一种抗癌生物膜纳米靶向配质体及其制备方法与应用与流程

本发明属于生物医学技术领域，具体是一种抗癌生物膜纳米靶向配质体及其制备方法与应用。

背景技术：

癌症(cancer)目前是一种最常见的、严重威胁人们健康和生命的重大疾病，当前对于癌症的药物治疗仍然面临许多瓶颈问题，如高复发率、迅速形成的抗药性、高毒副作用、药效低等。目前临床使用的抗癌药物存在的问题有：增敏药物毒性大、药物的靶向性差或者每日放疗同时配合每日用药增加了临床应用的不便等。以顺铂为例的抗癌药物，该药物本身有着很好的抗癌效果，可以作为化疗的一线用药，同时，顺铂又是高效的放疗增敏剂，能够显著增强放疗效果。但是顺铂在杀伤肿瘤细胞同时对人体正常细胞也造成很大伤害，毒性反应主要包括肾毒性、消化道毒性、骨髓抑制、神经毒性和耳毒性等，严重的毒副作用使得患者往往不能继续药物治疗。

为了解决这一问题，研究人员设想通过制剂手段，如脂质体，将抗癌药物直接定向于肿瘤部位，并取得了一些成功。脂质体技术是被喻为“生物导弹”的第四代靶向给药技术，利用脂质体的独有特性，将副作用大、在血液中稳定性差、降解快的药物包裹在脂质体内，根据人体病灶部位血管内皮细胞间隙较大，脂质体药物可透过此间隙到达病灶部位，靶向释放给药，临床治疗安全有效。脂质体作为抗肿瘤药物载体具有改变药物在组织中的分布,提高治疗指数和生物利用度，增加疗效同时减小毒副作用的特点。长效靶向脂质体作为药物载体，提高脂质体向肿瘤区域扩散，使到达肿瘤的药物增加，提高治愈率。脂质体为载体的药物已在临床应用多年，如多柔比星脂质体。但是脂质体最大的缺点是化学和物理上不稳定性,脂质体囊泡容易破裂,抗癌药物在到达肿瘤部位之前过早泄漏,达不到缓释效果,严重影响了它在临床上的广泛应用。为了提高脂质体的稳定性，通常需要加入胆固醇或类固醇物质作为稳定剂。在国家863计划、国家自然科学基金重点及面上项目的支持下，戴志飞课题组设计合成了一系列有机/无机复合脂质体—硅质体（戴志飞.硅质体纳米药物载体,功能材料信息,2013,10(5-c6):7-9）。该硅质体是硅氧烷链在脂质体囊泡表面形成聚硅氧烷的网络结构。纳米子粒径在150-200nm左右，复合硅质体的电位在-30mv左右。该方法需要首先合成有机-无机复合脂质分子(cfl),该过程不仅耗时长，而且引入了人工成份，需要缓慢水解后，在脂质体表形成一层聚硅氧烷网络外壳，难以工业化规模生产。就像冬天北方的汽车加装了一层防滑链，在增加汽车稳定性的同时，也增加了轮胎的刚性。这样就增加了肿瘤细胞对硅质体内吞的难度。作为药物载体，其水解副产物乙醇，增加了硅质体的副作用或增加分离步骤。与硅质体不同，生物膜配质体是以人和动植物细胞膜为原料利用铁等金属离子易与蛋白质、磷脂中的氨基或磷酸基团形成配位键的方法，在脂质体内部形成众多的有机-金属配位键来稳定脂质体，就像在汽车轮子里面增加了有弹性的纤维网状结构，因此在获得高度稳定脂质体同时，又能保持外部轮子的弹性。特别是铁配合物易于在人体中代谢，因此，生物相容性更好，细胞毒性更低。生物膜配质体在靶向多肽的介导下，投递到肿瘤组织并与肿瘤细胞受体相结合。该配质体具有特异性靶向目的肿瘤组织或细胞的功能，可以发挥四种抗癌功能：（1）能作为亲脂、亲水性化疗药物与抗癌基因的载体；（2）在光、声、波等外界激发下，能同时产生对肿瘤有杀灭作用的热和活性氧-无耐药性的光热治疗与光动力治疗；（3）有很强的磁共振影像增强、光声成像功能，可用于早期肿瘤的诊断与术中导航；（4）可作为肿瘤热疗过程的增敏剂。

