旌节花提取物及其应用的制作方法

本发明涉及植物提取物及化妆品领域，具体涉及旌节花提取物及其在化妆品中的应用。

技术背景

近年的研究证明色素沉着是由紫外线激活表皮中的黑色素细胞内的黑色素生成酶，产生色素所引起的。人表皮中位于基底层的黑素细胞与周围的角质形成细胞接触并发生联系，构成“表皮黑素单元”，其中黑素是一种含氮的复合物,在黑素小体中进行合成。一般来讲，黑色素数量和质量在皮肤黑色素是决定皮肤颜色的重要因素。黑色素生成过程中，酪氨酸酶将酪氨酸转化成多巴，多巴醌，经非酶氧化而聚合生成大分子的黑色素。因此通过抑制酪氨酸酶的活性可以限制黑色素生成，改善皮肤的色素沉着。

旌节花属于旌节花科(stachyuraceae)、旌节花属(stachyurussieb.etzucc.)，为东亚特有科。该科约15种，6变种。中国产10种、5变种，产于秦岭以南各省地区。旌节花品种繁多，包括喜马拉雅旌节花(即西域旌节花，stachyurushimalaicushook.f.etthomsexbenth.)、中国旌节花(s.chinensisfranch.)、倒卵叶旌节花(s.obovatus(rehd.)hand.-mazz.)、凹叶旌节花(s.retususyang)，柳叶旌节花(s.salicifoliusfranch.)、四川旌节花(s.szechuanensisfang)和云南旌节花(s.yunnanensisfranch.)等，中药材统称为“小通草”，茎髓入药，有利尿、催乳、清湿热之功效。

喜马拉雅旌节花(stachyurushimalaicushook.f.etthomsexbenth.)又叫西域旌节花、小通花、通条树等，为灌木，分布产陕西、浙江、湖南、湖北、四川、贵州、台湾、广东、广西、云南、西藏等省区，生于海拔400～3000米的山坡阔叶林下或灌丛中，印度北部、尼泊尔、不丹及缅甸北部也有分布。其茎髓白色，作中药“通草”，有利尿、催乳、清湿热功效，主治热病烦渴、小便黄赤、尿少或尿闭、急性膀胱炎、肾炎、水肿、小便不利、乳汁不通等，其嫩茎叶也可用于毒蛇咬伤，骨折。

目前对于旌节花的研究主要集中于其药学方面，有关旌节花的提取工艺、化学成分及其药理作用等方面的研究有限；有文献报道的旌节花的药理作用仅为总多糖活性部位通过降低老化相关代谢产物(过氧化脂质产物lpo、脂褐素lf)含量以提高全血sod活力最终提高抗氧化作用；旌节花有效成分的提取主要是采用的水回流提取工艺获得总多糖。目前，有关旌节花及其化学成分用于改善皮肤功能，延缓皮肤衰老、通过清除自由基、抑制酪氨酸酶活性达到抗衰老、美白效果，并应用于皮肤外用剂例如护肤品或化妆品的研究尚未见报道。

技术实现要素：

本发明旨在提供旌节花提取物。

本发明还将上述旌节花提取物用作皮肤外用剂。

本发明的技术方案为：一种旌节花提取物，为旌节花水提取物、旌节花醇提取物或者两者的任意混合物。

所述的旌节花为喜马拉雅旌节花、中国旌节花、倒卵叶旌节花、凹叶旌节花、四川旌节花或者云南旌节花中的至少一种。

旌节花醇提取物通过方法i制备，步骤包括：

(1)将旌节花的茎髓置于醇溶液中超声提取；

(2)取滤液浓缩干燥。

优选的，步骤(1)中，旌节花的茎髓用醇溶液在300～1000w下超声提取1～3次，每次0.5～2小时，合并滤液。超声提取可在10～40℃下进行，通常为室温。

优选的，每次超声提取时，醇溶液与旌节花的茎髓的用量比为30～60l/kg。

优选的，所述的醇溶液为60％～85％乙醇溶液。

优选的，步骤(2)中浓缩干燥的方法为旋转蒸发干燥或者冷冻干燥，旋转蒸发干燥的温度为35～80℃，更优选为40～60℃。

旌节花水提取物通过方法ii制备，步骤包括：

(a)将旌节花的茎髓置于水中保温浸提；

(b)取滤液浓缩干燥。

优选的，步骤(a)所述的保温浸提为：旌节花的茎髓用水在90～98℃下浸提1～3次，每次0.5～2小时，合并滤液。优选的浸提温度为94～97℃。

每次浸提时，水与旌节花的茎髓的用量比为30～80l/kg，优选为35～75l/kg。

优选的，步骤(b)中浓缩干燥的方法为旋转蒸发干燥或者冷冻干燥，尤其是冷冻干燥。

方法i和方法ii所述旌节花的茎髓含水量不超过10％，粒径25～800目。更优选的，含水量不超过5％。

浓缩干燥的方式为旋转蒸发或者冷冻干燥。优选地，旋转蒸发的温度为40～60℃。

本发明旌节花提取物具有清除自由基和抑制酪氨酸酶活性、抑制黑色素生成的效果，可作为活性成分用于制备皮肤外用剂，例如护肤品或化妆品。在含量0.05％时，清除自由基的效率超过50％；含量0.001％时，即可以明显地抑制酪氨酸酶活性，显著降低黑色素含量，实现美白功能。

因此，本发明的旌节花提取物可作为美白功能或抗衰老功能的活性成分，用于制备皮肤外用剂。

在皮肤外用剂中，旌节花提取物的添加量为0.0001wt％～5wt％，优选

0.005wt％～2wt％。

所述的皮肤外用剂可以是化妆水、精华液、乳液、乳霜等。

本发明的有益效果在于，所提供的旌节花提取物具有良好的清除自由基、抑制酪氨酸酶活性、抑制黑色素生成、改善色素沉着等功能，美白和抗衰老效果好；而且天然、安全、有效，对皮肤不产生刺激，可作为功效添加剂加入化妆品或护肤品。

