本发明属于医药领域，涉及中药活性成分的提取及纯化方法，具体涉及从大黄中提取、纯化大黄总蒽醌的方法。
背景技术：
大黄是一种重要的常用中药材，具有泻下攻积、清热泻火、活血祛於之功效。现代研究表明，大黄具有改善肾功能不全、导泻、保肝利胆、抗菌、抗病毒、抗炎镇痛、活血止血、降血脂、抗肿瘤等多种药理作用。大黄药理作用的主要活性成分包括芦荟大黄素，大黄酸，大黄酚，大黄素和大黄素甲醚等大黄总蒽醌。药材中蒽醌类活性成分多与糖结合以蒽醌苷形式存在，但蒽醌苷不稳定，受热易分解为游离的蒽醌而减弱泻下攻积的功效。
专利申请号201410836961.6公开了一种制备大黄总蒽醌的方法：大黄乙醇回流提取、制浸膏，浸膏加水沉淀，沉淀用盐酸/氯仿回流，回收氯仿即得。此法需以氯仿为溶剂，易污染环境，残留的溶剂毒性强。专利申请号CN201710326474.9采用闪式提取法对大黄进行提取，提取液浓缩并加酸水解，再用大孔吸附树脂纯化水解液，从而获得高纯度的大黄游离总蒽醌。上述方法均长时间加热破坏了蒽醌苷的糖苷键而得到游离的蒽醌，不利于保持泻下的疗效。
闪式提取技术是一种用于植物软、硬组织破碎的新型提取技术，它能在室温下将溶剂中的药材碎至细微颗粒，有效成分在数秒钟或数分钟内扩散到溶剂中，能避免药材中活性成分受热破坏，提取时间短，效率高。近年，闪式提取法在中药有效成分提取中越来越受到研究者的青睐。
有机絮凝剂是一种高分子聚合物，它的分子量很大，由于絮凝剂是较长的线状结构，有许多官能团，通过吸附，架桥，絮凝作用，使提取液中许多不稳定的微粒连接成絮团，絮团逐渐增长变成较大的絮团，因而加快了微粒的沉降速度（服从Stokes定律），通常用于医药、食品等行业的固液分离过程，去除无效成分，提高有效成分含量。
技术实现要素：
本发明旨在开发一种节能环保、能够迅速高效地从大黄中提取纯化大黄总蒽醌的方法。
本发明目的通过以下技术方案实现，包括以下步骤：
（A）大黄粗粉，乙醇浸泡，闪式提取法提取；
（B）将步骤（A）所得提取药液回收部分乙醇；
（C）将步骤（B）所得药液用高分子絮凝剂进行吸附澄清；
（D）将步骤（C）所得澄清的药液继续浓缩、加酸调酸性、析出沉淀；
（E）将步骤（D）所得沉淀加碱溶解、去除杂质，溶液加酸调节PH至酸性，离心、离心物水浴蒸干即得产品。
本发明进一步提供上述技术方案的优选技术方案。
步骤（A）中浸泡30min～60min，乙醇浓度为50%～90%，溶剂用量为药材量的6～12mL/g，提取次数为2～3次，提取时间为2～3min。
步骤（B）中所述的回收乙醇的方法为减压浓缩，药液浓缩至含大黄0.08～0.15g/mL。
步骤（C）所述高分子絮凝剂包括明胶类、海藻酸钠、甲壳素及其衍生物、壳聚糖、101果汁澄清剂、聚凝净、ZTC天然澄清剂、丹宁、蛋清中的一种，优选絮凝剂为壳聚糖；具体加入量：每100mL浓缩液加入1%壳聚糖的乙酸溶液（1g壳聚糖溶解于100mL1%的乙酸溶液中）10～50mL，优选10～20mL；絮凝温度为20～90℃；吸附澄清时间为30～300分钟。
步骤（D）所述酸是无机酸，包括硫酸，盐酸、硝酸和冰醋酸，浓度为5%～50%，优选为8%～10%盐酸。
步骤（E）所述碱是氢氧化钠、氢氧化钾等，浓度为5%～50%，优选浓度为8%～20%。
本发明的有益效果：
本发明选用闪式提取法提取大黄，提取迅速，缩短生产周期，提取过程中无需加热，减少了能耗。同时本发明制备产品仅需乙醇为溶剂，不污染环境，产品中无有毒的有机溶剂残留；吸附澄清所用的壳聚糖可生物降解，不污染环境，成本低廉。本发明研究发现经吸附澄清所得产品中大黄蒽醌类成分含量超过未经此处理所得产品的含量两倍，由此可见吸附澄清能大大减少大黄提取液中杂质含量，从而显著地减少后续加酸酸化时随活性成分析出的杂质量；况且采用闪式提取无需加热，减压浓缩可降低药液浓缩的温度并减少药液受热时间，有利于增加产品蒽醌苷含量而维持大黄的原有疗效。因此，本发明作为一个全新、整体的方案，是一种节能环保、迅速高效地从大黄中提取、纯化大黄总蒽醌的新方法。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