技术实现要素：

本发明的目的为了减少抗癌药物治疗中对正常细胞的毒副作用，增加药物的生物相容性、靶向性、可降解性、生物利用度，提高组织细胞穿透率。提供一种抗癌生物膜纳米靶向配质体及其制备方法与应用。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，包括以下重量份数的原料：卵磷脂160-250份、可溶性蛋白40-60份、靶向多肽10-50份和可溶性金属盐5-20份。。

进一步地，所述靶向多肽是由5-31个氨基酸脱水聚合成的多肽。。

进一步地，所述可溶性蛋白包括从植物组织中提取的可溶性蛋白质、从动物中提取的可溶性蛋白质、人血白蛋白、重组基因合成的人工蛋白质中的一种或多种组合物。优选地，所述从植物组织中提取的可溶性蛋白质是从从桑叶或大豆中提取的可溶性蛋白质。优选地，所述从动物中提取的可溶性蛋白质为牛血清白蛋白、猪血清白蛋白、兔血清白蛋白等。

进一步地，所述可溶性金属盐为六水三氯化铁、无水三氯化铁、硫酸亚铁、硫亚铁铵、氯化亚铁、亚铁氰化钾、铁氰化钾、氯化铜、硫酸铜、醋酸锰、硫酸锰、三氯化钆、叶绿酸铁锰盐、硫酸锌、硫酸镍、三氯化铋、过渡金属盐、稀土金属盐中的一种或多种组合物。

进一步地，所述过渡金属盐溶液为硝酸镧、硝酸铈、硝酸镨、硝酸钕、硝酸钷、硝酸钐、硝酸铕、硝酸钆、硝酸铽、硝酸镝、硝酸钬、硝酸铒、硝酸铥、硝酸镱、硝酸镥、硝酸钪、硝酸钇。

进一步地，所述稀土金属盐溶液包括lacl3、smcl3、gecl4、和dycl3。

进一步地，所述稀土金属盐的制备方法为：将稀土金属氧化物用hclo4溶解，加热驱赶酸至近干，得lacl3、smcl3、gecl4、和dycl3盐。

本发明还提供抗癌生物膜纳米靶向配质体的制备方法，包括以下步骤：

（1）将卵磷脂用有机溶剂溶解，制成卵磷脂溶液，可溶性蛋白、靶向多肽、可溶性金属盐分别用水溶解，制成蛋白质溶液、多肽溶液、金属盐溶液；

（2）将蛋白质溶液、多肽溶液加入卵磷脂溶液中，涡旋振荡5-20min，超声10-30min，得溶液a；

（3）将金属盐溶液加入a溶液中，涡旋振荡5-20min，超声10-30min，得溶液b；

（4）将溶液b密闭后，在30-55℃水浴中搅拌、加热2-10h，涡旋振荡5-10min，超声波10-30min后，加入10-20份超纯水，旋转蒸发除去有机溶剂，得透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液冷冻干燥，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

进一步地，所述有机溶剂为氯仿、环已烷、正已烷或乙醇与氯仿的混合液。

进一步地，所述涡旋振荡的转速为1000-3000r/min。

进一步地，所述超声波的频率为40-100khz。

进一步地，所述冷冻干燥的温度为-50℃至-80℃。

与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：

1、本发明得到的抗癌生物膜纳米靶向配质体与传统的脂质体合成不同，传统的方法是利用胆固醇或类固醇之类的物质作稳剂定，由于胆固醇属于小分子，对脂质体的稳定作用力小，因此造成了脂质体的固有不稳定性。本方案与现有的硅质体不同，本发明是利用铁等金属离子易与蛋白质、磷脂中的氨基或磷酸基团形成配位键的方法，在脂质体内部形成众多的有机-金属配位键来稳定脂质体，就像在汽车轮子里面增加了有弹性的纤维网状结构，因此在获得高度稳定脂质体同时，又能保持外部轮子的弹性。特别是铁配合物易于在人体中代谢，因此，生物相容性更好，细胞毒性更低。

2、本发明的配制体很容易穿透生物膜等生理组织屏障的能力，特别是它表面有很多活性基团，如氨基、羧基、羟基等，易与肿瘤特异性靶向多肽、细胞穿膜肽等小分子偶联，使其具有协同靶向作用，它能快速的达到肿瘤组织，并被肿瘤细胞吞噬。此外，配质体的粒径为50-150nm，粒径小形成的粒子数量以及形成的纳米粒子的表层的原子数目大幅度的增加，其遮掩的能力、附着的能力得到加强，它们与细胞的接触面积将大大增加，将更快更稳定的和肿瘤组织接触，利用光动力治疗时能局部升温杀死肿瘤细胞而不损伤正常组织细胞。

