验结果取各组大鼠脑组织，进行海马部位he染色，结果如下：空白组海马区与皮层下神经元完整，细胞核未见变性，细胞核内紫色致密，神经元排列紧密。模型组海马区与皮层下神经元发生变性，细胞核质疏松，远志人参1：1组和远志人参1：2组，比单用远志皂苷或人参皂苷任何一种效果明显，神经元排列松散神经元变性程度较模型组轻，神经元排列较模型组紧密，神经元变性数量少于远志皂苷组及人参皂苷组，远志人参2：1组效果不如单用远志皂苷或人参皂苷，见图3，图3为各组大鼠海马组织he染色图，其中a为空白组，b为模型组，c为远志皂苷：人参皂苷1:1组，d为远志皂苷：人参皂苷2:1组，e为远志皂苷：人参皂苷1:2组，f为远志皂苷组，g为人参皂苷组。实施例3远志皂苷和人参皂苷组合物对ad大鼠脑内相关蛋白表达的影响3.1实验方法采用免疫蛋白印迹法对分别为空白组，模型组，远志皂苷组，人参皂苷组，远志皂苷和人参皂苷组合组，大鼠脑脑组织中与ad发生、发展相关的四种蛋白：p-tau、gsk3、aβ、pp2a水平进行表达，以gapdh作为内参蛋白，使用imagej图像处理软件进行灰度分析。3.2实验结果与空白组比较，模型组aβ水平及p-tau、gsk3水平增加；与模型组比较，远志皂苷和人参皂苷组合物明显能降低脑内p-tau、gsk3、aβ三种蛋白水平，增加pp2a蛋白水平，改善ad大鼠的认知障碍，结果见图4，图4为各组大鼠蛋白含量表达图，其中a为空白组，b为模型组，c为远志皂苷和人参皂苷1:1组合组，d为远志皂苷组，e为人参皂苷组。3.3结论采用免疫蛋白印迹法对ad大鼠脑内与ad发生、发展相关的四种蛋白：p-tau、gsk3、aβ、pp2a水平进行表达，结果表明，人参皂苷组合物明显能降低脑内p-tau、gsk3、aβ三种蛋白水平，增加pp2a蛋白水平。其抗ad机制可能与影响tau蛋白磷酸化和aβ聚集有关。当前第1页12