本发明各实施例均采用高效液相色谱法测定样品中大黄总蒽醌的含量，色谱条件如下：色谱柱InertSustain C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液；流速：1 mL·min-1；检测波长：254 nm；柱温：40℃；进样量：10μL。
实施例1：
称取大黄粗粉50g，加9倍量50％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中大黄总蒽醌含量并计算提取率。
实施例2：
称取大黄粗粉50g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中大黄总蒽醌含量并计算提取率。
实施例3：
称取大黄粗粉50g，加9倍量90％乙醇浸泡1h，闪式提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中大黄总蒽醌含量并计算提取率。
实施例4：
称取大黄粗粉50g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，回流提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中大黄总蒽醌含量并计算提取率。
实施例5：
称取大黄粗粉50g，加9倍量70％乙醇浸泡1h，超声提取法提取2次，提取液用四层纱布滤过。于上述色谱条件下测定提取液中大黄总蒽醌含量并计算提取率。
表1可见，随着乙醇浓度从50%增大到90%，大黄总蒽醌的提取率由24.82%增至96.22%；闪式提取法的大黄总蒽醌提取率明显高于回流法与超声法。
实施例6：
取大黄粗粉50g，闪式提取2次，每次加10倍量90%乙醇，每次90s，过滤。将提取液回收乙醇至药液含大黄0.10g/mL时，加壳聚糖进行吸附澄清，澄清药液继续浓缩至含大黄0.125g/mL，澄清的药液继续浓缩、加盐酸调酸性、析出沉淀；沉淀加氢氧化钠溶解、去除杂质，药液加酸调节PH至酸性，离心、离心物干燥得0.563g产品。以大黄酸、大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚的含量计算，产品中大黄总蒽醌的含量为23.8%。
实施例7：
取大黄粗粉50g，闪式提取2次，每次加10倍量90%乙醇，每次90s，过滤。将提取液回收乙醇至药液含大黄0.15g/mL时，加壳聚糖进行吸附澄清，澄清药液继续浓缩至含大黄0.25g/mL，澄清的药液继续浓缩、加硫酸调酸性、析出沉淀；沉淀加氢氧化钾溶解、去除杂质，药液加硫酸调节PH至酸性，离心、离心物干燥得0.381g产品。以大黄酸、大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚的含量计算，产品中大黄总蒽醌的含量为27.1%。
实施例8：
取大黄粗粉50g，闪式提取2次，每次加10倍量90%乙醇，每次90s，过滤。将提取液回收乙醇至药液含大黄0.08g/mL时，加壳聚糖进行吸附澄清，澄清药液继续浓缩至含大黄0.50g/mL，澄清的药液继续浓缩、加硫酸调酸性、析出沉淀；沉淀加氢氧化钾溶解、去除杂质，药液加硫酸调节PH至酸性，离心、离心物干燥得0.353g产品。以大黄酸、大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚的含量计算，产品中大黄总蒽醌的含量为55.6%。
对照例：
取大黄粗粉50g，闪式提取2次，每次加10倍量90%乙醇，每次90s，过滤。将提取液回收乙醇至药液含大黄0.50g/mL，加硫酸调酸性、析出沉淀；沉淀加氢氧化钾溶解、去除杂质，药液加硫酸调节PH至酸性，离心、离心物干燥得0.919g产品。 以大黄酸、大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚的含量计算，产品中大黄总蒽醌的含量为9.9%。
经吸附澄清实施例6-8所得产品中大黄蒽醌类成分含量超过未经吸附澄清对照例所得产品的含量两倍，由此可见吸附澄清大大减少大黄浓缩药液中杂质，从而显著地减少后续加酸酸化时随活性成分析出的杂质。