、本发明的生物膜纳米靶向配质体可作为亲脂、亲水性化疗药物与抗癌基因的载体，增加药物的生物相容性、靶向性、可降解性、生物利用度、稳定性等。本配质体还具有生物兼性、可降解性，对人体安全无毒。

、本发明配质体采用微量元素金属离子交联剂取代胆固醇及其衍生物作为脂质体的稳定剂，避免了胆固醇的使用，避免了胆固醇对人体造成动脉硬化、冠心病等的副作用。

5、本发明的生物膜金属离子配合物纳米配制体可包裹光敏剂，可利用可见光、红外光进行光动力治疗以及超声波治疗，不需要其他辅助仪器，操作简单，对患者身体损伤小。

6、本发明制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体可作为肿瘤诊断试剂、抗癌药物的载体，转基因载体，光热光动力治疗剂，超声光动力治疗载体，微波热疗治疗剂载体，射频热疗增敏剂，医学影像增强剂等。

7、本发明还具有原料简单易得，制备工艺简单，能够大规模化工业生产，成本低廉，大小医院都能适用，应用性广。

附图说明

图1为抗癌生物膜纳米靶向配质体超声热疗结果图；

图2为小鼠注射配质体溶液后，经光热治疗前后肿瘤组织坏死的情况；

图3为图3配质体小鼠体内磁共振影像增强效果图。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本技术方案进一步详细说明，但不限于本发明的保护范围。

本方案所使用的化学试剂为市售产品。

抗癌生物膜纳米靶向配质体的制备实例

实施例1

一种生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：卵磷脂160份、牛血清白蛋白40份、靶向多肽10份、硫酸亚铁盐5份。所述靶向多肽为由5个氨基酸脱水聚合成的多肽。

其制备方法，包括以下步骤：

1）将卵磷脂用氯仿溶解，制成卵磷脂氯仿溶液，牛血清白蛋白、靶向多肽、硫酸亚铁盐分别用水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶液、硫酸铁盐溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到卵磷脂氯仿溶液中，在转速为1000r/min下涡旋振荡20min，40khz超声10min，得悬浮液a；

（3）将硫酸亚铁溶液加入溶液a中，在转速为1000r/min下涡旋振荡20min，80khz超声20min，得悬浮液b；

（4）将悬浮液b置40℃水浴中，搅拌2.5h后，加入10份水，转速为1000r/min涡旋振荡10min，在频率为40khz下超声20min，充分混匀后，旋转蒸发除去有机溶剂，得透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液在温度为-50℃下冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为98nm，电位为-43mv。

实施例2

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：磷脂200份、人血清白蛋白50份、靶向多肽30份、硫酸锰5份和亚铁氰化钾10份。所述靶向多肽为由13个氨基酸脱水聚合成的多肽。

其制备方法，包括以下步骤：

1）将卵磷脂用氯仿-乙醇（体积比为2∶1）溶解，制成卵磷脂氯仿-乙醇溶液，人血清白蛋白、靶向多肽、硫酸锰、硫酸亚铁盐分别用水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶液、硫酸锰溶液、硫酸亚铁盐溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到磷脂的氯仿-乙醇溶液中，在转速为1500r/min下涡旋振荡10min，80khz超声20min，得悬浮液a；

（3）将硫酸锰溶液、硫酸亚溶液加入溶液a中，在转速为1500r/min下涡旋振荡10min，80khz超声20min，得悬浮液b；

（4）将悬浮液b置50℃水浴中，搅拌3h后，加入10份水，转速为1500r/min涡旋振荡8min，在频率为80khz下超声20min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液在温度为-60℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为57nm，电位为-54mv。

实施例3

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：卵磷脂250份、大豆白蛋白60份、靶向多肽50份、亚铁氰化钾3份、三氯化铁盐4份和硫酸锰1份。所述靶向多肽为由10个氨基酸脱水聚合成的多肽。

其制备方法，包括以下步骤：

1）将卵磷脂用环已烷溶解，制成卵磷脂环已烷溶液，大豆白蛋白、靶向多肽、亚铁氰化钾、三氯化铁盐、硫酸锰分别用水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶液、亚铁氰化钾、三氯化铁溶液、硫酸锰溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到卵磷脂环已烷溶液中，在转速为3000r/min下涡旋振荡5min，100khz超声20min，得悬浮液a；

