1.一种生物源性小口径组织工程血管的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)冻融:将新鲜动物血管放在含有0.02%~0.2%EDTA的PBS缓冲液中,置于-80℃速冻1~3小时,取出后立刻放置于37℃条件下10~30分钟解冻;重复上述操作2~5次,得到血管材料;
(2)去除冻融后脱落的细胞碎片:将步骤(1)得到的血管材料置于蒸馏水中充分冲洗,除去脱落的细胞残渣;
(3)脱细胞:将步骤(2)得到的血管材料浸泡在含有0.02%~0.2%EDTA和1%TritonX-100的Tris-HCl缓冲液中在室温下摇振12~48小时,之后用蒸馏水充分清洗去除残留的TritonX-100;然后将得到的血管组织置于含有0.05%~0.5%的十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的Tris-HCl缓冲液中,在室温下摇振60~80小时,得到脱细胞血管基质;
(4)清除去垢剂:将步骤(3)得到的脱细胞血管基质在蒸馏水中充分摇晃洗涤,彻底清除残留的脱细胞试剂,后用PBS缓冲液摇振清洗12~36小时,得到脱细胞组织工程血管,消毒后浸于含1%青霉素/链霉素的无菌PBS缓冲液中,置于-20℃冰箱保存。
2.根据权利要求1所述的一种生物源性小口径组织工程血管的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)冻融,是指将新鲜动物血管放在含有0.1%EDTA的PBS缓冲液中,置于-80℃速冻2小时,取出后立刻放置于37℃条件下水浴20分钟解冻;重复上述操作3次,得到血管材料。
3.根据权利要求2所述的一种生物源性小口径组织工程血管的制备方法,其特征在于:所述的动物血管为猪颈动脉或猪髂动脉。
4.根据权利要求1所述的一种生物源性小口径组织工程血管的制备方法,其特征在于:所述步骤(3)脱细胞,是指将步骤(2)得到的血管材料浸泡在含有0.1%EDTA和1%TritonX-100的Tris-Hcl缓冲液中室温下摇振24小时,之后用蒸馏水充分清洗去除残留的TritonX-100;然后将得到的血管组织置于含有0.1%的十二烷基硫酸钠溶液的Tris-Hcl缓冲液中,室温下摇振72小时,每24小时更换一次液体,得到脱细胞血管基质。
5.根据权利要求1所述的一种生物源性小口径组织工程血管的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)、步骤(3)和步骤(4)中的用蒸馏水冲洗或洗涤的温度为4℃。
6.一种生物源性小口径组织工程血管,以猪颈动脉或猪髂动脉为材料,采用上述权利要求1至5中任意方法制备得到。
7.权利要求1至5中所述的方法用于制备组织工程血管支架的用途。
8.根据权利要求7所述的用途,所述的组织工程血管支架是指去除细胞的动物来源的血管支架。
9.一种制备组织工程血管的试剂盒,其特征在于由以下试剂组成:
冻融液:含有0.02%~0.2%EDTA的PBS缓冲液;
脱细胞液A:含有0.02%~0.2%EDTA和1%TritonX-100的Tris-HCl缓冲液;
脱细胞液B:含有0.05%~0.5%的十二烷基硫酸钠的Tris-HCl缓冲液;
洗涤液:PBS缓冲液;
保存液:含1%青霉素/链霉素的无菌PBS缓冲液。
10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于由以下试剂组成:
冻融液:含有0.1%EDTA的PBS缓冲液;
脱细胞液A:含有0.1%EDTA和1%TritonX-100的Tris-HCl缓冲液;
脱细胞液B:含有0.1%的十二烷基硫酸钠的Tris-HCl缓冲液;
洗涤液:PBS缓冲液;
保存液:含1%青霉素/链霉素的无菌PBS缓冲液。