而且上述旌节花提取物的制备方法简单易行、成本低，所获得的提取物活性高，在含量极低的情况下就可以发挥效果。

附图说明

图1为实施例4的原代的黑素瘤细胞和角质形成细胞共培养图

图2为实施例4细胞共培养图的平均光密度图。

图3为实施例4旌节花提取物对酪氨酸酶活性抑制效果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步示例性地对本发明加以说明。实施例用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。未注明具体操作方法和条件的实验方法，按照常规的操作方法和实验条件、或者商品说明书进行选择。

实施例1旌节花的醇提取物

喜马拉雅旌节花茎髓干燥至含水量≤5％，取100g，粉碎成粒径25～800目的粗粉，置于4l70％(v/v)乙醇水溶液中，室温下500w超声提取1h；

过滤取固体，重复上述提取步骤一次。

合并滤液，40～60℃旋转蒸发至干，得到喜马拉雅旌节花乙醇提取物约2g。

实施例2旌节花的水提取物

喜马拉雅旌节花茎髓干燥至含水量≤5％，取100g，粉碎成粒径25～800粗粉，置于6l去离子水中，96℃水浴加热1h，抽滤分离固体和滤液；

取固体重复上述提取步骤一次。

合并滤液，浓缩冷冻干燥，得到喜马拉雅旌节花水提取物约2g。

实施例3dpph法清除自由基活性测试

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，dpph)是一种稳定的氮中心有机自由基，其乙醇溶液呈深紫色，约在517nm左右有强吸收；当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使dpph吸收减弱，逐渐消失。dpph乙醇溶液褪色程度与其接受的电子数呈定量关系，因此可用分光光度计进行快速定量分析，检测自由基清除情况，评价抗氧化剂清除自由基能力、抗氧化能力和抗衰老能力。

dpph乙醇溶液的配制：准确称量6mgdpph，用95％乙醇溶解并定容于50ml容量瓶中，超声辅助溶解。使用时再用95％乙醇稀释四倍，得到浓度为3mg/100ml(76μm)的dpph乙醇溶液，避光保存(0～4℃)。

待测样品预处理：将实施例1或2的产物溶解于蒸馏水，并用蒸馏水稀释到适合的浓度备用。

实验步骤：将待测样品溶液2ml加入试管中，之后加入2mldpph乙醇溶液，混匀；混合体系中的喜马拉雅旌节花提取物含量为0.5mg/ml。室温下避光在黑暗处反应30min，在525nm处测定吸光度abs；除样品组外，分别设样品溶剂对照组，空白对照组和溶剂对照组(dpph的溶剂)。

清除率i(％)＝[1-(t-t0)/(c-c0)]×100％

按照上面公式计算清除率，清除率越大抗氧化能力越强，通常清除率≥10％时，认为具有抗氧化作用。

式中：t0：待测样品液加等体积95％乙醇的吸光度(样品溶剂对照组)；

t：待测样品液加等体积dpph溶液的吸光度(样品组)；

c0：蒸馏水加等体积95％乙醇的吸光度(溶剂对照组)；

c：蒸馏水加等体积dpph溶液的吸光度(空白对照组)。

表1西域旌节花提取物清除自由基作用

实施例4美白活性测试

角质形成细胞和黑素瘤细胞共培养模型是目前体外模拟“表皮黑素单元”的公认模型，更接近皮肤生理学特点。方法为，将培养好的原代的黑素瘤细胞和角质形成细胞按照一定比列混合接种，共同培养，形成“表皮黑素单元”体外模型；再加入样品处理，用多巴染色法检测黑素含量和酪氨酸酶的活力。

将“表皮黑素单元”体外模型(原代的黑素瘤细胞和角质形成细胞按照1:4的比例混合接种)，分为无任何添加的空白组(nt)、加入熊果苷(arbutin，500μg/ml)的阳性对照组、加入实施例1的旌节花醇提物(10μg/ml)的样品组。将各组体外模型共同分别培养6～7d后，用多巴染色法检测黑素含量和酪氨酸酶的活力。

细胞共培养照片如图1所示，用喜马拉雅旌节花醇提取物处理的样品组细胞生长状态良好，说明提取物无细胞毒性；且与nt相比，样品组的黑素细胞颜色变浅，与阳性对照组(熊果苷500μg/ml)类似。

细胞共培养图片用软件进行平均光密度(白)分析，结果如图2，样品组的平均光密度高于对照组(nt)和熊果苷阳性对照组，证明经过旌节花醇提取物(10μg/ml)处理后，细胞黑色素含量降低。

酪氨酸酶活抑制率如图3。结果显示，喜马拉雅旌节花醇提取物处理的样品组中，酪氨酸酶活受到显著抑制，远高于熊果苷阳性对照组。

结果说明，喜马拉雅旌节花醇提取物能够限制黑色素生成，改善皮肤色素沉着，具有美白效果。

实施例2的喜马拉雅旌节花水提取物的美白活性测试结果与喜马拉雅旌节花醇提取物结果相同，在加入喜马拉雅旌节花水提取物后，“表皮黑素单元”体外模型的黑色素含量显著降低，酪氨酸酶活性受到抑制。

将实施例1和2的喜马拉雅旌节花的醇提取物及水提取物按1：1质量比混合复配，所获得的复合物同样具有美白效果，能够显著降低黑色素含量，并抑制酪氨酸酶的活性。

综上所述，旌节花的提取物可以清除自由基、防止黑色素生成、抑制酪氨酸酶的活性，具有美白和抗衰老的效果。