（3）将硫酸锰溶液、硫酸亚溶液加入溶液a中，在转速为3000r/min下涡旋振荡5min，100khz超声20min，得悬浮液b；

（4）将悬浮液b置35℃水浴中，搅拌10h后，加入15份水，转速为3000r/min涡旋振荡10min，在频率为100khz下超声20min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液在温度为-70℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为56nm，电位为-48mv。

实施例4

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：卵磷脂220份、猪血清白蛋白冻干粉60份、靶向多肽30份、三氯化钆20份。所述靶向多肽为由17个氨基酸脱水聚合成的多肽。

其制备方法，包括以下步骤：

1）将卵磷脂用正已烷溶解，制成卵磷脂正已烷溶液，猪血清白蛋白冻干粉、靶向多肽、三氯化钆用超纯水溶解，得蛋白溶液、多肽溶液、三氯化钆溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到磷脂正已烷溶液中，在转速为2000r/min下涡旋振荡15min，100khz超声20min，得悬浮液a；

（3）将三氯化钆溶液加入溶液a中，在转速为2000r/min下涡旋振荡15min，100khz超声20min，得悬浮液b；

（4）将悬浮液b置55℃水浴中，搅拌2h后，加入20份水，转速为2000r/min涡旋振荡8min，在频率为100khz下超声20min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液在温度为-80℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为88nm，电位为-60mv。

实施例5

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：磷脂200份、桑叶白蛋白50份、靶向多肽50份、叶绿酸铁锰盐20份。所述靶向多肽为由31个氨基酸脱水聚合成的多肽。

其制备方法，包括以下步骤：

1）将卵磷脂用环已烷溶解，制成卵磷脂环已烷溶液，桑叶白蛋白、靶向多肽、叶绿酸铁锰用超纯水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶解、叶绿酸铁锰盐溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到卵磷脂正已烷溶液中，在转速为1500r/min下涡旋振荡10min，100khz超声20min，得悬浮液a；

（3）将叶绿酸铁锰溶液加入溶液a中，在转速为1500r/min下涡旋振荡10min，100khz超声30min，得悬浮液b；

（4）将悬浮液b置50℃水浴中，搅拌3h后，加入15份水，转速为1500r/min涡旋振荡10min，在频率为100khz下超声30min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得墨绿色透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液在温度为-60℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为78nm，电位为-61mv。

实施例6

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：卵磷脂180份、兔血清白蛋白20份、、基因重组人血白蛋白25份、靶向多肽40份、硝酸铈20份。所述靶向多肽为由14个氨基酸脱水聚合成的多肽。

其制备方法，包括以下步骤：

1）将卵磷脂用环已烷溶解，制成卵磷脂环已烷溶液，兔血清白蛋白、基因重组人血白蛋白、靶向多肽、硝酸铈用超纯水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶解、硝酸铈溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到卵磷脂正已烷溶液中，在转速为3000r/min下涡旋振荡15min，60khz超声30min，得悬浮液a；

（3）将硝酸铈溶液加入溶液a中，在转速为1000r/min下涡旋振荡30min，80khz超声20min，得悬浮液b；

（4）将悬浮液b置30℃水浴中，搅拌10h后，加入20份水，转速为1000r/min涡旋振荡20min，在频率为60khz下超声20min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液在温度为-70℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为82nm，电位为-54mv。

实施例7

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：卵磷脂200份、猪血清白蛋白45份、靶向多肽20份、lacl310份。所述靶向多肽为由31个氨基酸脱水聚合成的多肽。

其制备方法，包括以下步骤：

1）将卵磷脂用环已烷溶解，制成卵磷脂环已烷溶液，猪血清白蛋白、靶向多肽、叶绿lacl3用超纯水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶解、lacl3溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到卵磷脂正已烷溶液中，在转速为3000r/min下涡旋振荡5min，80khz超声20min，得悬浮液a；

（3）将lacl3溶液加入溶液a中，在转速为3000r/min下涡旋振荡5min，80khz超声20min，得悬浮液b；

（4）将悬浮液b置50℃水浴中，搅拌3h后，加入20份水，转速为3000r/min涡旋振荡5min，在频率为80khz下超声20min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得透明纳米靶向配质体溶液；

（5）再将透明纳米靶向配质体溶液在温度为-70℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为85nm，电位为-48mv。

应用实施例

应用实施例1（载天然产物提取抗癌成份）

一种树棉（牛角瓜）叶提取物抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：磷脂200份、牛血清白蛋白50份、靶向多肽20份、树棉叶提取物10份，硫酸铜20份。

其制备方法，包括以下步骤：

（1）、牛角瓜干叶抗肿瘤活性成份色谱分离

取阴凉干燥的牛角瓜叶，用50℃沸程的石油醚及甲醇依次萃取，甲醇萃取物旋转蒸发浓缩后，过硅胶柱（120目）。先用石油醚作为流动相，再依次用石油醚：氯仿（1：3）洗脱，再用（3）纯氯仿，（4）氯仿：甲醇（99:1）作流动相洗脱。同时用硅胶g薄层板为固定相，氯仿：甲醇（4:1）作流动相，碘为显色剂监控不同成份洗脱液的分离结果，收集步骤（4）中洗脱出的抗肿瘤成份，旋转蒸发除溶剂，经减压干燥得到牛角瓜抗肿瘤活性成份a。

（2）将卵磷脂用氯仿溶解，制成磷脂氯仿溶液b，牛角抗肿瘤活性成份a用氯仿-乙醇溶解，得牛角瓜溶液。血清白蛋白、靶向多肽、硫酸铜用超纯水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶解、硫酸铜溶液；

（3）将牛角瓜溶液加入到溶液b中，在转速为1000r/min下涡旋振荡10min溶解，得溶液c；

（4）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到溶液c中，在转速为1000r/min下涡旋振荡10min，80khz超声20min，得悬浮液d；

（5）将硫酸铜溶液加入悬浮液d中，在转速为1000r/min下涡旋振荡15min，100khz超声30min，得悬浮液e；

（6）将悬浮液d置30℃水浴中，搅拌10h后，加入10份水，转速为1000r/min涡旋振荡10min，在频率为100khz下超声30min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得树棉抗肿瘤配质体溶液；

（7）再将配制体在温度为-50℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为95nm，电位为-45mv。

应用实施例2（载亲油性荧光剂）

一种抗癌生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：磷脂220份、牛血清白蛋白50份、靶向多肽50份、叶绿酸铁锰20份，近红外荧光剂dir0.02ml(0.005g/mldmso溶液。

其制备方法，包括以下步骤：

（1）将卵磷脂用环已烷溶解，制成磷脂环已烷溶液a，避光下dir用氯仿溶解，血清白蛋白、靶向多肽、叶绿酸铁锰用超纯水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶解、叶绿酸铁锰溶液；

（2）避光下，将dir用氯仿溶液加入到溶洗液a中，在转速为1000r/min下涡旋振荡5min溶解，得溶液b。

（3）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到溶液b中，在转速为1000r/min下涡旋振荡20min，100khz超声20min，得悬浮液c；

（4）将叶绿酸铁锰溶液加入溶液c中，在转速为1000r/min下涡旋振荡20min，100khz超声30min，得悬浮液d；

（5）将悬浮液d置50℃水浴中，搅拌2.5h后，加入15ml水，转速为1000r/min涡旋振荡10min，在频率为100khz下超声30min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得墨绿色透明配质体溶液；

（6）再将配制体在温度为-50℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为68nm，电位为-51mv。

应用实施例3（载亲水性抗肿瘤抗氧化剂）

一种抗氧化生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：磷脂180份、白蛋白45份、靶向多肽20份、硫酸亚铁盐15份，原花青素8份。

其制备方法，包括以下步骤：

（1）将卵磷脂用氯仿-乙醇（2∶1,v∶v）溶解，制成磷脂氯仿-乙醇溶液a，基因工程血清白蛋白、靶向多肽、硫酸亚铁盐、原花青素分别用水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶液、硫酸亚铁溶液、原花青素溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到磷脂的氯仿-乙醇溶液a中，在转速为3000r/min下涡旋振荡10min，80khz超声20min，得悬浮液b；

（3）避光下，将原花青青溶液、硫酸亚溶液依次加入溶液b中，在转速为3000r/min下涡旋振荡10min，80khz超声20min，得悬浮液c；

（4）避光下，将悬浮液c置40℃水浴中，搅拌5h后，加入10ml水，转速为3000r/min涡旋振荡5min，在频率为80khz下超声20min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得透明红棕色配质体溶液；

（5）再将透明配制体在温度为-60℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌抗氧化生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌抗氧化生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为79nm，电位为-48mv。

应用实施例4（载化疗药物）

一种抗癌化疗生物膜纳米靶向配质体，由以下重量份数的原料：磷脂200份、白蛋白60份、靶向多肽30份、硫酸亚铁盐15份，脱盐阿霉素0.2ml(0.025g/mldmso)。

其制备方法，包括以下步骤：

1）用三倍量碳酸氢钠（或三乙胺）水溶液和盐酸阿霉素避光反应一天析出橘红色沉淀颗粒，将沉淀溶解于二甲基亚砜（dmso）中，配制成脱盐阿霉素溶液（25mg/ml）；

1）将卵磷脂用氯仿-乙醇（2∶1,v∶v）溶解，制成磷脂氯仿-乙醇溶液a；人血清白蛋白、靶向多肽、硫酸亚铁盐、分别用水溶解，得蛋白质溶液、多肽溶液、硫酸亚铁溶液；

（2）将多肽溶液、蛋白质溶液加入到磷脂的氯仿-乙醇溶液a中，在转速为1500r/min下涡旋振荡15min，80khz超声20min，得悬浮液b；

（3）避光下，将脱盐阿霉素溶液、硫酸亚溶液依次加入溶液b中，在转速为1500r/min下涡旋振荡15min，80khz超声20min，得悬浮液c；

（4）避光下，将悬浮液c置50℃水浴中，搅拌2.5h后，加入15ml水，转速为1500r/min涡旋振荡8min，在频率为80khz下超声20min，充分混匀后旋转蒸发除去有机溶剂，得透明红色配质体溶液；

（5）再将透明配制体在温度为-55℃冷冻干燥成粉状，即得抗癌抗氧化生物膜纳米靶向配质体。

本实施例制备的抗癌生物膜纳米靶向配质体经过测定粒径为60nm，电位为-38mv。

应用实施例5（配质体结合超声光动力治疗肿瘤）

收集处于对数生长期的乳腺癌mda－mb－231细胞，在避光条件下加入一定量的钙黄绿素-am染色，呈梭形的绿色荧光（活细胞染色）。再加入配质体培养20min后观察，对细胞的生长无影响。选择特定的超声条件，将探头放于细胞培养液的液面进行超声1min，送回培养箱培养2h后，观察细胞的生长情况。再加入适量1umol/l的碘化丙啶染色，培养30min后，观察细胞成园形红色荧光（死细胞），见图1。

应用实施例6(配质体结合光热治疗肿瘤)

建立裸鼠人源乳腺癌mda-mb-231原位模型，待肿瘤长大到100-300cm³时，尾静脉注射300ul，浓度为10mg/ml实例3中的配质体水溶液，8h后，选择波长为750nm的近红外光,距小鼠15公分距，照度为3500lux,对小鼠肿瘤部位及附近照射15min。第三天、第五天重复此操作。图2小鼠注射配质体溶液后，经光热治疗前后肿瘤组织坏死的情况，从图2可以看到，注射配质体后，经光热治疗，肿瘤组织变黑坏死。

应用实施例7(配质体结合射频热治疗肿瘤)

建立nod/scid小鼠肝癌模型，待肿瘤长大到100-300cm³时，尾静脉注射300ul，浓度为10mg/ml实例3中的配质体水溶液，2h后，用型射频热疗仪，采用13.56mhz射频输出，功率8.5w/kg,距小鼠5公分距，控制皮肤温度40℃，升温速率为0.4℃/分，对小鼠肿瘤部位及附近照射15min。第三天、第五天重复此操作。试验结果显示，肿瘤组织变黑坏死。

应用实施例8（肿瘤磁共振影像）

建立裸鼠乳腺癌4t1皮下模型，待肿瘤长大到100-300cm³时，将荷瘤小鼠腹腔麻醉，将实例3中的配质体溶液用生理盐稀释至10mg/ml后尾静脉注射。用mesomr23-060h-1核磁共振分析与成像系统，共振频率23.317mhz，磁体强度0.5t，线圈直径为40mm,磁体温度为32℃。分别在分别于0、1.5、2、8、10、12、24、30、48、48.5h，测试配质体对肿瘤的影像增强作用。使用核磁成像软件得到小鼠t1加权成像图，结果见图3。从图3可以看出小鼠注射配质体后，肿瘤部位的t1加权成像在2-10小后灰度值比注射前明显增大，大大增强了对肿瘤的对比度。